CN103690864B - 铁帚清浊片在制备抑制肝癌细胞h22细胞增殖药物中的应用 - Google Patents
铁帚清浊片在制备抑制肝癌细胞h22细胞增殖药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103690864B CN103690864B CN201310746646.XA CN201310746646A CN103690864B CN 103690864 B CN103690864 B CN 103690864B CN 201310746646 A CN201310746646 A CN 201310746646A CN 103690864 B CN103690864 B CN 103690864B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- impure
- pure
- herba
- preparation
- ferrum broom
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 37
- 244000007853 Sarothamnus scoparius Species 0.000 title claims abstract description 37
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 title claims abstract description 10
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 title claims abstract description 10
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 claims abstract description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 16
- 241001251068 Formica fusca Species 0.000 claims abstract description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 13
- UAJTZZNRJCKXJN-UHFFFAOYSA-M sodium;2-dodecoxy-2-oxoethanesulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOC(=O)CS([O-])(=O)=O UAJTZZNRJCKXJN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 13
- 229940126678 chinese medicines Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 239000009526 Fructus Akebiae Substances 0.000 claims abstract description 7
- 241001619461 Poria <basidiomycete fungus> Species 0.000 claims abstract description 7
- 238000000194 supercritical-fluid extraction Methods 0.000 claims abstract description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 63
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 19
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 18
- 238000000874 microwave-assisted extraction Methods 0.000 claims description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 10
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 6
- 230000000274 adsorptive effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000006837 decompression Effects 0.000 claims description 6
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 6
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 6
- 238000004064 recycling Methods 0.000 claims description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 6
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 6
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 6
- DWCSNWXARWMZTG-UHFFFAOYSA-N Trigonegenin A Natural products CC1C(C2(CCC3C4(C)CCC(O)C=C4CCC3C2C2)C)C2OC11CCC(C)CO1 DWCSNWXARWMZTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 13
- WQLVFSAGQJTQCK-VKROHFNGSA-N diosgenin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@@]4(C)CC[C@H](O)CC4=CC[C@H]3[C@@H]2C1)C)[C@@H]1C)[C@]11CC[C@@H](C)CO1 WQLVFSAGQJTQCK-VKROHFNGSA-N 0.000 abstract description 13
- WQLVFSAGQJTQCK-UHFFFAOYSA-N diosgenin Natural products CC1C(C2(CCC3C4(C)CCC(O)CC4=CCC3C2C2)C)C2OC11CCC(C)CO1 WQLVFSAGQJTQCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 13
