CN103768075A - Ethyl asterrate在制备抗老年痴呆药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种Ethylasterrate在制备抗老年痴呆药物中的应用，具体涉及一种具有结构式（I）所示的二苯醚类化合物Ethylasterrate，以及该化合物在抑制乙酰胆碱酯酶(acetylcholineesterase)活性及制备老年痴呆药物中的用途。实验证明：Ethylasterrate可以明显的抑制乙酰胆碱酯酶活性；同时对D-半乳糖和AlCl₃所致老年痴呆模型大鼠的记忆和空间探索能力也具有明显的改善作用。该物质可应用于制备抗老年痴呆药物且显示良好的市场应用前景。

Description

Ethyl asterrate在制备抗老年痴呆药物中的应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种二苯醚类化合物，并对其乙酰胆碱酯酶抑制活性进行了研究，该类化合物可应用于制备抗老年痴呆药物。

背景技术

老年痴呆（AD）是一种渐进性神经退化性疾病，其主要表现为记忆功能衰减及识别能力障碍，同时伴有各种神经症状和行为障碍，具有非常高的发病率，目前市场批准治疗 AD 的药物大多是抑制乙酰胆碱酯酶活性的药物，主要包括他克林 (tacrine)， 多奈哌齐 (donepezil)， 氨基甲酸酯 ( 如 rivastigmine，雷沃斯地明 )，石杉碱甲，加兰他敏 (galantamine) 等。随着全球人口老龄化的到来，其发病人数将不断增加，抗老年痴呆药物的需求将有广阔的增长空间。因此，抗老年痴呆药物的研发尤为迫切，寻找和发现新的乙酰胆碱酯酶抑制剂就显得尤为重要。

曲地酸( asterric acid) 及其类似物是一类具有二苯醚结构的化合物，是从一些曲霉 ( Aspergillus) 、青霉( Penicillium)及茎点霉(Phoma) 等真菌中提取分离到的一种真菌代谢产物，具有抗菌、抗肿瘤等医药活性以及杀菌、杀线虫及抑制水芹种子萌芽等农药活性。该类物质是首类非多肽内皮素结合抑制剂，也可作为血管内皮生长因子 ( VEGF) 抑制剂治疗早期的特发性肺纤维化疾病，目前已有商品化的生物试剂应用于生物和医学相关领域，是一类优秀的天然药物和天然先导化合物。本发明中化合物ethyl asterrate是曲地酸的衍生物，有显著的抗菌活性（LI Y，SUN BD，CHE YS，et al．Bioactive Asterric acid derivatives from the Antarctic ascomycete fungus Geomyces sp．［J］. J Nat Prod，2008，71( 9): 1643~1646．），而未见该类化合物在乙酰胆碱酯酶抑制活性方面的报道。本发明首次发现该物质具有明显的乙酰胆碱酯酶抑制活性，而目前市场批准治疗 AD 的药物大多是抑制乙酰胆碱酯酶活性的药物，因此该物质可作为制备老年痴呆药物的新来源。

发明内容

本发明涉及具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的化合物ethyl asterrate。本发明还涉及使用上述化合物在制备老年痴呆药物中的应用。

具体而言，本发明内容如下：本发明提供了式(I)的化合物，

(I)。

本发明所述的化合物ethyl asterrate可由商业购买获得，也可由真菌菌株发酵制备获得，还可通过合成方法制备获得。

本发明还提供了式(I)的化合物在抑制乙酰胆碱酯酶活性中的应用，利用体外活性检测技术对分离到的乙酰胆碱酯酶抑制剂（AChEI）的生物活性进行进一步量化研究，通过测定其半抑制浓度IC₅₀来评价其生物活性。

本发明另外提供了式(I)的化合物在制备抗老年痴呆药物中的应用，选用经典的老年痴呆动物造模方法，复制出老年痴呆模型小鼠和大鼠，并分别给予模型动物不同剂量的ethyl asterrate干预，均表明：ethyl asterrate具有显著的抗老年痴呆作用，可应用于制备抗老年痴呆药物。另外还显示：当ethyl asterrate的剂量为5 mg/kg以上时，其对模型小鼠记忆的改善和AChE酶活性的抑制均有增强，显示其作为临床抗老年痴呆药物的良好市场开发前景。

具体实施方式

下面根据具体实施例对本发明作进一步的说明，但不意味着限制本发明的保护范围。

实施例1：化合物ethyl asterrate的乙酰胆碱酯酶抑制活性

（1）药品与试剂

乙酰胆碱酯酶(AChE，Sigma公司)，50 mmol/L、pH8.0的磷酸缓冲盐溶液( PBS)，15 mmol/L 5,5-二硫代-2-硝基苯甲酸(dithiobis-nitrobenzoic acid，DTNB)溶液( Sigma公司) (用50mmol/L, pH 8.0 PBS配制)，15 mmol/L 硫代乙酰胆碱( Acetyl thiocholine, ATch，Sigma公司，用 50mmol/L, pH 8.0 PBS配制)，4%十二烷基硫酸钠( SDS, Sigma公司)，阳性对照Huperzine A (中国药品生物制品检定所) , 0.75mol/ L MgCl₂ 溶液，甲醇。

