CN103819539A - 一种胸腺五肽的液相合成方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种胸腺五肽的液相合成方法，以Boc-Tyr-OH为起始原料，其羧基和酚羟基被Bzl苄基保护，经过四次缩合反应，依次连接Boc-Val-OH，Boc-Asp(OBzl)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Boc-Arg(pbf)-OH，得到的保护五肽再脱除各保护基团，经纯化后可得到纯度大于99%以上的标准品。本方法简化了工艺步骤，收率高，纯度高且大大降低了生产成本，不需要重金属催化氢化，不需要压力容器，不需要昂贵的催化剂，常压常温反应，所有中间体的纯化条件简单，只需要沉淀即可得到纯品，最终产品经制备色谱纯化，非常适用于规模化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种胸腺五肽的液相合成方法，可适用于规模化大生产。
背景技术
胸腺五肽( Thymopentin, TP5)是促胸腺生成素32~ 36上5个氨基酸组成的小肽，基本序列为NH2-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH，它保留了胸腺生成素的有效生物活性，有调节和增强人体细胞免疫功能的作用，是目前治疗艾滋病的最有疗效和潜力的胸腺激素之一，其注射用药剂是目前世界上处方量处于第一位的免疫调节剂。
胸腺五肽在医用上良好的产业前景使得人们将注意力纷纷集中在大规模生产上，由于采用生物提取会受材料来源限制，而基因表达技术运用在小分子肽上存在困难等问题，其分子式简单的特点使化学法合成胸腺五肽独具优势。而传统的固相合成成本高，且生产规模较小，而液相合成胸腺五肽适用于大规模化生产的特点，使得液相合成成为主要优选途径。
许多文献和专利报道了采用液相合成技术制备胸腺五肽的方法，与本发明相近的技术主要有：
中国专利CN101597318A公开的方法是采用以酪氨酸苄酯盐酸盐为起始原料，以N-甲基吗啉为催化剂，采用氯甲酸烷基酯为活化剂，活化被保护的氨基酸形成高活性的混合酸酐与氨基端裸露的氨基酸或肽反应，制备高纯度胸腺五肽。该技术大都采用Fmoc基团保护氨基酸的氨基末端，只有最后一个精氨酸氨基末端用Boc基团保护，不过该精氨酸胍基未保护。该技术的缺点是由于芴甲氧羰基衍生物价格昂贵，使得生产成本很高；另外在脱去Fmoc基团时使用价格较为昂贵的哌啶，也大大增加了成本；而且使用胍基未保护的精氨酸使得五肽副产物较多，增加了纯化难度。
中国专利CN1442428A公开的方法是以酪氨酸衍生物为原料，进行多次缩合反应，依次分别连接由叔丁氧羰基、芴甲氧羰基等保护基团保护的缬氨酸、天冬氨酸、赖氨酸，生成保护四肽，在连接精氨酸进行五肽合成时，利用的是芴甲氧羰基作为保护基对精氨酸的氨基酸进行保护，生成保护五肽，再分步脱去几种不同的保护基得到胸腺五肽。该技术的缺点是Boc和Fmoc基团脱除分别使用昂贵的TFA和哌啶，大大增加了成本；而且生成的保护五肽上有两种保护基，在脱去保护基团时至少需要经过两步反应，即需要不同的方法脱去不同的保护基，如文献方法是用催化氢化、酸解两次反应才能脱去所有保护基。
中国专利CN1704430A公开的方法是采用侧链官能团未保护的Arg和Tyr为原料合成胸腺五肽。该技术缺点是需要极其温和的反应条件，且副产物较多，增加了纯化难度；还有就是要在压力容器条件下重金属催化氢化除去精氨酸氨基末端的苄氧羰基。
中国专利CN1844142A公开的方法是以酪氨酸衍生物为原料，通过四次缩合反应，依次分别连接苄氧羰基保护的缬氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸，生成保护五肽。该技术采用叔丁氧羰基对精氨酸进行保护，可一次性脱除所有保护基得到胸腺五肽，简化了步骤，但缺点是使用苄氧羰基作为保护基，得到的产物溶解性很差，在溶剂中成果冻状，无法进行过滤，使得产物纯化十分困难，而且脱去时也较为麻烦。
因此，需要一种简单、快速、成本低、原料易得和可行成规模的合成胸腺五肽的方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种步骤精简且收率高的胸腺五肽的液相合成方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种胸腺五肽的液相合成方法，该方法包括如下步骤：
(1) 以Boc-Tyr-OH为起始原料，其羧基和酚羟基在碳酸钾和四丁基碘化铵存在下，用苄溴处理得到被Bzl苄基保护的酪氨酸，然后经柠檬酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液萃取，再用硫酸钠固体干燥，得到的有机溶液减压旋蒸，得到Boc-Tyr(Bzl)- OBzl产物。该产物溶于乙酸乙酯溶液，并向其中通入HCl气体，得到脱去Boc保护基团的NH2-Tyr(Bzl)-OBzl盐酸盐产物；
