CN103690646A - 一种益康补元片的制备方法及其在抑制小鼠淋巴瘤细胞yac-1细胞增殖药物中的应用 - Google Patents
一种益康补元片的制备方法及其在抑制小鼠淋巴瘤细胞yac-1细胞增殖药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103690646A CN103690646A CN201310670597.6A CN201310670597A CN103690646A CN 103690646 A CN103690646 A CN 103690646A CN 201310670597 A CN201310670597 A CN 201310670597A CN 103690646 A CN103690646 A CN 103690646A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- preparation
- extraction
- yikang complement
- radix
- complement sheet
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 101000981253 Mus musculus GPI-linked NAD(P)(+)-arginine ADP-ribosyltransferase 1 Proteins 0.000 title claims abstract description 14
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 title claims abstract description 9
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 title claims description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title abstract description 4
- 238000000194 supercritical-fluid extraction Methods 0.000 claims abstract description 16
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 14
- 238000000874 microwave-assisted extraction Methods 0.000 claims abstract description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 53
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 42
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 22
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 16
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 15
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 claims description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 8
- 241000628997 Flos Species 0.000 claims description 6
- 239000009636 Huang Qi Substances 0.000 claims description 6
- 229940126678 chinese medicines Drugs 0.000 claims description 6
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 5
- 230000000274 adsorptive effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 5
- 230000006837 decompression Effects 0.000 claims description 5
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 5
- 238000004064 recycling Methods 0.000 claims description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 5
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 5
- YKRGDOXKVOZESV-WRJNSLSBSA-N Paeoniflorin Chemical compound C([C@]12[C@H]3O[C@]4(O)C[C@](O3)([C@]1(C[C@@H]42)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C)OC(=O)C1=CC=CC=C1 YKRGDOXKVOZESV-WRJNSLSBSA-N 0.000 abstract description 12
- YKRGDOXKVOZESV-UHFFFAOYSA-N paeoniflorin Natural products O1C(C)(C2(CC34)OC5C(C(O)C(O)C(CO)O5)O)CC3(O)OC1C24COC(=O)C1=CC=CC=C1 YKRGDOXKVOZESV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 abstract description 2
- 244000144730 Amygdalus persica Species 0.000 abstract 1
- 241000382455 Angelica sinensis Species 0.000 abstract 1
- 241000045403 Astragalus propinquus Species 0.000 abstract 1
- 244000020518 Carthamus tinctorius Species 0.000 abstract 1
- 235000003255 Carthamus tinctorius Nutrition 0.000 abstract 1
- 244000286838 Eclipta prostrata Species 0.000 abstract 1
- 241000218671 Ephedra Species 0.000 abstract 1
- 241000112528 Ligusticum striatum Species 0.000 abstract 1
- 244000274050 Platycodon grandiflorum Species 0.000 abstract 1
- 235000006753 Platycodon grandiflorum Nutrition 0.000 abstract 1
- 235000006040 Prunus persica var persica Nutrition 0.000 abstract 1
- 235000006533 astragalus Nutrition 0.000 abstract 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract 1
- 229960004756 ethanol Drugs 0.000 description 20
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 3
- 229960000935 dehydrated alcohol Drugs 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 235000019640 taste Nutrition 0.000 description 2