（2）实验方法

参照文献（张翼, 冯妍, 李晓明, 等. 海藻组分抑制乙酰胆碱酯酶活性研究[J]. 海洋与湖沼, 2005, 36(5): 459-464.）的方法做适当改进。化合物ethyl asterrate体外AChE抑制活性检测对照品为HupA标准品。样品及标准品均用甲醇配成1mg/mL。试管法测样品的体外AChE抑制活性的具体步骤如下：取20 mL 0.75 mol/L MgCl₂于试管中，加入0.5 mmol/L PBS (PH 8.0, 0.05 mol/L) 2530 mL，水浴锅中37°C水浴预热2 min；再依次加入样品150 mL，乙酰胆碱酯酶（AChE）100 mL (用Tris-HCl稀释3.33 u/mL)，15 mmol/L ATch 100 mL，于37°C水浴20 min，加4%SDS 1 mL终止15分钟，15 mmol/L DTNB 100 mL显色，测其在OD₄₁₂ nm的OD值。用下式计算抑制率I（%）：

其中：OD_样品: 样品150 mL +15 mmol/L ATch 100 mL；OD_本底: 样品150 mL + PBS 100 mL；OD_-: PBS 150 mL+ ATch 100 mL；OD₊: PBS 150 mL+ PBS 100 mL

（3）化合物ethyl asterrate活性测定

将化合物ethyl asterrate溶于甲醇中，配成1 mg/mL的浓度，再分别稀释为0.5、0.2、0.1、0.05、0.02、0.01 mg/mL，测抑制率(表1)，根据其分子量376计算其IC₅₀为149760 nmol/L，阳性对照Huperzine A 1 mg/mL的抑制率为93.28%。

表1 化合物ethyl asterrate不同浓度的AChE抑制活性

实施例2：

（1）实验动物及试药

实验动物：雌性NIH小鼠60只，20~24g，购于南昌大学实验动物学科部。

试药：ethyl asterrat（EA）来自于本实验室自制；D-半乳糖、AlCl₃ 购于国药集团化学试剂有限公司；乙酰胆碱酯酶(AChE)购自Sigma公司；脑复康购于广东华南药业集团有限公司。

（2）复合型老年痴呆动物模型的制备及给药

将实验雌性NIH小鼠随机分为空白对照组、AD模型组、脑复康组和EA组，每组15只。按照表2灌喂给药60天，ethyl asterrat（EA）、脑复康及AlCl₃用蒸馏水配成溶液及混悬液。

表2 分组及剂量

（3）Morris 水迷宫训练及测试

自给药结束后进行实验大鼠的水迷宫训练。自动记录水迷宫装置为80cm×50 cm×20 cm 的茶色有机玻璃槽，内设起点、终点 (台阶)和多处盲端，水深9cm，水温24°C~27°C，记录小鼠从起始点放入至找到台阶的时间(寻找潜伏期)， 若超过120 S则以120 S计。给药完毕后第1天，各组小鼠进行训练，使其找到台阶。

（4）脑内相关指标的测定  

行为学试验结束后，每组取10只小鼠禁食12 h，断头处死，取全脑 (嗅脑除外)，置玻匀浆器中，加入预冷生理盐水制成10g/mL脑匀浆，4000 r/min离心10 min，取上清液置冰浴中，测定AchE活性。实验结果统计学分析以±s表示，采用SPSS11.0软件包进行方差分析，用t检验进行各组间的比较。

（5）结果与分析

以脑复康作为阳性对照，测定ethyl asterrat（EA）对实验大鼠空间探索能力的影响， 其结果（表3）表明：灌服10mg/kg的EA均能缩短D-半乳糖和AlCl₃ 所致老年痴呆模型大鼠的潜伏期。与模型组比较，均具有显著性差异。显示EA对D-半乳糖和AlCl₃ 所致老年痴呆模型大鼠的记忆及行为具有明显的改善效果。模型组AchE活性比空白对照组明显升高，灌服10mg/kg的EA与模型组比较，具有显著性差异。

表 3  ethyl asterrat对实验大鼠空间探索能力的影响（n = 15）

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

综上所述和分析均表明：ethyl asterrat对D-半乳糖和AlCl₃ 所致老年痴呆模型大鼠具有显著的抗老年痴呆作用和改善记忆功能， 进一步证明ethyl asterrat可用于制备抗老年痴呆药物，同时也显示其在制备抗老年痴呆药物方面具有良好应用和开发前景。

Claims (1)

1.一种Ethyl asterrate在制备抗老年痴呆药物中的应用，其特征在于：二苯醚类化合物Ethyl asterrate，具有如式 (I) 所示的结构：                                                

(I)，该化合物具有明显的抑制乙酰胆碱酯酶活性，且可应用于制备抗老年痴呆药物。