CN103688772A - 一种检测二化螟或大螟对转Bt水稻敏感性的方法 - Google Patents

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马伟华
侯蕾蕾
张志林
王小平
雷朝亮
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Abstract

本发明公开了一种检测二化螟或大螟对转Bt水稻敏感性的方法，它包括以下步骤：取转Bt水稻种子，用蒸馏水在37℃条件下浸泡24-48h，种子露出白色的胚芽后保湿催芽，待胚芽长至0.8-1.5cm时备用；选择Bt毒素蛋白表达量无差异的水稻胚芽，并将待测二化螟或大螟初孵幼虫与室内饲养的二化螟或大螟初孵幼虫同时用水稻胚芽饲养；饲养5-10天后记录活虫数，计算死亡率，并将待测二化螟或大螟初孵幼虫与室内饲养的二化螟或大螟初孵幼虫进行比对。本发明具有试验周期短，操作简便、快速等优点。

Description

一种检测二化螟或大螟对转Bt水稻敏感性的方法
技术领域
本发明涉及一种检测二化螟或大螟对转Bt水稻敏感性的方法。
背景技术
二化螟和大螟均属鳞翅目，是我国水稻上危害最为严重的常发性害虫，国内各稻区均有分布，但主要以长江流域及以南稻区发生较重，近年来发生数量呈明显上升的态势，给农业生产造成严重威胁。
传统化学防治方法虽然能在短期内有效的防治虫害，但是其环境污染、杀害天敌、破坏生态平衡和增加生产成本，所以选育抗虫水稻是最经济、实效的方法。从1988年，第一例转Bt水稻研制成功后，不同类型的Bt杀虫基因、蛋白酶抑制剂基因和植物或动物源凝集素基因不断的转入不同水稻品种，从而得到不同品系的抗虫水稻。
我国选育的转Bt水稻主要是以二化螟、大螟等害虫为主要靶标害虫，这类转基因抗虫水稻的种植可能会引起田间螟类害虫种群抗性发生。因此，建立评估二化螟等螟类对转基因抗虫水稻敏感性的方法,对早期预警螟类害虫抗性的发生显得尤为重要。传统的监测方法是将螟类害虫用田间转Bt水稻的稻杆进行饲养，通过统计死亡率来评估害虫对转Bt水稻的敏感性，该方法繁琐，费时较长。
发明内容
本发明的目的在于提供一种简便快速的检测二化螟或大螟对转Bt水稻敏感性的方法。
上述目的是通过以下技术方案实现的：
一种检测二化螟或大螟对转Bt水稻敏感性的方法，包括以下步骤：
1）取转Bt水稻种子，用蒸馏水在37℃条件下浸泡24-48h，种子露出白色的胚芽后保湿催芽，待胚芽长至0.8-1.5cm时备用；
2）检测水稻胚芽的Bt毒素蛋白表达量，选择Bt毒素蛋白表达量无差异的水稻胚芽；
3）将待测二化螟或大螟初孵幼虫与室内饲养的二化螟或大螟初孵幼虫同时用步骤2）的水稻胚芽饲养，饲养温度为20-30℃，相对湿度为50-80%，每天在自然光条件下饲养14小时，然后在避光条件下饲养10小时；
4）饲养5-10天后记录活虫数，计算死亡率，并将待测二化螟或大螟初孵幼虫与室内饲养的二化螟或大螟初孵幼虫进行比对，根据比对结果分析待测二化螟或大螟对Bt水稻的敏感性。
优选地，步骤3）中所述二化螟或大螟初孵幼虫的饲养条件是温度为26-28℃，相对湿度为60-70%。
本方法将二化螟或大螟的初孵幼虫接在水稻胚芽上进行饲养，解决了二化螟或大螟初孵幼虫在水稻胚芽上难以饲养成活等问题，并通过将二化螟或大螟田间种群和室内种群对转Bt水稻的敏感性进行对比，从而快速监测室外种群对转Bt水稻的抗性水平。该方法具有试验周期短，操作简便、快速等优点。
附图说明
图1是二化螟室内种群与田间种群对四种水稻的敏感性检测结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
一种检测二化螟对转Bt水稻敏感性的方法，包括以下步骤：
1）取三种转Bt水稻种子（Cry1C、Cry2A、Cry1Ac），以明恢63水稻种子为对照，用蒸馏水在37℃条件下浸泡36h，种子露出白色的胚芽后保湿催芽，待胚芽长至1cm时备用；
2）用植物抗虫转基因定量检测试剂盒（通过商业途径购买）检测三种转Bt水稻胚芽的Bt毒素蛋白表达量（按试剂盒的说明书进行操作），选择Bt毒素蛋白表达量无差异的水稻胚芽；
3）将待测二化螟初孵幼虫与室内饲养的二化螟初孵幼虫分别用四种水稻胚芽饲养，饲养温度为27℃，相对湿度为60%，每天在自然光条件下饲养14小时，然后在避光条件下饲养10小时，每个实验处理5个重复，每个重复20头试虫；
4）饲养7天后记录活虫数，计算死亡率，并将待测二化螟初孵幼虫与室内饲养的二化螟初孵幼虫进行比对，根据比对结果分析待测二化螟对Bt水稻的敏感性。
试验结果如图1所示。
结果表明，本实施例中二化螟室内种群与田间种群的死亡率基本一致，田间种群与室内种群的各处理（Cry1C,Cry2A,Cry1Ac）组没有显著差异，说明田间种群与室内种群在对三种转基因水稻的抗性水平一致，即二化螟田间种群对转Bt水稻敏感性高，没有产生抗性。

Claims (2)

1.一种检测二化螟或大螟对转Bt水稻敏感性的方法，其特征在于包括以下步骤：
1）取转Bt水稻种子，用蒸馏水在37℃条件下浸泡24-48h，种子露出白色的胚芽后保湿催芽，待胚芽长至0.8-1.5cm时备用；
2）检测水稻胚芽的Bt毒素蛋白表达量，选择Bt毒素蛋白表达量无差异的水稻胚芽；
3）将待测二化螟或大螟初孵幼虫与室内饲养的二化螟或大螟初孵幼虫同时用步骤2）的水稻胚芽饲养，饲养温度为20-30℃，相对湿度为50-80%，每天在自然光条件下饲养14小时，然后在避光条件下饲养10小时；
4）饲养5-10天后记录活虫数，计算死亡率，并将待测二化螟或大螟初孵幼虫与室内饲养的二化螟或大螟初孵幼虫进行比对，根据比对结果分析待测二化螟或大螟对Bt水稻的敏感性。
2.根据权利要求1所述的检测二化螟或大螟对转Bt水稻敏感性的方法，其特征在于：步骤3）中所述二化螟或大螟初孵幼虫的饲养温度为26-28℃，相对湿度为60-70%。
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