(2) 将NH2-Tyr(Bzl)-OBzl盐酸盐和Boc-Val-OH在DIEA提供的碱性条件下，以及HOBT、HBTU缩合剂作用下反应，再经过酸碱洗脱除水干燥，得到Boc-Val-Tyr(Bzl)-OBzl二肽；
(3) 脱去(2)中得到的二肽氨端保护基，然后得到的产物与Boc-Asp(OBzl)-OH在缩合剂下反应，经过酸碱洗脱除水干燥，得到Boc-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl三肽；
(4) 脱去(3)中得到的三肽氨端保护基，然后得到的产物与Fmoc-Lys(Boc)-OH在缩合剂下反应，经过酸碱洗脱除水干燥，得到Fmoc-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl四肽；
(5) 将Fmoc-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl四肽溶于二氯甲烷，在二乙胺提供的碱性条件下脱去四肽的氨端Fmoc保护基团，反应完成后用冷乙醚沉降，然后与Boc- Arg(pbf)-OH在缩合剂下反应，经过酸碱洗脱除水干燥，得到Boc-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Asp (OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl保护五肽；
(6) 将(5)中得到的五肽利用酸解法，脱除全部保护基团，得到NH2-Arg-Lys-Asp-Val -Tyr-OH五肽粗品。
与其他的胸腺五肽合成工艺相比，本实验方法优点在于：利用干燥的HCl气体通入乙酸乙酯来脱除氨基酸上的Boc基团，经实验验证，这种方法脱除Boc基团的产率在98%以上，相比于用TFA、HF等脱除Boc保护基的其他实验方法，产率更高，而且在工业生产上，由于HCl气体非常廉价，因此利用HCl脱除Boc基团的方法在工业上可以得到更好推广。其次利用相对便宜的二乙胺脱除氨基端的Fmoc保护基团，在工业生产上可以大大节约成本。还有在本设计中酪氨酸的羧基与酚羟基采用被Bzl苄基双保护的方法，与酪氨酸的酚羟基用苄基保护，羧基用酯基保护方法相比，减少了合成酪氨酸衍生物的步骤，节约了成本。而且在精氨酸的选择上，使用胍基被pbf基团保护的Boc-Arg (pbf)-OH，副产物较少，pbf基团比Boc基团更易在酸性条件下脱去，使得合成保护性五肽后，只需要一步就可脱掉全部保护基团，极为方便。正是由于本试验中所使用的保护基都是比较常用的保护基团，其上保护以及脱保护操作都更为简便，这些优点使得本实验比其他的胸腺五肽合成方法成本更低、产率更高。
附图说明
图1 为本发明的合成路线示意图。
图2 为本发明TP5质谱图。
图3 为本发明TP5一维核磁共振氢谱图（400 MHz）。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
说明书或权利要求书中所使用的缩写含义列于下表：
| Fmoc | 9-芴甲氧羰基 |
| Boc | 叔丁氧羰基 |
| Bzl | 苄基 |
| pbf | 2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基 |
| TBAI | 四丁基碘化铵 |
| DIEA | N,N-二异丙基乙胺 |
| HOBT | 1-羟基苯并三唑 |
| HBTU | 苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 |
| HCl | 盐酸 |
| ACN | 乙腈 |
| TLC | 薄板层析 |
| DCM | 二氯甲烷 |
| DMF | N，N-二甲基甲酰胺 |
| TFA | 三氟乙酸 |
| TFMSA | 三氟甲磺酸 |
| Thioanisole | 苯甲硫醚 |
| HPLC | 高效液相色谱 |
实施例1：Boc-Tyr(Bzl)-Obzl的合成
称取Boc-Tyr-OH (0.562 g, 2 mmol, 1 eq)，K2CO3 (1.10 g, 8 mmol, 4 eq)，TBAI（碘化四丁铵88.6 mg, 0.24 mmol, 0.12 eq），加入到50 ml烧瓶中，在室温条件下加入DMF (15 ml) 溶解，之后将烧瓶用油泵抽真空充N2多次，使烧瓶中充满N2。打开磁力搅拌器慢速搅拌，然后加入溴化苄(0.52 ml, 4.4 mmol, 2.2 eq)，常温避光反应12小时后停止搅拌，结束反应。所得反应液用乙醚和水萃取，然后有机相用1 mol/L的HCl洗涤2遍，用饱和NaHCO3溶液洗涤2遍，再用饱和食盐水洗涤两遍，所得乙醚有机相加过量无水硫酸钠干燥5小时。干燥结束后用布氏漏斗抽滤，滤去硫酸钠，所得溶液用旋转蒸发仪减压浓缩除去溶剂得到Boc-Tyr(Bzl)-OBzl (876.9 mg, 1.9 mmol)产率接近95%。
实施例2：脱除Boc得到NH2-Tyr(Bzl)-OBzl盐酸盐
