CN103830212A - 苯并戊二酮类衍生物在制备肠道病毒蛋白酶抑制剂中的用途 - Google Patents

苯并戊二酮类衍生物在制备肠道病毒蛋白酶抑制剂中的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN103830212A
CN103830212A CN201210482464.1A CN201210482464A CN103830212A CN 103830212 A CN103830212 A CN 103830212A CN 201210482464 A CN201210482464 A CN 201210482464A CN 103830212 A CN103830212 A CN 103830212A
Authority
CN
China
Prior art keywords
nitro
alkyl
enterovirus
amino
compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201210482464.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103830212B (zh
Inventor
徐峰
孙传奇
王坚
王泰一
张博
刘侃侃
王权
周天元
徐源
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nankai University
Original Assignee
Nankai University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nankai University filed Critical Nankai University
Priority to CN201210482464.1A priority Critical patent/CN103830212B/zh
Publication of CN103830212A publication Critical patent/CN103830212A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103830212B publication Critical patent/CN103830212B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Abstract

苯并戊二酮类衍生物在制备用于预防和/或治疗手足口病、特别是由肠道病毒导致的手足口病的药物中的用途，以及苯并戊二酮类衍生物在制备肠道病毒蛋白酶抑制剂、尤其是肠道病毒71型（EV71）3C蛋白酶的抑制剂中的用途。

Description

苯并戊二酮类衍生物在制备肠道病毒蛋白酶抑制剂中的用途
技术领域
本发明涉及苯并戊二酮类衍生物在制备用于预防和/或治疗手足口病、特别是由肠道病毒导致的手足口病的药物中的用途。本发明进一步涉及苯并戊二酮类衍生物在制备肠道病毒蛋白酶抑制剂、尤其是肠道病毒71型（EV71）3C蛋白酶的抑制剂中的用途。
背景技术
手足口病(hand-foot-mouth disease，HFMD)是由肠道病毒感染所引起的常见传染病，目前在世界大部分地区均有流行报道，属于全球性的传染病。2008年5月2日，中华人民共和国卫生部将手足口病纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的丙类传染病进行管理[1]。
手足口病多发生于5岁以下婴幼儿，以发热，口腔、手、足、臀部发生疤疹为主要特征，严重者可并发心肌炎、呼吸道感染肺水肿、无菌性脑膜炎、脑干脑炎和脊髓灰质炎样麻痹等相关疾病，病情进展较快，重症患者可导致死亡[2]。截至2010年5月4日，仅在中国已累计报告手足口病病例427278例，同比上升超40％，其中死亡260例，同比上升142.99％，重症病例5454例，同比上升66％，已经引起了社会的广泛关注。2012年2月，卫生部统计报告显示在中国全国（不含台港澳）手足口病死亡11人[3]。2012年中国手足口病发病数上升，布病、出血热等人畜共患传染病处于高发水平，尽管全国法定传染病疫情形势总体平稳，但手足口病发病数、重症数和死亡数较2011年同期上升明显，局部地区流感样病例聚集性疫情常见[4]。
手足口病的传染源包括患者、无症状带毒者和隐性感染者，其传播途径主要为粪-口途径和(或)呼吸道飞沫传播，人群对肠道病毒普遍易感，但以隐性感染为主，0~5岁儿童是本病的主要易感人群，易感性随年龄增长而降低。感染一年四季均可发生，但有明显的季节高峰，3-4月份开始增多，夏秋季达高峰，冬季发病较少。因肠道病毒易在温暖潮湿的环境中生存与传播，所以该病主要集中在热带、亚热带和温带地区[5-7]。