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N tetraphosphorus decaoxide Chemical compound O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxybenzenecarbothioamide Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(N)=S WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000027559 Appetite disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000167880 Hirundinidae Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 description 1
- 229920002334 Spandex Polymers 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000010165 autogamy Effects 0.000 description 1
- FCPVYOBCFFNJFS-LQDWTQKMSA-M benzylpenicillin sodium Chemical compound [Na+].N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C([O-])=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 FCPVYOBCFFNJFS-LQDWTQKMSA-M 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000012738 dissolution medium Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- 238000004900 laundering Methods 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000004759 spandex Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 229960002385 streptomycin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000009923 sugaring Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种益康补元片的制备方法及应用。本发明的益康补元片的制备方法，由黄芪280g、麻罕80g、当归190g、墨旱莲220g、苍术190g、红花150g、赤芍140g、桃仁140g、牛膝150g、川芎120g、枳壳70g、桔梗100g作为原料药制成，采用超临界萃取和微波萃取制备而成，使得芍药苷含量有很大提高。本发明还提供了益康补元片在制备抑制小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞增殖药物中的应用。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种益康补元片的制备方法及其在抑制小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞增殖药物中的应用。
背景技术
益康补元颗粒标准号WS-10983（ZD-0983）-2002，记载于国家中成药标准汇编内科脾胃分册。由黄芪280g、麻罕80g、当归190g、墨旱莲220g、苍术190g、红花150g、赤芍140g、桃仁140g、牛膝150g、川芎120g、枳壳70g、桔梗100g作为原料药制成，具有益气活血，健脾补肾的功效。用于气虚血瘀、脾肾亏虚引起的神疲乏力，呼吸气短，失眠，腰膝酸软，食少健忘等症。
现有技术中，尚未有益康补元颗粒在提取制备方面采用超临界和微波技术的报道，而挥发油提取，水煎煮的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。
发明内容
为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种益康补元片的制备方法。
本发明的另一个目的在于提供一种益康补元片在制备抑制小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞增殖药物中的应用。
本发明的目的是通过如下的方案实现的：
一种益康补元片的制备方法，由黄芪280g、麻罕80g、当归190g、墨旱莲220g、苍术190g、红花150g、赤芍140g、桃仁140g、牛膝150g、川芎120g、枳壳70g、桔梗100g作为原料药制成，所述的制备方法由下列步骤组成：取麻罕、当归、苍术、桃仁、川芎，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量l-3ml/g生药·min，萃取时间180-220min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入1.6L的50%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率600-800W，萃取2次，每次5-10分钟，合并萃取液，浓缩，加到Dl01大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成300片，每片重0.3g。
上述的益康补元片的制备方法中，所述CO2超临界萃取中夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
上述的益康补元片的制备方法中，所述CO2超临界萃取中萃取压力为25MPa。
上述的益康补元片的制备方法中，所述CO2超临界萃取中萃取温度为60℃。
上述的益康补元片的制备方法中，所述CO2超临界萃取中CO2流量2ml/g生药·min。
上述的益康补元片的制备方法中，所述CO2超临界萃取中萃取时间为200min。
上述的益康补元片的制备方法中，所述微波萃取功率为700W。
上述的益康补元片的制备方法中，所述微波萃取每次萃取时间为8分钟。
上述的益康补元片在制备抑制小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞增殖药物中的应用。
现有技术中，益康补元颗粒每次1袋，每袋7g，一日3次。益康补元颗粒服药量大，且颗粒剂制备需要加大量的糖，糖尿病患者不适宜，不加糖的话味道不佳，患者不容易服下，依从性差。采用本发明方法制备成的益康补元片每片重0.3g，每次仅需2片，一日服用3次。在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。此结论可以通过下述试验证明。且制备成片剂，患者随水吞下即可，服药量小且无苦味，患者易于接受。
试验一、不同方法制备的益康补元片中芍药苷含量的比较
l、仪器及试药本发明益康补元片：按实施例1方法制备，使用1510g原料药，经提取制成300片，每片重0.3g。原益康补元颗粒，按照WS-10983（ZD-0983）-2002标准方法制备。Agilent1200高效液相色谱仪；METTLER AE240电子分析天平；芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所）。
2、方法
照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录V D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.2%磷酸水溶液（15∶85）为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥36小时的芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
本发明产品供试品溶液的制备取本发明的益康补元片，研细，取2.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml.密塞，称定重量，超声处理(功率250w.频率33kHz)1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
对照产品供试品溶液的制备取本对照的益康补元颗粒，研细，取2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml.密塞，称定重量，超声处理(功率250w.频率33kHz)1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
3、结果
结果表明，本发明益康补元片中芍药苷的含量为5-8mg/片；而原益康补元颗粒中芍药苷的含量为4.8mg/袋，每次服用量2片的芍药苷含量为原颗粒剂含量的2-4倍，在服用量减少的情况下，芍药苷含量有很大提高。