将上步油状产物用15 ml乙酸乙酯溶解，冰浴搅拌，然后以恒定速率通入HCl气体15分钟。然后移去冰浴，常温搅拌15分钟，用TLC 检测反应进程。反应完毕后反应液用旋转蒸发仪减压浓缩除去溶剂，然后用冷乙醚沉淀。所得乙醚沉淀物用布什漏斗抽滤，所得的白色固体即为NH2-Tyr(Bzl)-OBzl盐酸盐粗产物，该步产率接近100%。
实施例3：二肽产物Boc-Val-Tyr(Bzl)-OBzl的合成
将上一步干燥的白色固体HN2-Tyr(Bzl)-OBzl盐酸盐 (756.1 mg, 1.9 mmol, 1 eq)和DIEA (1.25 ml, 7.6 mmol, 4 eq) 加入到50 ml烧瓶中，先用10 ml DMF溶解，在保持N2环境下加入Boc-Val-OH (495.1 mg, 2.28 mmol, 1.2 eq)， HBTU (864.6 mg, 2.28 mmol, 1.2 eq)，HOBT (308.1 mg, 2.28 mmol, 1.2 eq)，再加入溶剂DMF 10 ml。之后加速磁力搅拌器进行搅拌，用TLC来监测反应进程，室温反应2 h后，TLC监测到原料点消失，这时停止搅拌，结束反应。将反应液用1 mol/L的柠檬酸和二氯甲烷萃取2遍，然后有机相用饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠洗涤2遍，最后，所得有机相用无水硫酸钠干燥5小时。干燥结束后，用布什漏斗抽滤，滤去硫酸钠，所得溶液用旋转蒸发仪减压浓缩除去溶剂，得Boc-Val-Tyr(Bzl)-OBzl产物990 mg，产率93%。
实施例4：三肽产物Boc-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl的合成
将所得的Boc-Val-Tyr(Bzl)-OBzl油状物质用15 ml乙酸乙酯溶解，冰浴条件通HCl气体15分钟，常温再搅拌15分钟。经冷乙醚沉降得到白色固体NH2-Val-Tyr(Bzl)-OBzl盐酸盐874.8 mg，产率接近100%。将白色固体NH2-Val-Tyr(Bzl)-OBzl盐酸盐 (874.8 mg, 1.76 mmol, 1 eq)和DIEA (1.16 ml, 7.04 mmol, 4 eq)用20 ml DMF溶解，然后加入Boc-Asp (OBzl)-OH (682.2 mg, 2.11 mmol, 1.2 eq)，HBTU (800.2 mg, 2.11 mmol, 1.2 eq)，HOBT (285.1 mg, 2.11 mmol, 1.2 eq)。2 h后结束反应，将反应液酸碱洗脱除水干燥后得Boc-Asp (OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-Obzl产物1.22 g，产率90.5%。
实施例5：四肽产物Fmoc-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl的合成
将上步得到的Boc-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl (1.22 g, 1.59 moml)用15 ml乙酸乙酯溶解，冰浴条件通入HCl气体15分钟，常温再搅拌15分钟，反应完毕经冷乙醚沉降得白色固体HN2-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl盐酸盐1.06 g，产率接近100%。将HN2-Asp (OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl盐酸盐 (1.06 g, 1.59 mmol, 1 eq)，DIEA (1.05 ml, 6.36 mmol, 4 eq)用20 ml DMF溶解，之后在 N2环境下迅速加入 Fmoc-Lys(Boc)-OH (889.5 mg, 1.90 mmol, 1.2 eq)，HBTU (720.5 mg, 1.90 mmol, 1.2 eq)，HOBT (256.7 mg, 1.90 mmol, 1.2 eq)，再加入10 ml DCM，3 h后结束反应。反应液经过酸碱洗脱除水干燥后，加入乙醚沉降得Fmoc-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl产物1.43 g，产率82.03%。
实施例6：五肽化合物Boc-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl的合成
将化合物Fmoc-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl (1.43 g, 1.30 mmol, 1 eq) 用25 ml DCM溶解，再将二乙胺（1.34 ml, 13.0 mmol, 10 eq）溶液滴加到烧瓶中，室温搅拌3 h，用TLC监测反应进程，反应完毕后经冷乙醚沉降得HN2-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val- Tyr(Bzl)-OBzl产物957 mg，产率为82.3%。将HN2-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl (957 mg, 1.07 mmol, 1 eq), DIEA (0.525 ml, 3.21 mmol, 3 eq)用20 ml DMF溶解，再加入Boc-Arg(pbf)-OH (674.1 mg, 1.28 mmol, 1.2 eq), HBTU (485.4 mg, 1.28 mmol, 1.2 eq), HOBT (173.0 mg, 1.28 mmol, 1.2 eq)。然后用磁力搅拌器搅拌，用TLC来监测反应进程，室温反应3 h后，结束反应。反应液经过酸碱洗脱除水干燥后，加入乙醚沉降得Boc-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl 产物1.34 g，产率89.2%。
实施例7：胸腺五肽TP5粗肽的合成及纯化方法1
将Boc-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl (1.34 g, 0.95 mmol, 1 eq) 至于50 ml烧瓶中，向其中加入TFMSA 1.43 ml, TFA 16.5 ml，苯甲硫醚0.93 ml (TFMSA : TFA : thioanisole = 7.5 : 87.5 : 5) 加入烧瓶，冰浴条件下反应2小时，之后加入冷乙醚沉淀，离心收集白色沉淀，得到白色固体NH2-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH粗肽。再经HPLC纯化得白色絮状TP5 427.2 mg, 66.2%，纯度达到99%以上。1H NMR (400 MHz, D2O) d (ppm): 0.602~0.610(d, 6H, C(CH3)2, J = 6.64 Hz), 1.183~1.236(m, 2H, CH2), 1.431~ 1.468(m, 4H, 2CH2), 1.640~1.742(m, 4H, 2CH2), 2.565~2.675(m, 2H, NCH2), 2.729~ 2.764 (m, 3H, NCH2, NCH), 2.919~3.007(m, 2H, PhCH2), 3.795~3.813(t, 2H, NCH, J = 7.43 Hz), 3.841(m, 1H, NCH), 3.949~4.157(m, 2H, CH2), 4.405~4.430(m, 1H, NCH), 4.602~ 4.630(m, 1H, NCH), 6.584~6.605(d, 2H, PhH, J = 8.4 Hz), 6.898~6.925(d, 2H, PhH, J = 8.4 Hz)。MS m/z 680 (M+H+)。
实施例8：五肽化合物Fmoc-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl的合成
将化合物Fmoc-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl (1.38 g, 1.24 mmol, 1 eq）用25 ml DCM溶解，再将二乙胺（1.28 ml, 12.4 mmol, 10 eq）溶液滴加到烧瓶中，室温搅拌3 h，用TLC监测反应进程，反应完毕后经冷乙醚沉降得HN2-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val- Tyr(Bzl)-OBzl产物910 mg，产率为82%。将HN2-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl (910 mg, 1.02 mmol, 1 eq)和DIEA (0.504 ml, 3.06 mmol, 3 eq)加入到50 ml烧瓶中，先用20 ml DMF溶解，再加入Fmoc-Arg(pbf)-OH (778.6 mg, 1.22 mmol, 1.2 eq)，HBTU (462.7 mg, 1.22 mmol, 1.2 eq)，HOBT (164.8 mg, 1.22 mmol, 1.2 eq)。然后用磁力搅拌器搅拌，用TLC来监测反应进程，室温反应3 h后，结束反应。反应液经过酸碱洗脱除水干燥后，经乙醚沉降得Fmoc-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl 产物1.29 g，产率83%。
实施例9：胸腺五肽TP5粗肽的合成及纯化方法2