引起手足口病的肠道病毒有20多种，包括柯萨奇病毒(Coxasckie virus)、埃可病毒(ECHO viruses)的某些血清型和肠道病毒71型(Enterovirus71，EV71)。柯萨奇病毒A组的16、4、5、9、10型，B组的2、5型，以及肠道病毒71型均为手足口病较常见的病原体，其中以柯萨奇病毒A16型(CoxA16)和肠道病毒71型(EV71)最为常见，且导致死亡的病例中主要是因为感染了EV71病毒。世界卫生组织已将由EV71病毒引起的严重疾病列为造成公众健康的主要威胁[8-10]。
EV71病毒由咽部或肠道入侵，在局部粘膜或淋巴组织中繁殖并排出，引起局部症状。然后病毒又侵入局部淋巴结，并进入血液循环导致第一次病毒血症。病毒经血液循环侵入深部淋巴结、肝、脾、骨髓等处大量繁殖并由此进入血循环，引起第二次病毒血症[11]。病毒随血循环进入全身器官：中枢神经系统、心脏、肺、皮肤粘膜等处，繁殖并引起病变。有研究表明，易感者感染EV71后，出现血管变态反应和组织炎性病变。当病毒累及中枢神经系统时，组织炎症较神经毒性作用更加强烈，中枢神经系统小血管内皮最易受到损害。细胞融合、血管炎性变、血栓形成可导致缺血和梗死[12]。
EV71病毒属于小RNA病毒科，为肠道病毒属成员，于1969年在美国加利福尼亚州从患脑炎婴儿的粪便中首次提取并被确认，根据衣壳蛋白VP1核苷酸序列的差异，可将其分为A、B、C三个基因型，其中B型和C型又可进一步分为B1、B2、B3、B4以及C1、C2、C3、C4亚型。研究发现，中国大陆1998年至今手足口病患者中EV的基因型主要是C3和C4型[13-15]。
EV71病毒颗粒呈二十面体立方对称球形，直径24-30nm，无包膜和突起，蛋白衣膜厚3nm，在pH值低于3时稳定并且保持感染性。病毒基因由约7408个核苷酸组成，为单股正链RNA，两端为保守的非编码区，即5’非编码区(UTRs)和3’-非编码区中间为仅有的一个开放阅读框(ORF)。ORF编码是含2193个氨基酸的多聚蛋白，该蛋白进一步被水解成P1、P2、P3三个前体蛋白。P1前体蛋白最终形成1A(VP4)、1B(VP2)、1C(VP3)、1D(VP1)4个病毒衣壳蛋白，且为结构蛋白；P2和P3前体蛋白分别产生2A(特异性蛋白酶)、2B、2C和3A、3B、3C(特异性蛋白酶)、3D(RNA多聚酶组分)，这些蛋白均属于非结构蛋白[16-17]。
3C蛋白在肠道病毒复制过程中，具有蛋白水解酶活性。目前发现3C蛋白酶有两种功能：促进病毒复制和促使宿主细胞凋亡。3C蛋白酶进入宿主细胞核内，而病毒的复制发生在细胞质中，它的最主要作用就是抑制宿主细胞转录。Weng等发现3C蛋白酶有可能通过消化宿主蛋白CstF-64来干扰宿主细胞内RNA多聚腺苷酸化，而CstF-64在宿主细胞基因3'端Pre-mRNA加工过程中发挥重要作用[18-20]。
3C蛋白酶能够通过激活半胱氨酸天冬氨酸酶来诱导细胞凋亡，与中枢神经系统发病有密切的关系。由于3C蛋白酶在病毒复制中发挥重要作用，而且序列分析表明哺乳动物中无EV71 3C的同源序列。3C蛋白酶抑制剂可以有效的抑制病毒的复制，以及抑制其对宿主细胞促凋亡的作用，对控制病毒的复制及扩散有显著的作用[21-23]，所以3C蛋白已成为公认的抗病毒药物靶点。3C蛋白酶抑制剂是基于该酶剪切多肽底物肽键的过渡态（P1-P1'）设计合成的不可逆小分子抑制剂，如AG7088（rupintrivir）可有效地抑制鼻病毒的3C蛋白酶活性，临床研究结果表明它是最有前景的抗小RNA病毒的化合物。AG7088体外抑制EV713C蛋白酶活性EC50为18nmol·L-1，对EV71病毒表现出显著的抑制作用，并且没有明显的细胞毒性[24]。
通过对已报道的3C蛋白酶的同源序列和已解析出来的晶体结构分析，发现虽然从序列同源性上来说与之同源的其他小RNA病毒及肠道病毒并没有太高的同源性，与EV71病毒3C蛋白酶序列上相似性最高的是鼻病毒(HRV)和柯萨奇病毒B3(CVB3)的3C蛋白酶，彼此间的序列相似度也只有50％左右。然而通过对这三个亚型的3C蛋白酶的晶体结构分析发现，它们在高级结构上具有高度的同源性（参见图1），从而也解释了前述对鼻病毒3C蛋白酶具有活性的AG7088为何同样具有抗其他小RNA病毒的活性。因此，以EV71 3C蛋白酶为靶标的抑制剂对其他亚型的小RNA病毒的3C蛋白酶也会有抑制作用，从而不仅可用于治疗由EV71导致的手足口病，还可用于治疗由小RNA病毒、特别是肠道病毒引起的其他相关疾病。例如，目前已知肠道病毒的感染可以导致手足口病、疱疹性咽峡炎、无菌性脑膜炎（asepic meningitis）、脑炎（encephalitis）和脊髓灰质炎样的麻痹性疾病（poliomyelitis-like paralysis）等多种与神经系统相关的疾病。因此3C蛋白酶抑制剂不仅可以用来推动手足口病药物的研究开发，还可以对其他相关疾病有重大的研究价值[25]。