- 230000001629 suppression Effects 0.000 abstract description 5
- 229960004756 ethanol Drugs 0.000 description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 3
- 229960000935 dehydrated alcohol Drugs 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxybenzenecarbothioamide Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(N)=S WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WSGYTJNNHPZFKR-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxypropanenitrile Chemical compound OCCC#N WSGYTJNNHPZFKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QZKDXSOKZHLFHE-UHFFFAOYSA-N 4-(1,3-benzodioxol-5-yl)benzoic acid Chemical compound C1=CC(C(=O)O)=CC=C1C1=CC=C(OCO2)C2=C1 QZKDXSOKZHLFHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000167880 Hirundinidae Species 0.000 description 1
- 229920002334 Spandex Polymers 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000010165 autogamy Effects 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 208000013507 chronic prostatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000012738 dissolution medium Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000004900 laundering Methods 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 238000005325 percolation Methods 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 201000007094 prostatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000004759 spandex Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 229960002385 streptomycin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种铁帚清浊片在制备抑制肝癌细胞H22细胞增殖药物中的应用及铁帚清浊片的制备方法。本发明的铁帚清浊片在制备抑制肝癌细胞H22细胞增殖药物中的应用，所述铁帚清浊片由猪殃殃417g、铁扫帚417g、粉萆薢333g、鱼腥草417g、蒲公英417g、黑蚂蚁250g、预知子417g、车前子250g、茯苓250g、山药250g、益智167g、菟丝子250g、沙苑子250g、金樱根333g、远志125g、甘草50g作为原料药制成，采用超临界萃取和微波萃取制备而成，使得薯蓣皂苷元含量有很大提高。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种铁帚清浊片在制备抑制肝癌细胞H22细胞增殖药物中的应用及铁帚清浊片的制备方法。
背景技术
铁帚清浊丸标准号WS-10190（ZD-0190）2002，记载于国家中成药标准汇编内科外科妇科分册。由猪殃殃417g、铁扫帚417g、粉萆薢333g、鱼腥草417g、蒲公英417g、黑蚂蚁250g、预知子417g、车前子250g、茯苓250g、山药250g、益智167g、菟丝子250g、沙苑子250g、金樱根333g、远志125g、甘草50g作为原料药制成，具有清热解毒、利湿去浊的功效。用于慢性前列腺炎下焦湿热证。
现有技术中，尚未有铁帚清浊丸在在制备抑制肝癌细胞H22细胞增殖药物中的应用的报道，也未见有铁帚清浊丸提取制备方面采用超临界和微波技术的报道，而直接粉碎、渗漉、挥发油提取，水煎煮的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。
发明内容
发明目的：本发明的目的在于提供一种铁帚清浊片在制备抑制肝癌细胞H22细胞增殖药物中的应用。
本发明的另一个目的在于提供一种铁帚清浊片的制备方法。
本发明的目的是通过如下的方案实现的：
铁帚清浊片在制备抑制肝癌细胞H22细胞增殖药物中的应用，所述铁帚清浊片由猪殃殃417g、铁扫帚417g、粉萆薢333g、鱼腥草417g、蒲公英417g、黑蚂蚁250g、预知子417g、车前子250g、茯苓250g、山药250g、益智167g、菟丝子250g、沙苑子250g、金樱根333g、远志125g、甘草50g作为原料药制成，所述铁帚清浊片的制备方法由下列步骤组成：取铁扫帚、黑蚂蚁、鱼腥草、益智，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量l-3ml/g生药·min，萃取时间330-370min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎成粗粉，加入15L的60%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率600-800W，萃取2次，每次15-25分钟，合并萃取液，浓缩，加到DiaionHP-10大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。
优选的，上述的铁帚清浊片在制备抑制肝癌细胞H22细胞增殖药物中的应用，其特征在于，所述铁帚清浊片的制备方法由下列步骤组成：取铁扫帚、黑蚂蚁、鱼腥草、益智，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力25MPa，温度40℃，CO2流量5ml/g生药·min，萃取时间350min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎成粗粉，加入15L的30%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率700W，萃取2次，每次20分钟，合并萃取液，浓缩，加到DiaionHP-10大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。