上述研究表明，采用本发明制备方法制备的益康补元片，有效成分含量远远高于WS-10983（ZD-0983）-2002标准记载的方法制备的益康补元颗粒。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
取黄芪280g、麻罕80g、当归190g、墨旱莲220g、苍术190g、红花150g、赤芍140g、桃仁140g、牛膝150g、川芎120g、枳壳70g、桔梗100g，将麻罕、当归、苍术、桃仁、川芎加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力25MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间200min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入1.6L的50%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率700W，萃取2次，每次8分钟，合并萃取液，浓缩，加到Dl01大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成300片，每片重0.3g。
经检测，成品中芍药苷的含量为7.8mg/片。
实施例2
取黄芪280g、麻罕80g、当归190g、墨旱莲220g、苍术190g、红花150g、赤芍140g、桃仁140g、牛膝150g、川芎120g、枳壳70g、桔梗100g，将麻罕、当归、苍术、桃仁、川芎加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力30MPa，温度50℃，CO2流量3ml/g生药·min，萃取时间180min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入1.6L的50%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率600W，萃取2次，每次5分钟，合并萃取液，浓缩，加到Dl01大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成300片，每片重0.3g。
经检测，成品中芍药苷的含量为5.6mg/片。
实施例3
取黄芪280g、麻罕80g、当归190g、墨旱莲220g、苍术190g、红花150g、赤芍140g、桃仁140g、牛膝150g、川芎120g、枳壳70g、桔梗100g，将麻罕、当归、苍术、桃仁、川芎加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6%，萃取压力15MPa，温度30℃，CO2流量1ml/g生药·min，萃取时间220min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入1.6L的50%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率800W，萃取2次，每次10分钟，合并萃取液，浓缩，加到Dl01大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成300片，每片重0.3g。
经检测，成品中芍药苷的含量为6.2mg/片。
实施例4：益康补元片抑制小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞增殖的实验研究资料
1.实验材料
1.1实验用细胞株
小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞，山东大学实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。
1.2实验药物
研究药物：本发明益康补元片：按实施例1方法制备。
药液储液：称取100mg益康补元片，溶于5ml无水乙醇中，0.2μm滤器过滤，500μldoff管分装，-20℃存储，同时0.2μm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
1.3实验试剂
DMEM(GIBCO公司Cat.No.12100-061Lot.No.758137)；胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419）；NaHCO3(上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-033Lot.No.1088387)；Trypsin（AMRESCO公司）；EDTA（AMRESCO公司）；Penicillin G Sodium Salt（AMRESCO公司1）；Streptomycin Sulfate(AMRESCO)；无水乙醇（淄博亚杜兰经贸有限公司）；MTT(Biosharp批号：0793)：PBS（实验室自配）；
1.4实验器材
莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DMIL）；可见-紫外光微孔板检测仪（美国MD公司型号：SPECTRAMAX190）；CO2培养箱（FORMA型号：3111）；超净台（苏净集团安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD）；纯水仪（美国Sprlng公司型号：S/N020579）；精密移液器（法国吉尔森公司型号：P2）；电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323S）；全自动高压灭菌锅（日本SANYO公司型号：MLS-3020）；台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号：DHG9123A)；冰箱(西门子公司型号：KG18V21TI)；液氮罐（CBS型号：2001）；低速离心机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000）；0.2μm滤器（MILLIPORE型号：SLGP033RB）；1cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
2.实验方法
1)YAC-1细胞用DMEM+10%FBS于37℃、5%CO2进行常规培养（10cm培养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.04%EDTA，37℃消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3×104个/ml。
2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180μl，培养板放入细胞培养箱中(37℃，5%CO2)常规培养。
3)根据细胞生长情况，一般长至50%-70%，加入益康补元片溶液，继续培养24h。
4)24h后加入20μl MTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。
5)4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔如入200μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
6)同时设置本底（不加细胞，只加培养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定6个复孔。
7)结果以药物对细胞的抑制率表示：细胞增值抑制率(%)=（对照孔OD值-给药孔OD值）、对照孔OD值×100%。实验重复3次。
3.统计处理
采用Microsoft Excel2007软件中的相关分析和Student t检验，数据以mean±S.D.表示。
4.实验结果
MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对YAC-1细胞增殖抑制有差异(P<0.05)，剂量在10mg/ml时该差异具有显著性(P<0.01)，当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异(P<0.001)。
表1益康补元片对YAC-1细胞增殖抑制影响研究(X±SD)
| 组别 | 药物浓度（mg/ml） | 抑制率（%） |
| 对照组 | 0 | 0 |
| 1 | 5 | 8.94±7.62 |
| 2 | 10 | 21.41±10.59* |
| 3 | 15 | 33.68±14.22** |
| 4 | 20 | 45.71±16.98** |