因此亟需一种肠道病毒蛋白酶抑制剂，其可以作为由肠道病毒导致的疾病、特别是手足口病的候选药物，本发明人就是基于此发现一种新型的EV71 3C蛋白酶抑制剂，体外实验表明可以有效抑制EV71 3C蛋白酶的活性，因此可以作为治疗手足口病的潜在候选药物进行深入研究和开发[26]。
发明内容
本发明的一个目的在于提供如下通式I的化合物在制备用于预防和/或治疗手足口病、特别是肠道病毒导致的手足口病的药物中的用途，以及一种通过向患者给药所述通式I化合物来预防和/或治疗手足口病、特别是肠道病毒导致的手足口病的方法，
Figure BDA00002455326700031
（通式I）
其中，R1选自：氧代基、-C1-C6烷基氨基、苯基，以及含有1、2或3个、优选2个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元杂环基，所述苯基和杂环基各自任选地被选自羟基、氨基、和-C1-C6烷基的取代基取代；并且
R2选自：H、-C1-C6烷基、硝基、-C1-C6烷基硝基、以及-C1-C6烷基羧基。
在优选的实施方案中，所述R1优选为-C1-C6烷基氨基，优选为-丙基氨基。在另一优选的实施方案中，所述R2为硝基。
在优选的实施方案中，本发明通式I化合物中R1选自：
Figure BDA00002455326700032
Figure BDA00002455326700033
在优选的实施方案中，本发明通式I的化合物中R2选自：H、
Figure BDA00002455326700034
Figure BDA00002455326700035
在优选的实施方案中，所述通式I化合物为苯并戊三酮。
在优选的实施方案中，所述通式I化合物为2-(3-氨基-丙基)-5-硝基二氢化茚-1,3-二酮。
在优选的实施方案中，所述通式I化合物为5-硝基二氢化茚-1,2,3-三酮。
在优选的实施方案中，所述肠道病毒为肠道病毒71型（EV71）。
本发明的一个目的在于提供通式I化合物在制备肠道病毒蛋白酶抑制剂中的用途，
（通式I）
其中，R1选自：氧代基、-C1-C6烷基氨基、苯基，以及含有1、2或3个、优选2个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元杂环基，所述苯基和杂环基各自任选地被选自羟基、氨基、和-C1-C6烷基的取代基取代；并且
R2选自：H、-C1-C6烷基、硝基、-C1-C6烷基硝基、以及-C1-C6烷基羧基。
在优选的实施方案中，所述R1优选为-C1-C6烷基氨基，优选为-丙基氨基。在另一优选的实施方案中，所述R2为硝基。
在优选的实施方案中，本发明通式I化合物中R1选自：
Figure BDA00002455326700043
在优选的实施方案中，本发明通式I的化合物中R2选自：H、
Figure BDA00002455326700045
在优选的实施方案中，所述通式I化合物为苯并戊三酮。
在优选的实施方案中，所述通式I化合物为2-(3-氨基-丙基)-5-硝基二氢化茚-1,3-二酮。
在优选的实施方案中，所述通式I化合物为5-硝基二氢化茚-1,2,3-三酮。
在优选的实施方案中，所述肠道病毒为肠道病毒71型（EV71）。
在优选的实施方案中，所述肠道病毒蛋白酶为肠道病毒71型3C蛋白酶。
本发明还提供一种肠道病毒蛋白酶抑制剂，其包含如上所述的通式I的化合物作为活性成分，
Figure BDA00002455326700046
（通式I）
其中，R1选自：氧代基、-C1-C6烷基氨基、苯基，以及含有1、2或3个、优选2个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元杂环基，所述苯基和杂环基各自任选地被选自羟基、氨基、和-C1-C6烷基的取代基取代；并且
R2选自：H、-C1-C6烷基、硝基、-C1-C6烷基硝基、以及-C1-C6烷基羧基。
在优选的实施方案中，所述R1优选为-C1-C6烷基氨基，优选为-丙基氨基。在另一优选的实施方案中，所述R2为硝基。
在优选的实施方案中，本发明通式I化合物中R1选自：
Figure BDA00002455326700051
Figure BDA00002455326700052
在优选的实施方案中，本发明通式I的化合物中R2选自：H、
Figure BDA00002455326700053
Figure BDA00002455326700054
在优选的实施方案中，所述通式I化合物为苯并戊三酮。
在优选的实施方案中，所述通式I化合物为2-（3-氨基-丙基）-5-硝基二氢化茚-1,3-二酮。
在优选的实施方案中，所述通式I化合物为5-硝基二氢化茚-1,2,3-三酮。
在优选的实施方案中，所述肠道病毒为肠道病毒71型（EV71）。
在优选的实施方案中，所述肠道病毒蛋白酶为肠道病毒71型3C蛋白酶。
附图说明