现有技术中，铁帚清浊丸每次6g，一日3次。铁帚清浊丸服药量大，且丸剂味道不好，患者依从性差。采用本发明方法制备成的铁帚清浊片每片重0.5g，每次仅需3片，一日服用3次。在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。此结论可以通过下述试验证明。且制备成片剂，患者随水吞下即可，服药量小且无苦味，患者易于接受。
试验一、不同方法制备的铁帚清浊片中薯蓣皂苷元含量的比较
l、仪器及试药本发明铁帚清浊片：按实施例1方法制备，使用4785g原料药，经提取制成500片，每片重0.5g。原铁帚清浊丸，按照WS-10190（ZD-0190）2002标准方法制备。Agilent1200高效液相色谱仪；METTLERAE240电子分析天平；薯蓣皂苷元对照品（中国药品生物制品检定所）。
2、方法
照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥD）测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇—乙腈（60:40）为流动相；检测波长为206nm。理论板数按薯蓣皂苷元峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备精密称取在60℃减压干燥4小时的薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品20片，研细，取0.25g，精密称定，置50ml圆底烧瓶中，加2mol/L硫酸溶液30ml，加热回流2小时，取出，冷却，滤过，用适量水洗涤容器及滤渣，滤渣烘干（70～80℃），用氯仿加热回流3次（20ml、15ml、15ml），每次15分钟，滤过，合并滤液，挥干氯仿，残渣加流动相适量使溶解，转移至10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。
对照产品供试品溶液的制备取本品10g，精密称定，研细，取0.50g，精密称定，置50ml圆底烧瓶中，加2mol/L硫酸溶液30ml，加热回流2小时，取出，冷却，滤过，用适量水洗涤容器及滤渣，滤渣烘干（70～80℃），用氯仿加热回流3次（20ml、15ml、15ml），每次15分钟，滤过，合并滤液，挥干氯仿，残渣加流动相适量使溶解，转移至10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。
含粉萆薢以薯蓣皂苷元（C27H42O3）计，不得少于0.030mg。
3、结果
结果表明，本发明铁帚清浊片中薯蓣皂苷元的含量为1.2-2.4mg/片；而原铁帚清浊丸中薯蓣皂苷元的含量为0.32mg/g，每次服用量3片的薯蓣皂苷元含量为原丸剂10g含量的4-8倍，在服用量减少的情况下，薯蓣皂苷元含量有很大提高。
上述研究表明，采用本发明制备方法制备的铁帚清浊片，有效成分含量远远高于WS-10190（ZD-0190）2002标准记载的方法制备的铁帚清浊丸。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
取猪殃殃417g、铁扫帚417g、粉萆薢333g、鱼腥草417g、蒲公英417g、黑蚂蚁250g、预知子417g、车前子250g、茯苓250g、山药250g、益智167g、菟丝子250g、沙苑子250g、金樱根333g、远志125g、甘草50g，将铁扫帚、黑蚂蚁、鱼腥草、益智，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力25MPa，温度40℃，CO2流量5ml/g生药·min，萃取时间350min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎成粗粉，加入15L的30%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率700W，萃取2次，每次20分钟，合并萃取液，浓缩，加到DiaionHP-10大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。
经检测，成品中薯蓣皂苷元的含量为2.38mg/片。
实施例2
取猪殃殃417g、铁扫帚417g、粉萆薢333g、鱼腥草417g、蒲公英417g、黑蚂蚁250g、预知子417g、车前子250g、茯苓250g、山药250g、益智167g、菟丝子250g、沙苑子250g、金樱根333g、远志125g、甘草50g，将铁扫帚、黑蚂蚁、鱼腥草、益智，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力15MPa，温度30℃，CO2流量lml/g生药·min，萃取时间370min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎成粗粉，加入15L的60%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率600W，萃取2次，每次15分钟，合并萃取液，浓缩，加到DiaionHP-10大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。
经检测，成品中薯蓣皂苷元的含量为1.27mg/片。
实施例3
取猪殃殃417g、铁扫帚417g、粉萆薢333g、鱼腥草417g、蒲公英417g、黑蚂蚁250g、预知子417g、车前子250g、茯苓250g、山药250g、益智167g、菟丝子250g、沙苑子250g、金樱根333g、远志125g、甘草50g，将铁扫帚、黑蚂蚁、鱼腥草、益智，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6%，萃取压力30MPa，温度50℃，CO2流量3ml/g生药·min，萃取时间3300min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎成粗粉，加入15L的60%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率800W，萃取2次，每次25分钟，合并萃取液，浓缩，加到DiaionHP-10大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。
经检测，成品中薯蓣皂苷元的含量为1.84mg/片。
实施例4：铁帚清浊片抑制小鼠肝癌细胞H22细胞增殖的实验研究资料
1．实验材料
1.1实验用细胞株
小鼠肝癌细胞H22细胞，山东大学实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。
1.2实验药物
研究药物：本发明铁帚清浊片：按实施例1方法制备。
药液储液：称取100mg铁帚清浊片，溶于5ml无水乙醇中，0.2μm滤器过滤，500μldoff管分装，-20℃存储，同时0.2μm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
1.3实验试剂
DMEM(GIBCO公司Cat.No.12100-061Lot.No.758137)；胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419）；NaHCO3(上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-033Lot.No.1088387)；Trypsin（AMRESCO公司）；EDTA（AMRESCO公司）；PenicillinGSodiumSalt（AMRESCO公司1）；StreptomycinSulfate(AMRESCO)；无水乙醇（淄博亚杜兰经贸有限公司）；MTT(Biosharp批号：0793)：PBS（实验室自配）；
1.4实验器材
莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DMIL）；可见-紫外光微孔板检测仪（美国MD公司型号：SPECTRAMAX190）；CO2培养箱（FORMA型号：3111）；超净台（苏净集团安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD）；纯水仪（美国Sprlng公司型号：S/N020579）；精密移液器（法国吉尔森公司型号：P2）；电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323S）；全自动高压灭菌锅（日本SANYO公司型号：MLS-3020）；台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号：DHG9123A)；冰箱(西门子公司型号：KG18V21TI)；液氮罐（CBS型号：2001）；低速离心机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000）；0.2μm滤器（MILLIPORE型号：SLGP033RB）；1cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
2．实验方法
1)H22细胞用DMEM+10%FBS于37℃、5%CO2进行常规培养（10cm培养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.04%EDTA，37℃消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3×104个/ml。
2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180μl，培养板放入细胞培养箱中(37℃，5%CO2)常规培养。
3)根据细胞生长情况，一般长至50%-70%，加入铁帚清浊片溶液，继续培养24h。
4)24h后加入20μlMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。
5)4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔如入200μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
6)同时设置本底（不加细胞，只加培养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定6个复孔。
7)结果以药物对细胞的抑制率表示：细胞增值抑制率(%)=（对照孔OD值-给药孔OD值）、对照孔OD值×100%。实验重复3次。
3．统计处理
采用MicrosoftExcel2007软件中的相关分析和Studentt检验，数据以mean±S．D．表示。
4．实验结果
MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对H22细胞增殖抑制有差异(P<0.05)，剂量在10mg/ml时该差异具有显著性(P<0.01)，当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异(P<0.001)。
表1铁帚清浊片对H22细胞增殖抑制影响研究(X±SD)
| 组别 | 药物浓度（mg/ml） | 抑制率（%） |
| 对照组 | 0 | 0 |
| 1 | 5 | 9.52±6.31 |
| 2 | 10 | 17.43±8..10* |
| 3 | 15 | 29.69±10.06** |
| 4 | 20 | 39.14±14.38** |
注：与对照组比较，*P<O.01；**P<0.001。
5．实验结论
本发明的铁帚清浊片可以抑制H22细胞增殖，减少H22细胞的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。
Claims (1)
1.铁帚清浊片在制备抑制肝癌细胞H22细胞增殖药物中的应用，所述铁帚清浊片由猪殃殃417g、铁扫帚417g、粉萆薢333g、鱼腥草417g、蒲公英417g、黑蚂蚁250g、预知子417g、车前子250g、茯苓250g、山药250g、益智167g、菟丝子250g、沙苑子250g、金樱根333g、远志125g、甘草50g作为原料药制成，其特征在于，所述铁帚清浊片的制备方法由下列步骤组成：取铁扫帚、黑蚂蚁、鱼腥草、益智，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量l-3ml/g生药·min，萃取时间330-370min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎成粗粉，加入15L的60%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率600-800W，萃取2次，每次15-25分钟，合并萃取液，浓缩，加到DiaionHP-10大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310746646.XA CN103690864B (zh) | 2013-12-30 | 2013-12-30 | 铁帚清浊片在制备抑制肝癌细胞h22细胞增殖药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310746646.XA CN103690864B (zh) | 2013-12-30 | 2013-12-30 | 铁帚清浊片在制备抑制肝癌细胞h22细胞增殖药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103690864A CN103690864A (zh) | 2014-04-02 |