注：与对照组比较，*P<0.01；**P<0.001。
5.实验结论
本发明的益康补元片可以抑制YAC-1细胞增殖，减少YAC-1细胞的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。
Claims (9)
1.一种益康补元片的制备方法，由黄芪280g、麻罕80g、当归190g、墨旱莲220g、苍术190g、红花150g、赤芍140g、桃仁140g、牛膝150g、川芎120g、枳壳70g、桔梗100g作为原料药制成，其特征在于，所述的制备方法由下列步骤组成：取麻罕、当归、苍术、桃仁、川芎，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量l-3ml/g生药·min，萃取时间180-220min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入1.6L的50%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率600-800W，萃取2次，每次5-10分钟，合并萃取液，浓缩，加到Dl01大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成300片，每片重0.3g。
2.根据权利要求l所述的益康补元片的制备方法，其特征在于，所述CO2超临界萃取中夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
3.根据权利要求l所述的益康补元片的制备方法，其特征在于，所述CO2超临界萃取中萃取压力为25MPa。
4.根据权利要求l所述的益康补元片的制备方法，其特征在于，所述CO2超临界萃取中萃取温度为60℃。
5.根据权利要求l所述的益康补元片的制备方法，其特征在于，所述CO2超临界萃取中CO2流量2ml/g生药·min。
6.根据权利要求l所述的益康补元片的制备方法，其特征在于，所述CO2超临界萃取中萃取时间为200min。
7.根据权利要求l所述的益康补元片的制备方法，其特征在于，所述微波萃取功率为700W。
8.根据权利要求l所述的益康补元片的制备方法，其特征在于，所述微波萃取每次萃取时间为8分钟。
9.权利要求l所述的益康补元片在制备抑制小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞增殖药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310670597.6A CN103690646B (zh) | 2013-12-11 | 2013-12-11 | 一种益康补元片的制备方法及其在抑制小鼠淋巴瘤细胞yac-1细胞增殖药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310670597.6A CN103690646B (zh) | 2013-12-11 | 2013-12-11 | 一种益康补元片的制备方法及其在抑制小鼠淋巴瘤细胞yac-1细胞增殖药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103690646A true CN103690646A (zh) | 2014-04-02 |
| CN103690646B CN103690646B (zh) | 2015-08-19 |
Family
ID=50352416
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310670597.6A Active CN103690646B (zh) | 2013-12-11 | 2013-12-11 | 一种益康补元片的制备方法及其在抑制小鼠淋巴瘤细胞yac-1细胞增殖药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103690646B (zh) |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104161803A (zh) * | 2014-07-22 | 2014-11-26 | 山东福胶集团有限公司 | 一种柴黄口服液的制备方法及其应用 |
| CN104306726A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-01-28 | 山东中大药业有限公司 | 一种九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制骨髓瘤细胞fo细胞增殖药物中的应用 |
| CN104306728A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-01-28 | 山东中大药业有限公司 | 一种九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制淋巴瘤细胞el4细胞增殖药物中的应用 |
| CN104383281A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-04 | 山东中大药业有限公司 | 一种九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制肝癌细胞h22细胞增殖药物中的应用 |
| CN104383282A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-04 | 山东中大药业有限公司 | 一种九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制肝癌细胞Hepa1-6细胞增殖药物中的应用 |
| CN104398811A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-11 | 山东中大药业有限公司 | 九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制肛门肉瘤细胞s-180细胞增殖药物中的应用 |
| CN104398817A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-11 | 山东中大药业有限公司 | 九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制肥大细胞瘤细胞p815细胞增殖药物中的应用 |
| CN104398815A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-11 | 山东中大药业有限公司 | 一种九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制黑色素瘤细胞b16细胞增殖药物中的应用 |
| CN104398814A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-11 | 山东中大药业有限公司 | 一种九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制白血病细胞l1210细胞增殖药物中的应用 |
| CN104398818A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-11 | 山东中大药业有限公司 | 一种九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制骨髓瘤细胞sp2/0细胞增殖药物中的应用 |
| CN104398810A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-11 | 山东中大药业有限公司 | 九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制淋巴样瘤细胞p388d1细胞增殖药物中的应用 |
| CN104398819A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-11 | 山东中大药业有限公司 | 九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制腹水瘤细胞sac-ⅱb2细胞增殖药物中的应用 |
| CN104398816A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-11 | 山东中大药业有限公司 | 一种九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制畸胎瘤细胞p19细胞增殖药物中的应用 |