图1为EV71 3C蛋白酶及其他亚型晶体结构比对，其中，A图示了EV71 3C蛋白酶，B图示了EV71 3C蛋白酶活性位点，C为三种蛋白酶晶体结构比较。
图2为苯并戊三酮抑制EV71 3C蛋白酶的IC50曲线图。
具体实施方式
下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。
本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。本文所用的缩略语通常为本领域技术人员所熟知的，或者可以是根据基础知识易于理解的。所用的缩略语及其含义如下所示：
Figure BDA00002455326700055
Figure BDA00002455326700061
苯并戊二酮类衍生物可溶于乙醇、二甲基亚砜（DMSO）等溶剂，在西格玛、开曼、百灵威等多家公司都有销售。在本申请实施例中采用的化合物均购买于百灵威公司。
本发明的活性测试方法：采用荧光检测法，利用靶向EV71 3C蛋白酶的特异性抑制剂来检测抑制后的活性，即先将抑制剂加入到反应体系中，再加入适量的酶样品使得最终体系为50μl，并于37℃恒温培养箱孵育15min，然后再加入含有底物的缓冲液至使终体积为100μl。然后立即用Bio-Red FLx-800荧光酶标仪进行检测，激发波长为360nm发射波长为485nm，约检测8min。理论上，如果特异性抑制剂加入，则能够抑制蛋白酶活性，再加入底物时，底物的降解速度与对照比较会明显降低。这就说明了抑制剂的显著抑制作用。因此可以用于抑制剂的筛选。
本发明的活性测试方法包括以下7个步骤：
步骤1．EV71 3C蛋白酶荧光底物储备液的准备
将我们自行设计的荧光底物RTATVQGPSLDF（Sigma公司合成)溶于50mM HEPES(购自BioBasic公司)中，配制成10mM的底物储备液备用。
步骤2．化合物的处理
将化合物在95％DMSO+5％ddH2O中溶解，配制成100mM浓度的溶液，然后将配制好的化合物溶液放置在1.5ml ep管中，于4℃下保存备用。
步骤3.EV71 3C蛋白酶的纯化
本实验室采用亲和层析，离子交换层析结合凝胶过滤层析的分离方法，得到纯度较高的蛋白酶，具体操作如下：将重组质粒转入表达菌株BL21（DE3），通过试表达验证后，取5μL保存的菌液，接种到含有卡那霉素的LB培养基中，200rpm、37℃培养过夜。再将其转接到含有相同抗性的800mL LB培养基中，200rpm、37℃培养，当OD600值介于0.6和1.0时将培养基温度降至16℃，再在培养基中加入0.5‰1M的IPTG。220rpm、16℃培养16h左右。
通过5000rpm离心20min，收取菌体。将菌体用MCAC0溶液重悬。从重悬菌液中取适量使用高压破碎和超声破碎的方法将大肠杆菌裂解。16000rpm高速离心20min，将上清和沉淀分别取样，用4*蛋白上样缓冲液制样。上清通过自制Ni-NTA柱，进行蛋白的富集。用MCAC0溶液和MCAC15洗掉未结合的杂蛋白，用MCAC200洗下目的蛋白，洗杂溶液和目的蛋白溶液分别制样。将MCAC200洗下目的蛋白溶液进行浓缩，将其中的缓冲液换成离子交换溶液A液，继续浓缩至1mL以下，通过FPLC系统使用离子交换柱resource Q柱进行进一步的纯化，目的蛋白大概在15％左右的B液时出峰。通过SDS-PAGE检测得到纯度较高的蛋白酶纯度，进行下面的实验研究。
步骤4．EV71 3C蛋白酶缓冲液的配制
将如上所述制备的EV71 3C蛋白酶溶解在蛋白缓冲液(pH=6.8)中，配制成50nM的EV71 3C蛋白酶缓冲液中，其中蛋白缓冲液含有50mM HEPES、5μM NaCl(购于BioBasic公司)、10μg/ml BSA(购于上海生工工程有限公司)。步骤5．EV71 3C蛋白酶药筛酶活体系的建立
EV71 3C蛋白酶药筛酶活体系中包含的成分，其体积和浓度见表1。
表1EV71 3C的药筛酶活体系
体系 体积 浓度
3C蛋白酶 97μl 50nM
荧光底物 2μl 300μM
化合物 1μl 50mM
总计 100μl
而且，检测体系设置阴性对照，阴性对照体系中加入1μl 95％DMSO取代化合物，用于检测EV713C蛋白酶的活性。
步骤6．化合物的初步筛选
向96微孔板中的每孔中加入97μl的浓度为50nM的EV71 3C蛋白酶缓冲液。然后向每孔中加入1μl的浓度为50mM的化合物溶液。振荡，室温孵育1分钟后，每孔加入2μl的300μM的底物进行反应。每隔8秒用光谱扫描多功能读数仪(Varioskan Flash，Thermo scientific)检测一次，共测20次。
绘制曲线，取阴性对照曲线斜率的最大处值为V0，化合物曲线斜率的最大处值为Vi，则NDM-1的剩余活性分数=Vi/V0。剩余活性越低，表示化合物对NDM-1的活性抑制越强。当NDM-1的剩余活性分数在0.2以内时，将进一步测定该化合物的IC50值。
步骤7．测定化合物的IC50值