将Fmoc-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl (1.29 g, 0.85 mmol, 1 eq)用15 ml DCM溶解，再将二乙胺（0.88 ml, 8.50 mmol, 10 eq）溶液滴加到烧瓶中，室温搅拌3 h，反应完毕后乙醚沉降得白色粉末HN2-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl 918 mg，产率83%。然后将该产物至于50 ml烧瓶中，向其中加入TFMSA 1.02 ml，TFA 12 ml，苯甲硫醚0.69 ml (TFMSA : TFA : thioanisole = 7.5 : 87.5 : 5)加入烧瓶，冰浴条件下反应2小时，之后加入冷乙醚沉降，离心收集白色沉淀，得到白色固体NH2-Arg-Lys- Asp-Val-Tyr-OH粗肽。再经HPLC纯化得白色絮状TP5 323 mg，67.4%。
HPLC纯化方法：
装备：C18制备柱：20 × 250 mm；
洗脱液A: 0.1% (v/v) TFA/H2O；
洗脱液B: 0.08% (v/v) TFA/ACN；
流速：8 ml/min；
检测波长：220 nm；254 nm；280 nm；
洗脱梯度：5% - 40%。
Claims (10)
1.一种胸腺五肽液相合成法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1) 以Boc-Tyr-OH为起始原料，其羧基和酚羟基被Bzl苄基保护，在酸性条件下，脱去Boc保护基团，经沉淀得到NH2-Tyr(Bzl)-OBzl盐酸盐；
(2) 在碱性条件下，使(1)中得到的NH2-Tyr(Bzl)-OBzl盐酸盐和Boc-Val-OH在缩合剂作用下反应，经过酸碱洗脱除水干燥，得到Boc-Val-Tyr(Bzl)-OBzl二肽；
(3) 脱去(2)中得到的二肽氨端保护基，然后沉淀得到的产物与Boc-Asp(OBzl)-OH在碱性条件下，经缩合剂作用反应，经过酸碱洗脱除水干燥，得到Boc-Asp(OBzl)-Val-Tyr (Bzl)-OBzl三肽；
(4) 脱去(3)中得到的三肽氨端保护基，然后得到的产物与Fmoc-Lys(Boc)-OH在缩合剂作用下反应，经过酸碱洗脱除水干燥，然后沉淀得到Fmoc-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val- Tyr(Bzl)-OBzl四肽；
(5) 在碱性条件下脱去(4)中得到的四肽氨端保护基团，然后与Boc-Arg(pbf)-OH在碱性条件下，经缩合剂作用反应，经过酸碱洗脱除水干燥，然后沉淀得到Boc-Arg(pbf)- Lys(Boc)-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl保护五肽；
(6) 将(5)中得到的五肽利用酸解法，脱除全部保护基团，沉淀得到NH2-Arg-Lys-Asp -Val-Tyr-OH五肽粗品。
2.根据权利要求1所述的胸腺五肽液相合成方法，其特征在于步骤(1)中，所述的对Boc-Tyr-OH的羧基和酚羟基进行Bzl苄基保护，则是在碳酸钾和四丁基碘化铵存在下，经苄溴处理而得到的。
3.根据权利要求1所述的胸腺五肽液相合成方法，其特征在于步骤(1)、(3)、(4)中，所述的在酸性条件下脱去Boc保护基团，为乙酸乙酯溶液中通入HCl气体，或者使用20-60% TFA/DCM溶液。
4.根据权利要求1所述的胸腺五肽液相合成方法，其特征在于(2)、(3)、(4)、(5)中用DIEA/N-甲基吗啉/三乙胺等有机碱将PH调至8~9。
5.根据权利要求1所述的胸腺五肽液相合成方法，其特征在于(2)、(3)、(4)、(5)中肽缩合步骤采用DCC/HOBT、HBTU、HOAT、HATU、DIC或PyBOP为缩合剂。
6.根据权利要求1所述的胸腺五肽液相合成方法，其特征在于(2)、(3)、(4)、(5)中所述的酸碱洗脱是将经过偶联得到的肽溶液用柠檬酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液萃取；所说的除水干燥是将反应液用硫酸钠/镁等干燥，然后减压蒸馏除去有机溶剂。
7.根据权利要求1所述的胸腺五肽液相合成方法，其特征在于步骤(5)中，Fmoc基团是在二乙胺/哌啶提供的碱性条件下脱去的。
8.根据权利要求1所述的胸腺五肽液相合成方法，其特征在于步骤(6)中，酸解脱除是指加入三氟乙酸、三氟甲磺酸、苯甲硫醚将保护基团全部脱除。
9.根据权利要求1所述的胸腺五肽液相合成方法，其特征在于步骤(1)、(3)、(4)、(5)、(6)中沉淀是指加入乙醚/石油醚/甲基叔丁基醚。
10.根据权利要求1所述的胸腺五肽液相合成方法，其特征在于步骤(6)中，得到的五肽粗品还要经C18/C8反相柱除杂，得到纯化产物。
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| 左朋飞等: "胸腺五肽的合成及临床应用进展", 《天津药学》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108484728A (zh) * | 2018-03-23 | 2018-09-04 | 哈尔滨师范大学 | 一种路邓素直链衍生物、其制备办法及用途 |
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