| CN105998189A (zh) * | 2016-05-09 | 2016-10-12 | 南京明宽信息咨询中心 | 一种含复合维生素的片剂保健品及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1961929A (zh) * | 2005-11-09 | 2007-05-16 | 北京奇源益德药物研究所 | 益气活血健脾补肾的益康补元制剂及其制法和质控方法 |
| CN102988526A (zh) * | 2012-10-08 | 2013-03-27 | 卞毓平 | 一种白灵片的制备方法及应用 |
-
2013
- 2013-12-11 CN CN201310670597.6A patent/CN103690646B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1961929A (zh) * | 2005-11-09 | 2007-05-16 | 北京奇源益德药物研究所 | 益气活血健脾补肾的益康补元制剂及其制法和质控方法 |
| CN102988526A (zh) * | 2012-10-08 | 2013-03-27 | 卞毓平 | 一种白灵片的制备方法及应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 王笑民: "论益气活血法治疗肿瘤", 《中国中医药信息杂志》 * |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104161803A (zh) * | 2014-07-22 | 2014-11-26 | 山东福胶集团有限公司 | 一种柴黄口服液的制备方法及其应用 |
| CN104306726A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-01-28 | 山东中大药业有限公司 | 一种九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制骨髓瘤细胞fo细胞增殖药物中的应用 |
| CN104306728A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-01-28 | 山东中大药业有限公司 | 一种九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制淋巴瘤细胞el4细胞增殖药物中的应用 |
| CN104383281A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-04 | 山东中大药业有限公司 | 一种九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制肝癌细胞h22细胞增殖药物中的应用 |
| CN104383282A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-04 | 山东中大药业有限公司 | 一种九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制肝癌细胞Hepa1-6细胞增殖药物中的应用 |
| CN104398811A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-11 | 山东中大药业有限公司 | 九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制肛门肉瘤细胞s-180细胞增殖药物中的应用 |
| CN104398817A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-11 | 山东中大药业有限公司 | 九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制肥大细胞瘤细胞p815细胞增殖药物中的应用 |
| CN104398815A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-11 | 山东中大药业有限公司 | 一种九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制黑色素瘤细胞b16细胞增殖药物中的应用 |
| CN104398814A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-11 | 山东中大药业有限公司 | 一种九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制白血病细胞l1210细胞增殖药物中的应用 |
| CN104398818A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-11 | 山东中大药业有限公司 | 一种九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制骨髓瘤细胞sp2/0细胞增殖药物中的应用 |
| CN104398810A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-11 | 山东中大药业有限公司 | 九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制淋巴样瘤细胞p388d1细胞增殖药物中的应用 |
| CN104398819A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-11 | 山东中大药业有限公司 | 九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制腹水瘤细胞sac-ⅱb2细胞增殖药物中的应用 |
| CN104398816A (zh) * | 2014-11-13 | 2015-03-11 | 山东中大药业有限公司 | 一种九味獐牙菜片的制备方法及其在制备抑制畸胎瘤细胞p19细胞增殖药物中的应用 |
| CN105998189A (zh) * | 2016-05-09 | 2016-10-12 | 南京明宽信息咨询中心 | 一种含复合维生素的片剂保健品及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103690646B (zh) | 2015-08-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103690646B (zh) | 一种益康补元片的制备方法及其在抑制小鼠淋巴瘤细胞yac-1细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103655843B (zh) | 一种益康补元片及其制备方法和应用 | |
| CN103656493B (zh) | 一种祛瘀益胃片的制备方法及应用 | |
| CN103638450B (zh) | 一种木香理气片的制备方法及应用 | |
| CN103690647B (zh) | 一种益康补元片的制备方法及其在抑制小鼠白血病细胞l6565细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103655842B (zh) | 一种益康补元片的制备方法及其在抑制小鼠淋巴瘤细胞el4.il-2细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103655839B (zh) | 一种益康补元片的制备方法及其在抑制小鼠肺癌细胞llc细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103655841B (zh) | 一种益康补元片的制备方法及其在抑制小鼠淋巴样瘤细胞p388d1细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103735960A (zh) | 石椒草咳喘片在制备抑制肺癌细胞llc细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103751424A (zh) | 一种青梅感冒片的制备方法及其在抑制畸胎瘤细胞f9细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103800498A (zh) | 一种青梅感冒片的制备方法及其在抑制列腺癌细胞rm-1细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103768211A (zh) | 一种青梅感冒片的制备方法及其在抑制淋巴瘤细胞el4细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103655838B (zh) | 一种益康补元片的制备方法及其在抑制小鼠淋巴瘤细胞l5178y细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103655840B (zh) | 一种益康补元片的制备方法及其在抑制小鼠白血病细胞l1210细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103800871A (zh) | 止眩安神片在制备抑制畸胎瘤细胞f9细胞增殖药物中的应用 | |
| CN104288658A (zh) | 一种阿里红咳喘片的制备方法及其在抑制小鼠骨髓瘤细胞sp2/0 细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103566168B (zh) | 一种安神片的制备方法及应用 | |
| CN103800770A (zh) | 石椒草咳喘片在制备抑制乳腺肿瘤细胞c127细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103751425A (zh) | 一种青梅感冒片的制备方法及其在抑制乳腺肿瘤细胞c127细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103768561A (zh) | 止眩安神片在制备抑制淋巴瘤细胞el4细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103768562A (zh) | 止眩安神片在制备抑制白血病细胞l1210细胞增殖药物中的应用 | |
| CN103800872A (zh) | 止眩安神片在制备抑制脑神经瘤细胞Neuro-2a细胞增殖药物中的应用 | |
| CN104288659A (zh) | 一种阿里红咳喘片的制备方法及其在抑制小鼠乳腺肿瘤细胞c127 细胞增殖药物中的应用 | |
| CN104288654A (zh) | 一种阿里红咳喘片的制备方法及其在抑制小鼠肺癌细胞llc细胞增殖药物中的应用 | |
| CN104288660A (zh) | 一种阿里红咳喘片的制备方法及其在抑制小鼠淋巴瘤细胞el4 细胞增殖药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: XU MAOHANG Free format text: FORMER OWNER: SHANDONG ZHONGDA PHARM CO., LTD. Effective date: 20150717 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| C53 | Correction of patent of invention or patent application | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Ren Lijie Inventor after: Wang Xuan Inventor after: Liu Haini Inventor before: Wei Shutong Inventor before: Duan Xuewen |
|
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: WEI SHUTONG DUAN XUEWEN TO: REN LIJIE WANG XUAN LIU HAINI |
|
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20150717 Address after: Licang District of Shandong province 266000 fo Lu Zheng Qingdao City No. 17 Applicant after: Xu Maohang Address before: 250062, No. ten, No. 16369, Lixia District, Ji'nan City, Shandong Province Applicant before: SHANDONG ZHONGDA PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20190925 Address after: 233000 Xianghe Home Floor No.9, Xinhuai Road, Dongsheng Street, Longzihu District, Bengbu City, Anhui Province Patentee after: Bengbu Qibang Science and Technology Information Consulting Co.,Ltd. Address before: Licang District of Shandong province 266000 fo Lu Zheng Qingdao City No. 17 Patentee before: Xu Maohang |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20210916 Address after: No. 4081, 4 / F, yingyiweiye venture building, 800m west of No. 5 Bridge, Jintang Road, Dongli District, Tianjin Patentee after: Smart housekeeper (Tianjin) Technology Co.,Ltd. Address before: 233000 No.9, 1st floor, Xianghe Jiayuan, Xinhuai Road, Dongsheng Street, Longzihu District, Bengbu City, Anhui Province Patentee before: Bengbu Qibang Science and Technology Information Consulting Co.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20220506 Address after: 300300 324, floor 3, tower a, Xinhao apartment, No. 58, Wuwei Road, Dongli Economic and Technological Development Zone, Dongli District, Tianjin Patentee after: Tianjin ruijijiade Intellectual Property Service Co.,Ltd. Address before: No. 4081, 4 / F, yingyiweiye venture building, 800m west of No. 5 Bridge, Jintang Road, Dongli District, Tianjin Patentee before: Smart housekeeper (Tianjin) Technology Co.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20230112 Address after: No. 16, Room 301, Building 2, No. 302, Changjiang Road, Yantai Area, China (Shandong) Pilot Free Trade Zone, Yantai City, Shandong Province, 265599 Patentee after: Yantai Power Intellectual Property Service Co.,Ltd. Address before: 300300 324, floor 3, tower a, Xinhao apartment, No. 58, Wuwei Road, Dongli Economic and Technological Development Zone, Dongli District, Tianjin Patentee before: Tianjin ruijijiade Intellectual Property Service Co.,Ltd. |