将原始浓度为50mM的化合物溶液用95％DMSO按1:2(体积比)的比例进行等比稀释，共稀释11个浓度梯度。接着进行化合物的IC50值检测，向96微孔板中的每孔中加入100μl的浓度50nM的EV713C蛋白酶缓冲液。然后向每孔中加入1μl的上面配制的11个浓度的化合物溶液。振荡，室温孵育1分钟后，每孔加入2μl的300μM的底物进行反应。每隔8秒用光谱扫描多功能读数仪检测一次，共测20次。然后绘制曲线，计算EV71 3C蛋白酶的剩余活性分数。最后以化合物浓度对数为横坐标，EV71 3C蛋白酶的剩余活性为纵坐标绘制曲线。根据曲线，采用GraphPad Prism version 5.0软件(美国GraphPad software公司)计算IC50值。
实施例1：苯并戊三酮抑制EV71 3C蛋白酶活性的测定
将上述的苯并戊三酮（3mg，由北京百灵威科技有限公司合成）在95％DMSO(252.75μL)中溶解，配制成50mM浓度的溶液，然后将该溶液放置在1.5ml ep管中，于4℃下保存。
然后按照上面活性测试方法步骤5(化合物的初步筛选)和步骤6(化合物的IC50值的测定)中所述的内容进行操作。然后以苯并戊三酮的浓度对数为横坐标，EV71 3C蛋白酶的剩余活性为纵坐标绘制曲线（见图2），根据曲线，采用GraphPad Prism version 5.0软件计算，得到的IC50值为180.30±3.08μM。
Figure BDA00002455326700082
实施例2：2-(3-氨基-丙基)-5-硝基二氢化茚-1,3-二酮抑制EV71 3C蛋白酶活性的测定
Figure BDA00002455326700083
将上述的2-(3-氨基-丙基)-5-硝基二氢化茚-1,3-二酮（4mg，由北京百灵威科技有限公司合成）在95％DMSO(204.8μL)中溶解，配制成100mM浓度的溶液，然后将该溶液放置在1.5ml ep管中，于4℃下保存。
然后按照上面活性测试方法步骤5(化合物的初步筛选)和步骤6(化合物的IC50值的测定)中所述的内容进行操作。然后以2-(3-氨基-丙基)-5-硝基二氢化茚-1,3-二酮的浓度对数为横坐标，3C蛋白酶的剩余活性为纵坐标绘制曲线。最后根据该曲线，采用GraphPad Prism version 5.0软件计算，得到的IC50值为167.50±14.23μM。
实施例3：5-硝基二氢化茚-1,2,3-三酮抑制EV713C蛋白酶活性的测定
将上述的5-硝基二氢化茚-1,2,3-三酮（4mg，由北京百灵威科技有限公司合成）在95％DMSO(237.8μL)中溶解，配制成100mM浓度的溶液，然后将该溶液放置在1.5ml ep管中，于4℃下保存。
然后按照上面活性测试方法步骤5(化合物的初步筛选)和步骤6(化合物的IC50值的测定)中所述的内容进行操作。然后以5-硝基二氢化茚-1,2,3-三酮的浓度对数为横坐标，3C蛋白酶的剩余活性为纵坐标绘制曲线。最后根据该曲线，采用GraphPad Prismversion 5.0软件计算，得到的IC50值为120.21±23.19μM。
以上实验证实，本发明通式I的化合物对EV713C蛋白酶有显著抑制活性，从而可以减少甚至消除EV713C蛋白酶对底物的水解，因此可以用于抑制EV71病毒，并用于预防和/或治疗手足口病、特别是肠道病毒导致的手足口病。
尽管参照以上具体实施方式对本发明进行描述，但应理解的是，在不脱离由所附权利要求书限定的本发明精神和范围的情况下，本领域技术人员可以进行各种删节、替换和改变。因此，本发明涵盖这些删节、替换和改变。
参考文献
[1]董晓楠,应剑,陈应华1197022004全球肠道病毒71型分离株的分子流行病学分析，科学通报,2007,52:1021~1027
[2]杨秀慧,何家鑫,严延生等.一起手足口病暴发的病原学诊断与分析，中国人兽共患病学报,2007,23:323~327
[3]中华人民共和国卫生部，手足口病预防控制指南(2008年版)，http://61149118165/newshtml/217511htm
[4]中华人民共和国卫生部，肠道病毒(EV71)诊疗指南(2008年版)，http://61149118165/newshtml/217231htm
[5]Chen HL,Huang J Y,Chu TW,et al.Expression of VP1 protein in the milk oftransgenic mice:a potential oral vaccine protects against enterovirus 71 infection,Vaccine,2008,26:2882~2889
[6]Chen HL,Wang LC,Chang CH,et al.Recombinant porcine lactoferrin expressed inthe milk of transgenic mice protects neonatal mice from a lethal challenge with enterovirus 71,Vaccine,2008,26:891~898