| CN103690864B true CN103690864B (zh) | 2015-12-09 |
Family
ID=50352634
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310746646.XA Expired - Fee Related CN103690864B (zh) | 2013-12-30 | 2013-12-30 | 铁帚清浊片在制备抑制肝癌细胞h22细胞增殖药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103690864B (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1686505A (zh) * | 2005-04-14 | 2005-10-26 | 赖庆龙 | 一种治疗前列腺疾病的中药制剂及其生产方法 |
-
2013
- 2013-12-30 CN CN201310746646.XA patent/CN103690864B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1686505A (zh) * | 2005-04-14 | 2005-10-26 | 赖庆龙 | 一种治疗前列腺疾病的中药制剂及其生产方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103690864A (zh) | 2014-04-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103705825B (zh) | 铁帚清浊片在制备抑制畸胎瘤细胞f9细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103735785B (zh) | 铁帚清浊片在制备抑制淋巴瘤细胞yac-1细胞增殖药物中的应用 | |
| CN105535515A (zh) | 绿及咳喘片在制备抑制前列腺癌细胞pc-3细胞增殖药物中的应用 | |
| CN104382871A (zh) | 黄萱益肝片的制备方法及其在制备抑制淋巴样瘤细胞p388d1细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103690864B (zh) | 铁帚清浊片在制备抑制肝癌细胞h22细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103690863B (zh) | 铁帚清浊片在制备抑制黑色素瘤细胞b16细胞增殖药物中的应用 | |
| CN105343292A (zh) | 蜜桶花片在制备抑制子宫内膜癌细胞hec-1b细胞增殖药物中的应用 | |
| CN104306822A (zh) | 一种黄萱益肝片的制备方法及其在制备抑制肝癌细胞h22细胞增殖药物中的应用 | |
| CN105412333A (zh) | 蜜桶花片在制备抑制胶质瘤细胞shg-44细胞增殖药物中的应用 | |
| CN104306820A (zh) | 一种黄萱益肝片的制备方法及其在制备抑制肺癌细胞llc细胞增殖药物中的应用 | |
| CN104306830A (zh) | 黄萱益肝片的制备方法及其在制备抑制骨髓瘤细胞P3X63Ag8细胞增殖药物中的应用 | |
| CN104306821A (zh) | 一种黄萱益肝片的制备方法及其在制备抑制肥大细胞瘤细胞p815细胞增殖药物中的应用 | |
| CN104306828A (zh) | 一种黄萱益肝片的制备方法及其在制备抑制淋巴瘤细胞yac-1细胞增殖药物中的应用 | |
| CN104398928A (zh) | 一种黄萱益肝片的制备方法及其在制备抑制骨髓瘤细胞fo细胞增殖药物中的应用 | |
| CN104324288A (zh) | 一种黄萱益肝片的制备方法及其在制备抑制畸胎瘤细胞f9细胞增殖药物中的应用 | |
| CN105521296A (zh) | 绿及咳喘片在制备抑制胎盘绒毛癌细胞jar细胞增殖药物中的应用 | |
| CN104324289A (zh) | 一种黄萱益肝片的制备方法及其在制备抑制淋巴瘤细胞el4细胞增殖药物中的应用 | |
| CN104306824A (zh) | 黄萱益肝片的制备方法及其在制备抑制肝癌细胞Hepa1-6细胞增殖药物中的应用 | |
| CN105381062A (zh) | 蜜桶花片在制备抑制宫颈癌细胞HelaS3细胞增殖药物中的应用 | |
| CN105412331A (zh) | 蜜桶花片在制备抑制前列腺癌细胞pc-3细胞增殖药物中的应用 | |
| CN105412330A (zh) | 蜜桶花片在制备抑制乳腺髓样癌细胞Bcap-37细胞增殖药物中的应用 | |
| CN104306827A (zh) | 一种黄萱益肝片的制备方法及其在制备抑制骨髓瘤细胞sp2/0细胞增殖药物中的应用 | |
| CN105521298A (zh) | 绿及咳喘片在制备抑制口腔表皮样癌细胞kb细胞增殖药物中的应用 | |
| CN104383380A (zh) | 一种黄萱益肝片的制备方法及其在制备抑制前列腺癌细胞rm-1细胞增殖药物中的应用 | |
| CN105362451A (zh) | 蜜桶花片在制备抑制黑色素瘤细胞m14细胞增殖药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Li Heping Inventor after: Zhang Bing Inventor before: Sun Yaping |
|
| COR | Change of bibliographic data | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20151030 Address after: 510080, No. two, No. 58, Zhongshan Road, Guangzhou, Guangdong, Yuexiu District Applicant after: The First Affiliated Hospital,Sun Yat-sen University Address before: Three road 256600 Shandong County of Boxing city of Binzhou Province Bo No. 126 Applicant before: Sun Yaping |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20151209 Termination date: 20161230 |