[7]Chen TC,Lai YK,Yu CK,et al.Enterovirus 71triggering of neuronal apoptosisthrough activation of Abl2Cdk5 signalling,Cell Microbiol,2007,9:2676~2688
[8]Chung YC,Ho MS,Wu JC,et al.Immunization with virus-like particles ofenterovirus 71elicits potent immune responses and protects mice against lethal challenge,Vaccine,2008,26:1855~1862
[9]Hsu BM,Chen CH,Wan WT,Genetic diversity of epidemic enterovirus 71strainsrecovered fom clinical and environmental samples in Taiwan,Virus Res,2007,126:69~75
[10]Huang SC,Hsu YW,Wang HC,et al.Appearance of intratypic recombination ofenterovirus71 in Taiwan from 2002to 2005,Virus Res,2008,131:250~259
[11]Lee TC,Shih SR,Chang TY,et al.A mammalian cell-based reverse two hybridsystem for functional analysis of 3C protease of human enterovirus 71,Anal Biochem,2008,375:115~123
[12]Lin YC,Juan HC,Cheng YC,Ozone expression in the culture medium inhibitsenterovirus 71 virus replication and modulates cytokine production in rhabdomyosarcomacells,Antivir Res,2007,76:241~251
[13]Liu CC,Lian WC,Butler M,et al.High immunogenic enterovirus 71strain and itsproduction using serum free microcarrier Vero cell culture Vaccine,2007,25:19~24
[14]Tan EL,Yong LL,Quak SH,et al.Rapid detection of enterovirus 71by real-timeTaqMan RT2PCR1J Clin Virol,2008,42:203~206
[15]Tan EL,Chow VT,Kumarasinghe G,et al.Specific detection of enterovirus 71directly from clinical specimens using real-time RT-PCR hybridization probe assay,Mol CellProbe,2006,20:135~140
[16]Tung WH,Sun CC,Hsieh HL,et al.EV71induces VCAM21expression via PDGFreceptor,PI32K/Akt,p38MAPK,JNK,and NF2κB in vascular smooth muscle cells,CellSignal,2007,19:2127~2137
[17]Weng TY,Chen LC,Shyu HW,et al.Lactoferrin inhibits enterovirus 71infectionby binding to VP1 protein and host cells,Antivir Res,2005,67:31~37
[18]De Palma AM,Thibaut HJ,van der Linden L,et al.Mutations in the nonstructuralprotein 3A confer resistance to the novel enterovirus replication inhibitor TTP-8307[J].Antimicrobial Agents and Chemotherapy,2009,53(5):1850-1857.
[19]Chen TC,Chang HY，Lin PF,et al.Novel antiviral agent DTriP-22targetsRNA-dependent RNA polymerase of enterovirus 71[J].Antimicrobial Agents andChemotherapy,2009,53(7):2740-2747.
[20]Hung HC,Chen TC,Fang MY，et al.Inhibition of enterovirus 71replication and theviral 3D polymerase by aurintricarboxylic acid[J].Journal of Antimicrobial Chemotherapy,2010,65(4):676-683.
[21]Laszik Z,Jansen PJ,Cummings RD,et al.P-selectin glycoprotein ligand-1isbroadly expressed in cells of myeloid,lymphoid,and dendritic lineage and in somenonhematopoietic cells[J].Blood,1996,88(8):3010-3021.
[22]Chen TC,Liu SC,Huang PN,et al.Antiviral activity of pyridylimidazolidinonesagainst enterovirus 71variants[J].Journal of Biomedical Science,2008,15(3):291-300.
[23]黄维金,梁争论.肠道病毒71型研究进展[J].微生物学免疫学进展,2009,37(2):54-59.
[24]Yi LN,Lu J,Kung HF,et al.The virology and developments toward control ofhuman enterovirus 71[J].Critical Reviews in Microbiology,2011,37(4):313-327.
[25]Cui,S.,et al.2011.Crystal structure of human enterovirus 713C protease.J.Mol.Biol.408:449-461.
[26]Drake JW,Holland JJ.Mutation rates among RNA viruses[J].Proceedings of theNational Academy of Sciences of the United States of America,1999,96(24):13910-13913.

Claims (10)

1.通式I的化合物在制备用于预防和/或治疗手足口病、特别是肠道病毒导致的手足口病的药物中的用途，
Figure FDA00002455326600011
（通式I）
其中，R1选自：氧代基、-C1-C6烷基氨基、苯基，以及含有1、2或3个、优选2个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元杂环基，所述苯基和杂环基各自任选地被选自羟基、氨基、和-C1-C6烷基的取代基取代；并且
R2选自：H、-C1-C6烷基、硝基、-C1-C6烷基硝基、以及-C1-C6烷基羧基。
2.如权利要求1所述的用途，其中所述R1为-C1-C6烷基氨基，优选为-丙基氨基。
3.如前述权利要求之一所述的用途，其中所述R2为H、硝基或-C1-C6烷基硝基。
4.如前述权利要求之一所述的用途，其中所述化合物选自苯并戊三酮、2-(3-氨基-丙基)-5-硝基二氢化茚-1,3-二酮、以及5-硝基二氢化茚-1,2,3-三酮。
5.如前述权利要求之一所述的用途，其中所述肠道病毒为肠道病毒71型。
6.通式I的化合物在制备肠道病毒蛋白酶抑制剂中的用途，
Figure FDA00002455326600012
（通式I）
其中，R1选自：氧代基、-C1-C6烷基氨基、苯基，以及含有1、2或3个、优选2个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元杂环基，所述苯基和杂环基各自任选地被选自羟基、氨基、和-C1-C6烷基的取代基取代；并且
R2选自：H、-C1-C6烷基、硝基、-C1-C6烷基硝基、以及-C1-C6烷基羧基。
7.如权利要求6所述的用途，其中所述R1为-C1-C6烷基氨基，优选为-丙基氨基。
8.如权利要求6或7所述的用途，其中所述R2为H、硝基或-C1-C6烷基硝基。
9.如权利要求6-8之一所述的用途，其中所述化合物选自苯并戊三酮、2-(3-氨基-丙基)-5-硝基二氢化茚-1,3-二酮、以及5-硝基二氢化茚-1,2,3-三酮。
10.如权利要求6-9之一所述的用途，其中所述肠道病毒蛋白酶为肠道病毒71型3C蛋白。
CN201210482464.1A 2012-11-23 2012-11-23 苯并戊二酮类衍生物在制备肠道病毒蛋白酶抑制剂中的用途 Expired - Fee Related CN103830212B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210482464.1A CN103830212B (zh) 2012-11-23 2012-11-23 苯并戊二酮类衍生物在制备肠道病毒蛋白酶抑制剂中的用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210482464.1A CN103830212B (zh) 2012-11-23 2012-11-23 苯并戊二酮类衍生物在制备肠道病毒蛋白酶抑制剂中的用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103830212A true CN103830212A (zh) 2014-06-04
CN103830212B CN103830212B (zh) 2017-12-05

Family

ID=50794320

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201210482464.1A Expired - Fee Related CN103830212B (zh) 2012-11-23 2012-11-23 苯并戊二酮类衍生物在制备肠道病毒蛋白酶抑制剂中的用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103830212B (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1784239A (zh) * 2003-05-06 2006-06-07 西托维亚公司 冠状病毒和sars－cov的蛋白酶抑制剂及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1784239A (zh) * 2003-05-06 2006-06-07 西托维亚公司 冠状病毒和sars－cov的蛋白酶抑制剂及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FEI XUE 等: "Inhibitory properties of 2-substituent-1H-benzimidazole-4-carboxamide derivatives against enteroviruses", 《BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY》 *
MINETARO ARITA 等: "Characterization of pharmacologically active compounds that inhibit poliovirus and enterovirus71 infectivity", 《JOURNAL OF GENERAL VIROLOGY》 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN103830212B (zh) 2017-12-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Lee et al. Identification of novel small molecule inhibitors against NS2B/NS3 serine protease from Zika virus
Belliot et al. Norovirus proteinase-polymerase and polymerase are both active forms of RNA-dependent RNA polymerase
Cui et al. Crystal structure of human enterovirus 71 3C protease
Love et al. The crystal structure of hepatitis C virus NS3 proteinase reveals a trypsin-like fold and a structural zinc binding site
Brecher et al. The flavivirus protease as a target for drug discovery
Mandadapu et al. Macrocyclic inhibitors of 3C and 3C-like proteases of picornavirus, norovirus, and coronavirus
Li et al. Clinical manifestations and laboratory assessment in an enterovirus 71 outbreak in southern Taiwan
Vasilakis et al. Genetic and phenotypic characterization of sylvatic dengue virus type 2 strains
Oliveira et al. NS3 and NS5 proteins: important targets for anti-dengue drug design
Welbourn et al. The hepatitis C virus NS2/3 protease
CN111402968B (zh) 基于分子模拟发现山柰酚在covid-19病毒中的新用途
Li et al. A novel enterovirus 71 (EV71) virulence determinant: the 69th residue of 3C protease modulates pathogenicity
Ourique et al. A quantum chemistry investigation of a potential inhibitory drug against the dengue virus
Murugan et al. COVID-19: A review of newly formed viral clades, pathophysiology, therapeutic strategies and current vaccination tasks
De Francesco et al. Biochemical and immunologic properties of the nonstructural proteins of the hepatitis C virus: implications for development of antiviral agents and vaccines
McCoy et al. Solution structure and dynamics of the single-chain hepatitis C virus NS3 protease NS4A cofactor complex
Wu et al. Antiviral drug discovery against SARS-CoV
Sarvestani et al. Norovirus infection: replication, manipulation of host, and interaction with the host immune response
Saleh et al. Design and development of some viral protease inhibitors by QSAR and molecular modeling studies
Lee et al. Nonsubstrate based inhibitors of dengue virus serine protease: a molecular docking approach to study binding interactions between protease and inhibitors
CN103830212A (zh) 苯并戊二酮类衍生物在制备肠道病毒蛋白酶抑制剂中的用途
Su et al. Octyl gallate targeting the 3C-like protease exhibits highly efficient antiviral activity against swine enteric coronavirus PEDV
Yamashita et al. VI, 3. Molecular biology and epidemiology of Aichi virus and other diarrhoeogenic enteroviruses
CN113209275A (zh) Stch在制备抗黄病毒属病毒感染的功能产品中的应用
Wahaab et al. NS2B-D55E and NS2B-E65D Variations are Responsible for Differences in NS2B-NS3 Protease Activities Between Japanese Encephalitis Virus Genotype I and III in Fluorogenic Peptide Model

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20171205

Termination date: 20201123

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee