CN103655564B - 抑制组成型活性磷酸化flt3激酶的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明包括降低或抑制细胞或对象中正常和突变FLT3激酶活性的方法，以及与利用本发明化合物或其药学上可接受的盐相关的此类化合物在预防或治疗对象中细胞增殖性疾病中的应用：

Description

抑制组成型活性磷酸化FLT3激酶的方法
技术领域
本发明涉及降低或抑制细胞或对象中正常和突变FLT3的激酶活性的方法，以及此类方法对于预防或治疗FLT3相关的细胞增殖性疾病的应用。
背景技术
结合蛋白质激酶描述本发明的背景，但并不限制本发明的范围。
蛋白质激酶是这样一种酶，其通过催化γ磷酸根从三磷酸核苷酸，通常是三磷酸腺苷(ATP)的转移，并将磷酸根共价结合于氨基酸残基丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的游离羟基来化学修饰其它蛋白质。
激酶活性可修饰全部人蛋白质中的约30%。蛋白质激酶指导酶活性、底物蛋白的细胞定位和基础功能/结合，并调节细胞信号转导和细胞功能协调。
研究显示正常或突变蛋白激酶的异常表达常与许多疾病的形成和蔓延相关。研究显示蛋白激酶的过表达或不适当表达与癌症、心血管疾病、类风湿性关节炎、糖尿病、眼科疾病、神经疾病和自身免疫疾相关。因此，研究强效抑制蛋白激酶活性和功能的化合物能更深入地了解蛋白激酶的生理学作用。
FMS-样酪氨酸激酶3(FLT3)基因编码影响造血作用进而导致血液学疾病和恶性肿瘤的膜结合受体酪氨酸激酶。参见Drexler,HG等.“白血病细胞的FLT3 受体表达和对FLT3配体的反应”(Expression of FLT3 receptor and response to FLT3 ligand byleukemic cells).Leukemia.1996;10:588-599;Gilliland,DG和JD Griffin.“FLT3在造血作用和白血病中的作用”(The roles of FLT3 in hematopoiesis and leukemia).Blood.2002;100:1532-1542;Stirewalt,DL和JP Radich.“FLT3在造血恶性肿瘤中的作用”(The role of FLT3 in hematopoietic malignancies).Nat Rev Cancer.2003;3:650-665。FLT3配体(FLT3L)与FLT3受体结合启动FLT3受体酪氨酸激酶(也称为干细胞酪氨酸激酶-1(STK-1)和胎儿肝脏激酶-2(flk-2))的激活，所述受体在造血祖细胞和干细胞上表达。
FLT3是造血恶性肿瘤中最常突变的基因之一，在约30%成人急性髓性白血病(AML)中存在。参见Nakao M,S Yokota和T Iwai.“在急性髓性白血病中发现 FLT3基因的内部串联重复”(Internal tandem duplication of the FLT3gene found in acute myeloidleukemia).Leukemia.1996;10:1911-1918;H Kiyoi,M Towatari 和S Yokota.“FLT3基因的内部串联重复是导致产物的组成型激活的延伸突变新形态”(Internal Tandemduplication of the FLT3 gene is a novel modality of elongation mutation,whichcauses constitutive activation of the product). Leukemia.1998;12:1333-1337;PDKottaridis,RE Gale等,“急性髓性白血病 (AML)患者中存在FLT3内部串联重复增加了细胞遗传风险组的重要预后信息和对第一轮化疗的反应：英国医学研究理事会AML 10和12次试验中854位患者的分析”(The presence of a FLT3 internal tandem duplication inpatients with acute myeloid leukemia(AML)adds important prognosticinformation to cytogenetic risk group and response to the first cycle ofchemotherapy:analysis of 854 patients from the United Kingdom MedicalResearch Council AML 10 and 12 trials).Blood.2001; 98:1742-1759;Yamamoto Y,Kiyoi H,Nakano Y.“人血液恶性肿瘤中FLT3的激活环内D835的激活突变”(Activatingmutation of D835 within the activation loop of FLT3 in human hematologicmalignancies).Blood.2001;97:2434-2439;Thiede C,C Steudel,Mohr B.“979位急性髓性白血病患者中FLT3-激活突变的分析：结合FAB亚型和预后较差的亚组的鉴定”(Analysisof FLT3-activating mutations in 979 patients with acute myelogenous leukemia:association with FAB subtypes and identification of subgroups with poorprognosis).Blood.2002;99:4326-4335。 FLT3突变已在约2%诊断为中等和高风险骨髓增生异常综合征(MDS)的患者中检测到。参见，S Bains,Luthra R,Medeiros LJ和Zuo Z.“骨髓增生异常综合征中的FLT3和NPM1突变：预测发展为急性髓性白血病的频率和潜能值”(FLT3 and NPM1 mutations in myelodysplastic syndromes:Frequency and potentialvalue for predicting progression to acute myeloid leukemia).American Journalof Clinical Pathology.2011年1月;135:62-69;PK Bhamidipati,Daver NG,KantarjianH等, “骨髓增生异常综合征(MDS)和慢性骨髓单细胞性白血病(CMML)中的FLT3突变”(FLT3mutations in myelodysplastic syndromes(MDS)and chronic myelomonocyticleukemia(CMML)).2012.Journal of Clinical Oncology.增刊; 摘要6597。与MDS类似，急性早幼粒细胞性白血病(APL)患者中FLT3突变数量较少。最常见的FLT3突变是导致FLT3受体的近膜结构域(juxtamembrane domain) 内的框内插入的内部串联重复(ITD)。FLT3-ITD突变已在15-35%的成人AML患者中有报道。参见Nakao M,S Yokota和T Iwai.“急性髓性白血病中发现的FLT3 基因内部串联重复”(Internal tandem duplication of the FLT3gene found in acute myeloid leukemia).Leukemia.1996;10:1911-1918;H Kiyoi,MTowatari和S Yokota“FLT3基因的内部串联重复是导致产物的组成型激活的延伸突变新形态”(Internal Tandem duplication of the FLT3 gene is a novel modality ofelongation mutation,which causes constitutive activation of the product).Leukemia. 1998;12:1333-1337;H Kiyoi,T Naoe和S Yokota.“急性早幼粒细胞性白血病中与白细胞增多相关的FLT3内部串联重复”(Internal tandem duplication of FLT3associated with leukocytosis in acute promyelocytic leukemia).厚生省白血病研究组(Leukemia Study Group of the Ministry of Health and Welfare).Leukemia.1997; 11:1447-1452;S Schnittger,C Schoch和M Duga.“1003位急性髓性白血病患者中的FLT3长度突变分析：根据细胞遗传学、FAB亚型以及在AMLCG研究中的预后和用作检测轻微后遗症的标记”(Analysis of FLT3 length mutations in 1003 patientswith acute myeloid leukemia:correlation to cytogenetics,FAB subtype, andprognosis in the AMLCG study and usefulness as a marker for the detection ofminimal residual disease).Blood.2002;100:59-66。FLT3-ITD突变是患者预后不佳的独立预测，其与升高的标准化疗后复发风险及降低的无疾病和总存活率相关。参见FM Abu-Duhier,Goodeve AC,Wilson GA等,“成人急性髓性白血病中的FLT3内部串联重复突变确定高风险组”(FLT3internal tandem duplication mutations in adult acute myeloidleukemia define a high risk group).British Journal of Haematology.2000;111:190-195;H Kiyoi,T Naoe,Y Nakano等,“急性髓性白血病中FLT3和N-RAS基因突变的预后含义”(Prognostic implication of FLT3 and N-RAS gene mutations in acutemyeloid leukemia).Blood.1999;93:3074-3080。 FLT3受体的激活环中产生的FLT3点突变较少见。最常受影响的密码子是天冬氨酸835(D835)。约5-10%的成人急性髓性白血病患者中发生D835残基的核苷酸取代。参见DL Stirewalt和JP Radich.“FLT3在造血恶性肿瘤中的作用”(The role of FLT3 in haematopoietic malignancies).Nature ReviewsCancer.2003;3:650-665;Y Yamamoto,H Kiyoi和Y Nakano等,“人血液恶性肿瘤中FLT3激活环内的D835 激活突变”(Activating mutation of D835 within the activation loopof FLT3 in human hematologic malignancies).Blood.2001;97:2434-2439;C Thiede,Steudal C,Mohr B等,“979位急性髓性白血病患者中FLT3-激活突变的分析：结合FAB 亚型和预后较差的亚组的鉴定”(Analysis of FLT3-activating mutations in 979 patientswith acute myelogenous leukemia:association with FAB subtypes andidentification of subgroups with poor prognosis).Blood.2002;99:4326-4335;UBacher,Haferlach C,W Kern等,“AML中FLT3-TKD突变的预后相关性：组合问题-3082位患者的分析”(Prognostic relevance of FLT3-TKD mutations in AML:the combinationmatters-an analysis of 3082patients).Blood.2008;111:2527-2537。
成人AML中组成型激活突变FLT3的频率增高使得FLT3基因成为该肿瘤类型中极有吸引力的药物靶标。已经或正在AML患者中研究和检测对该靶标的效力和选择性程度不同的几种FLT3抑制剂。参见T Kindler,Lipka DB和Fischer T. “FLT3作为AML中的治疗靶标：这些年后仍是难点”(FLT3 as a therapeutic target in AML:still challenging afterall these years).Blood.2010;116:5089-102。
本领域已知的FLT3激酶抑制剂包括来他替尼(Lestaurtinib，也称为CEP 701, 以前称为KT-555,协和发酵公司Kyowa Hakko,许可给瑟法隆Cephalon); CHIR-258(凯龙公司(Chiron Corp.));EB10和IMC-EB10(免疫克隆系统公司 ImClone Systems Inc.);米哚妥林Midostaurin(也称为PKC412,诺华公司 (Novartis AG));坦度替尼Tandutinib(也称为MLN-518,以前称为CT53518,COR 治疗公司COR Therapeutics Inc.,许可给千年制药公司Millennium Pharmaceuticals Inc.);苏尼替尼(Sunitinib，也称为SU11248,辉瑞公司(Pfizer) 美国);奎扎替尼(Quizartinib，也称为AC220,AMBIT生物科技AmbitBiosciences); XL 999(Exelixis,美国,许可给和谐演化公司Symphony Evolution,Inc.);GTP 14564(默克生命科学Merck Biosciences英国);AG1295和AG1296;CEP-5214和CEP-7055(Cephalon)。以下PCT国际申请和美国专利申请公开了其它激酶调节剂，包括FLT3的调节剂：WO 2002032861,WO 2002092599,WO 2003035009, WO 2003024931,WO2003037347,WO 2003057690,WO 2003099771,WO 2004005281,WO 2004016597,WO2004018419,WO 2004039782,WO 2004043389,WO 2004046120,WO 2004058749,WO2004058749,WO 2003024969和美国专利申请号20040049032。还可参见Levis M,KF Tse等,2001 “FLT3酪氨酸激酶抑制剂对具有FLT3内部串联重复突变的急性髓性白血病母细胞具有选择性细胞毒性”(A FLT3 tyrosine kinase inhibitor is selectively cytotoxicto acute myeloid leukemia blasts harboring FLT3 internal tandem duplicationmutations).Blood 98(3):885-887;Tse K F等.,“利用酪氨酸激酶抑制剂抑制FLT3-介导的转化”(Inhibition of FLT3-mediated transformation by use of a tyrosinekinase inhibitor).Leukemia.2001年7月;15(7):1001-1010;Smith,B. Douglas等.,“单纯试剂CEP-701，一种新型FLT3抑制剂在复发或难治急性髓性白血病患者中显示生物学和临床活性”(Singlet agent CEP-701,a novel FLT3 inhibitor,shows biologic andclinical activity in patients with relapsed or refractory acute myeloidleukemia)Blood,2004年5月;103:3669-3676;Griswold,Ian J等., “MLN518，一种双重FLT3和KIT抑制剂对正常和恶性造血作用的影响”(Effects of MLN518,A Dual FLT3 andKIT Inhibitor,on Normal and Malignant Hematopoiesis).Blood,2004年11月;104(9):2912-2918[印刷前在7月8日电子出版];Yee,Kevin W.H.等.,“SU5416和SU5614抑制野生型和突变型FLT3受体酪氨酸激酶的激酶活性”(SU5416 and SU5614 inhibit kinaseactivity of wild-type and mutant FLT3 receptor tyrosine kinase).Blood,2002年10月;100(8): 2941-2949；O’Farrell,Anne-Marie等.,“SU11248是具有强效体外和体内活性的新型FLT3酪氨酸激酶抑制剂”(SU11248 is a novel FLT3 tyrosine kinaseinhibitor with potent activity in vitro and in vivo).Blood,2003年5月;101(9):3597-3605; Stone,R.M等.,“AML中的PKC-412FLT3抑制剂治疗：II期实验的结果” (PKC-412 FLT3 inhibitor therapy in AML:results of a phase II trials).Ann.Hematol.2004;83增刊1:S89-90;和Murata,K.等.,“GTP-14564，一种新型酪氨酸激酶抑制剂在表达组成型活性Fms-样酪氨酸激酶3(FLT3)的白血病细胞中的选择性细胞毒性机制”(Selective cytotoxic mechanism of GTP-14564,a novel tyrosine kinase inhibitorin leukemia cells expressing a constitutively active Fms-like tyrosine kinase3(FLT3)).J Biol Chem.2003年8月29日;278(35): 32892-32898[2003年6月18日电子出版];Levis,Mark等.,“小分子FLT3酪氨酸激酶抑制剂”(Small Molecule FLT3 TyrosineKinase Inhibitors).Current Pharmaceutical Design,2004,10,1183-1193。
FLT3抑制剂分为I型或II型抑制剂。这两种分类的区别在于它们的相对亲和力和结合磷酸化及非磷酸化受体位点的机制。I型抑制剂识别激酶的活性构象。该构象有利于磷酸转移。I型抑制剂通常由杂环系统构成。参见Liu,Y和N Gray. “结合无活性激酶构象的抑制剂的理性设计”(Rational design of inhibitors that bind to inactive kinaseconformations).Nature Chem.Biol.2006;2:358-354。I型 FLT3抑制剂的例子包括克莱拉尼(Crenolanib)和米哚妥林(Midostaurin)。参见A Ramachandran,Marshall H和Jain V“克莱拉尼，III类受体酪氨酸激酶的新I型突变体特异性抑制剂，优先结合磷酸化激酶”(Crenolanib,a novel type I,mutant specific inhibitor of class III receptortyrosine kinases,preferentially binds to phosphorylated kinases).CancerRes.2012;72(8增刊):368;J Cools等,“对小分子FLT3抑制剂耐受性的预测：急性白血病的分子靶向治疗的含义”(Prediction of resistance to small molecule FLT3inhibitors:implications for molecularly targeted therapy of acute leukemia).Cancer Res.2004;64:6385-6389。使得受体酪氨酸激酶的激酶成为组成型磷酸化的耐药突变可能对磷酸化激酶的亲和力较高的I型抑制剂敏感。
相比之下，II型抑制剂优先结合激酶的无活性构象。该构象通常因基序的重排而称为“DFG-out”。参见J Zhang,Yang PL和Gray NS.“用小分子激酶抑制剂靶向癌症”(Targeting cancer with small molecule kinase inhibitors).Nature ReviewsCancer.2009;9:28-39。抑制剂，例如伊马替尼(imatinib)、索拉非尼 (sorafenib)和尼罗替尼(nilotinib)结合II型构象。参见PW Manley,Cowan-Jacob SW,Mestan J.“用于治疗慢性髓性白血病的Bcr-Abl激酶抑制剂的结构生物学、设计和临床开发中的进展”(Advancesin the structural biology,design and clinical development of Bcr-Ab1 kinaseinhibitors for the treatment of chronic myeloid leukaemia).Biochim.Biophis.Acta.2005;1754:3-13;PT Wan等,“B-RAF的致癌突变激活RAF-ERK信号传导途径的机制”(Mechanism of activation of the RAF-ERK signaling pathway byoncogenic mutations of B-RAF).Cell.2004; 116:855-867。
对II型抑制剂的耐药突变是使得受体酪氨酸激酶的激酶结构域组成型磷酸化的突变。靶向磷酸化激酶的I型抑制剂能克服使用II型抑制剂治疗所致的耐药性，因此可能用于治疗具有这些耐药性突变的疾病。
发明内容
本发明包括抑制或降低失调FLT3酪氨酸激酶活性或其在患有增殖性疾病的对象中表达的方法，包括给予具有或怀疑具有增殖性疾病的对象治疗或预防有效量的式I所示化合物：
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一方面，所述增殖性疾病选自以下的至少一种：白血病、骨髓瘤、骨髓增殖性疾病、骨髓增生异常综合征、特发性高嗜酸性粒细胞综合征(HES)、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、CNS癌症、结肠癌、食道癌、头颈癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、神经内分泌癌症、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、唾液腺癌症、小细胞肺癌、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌症和血液学恶性肿瘤。在另一方面，治疗和预防有效量是每天约50-约500 毫克。在另一方面，所述化合物的给药是连续、间歇、全身性或局部给药中的至少一种。在另一方面，失调的FLT3进一步限定为组成型活性的突变FLT3。在另一方面，所述化合物口服、静脉内或腹膜内给予。在另一方面，克莱拉尼是苯磺酸克莱拉尼、磷酸克莱拉尼、乳酸克莱拉尼、盐酸克莱拉尼、柠檬酸克莱拉尼、乙酸克莱拉尼、甲苯磺酸克莱拉尼或琥珀酸克莱拉尼。在另一方面，所述FLT3是以下的至少一种：FLT-ITD、FLT-TKD、FLT3-D835Y、FLT3-D835H、 FLT3-K663Q或FLT-R834Q。在另一方面，治疗或预防有效量的所述化合物每天最多给予三次或更多次，只要对象需要治疗增殖性疾病。在另一方面，所述化合物与另一药剂以顺次或相伴方式中的至少一种用于新诊断的增殖性疾病患者或复发/难治的增殖性疾病患者以维持消退。在另一方面，所述化合物作为单一药剂提供或与另一药剂组合，用于新诊断的增殖性疾病患者或复发/难治的增殖性疾病患者以维持消退。在另一方面，所述化合物作为单一药剂或与另一药剂组合用于新诊断的增殖性疾病儿科患者或复发/难治的增殖性疾病儿科患者，以维持消退。在另一方面，所述患者是复发患者/II型酪氨酸激酶抑制剂难治的患者。
在另一实施方式中，本发明包括治疗患有增殖性疾病的患者的方法，包括：给予需要此类治疗的患者治疗有效量的克莱拉尼或其盐，其中细胞增殖性疾病的特征在于失调的FLT3受体酪氨酸激酶活性，增殖性疾病选自以下的至少一种：白血病、骨髓瘤、骨髓增殖性疾病、骨髓增生异常综合征、特发性高嗜酸性粒细胞综合征(HES)、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、CNS癌症、结肠癌、食道癌、头颈癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、神经内分泌癌症、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、唾液腺癌症、小细胞肺癌、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌症和血液学恶性肿瘤。在一方面，所述化合物经口服、静脉内或腹膜内给予。在另一方面，克莱拉尼是苯磺酸克莱拉尼、磷酸克莱拉尼、乳酸克莱拉尼、盐酸克莱拉尼、柠檬酸克莱拉尼、乙酸克莱拉尼、甲苯磺酸克莱拉尼或琥珀酸克莱拉尼。在另一方面，所述FLT3是以下的至少一种：FLT-ITD、FLT-TKD、 FLT3-D835Y、FLT3-D835H、FLT3-K663Q或FLT-R834Q。在另一方面，克莱拉尼与化疗、放疗或外科手术以顺次或相伴方式中的至少一种用于新诊断的增殖性疾病或复发/难治的增殖性疾病，以维持消退。在另一方面，克莱拉尼作为单一药剂提供或与化疗、放疗或外科手术组合提供以治疗患有增殖性疾病的儿科患者。在另一方面，克莱拉尼标准诱导治疗或高剂量诱导治疗中的至少一种之后作为单一药剂提供给新诊断的增殖性疾病。在另一方面，克莱拉尼作为单一药剂提供以治疗标准或高剂量化疗、放疗或外科手术难治的或治疗之后复发的增殖性疾病患者。在另一方面，所述患者是复发的/对至少一种其它酪氨酸激酶抑制剂难治的，所述其它酪氨酸激酶抑制剂包括索拉非尼、奎扎替尼、阿西替尼(axitinib)、苏尼替尼、帕唑帕尼(pazopanib)、米哚妥林或来他替尼。
本发明还有另一实施方式包括治疗白血病患者的方法，包括：获得怀疑患有白血病的患者的样品；自患者样品确定该患者具有失调的FLT3受体酪氨酸激酶；和给予需要此类治疗的患者治疗有效量的克莱拉尼或其盐，其中所述白血病的特征在于失调的FLT3受体酪氨酸激酶活性。
本发明的另一实施方式包括特异性抑制失调的受体酪氨酸激酶的方法，包括：获得患者样品并确定何种受体酪氨酸激酶失调；和给予需要此类治疗的哺乳动物治疗有效量的克莱拉尼或其盐，其中所述失调受体酪氨酸激酶是FLT3受体酪氨酸激酶。在一方面，治疗有效量的克莱拉尼或其盐的提供量足以阻止 FLT3受体酪氨酸激酶的生理活性，但不下调c-Kit活性。在另一方面，增殖性疾病选自以下的至少一种：白血病、骨髓瘤、骨髓增殖性疾病、骨髓增生异常综合征、特发性高嗜酸性粒细胞综合征(HES)、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、CNS 癌症、结肠癌、食道癌、头颈癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、神经内分泌癌症、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、唾液腺癌症、小细胞肺癌、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌症和血液学恶性肿瘤。在另一方面，治疗和预防有效量是每天约50-约500毫克。在另一方面，所述化合物的给药是连续、间歇、全身性或局部给药中的至少一种。在另一方面，失调的FLT3进一步限定为组成型活性的突变FLT3。在另一方面，所述化合物口服、静脉内或腹膜内给予。在另一方面，克莱拉尼是苯磺酸克莱拉尼、磷酸克莱拉尼、乳酸克莱拉尼、盐酸克莱拉尼、柠檬酸克莱拉尼、乙酸克莱拉尼、甲苯磺酸克莱拉尼或琥珀酸克莱拉尼。在另一方面，所述FLT3是以下的至少一种：FLT-ITD、FLT-TKD、 FLT3-D835Y、FLT3-D835H、FLT3-K663Q或FLT-R834Q。在另一方面，治疗或预防有效量的所述化合物每天最多给予三次或更多次，只要对象需要治疗增殖性疾病。在一方面，提供用于治疗的患者，获得一个或多个患者样品以测定疗效，持续治疗直至增殖性疾病减轻或消除。在另一方面，所述化合物与另一药剂以顺次或相伴方式中的至少一种提供给新诊断的增殖性疾病患者或复发/难治的增殖性疾病患，以维持现有患者的消退。在另一方面，本发明化合物作为单一药剂提供或与另一药剂组合提供给新诊断的增殖性疾病患者或复发/难治的增殖性疾病患者，以维持消退。在另一方面，本发明化合物作为单一药剂或与另一药剂组合提供给新诊断的增殖性疾病儿科患者或复发/难治的增殖性疾病儿科患者，以维持消退。在另一方面，所述患者是复发患者/II型酪氨酸激酶抑制剂难治的患者。
本发明还有另一实施方式包括治疗癌症患者的方法，包括：从患者获得怀疑有癌症的样品；确定该患者是否对II型蛋白酪氨酸激酶抑制剂具有抗药性；和给予治疗有效量的克莱拉尼或其盐以克服对II型蛋白酪氨酸激酶抑制剂的抗药性。在另一方面，摄取药物后，治疗有效量的克莱拉尼或其盐在生理水平不抑制c-Kit激酶。
本发明提供降低或抑制细胞或对象中FLT3的激酶活性的方法，以及此类方法在预防或治疗FLT3相关的细胞增殖性疾病中的应用。本发明的其它特征和优点将从下文的本发明详述和权利要求中明白。
附图说明
为更完全地了解本发明的特征和优点，可参考本发明详述和附图，其中：
图1显示本发明苯磺酸盐对III类受体酪氨酸激酶的特异性，所述激酶包括 FLT3、PDGFRA、PDGFRB、CSF1R和KIT；
图2显示本发明苯磺酸盐对非自抑制和自抑制状态的FLT3的亲和力，左图：非自抑制状态的FLT3；右图：自抑制状态的FLT3；
图3显示相比于其它FLT3酪氨酸激酶抑制剂，本发明苯磺酸盐对野生型 FLT3的结合常数；
图4显示相比于其它FLT3酪氨酸激酶抑制剂，本发明苯磺酸盐对组成型活性FLT3ITD突变的结合常数；
图5显示相比于其它FLT3酪氨酸激酶抑制剂，本发明苯磺酸盐对组成型活性FLT3D835Y突变的结合常数；
图6显示相比于其它FLT3酪氨酸激酶抑制剂，本发明苯磺酸盐对组成型活性FLT3D835H突变的结合常数；
图7显示本发明苯磺酸盐对磷酸化ABL1、非磷酸化ABL1、磷酸化ABL1 (T315I)和非-磷酸化ABL1(T315I)的结合常数。
具体实施方式
虽然下文详细讨论了作出和利用本发明的各种实施方式，但应该知道本发明提供了许多可适用的发明点，它们可以具体体现为各种特定的内容。本文讨论的具体实施方式仅是作出和利用本发明的具体方式的说明，不限制本发明的范围。
下文定义了许多术语以帮助理解本发明。本文定义的术语具有本发明相关领域的普通技术人员通常理解的含义。诸如“一”、“一个”和“该”不应仅指单数实体，还包括可用具体例子作说明的普通种类。本文的术语用于描述本发明的具体实施方式，但利用它们并不限制本发明，除非在权利要求中描述的。
本发明包括本发明化合物在抑制细胞或对象中FLT3激酶活性，或治疗对象中FLT3激酶活性或表达相关疾病中的应用。
在该方面的一个实施方式中，本发明提供降低或抑制细胞中FLT3的激酶活性的方法，包括将所述细胞与本发明化合物接触的步骤。本发明还提供降低或抑制对象中FLT3激酶活性的方法，包括给予所述对象本发明化合物的步骤。本发明还提供抑制细胞增殖的方法，包括将所述细胞与本发明化合物接触的步骤。
术语“对象”指作为治疗、观察或实验客体的动物，例如哺乳动物或人。
术语“接触”指将本发明化合物或其药学上可接受的盐加入细胞，从而所述细胞摄取所述化合物。
在该方面的其它实施方式中，本发明提供预防和治疗方法以便治疗具有产生细胞增殖性疾病风险或怀疑会产生细胞增殖性疾病的对象，所述疾病由FLT3 的异常激酶活性驱动。在一个实例中，本发明提供预防FLT3相关细胞增殖性疾病的方法，包括将预防有效量的包含本发明化合物的药物组合物给予对象。可在FLT3驱动细胞增殖性疾病的特征性症状显现之前给予所述预防药剂，从而可防止疾病或病症，或者延迟其发展。
术语“预防有效量”指研究人员、兽医、医生或其它临床医师所寻求的，抑制或延迟对象中疾病发作的活性化合物或药物盐的用量。
本文所用的术语“治疗有效量”指研究人员、兽医、医生或其它临床医师所寻求的，引发对象中生物学或医学反应的活性化合物或药物盐的用量，所述反应包括缓解所治疗疾病或病症的症状。
本领域知晓测定包含本发明化合物的药物组合物的治疗和预防有效剂量的方法。
本文所用的术语“组合物”应包括含有特定量的特定成分的产品以及从特定量的特定成分的组合直接或间接获得的任何产品。
本文所用的术语“FLT3相关疾病”或“FLT3受体相关疾病”或“FLT3受体酪氨酸激酶相关疾病”或“FLT3驱动细胞增殖性疾病”包括与FLT3活性相关或涉及FLT3活性的疾病，例如导致FLT3组成型激活的突变。“FLT3相关疾病”的例子包括FLT3中突变造成FLT3过度刺激所致的疾病，或者FLT3中异常大量的突变造成FLT3活性异常高所致疾病。已知FLT3的过度活性涉及许多疾病的致病原因，包括以下列出的细胞增殖性疾病、肿瘤疾病和癌症。
术语“细胞增殖性疾病”指多细胞生物中一个或多个细胞亚组的过度细胞增殖，从而对该多细胞生物致害(即，不适或预期寿命降低)。细胞增殖性疾病可在不同类型的动物和人中发生。本文所用的“细胞增殖性疾病”包括肿瘤疾病。
本文所用的术语“肿瘤疾病”指异常或不受控细胞生长所致肿瘤。肿瘤疾病的例子包括但不限于以下疾病，例如：骨髓增殖性疾病，如血小板减少症、原发性血小板增多症(ET)、特发性骨髓外化生、骨髓纤维化(MF)、骨髓纤维化伴有骨髓组织异生(MMM)、慢性特发性骨髓纤维化(UIMF)和真性红细胞增多症(PV)、血细胞减少及癌变前骨髓增生异常综合征；癌症，如神经胶质瘤癌症、肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、前列腺癌、胃癌、食道癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌和血液学恶性肿瘤，包括骨髓增生异常、多发性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。血液学恶性肿瘤的例子包括，例如白血病、淋巴瘤、霍奇金病和骨髓瘤。还有急性淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、急性早幼粒细胞性白血病(APL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、慢性中性粒细胞性白血病(CNL)、急性未分化性白血病(AUL)、间变性大细胞淋巴瘤 (ALCL)、前淋巴细胞性白血病(PML)、青少年单核细胞性白血病(JMML)、成人T细胞性ALL、伴有骨髓三系增生异常的AML(AMLITMDS)、混合系白血病(MLL)、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增殖性疾病(MPD)和多发性骨髓瘤 (MM)。
在进一步的实施方式中，本发明可与另一疗法组合为组合治疗以便治疗或抑制对象中FLT3相关的细胞增殖性疾病的发作。组合治疗包括给予预防和治疗有效量的本发明化合物与一种或多种其它抗细胞增殖疗法，包括但不限于化疗和放疗。
在本发明的实施方式中，本发明化合物可与化疗组合给予。本文所用的化疗指涉及化疗剂的疗法。各种化疗剂可与本发明联用。仅是举例，紫杉烷化合物，具体是多西他赛与本发明化合物以每平方米体表面积75毫克的剂量(mg/m2) 组合安全给药。
化疗是本领域技术人员已知的。化疗的合适剂量和方案类似于临床治疗中已经采用的那些，其中所述化疗与其它疗法组合使用或单用。
在本发明的另一实施方式中，本发明化合物可与放疗组合给予。本文所用的“放疗”指包括将有需要的对象暴露于射线的治疗。放疗是本领域技术人员已知的。放疗的合适剂量和方案类似于临床治疗中已经采用的那些，其中所述放疗与其它疗法组合递送或单用。
在本发明的另一实施方式中，本发明化合物与靶向治疗组合给予。本文所用的“靶向治疗”指靶向参与肿瘤产生或致癌信号传导的特定类型蛋白质的治疗。例如，抗血管内皮生长因子的酪氨酸激酶抑制剂已用于治疗癌症。
本发明还包括以下方法：除了本发明化合物，该方法还利用第二药剂，二者同时或顺次(依次)给药。
在一个实施方式中，本发明利用治疗或预防有效量的式I所示化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物抵御增殖性疾病：
所述增殖性疾病选自以下的至少一种：白血病、骨髓瘤、骨髓增殖性疾病、骨髓增生异常综合征、特发性高嗜酸性粒细胞综合征(HES)、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、CNS癌症、结肠癌、食道癌、头颈癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、神经内分泌癌症、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、唾液腺癌症、小细胞肺癌、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌症和血液学恶性肿瘤。药学上可接受的盐包括盐酸盐、磷酸盐和乳酸盐，它们的制备方式类似于苯磺酸盐的制备方法且是本领域普通技术人员熟知的。
可将本发明化合物经全身，例如口服、静脉内、皮下、肌肉内、真皮内或胃肠外给予对象。本发明化合物还可局部给予对象。
可将本发明化合物配制成缓释或速释制剂，其目的是在所需时间范围上维持本发明化合物与靶向组织的接触。
适合口服给药的组合物包括固体形式，例如丸剂、片剂、囊片、胶囊、颗粒剂和粉末，液体形式，例如溶液、乳液和混悬液。可用于胃肠外给药的形式包括无菌溶液、乳液和混悬液。
本发明化合物的每日剂量可以在每日每位成年人50-500毫克的宽范围内变动。对于口服给药，组合物宜采用含有20-100毫克的片剂形式提供。本发明的化合物可采用每日最多三次或更多次的服法给予。优选每日三次。待给予的最佳剂量可由本领域技术人员决定，可依据所用的本发明化合物、给药方式、给药时间、制品强度、疾病细节作出改变。剂量调节取决于患者特征相关的因素，例如年龄、体重和饮食。
本发明化合物的制备
可用于制备式I所示化合物的通用合成方法见美国专利号5,990,146(1999年 11月23日授权)(华纳-兰伯特公司Warner-Lambert Co.)和PCT申请公布号WO 99/16755(1999年4月8日公布)(默克Merck&Co.)、WO 01/40217(2001年7月7日公布)(辉瑞公司Pfizer,Inc.)、美国专利申请号US 2005/0124599(辉瑞公司)和美国专利申请号7,183,414(辉瑞公司)，相关部分通过引用纳入本文。
药学上可接受的盐，例如盐酸盐、磷酸盐和乳酸盐采用类似于制备苯磺酸盐的方式制备，这些盐是本领域普通技术人员熟知的。以下代表性的本发明化合物仅是出于示范性目的，绝非意味着限制本发明，包括克莱拉尼，例如苯磺酸克莱拉尼、磷酸克莱拉尼、乳酸克莱拉尼、盐酸克莱拉尼、柠檬酸克莱拉尼、乙酸克莱拉尼、甲苯磺酸克莱拉尼和琥珀酸克莱拉尼。
生物学活性
体外试验
进行以下代表性的体外试验以测定本发明化合物对FLT3的生物学活性。给予这些试验是以非限制性方式说明本发明。
抑制野生型和突变FLT3酶活性以及特异性抑制FLT3的磷酸化形式证明 FLT3酶和依赖于FLT3活性的细胞过程的特异性抑制作用。本文的所有实例显示 FLT3激酶和FLT3-依赖性细胞反应的显著和特异性抑制作用。
竞争性结合试验.
进行体外激酶试验以测定本发明化合物的活性。采用KINOME扫描Kdelect 试验方案进行人FLT3受体的激酶结构域的抑制。KINOME扫描平台采用高通量竞争结合技术。混合DNA-标记的激酶、固定化配体和本发明化合物进行该试验。采用DNA标签的定量PCR检测本发明化合物与固定化配体竞争的能力。采用竞争结合试验评估本发明化合物对一组96个人蛋白激酶的活性。
在24-孔板块中，将激酶-标记的T7噬菌体菌株在源自BL21菌株的大肠杆菌宿主中进行平行培养。将大肠杆菌培养至对数阶段，用冷冻储备物的T7噬菌体感染并在32℃振荡温育直至裂解。然后离心并过滤裂解物。在HEK-293细胞中产生其余激酶并用DNA标记以供定量PCR检测。室温下，用生物素化的小分子配体处理链霉亲和素-包被的磁珠30分钟来产生用于激酶试验的亲和树脂。用过量生物素封闭配体珠，用封闭缓冲液洗涤以减少非特异性噬菌体结合，所述封闭缓冲液由Sea Block、1%牛血清白蛋白(BSA)、0.05%吐温20、1mM二硫苏糖醇(DTT)构成。在100%二甲基亚砜(DMSO)中，将本发明的11-点3-倍连续稀释液制备成的40×储备液，稀释成1×直接加入试验。
通过在1x结合缓冲液中混合配体亲和珠、激酶和本发明化合物启动结合反应，所述结合缓冲液由20%Sea Block、0.17磷酸缓冲盐水(PBS)、0.05%吐温20、 6mM DTT构成。所有反应在聚丙烯384-孔平板中进行，最终体积为0.04mL。平板在室温下振荡温育1小时。亲和珠用1xPBS和0.05%吐温20缓冲液洗涤，然后重悬在由1x PBS、0.05%吐温20、0.5uM非生物素化的亲和配体构成的洗脱缓冲液中。重悬后，室温下振荡温育亲和珠。然后通过定量PCR检测洗脱液激酶浓度。
采用Hill方程，利用标准剂量-反应曲线计算结合常数(Kd)。利用非线性最小二乘拟合与Levenberg-Marquardt算法拟合曲线。将本发明化合物的Kd与阴性 DMSO对照和阳性对照化合物作比较。利用化合物概括目测相互作用图，TREE 点(TREEspot)目测观察本发明化合物的结合亲和力。
直接酶磷酸化试验.
采用密理博激酶IC50分析试验(Millipore Kinase IC50 Profiler assay)，对一组正常FLT3和突变的FLT3激酶筛选本发明化合物。对于两种激酶的试验，FLT3 酶与pH 7.0的8mM 3-(N-吗啉基)丙磺酸(MOPS)、0.2mM乙二胺四乙酸 (EDTA)、50uM合成的Abl肽底物EAIYAAPFAKKK、10mM乙酸镁和[γ-33P-ATP] 温育。加入MgATp混合物启动反应。反应混合物在室温温育40分钟，加入3%磷酸溶液停止反应。将10微升反应溶液点样在P30滤垫上，用75mM磷酸洗涤3次， 5分钟，然后用甲醇洗涤1次，随后干燥并作闪烁计数。利用5.1版的XLFit分析各复制品(包括阳性和阴性对照)的闪烁值，以测定本发明混合物对正常和突变FLT3的IC50值。
野生型FLT3的生物学数据.
本发明的苯磺酸盐对野生型FLT3的活性示于图3。所有结合常数以纳摩尔浓度示出。在图3中，比较了本发明化合物对野生型FLT3的活性与本领域已知的其它抑制剂。参见Davis MI,Hunt JP,Herrgard S等,“激酶抑制剂选择性的综合分析”(Comprehensiveanalysis of kinase inhibitor selectivity.)Nat Biotechnol 2011;29:1046-51。本发明苯磺酸盐的结合常数(Kd)是0.74nM。比较本发明的苯磺酸盐对野生型FLT3的Kd与本领域的另一抑制剂，AST-487的Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对FLT3野生型的亲和力是AST-487(Kd=0.79nM)的一倍。比较本发明的苯磺酸盐对野生型FLT3的Kd值与本领域的另一抑制剂，奎扎替尼的 Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对FLT3野生型的亲和力是奎扎替尼(Kd=1.3nM)的两倍。比较本发明的苯磺酸盐对野生型FLT3的Kd值与本领域的另一抑制剂， MLN-518的Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对FLT3野生型的亲和力是MLN-518 (Kd=3nM)的四倍。比较本发明的苯磺酸盐对野生型FLT3的Kd与本领域的另一抑制剂，来他替尼的Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对FLT3野生型的亲和力是来他替尼(Kd=8.5nM)的约十一倍。比较本发明的苯磺酸盐对野生型FLT3的Kd 与本领域的另一抑制剂，米哚妥林的Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对FLT3野生型的亲和力是米哚妥林(Kd=11nM)的十五倍。比较本发明的苯磺酸盐对野生型FLT3的Kd与本领域的另一抑制剂，索拉非尼的Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对FLT3野生型的亲和力是索拉非尼(Kd=13nM)的约十八倍。
采用直接酶促密理博激酶IC50分析试验(direct enzymatic Millipore IC50profiler assay)测定本发明苯磺酸盐的活性。所有IC50值以纳摩尔浓度示出。在直接酶促检测试验中，本发明苯磺酸盐对野生型FLT3的IC50值是3nM。图1显示本发明苯磺酸盐对III类受体酪氨酸激酶的特异性，所述激酶包括FLT3、 PDGFRA、PDGFRB、CSF1R和KIT。
FLT3-ITD突变的生物学数据.
本发明的苯磺酸盐对含有内部串联重复突变(ITD)的FLT3的活性示于图4。所有结合常数以纳摩尔浓度示出。在图4中，比较了本发明化合物与本领域已知的其它抑制剂对FLT3-ITD突变的活性。参见Davis MI,Hunt JP,Herrgard S等, “激酶抑制剂选择性的综合分析”(Comprehensive analysis of kinase inhibitor selectivity.)Nat Biotechnol2011;29:1046-51。本发明苯磺酸盐的Kd是0.43nM。比较本发明的苯磺酸盐对FLT3-ITD突变的Kd与本领域的另一抑制剂，苏尼替尼的Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对FLT3-ITD突变的亲和力是苏尼替尼(Kd= 0.99nM)的两倍以上。比较本发明的苯磺酸盐对FLT3-ITD突变的Kd与本领域的另一抑制剂，来他替尼的Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对FLT3-ITD突变的亲和力是来他替尼(Kd=1.5nM)的三倍以上。比较本发明的苯磺酸盐对FLT3-ITD 突变的Kd与本领域的另一抑制剂，奎扎替尼的Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对 FLT3-ITD突变的亲和力是奎扎替尼(Kd=8.8nM)的二十倍以上。比较本发明的苯磺酸盐对FLT3-ITD突变的Kd与本领域的另一抑制剂，MLN-518的Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对FLT3-ITD突变的亲和力是MLN-518(Kd=9.1nM)的二十三倍以上。比较本发明的苯磺酸盐对FLT3-ITD突变的Kd与本领域的另一抑制剂，PKC-412的Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对FLT3-ITD突变的亲和力是 PKC-412(Kd=11nM)的二十五倍以上。比较本发明的苯磺酸盐对FLT3-ITD突变的Kd与本领域的另一抑制剂，AST-487的Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对 FLT3-ITD突变的亲和力是AST-487(Kd=11nM)的二十五倍以上。比较本发明的苯磺酸盐对FLT3-ITD突变的Kd与本领域的另一抑制剂，索拉非尼的Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对FLT3-ITD突变的亲和力是索拉非尼(Kd=79nM)的一百八十三倍以上。
FLT3-D835突变的生物学数据.
本发明的苯磺酸盐对FLT3酪氨酸激酶结构域突变D835Y和D835H的活性示于图5和6。所有结合常数以纳摩尔浓度示出。在图5和6中，比较了本发明化合物与本领域已知的其它抑制剂对FLT3D835突变的活性。参见Davis MI,Hunt JP,Herrgard S等,“激酶抑制剂选择性的综合分析”(Comprehensive analysis of kinase inhibitor selectivity.)NatBiotechnol 2011;29:1046-51。本发明苯磺酸盐对 FLT D835Y突变的结合常数(Kd)是0.18nM，对FLT D835H突变的结合常数(Kd) 是0.4nM。比较本发明的苯磺酸盐对FLT3D835Y和D835H突变的Kd与本领域的另一抑制剂，来他替尼的Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对FLT3D835Y突变的亲和力是来他替尼(D835Y Kd=0.57nM)的三倍，对FLT3D835H突变的亲和力是来他替尼(D835H Kd=0.66nM)的一倍。比较本发明的苯磺酸盐对FLT3 D835Y和D835H突变的Kd与本领域的另一抑制剂，苏尼替尼的Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对FLT3D835Y突变的亲和力是苏尼替尼(D835Y Kd=2.3nM)的十二倍，对FLT3D835H突变的亲和力是苏尼替尼(D835H Kd=4.3nM)的十倍。比较本发明的苯磺酸盐对FLT3D835Y和D835H突变的Kd与本领域的另一抑制剂，奎扎替尼的Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对FLT3D835Y突变的亲和力是奎扎替尼(D835Y Kd=7.1nM)的三十九倍，对FLT3D835H突变的亲和力是奎扎替尼(D835H Kd=3.7nM)的九倍。比较本发明的苯磺酸盐对FLT3D835Y和 D835H突变的Kd与本领域的另一抑制剂，AST-487的Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对FLT3D835Y突变的亲和力是AST-487(D835YKd=11nM)的六十一倍，对FLT3D835H突变的亲和力是AST-487(D835H Kd=4.9nM)的十二倍。比较本发明的苯磺酸盐对FLT3D835Y和D835H突变的Kd与本领域的另一抑制剂， PKC-412的Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对FLT3D835Y突变的亲和力是 PKC-412(D835Y Kd=15nM)的八十三倍，对FLT3D835H突变的亲和力是 PKC-412(D835H Kd=6.8nM)的九倍。比较本发明的苯磺酸盐对FLT3D835Y 和D835H突变的Kd与本领域的另一抑制剂，索拉非尼的Kd时，本发明的苯磺酸盐形式对FLT3D835Y突变的亲和力是索拉非尼(D835Y Kd=82nM)的四百五十五倍，对FLT3D835H突变的亲和力是索拉非尼(D835H Kd=30nM)的七十五倍。
采用直接酶促密理博激酶IC50分析试验(direct enzymatic Millipore IC50profiler assay)测定本发明苯磺酸盐的活性。所有IC50值以纳摩尔浓度示出。在直接酶促检测试验中，本发明苯磺酸盐对FLT3TKD突变D835Y的IC50值是2 nM。
磷酸化激酶亲和力的生物学数据.
ABL1A环磷酸化对本发明化合物亲和力影响的结果示于图7。本发明苯磺酸盐对激酶ABL1和ABL(T315I)的亲和力分析证明该分子表现出I型抑制剂的特征性机制。本发明化合物对磷酸化ABL1(Kd=88nM)和ABL(T315I)(Kd= 760nM)的结合常数分别是对非磷酸化ABL1(Kd=600nM)和ABL(T315I)(Kd= 12000nM)的结合常数的七分之一和十五分之一。虽然本发明化合物对ABL无活性，但本发明苯磺酸盐对磷酸化激酶具有显著较高的亲和力提示克莱拉尼是I 型TKI。
本发明苯磺酸盐对非自抑制和自抑制状态的FLT3的不同结合亲和力还表明该分子具有I型抑制剂的功能。如图2所示，本发明苯磺酸盐对非自抑制FLT3 的Kd值是0.61nM，对自抑制FLT3的Kd值是6.7nM。因此，在非自抑制和自抑制状态的FLT3之间，本发明苯磺酸盐的亲和力有约10倍的亲和力变化。该值在报道的其它I型酪氨酸激酶抑制剂的亲和力变化范围内，但远在报道的II型TKI 的100到1000倍亲和力变化范围之外。Davis,MI等.,“激酶抑制剂选择性的综合分析”(Comprehensive analysis of kinase inhibitorselectivity).Nat Biotechnology. 2011;29(10):1046-1051;Zhang,J等.,“用小分子激酶抑制剂瞄准癌症打靶” (Targeting cancer with small molecule kinaseinhibitors).Nat Rev Cancer.2009; 9(1):28-39;Liu,Y等.,“结合无活性激酶构象的抑制剂的理性设计”(Rational design of inhibitors that bind to inactive kinaseconformations).Nat Chem Biol. 2006;2(7):358-364。
对于本发明的任何方法、试剂盒、试剂或组合物，可实施本说明书讨论的任何实施方式是预期的，反之亦然。此外，可利用本发明的组合物实施本发明的方法。
应该理解，本文所述的特定实施方式是为说明目的显示，不是对本发明的限制。本发明的主要特征可用于各种实施方式中而不脱离本发明的范围。仅采用常规实验，本领域技术人员会知道或确定本文所述具体流程的许多等价方式。此类等价方式应视作落在本发明的范围内并被权利要求所覆盖。
说明书述及的所有出版物和专利申请说明了本发明所属领域的技术人员的技术水平。与各出版物或专利申请专门且单独表示通过引用纳入的程度一样，所有出版物和专利申请通过引用纳入本文。
当词语“一”在权利要求和/或说明书中与术语“包含”联用时，可表示“一”，但还与“一个或多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的意义一致。在权利要求中利用术语“或”表示“和/或”，除非明确表示指代唯一的备选方案或者备选方案相互排斥，但本发明支持指代唯一的备选方案和“和/或”的定义。本申请通篇利用术语“约”表明某数值包括、用于测定该数值的方法、装置的固有误差，或研究客体之间存在的偏差。
本说明书和权利要求中使用的词语“包含”(和任何形式的包含，例如“含有”和“包括”)、“具有”(和任何形式的具有，例如“有”和“拥有”)、“包括”(和任何形式的包括，例如“包括有”和“包括了”)或“含有”(任何形式的含有，例如“含”和“包含”)是非排他性的或开放式的，不排除未述及的其它元素或方法步骤。
本文所用的术语“或它们的组合”指该术语之前所列项目的所有排列和组合。例如，“A、B、C或它们的组合”应包括以下的至少一种：A、B、C、AB、 AC、BC或ABC，如果在特定情况中顺序是至关重要的，还包括BA、CA、CB、 CBA、BCA、ACB、BAC或CAB。继续以此为例，明显包括的组合含有一个或多个项目或术语的重复，例如BB、AAA、MB、BBC、AAABCCCC、CBBAAA、CABABB等等。技术人员应理解任何组合中项目或术语的数量通常不作限制，除非上下文中明显有限制。
本文所用的近似词语，例如但不限于“约”、“实质性”或“实质性地”指这样一种条件：当如此修饰时，应理解为不必是绝对的或完美的，但认为足够接近本领域普通技术人员的那些条件，从而保证能指明该条件，如其存在的那样。说明书可变动的范围取决于产生的改变有多大，但该改变仍使得本领域普通技术人员认识到修饰的特征仍具有未修饰特征的所需特征和性能。根据前述讨论，用近似词语，例如“约”修饰的数值通常可自所述值改变至少±1、2、 3、4、5、6、7、10、12或15%。
根据本发明，无需过度的实验即可以作出和实施本文披露和要求保护的所有组合物和/或方法。虽然根据优选的实施方式描述了本发明的组合物和方法，本领域技术人员应该明白可对本文所述的组合物和/或方法以及方法的步骤或步骤次序作出改变而不脱离本发明的概念、构思和范围。对本领域技术人员是显而易见的所有此类相似的替代方式和改进应视作落在随附权利要求限定的本发明构思、范围和概念内。
参考文献
其它出版物
Drexler,HG等.“白血病细胞的FLT3受体表达和对FLT3配体的反应” (Expressionof FLT3 receptor and response to FLT3 ligand by leukemic cells).Leukemia.1996;10:588-599.
Gilliland,DG和JD Griffin.“FLT3在造血作用和白血病中的作用”(The rolesof FLT3 in hematopoiesis and leukemia).Blood.2002;100:1532-1542.
Stirewalt,DL和JP Radich.“FLT3在造血恶性肿瘤中的作用”(The role of FLT3in hematopoietic malignancies).Nat Rev Cancer.2003;3:650-665.
Nakao M,S Yokota和T Iwai.“急性髓性白血病中发现的FLT3基因内部串联重复”(Internal tandem duplication of the FLT3 gene found in acute myeloidleukemia).Leukemia.1996;10:1911-1918.
H Kiyoi,M Towatari和S Yokota“FLT3基因的内部串联重复是导致产物的组成型激活的延伸突变新形态”(Internal Tandem duplication of the FLT3 gene is a novelmodality of elongation mutation,which causes constitutive activation of theproduct).Leukemia.1998;12:1333-1337.
PD Kottaridis,RE Gale等,“急性髓性白血病(AML)患者中存在FLT3内部串联重复增加了细胞遗传风险组的重要预后信息和对第一轮化疗的反应：英国医学研究理事会AML 10和12次试验中854位患者的分析”(The presence of a FLT3 internal tandemduplication in patients with acute myeloid leukemia(AML)adds importantprognostic information to cytogenetic risk group and response to the firstcycle of chemotherapy:analysis of 854patients from the United Kingdom MedicalResearch Council AML 10and 12trials).Blood.2001;98:1742-1759.
Yamamoto Y,Kiyoi H,Nakano Y.“人血液学恶性肿瘤中FLT3的激活环内 D835的激活突变”(Activating mutation of D835 within the activation loop of FLT3 inhuman hematologic malignancies).Blood.2001;97:2434-2439.
Thiede C,C Steudel,Mohr B.“979位急性髓性白血病患者中FLT3-激活突变的分析：与FAB亚型相关和鉴定预后较差的亚组”(Analysis of FLT3-activating mutationsin 979 patients with acute myelogenous leukemia:association with FAB subtypesand identification of subgroups with poor prognosis).Blood.2002; 99:4326-4335.
S Bains,Luthra R,Medeiros LJ和Zuo Z.“骨髓增生异常综合征中的FLT3 和NPM1突变：预测发展为急性髓性白血病的频率和潜能值”(FLT3and NPM1 mutations inmyelodysplastic syndromes:Frequency and potential value for predictingprogression to acute myeloid leukemia).American Journal of ClinicalPathology.January 2011;135:62-69.
PK Bhamidipati,Daver NG,Kantarjian H等,“骨髓增生异常综合征(MDS) 和慢性骨髓单细胞性白血病(CMML)中的FLT3突变”(FLT3mutations in myelodysplasticsyndromes(MDS)and chronic myelomonocytic leukemia (CMML)).2012.JournalofClinical Oncology.增刊;摘要6597.
Nakao M,S Yokota和T Iwai.“急性髓性白血病中发现的FLT3基因内部串联重复”(Internal tandem duplication of the FLT3 gene found in acute myeloidleukemia).Leukemia.1996;10:1911-1918.
H Kiyoi,M Towatari和S Yokota“FLT3基因的内部串联重复是导致产物的组成型激活的延伸突变新形态”(Internal Tandem duplication of the FLT3 gene is a novelmodality of elongation mutation,which causes constitutive activation of theproduct).Leukemia.1998;12:1333-1337.
H Kiyoi,T Naoe和S Yokota.“急性早幼粒细胞性白血病中与白细胞增多相关的FLT3内部串联重复”(Internal tandem duplication of FLT3 associated withleukocytosis in acute promyelocytic leukemia).厚生省白血病研究组(LeukemiaStudy Group of the Ministry of Health and Welfare).Leukemia.1997; 11:1447-1452.
S Schnittger,C Schoch和M Duga.“1003位急性髓性白血病患者中的FLT3 长度突变分析：根据细胞遗传学、FAB亚型以及在AMLCG研究中的预后和用作检测轻微后遗症的标记”(Analysis of FLT3 length mutations in 1003 patients with acute myeloidleukemia:correlation to cytogenetics,FAB subtype,and prognosis in the AMLCGstudy and usefulness as a marker for the detection of minimal residualdisease).Blood.2002;100:59-66.
FM Abu-Duhier,Goodeve AC,Wilson GA等,“成人急性髓性白血病中的 FLT3内部串联重复突变确定高风险组”(FLT3 internal tandem duplication mutations in adultacute myeloid leukemia define a high risk group).British Journal ofHaematology.2000;111:190-195.
H Kiyoi,T Naoe,Y Nakano等,“FLT3和N-RAS基因突变在急性髓性白血病中的预后含义”(Prognostic implication of FLT3 and N-RAS gene mutations in acutemyeloid leukemia).Blood.1999;93:3074-3080.
DL Stirewalt和JP Radich.“FLT3在造血恶性肿瘤中的作用”(The role of FLT3in haematopoietic malignancies).Nature Reviews Cancer.2003;3:650-665.
Y Yamamoto,H Kiyoi和Y Nakano等,“人血液学恶性肿瘤中FLT3激活环内的D835激活突变”(Activating mutation of D835 within the activation loop of FLT3 inhuman hematologic malignancies).Blood.2001;97:2434-2439.
C Thiede,Steudal C,Mohr B等,“979位急性髓性白血病患者中FLT3-激活突变的分析：与FAB亚型相关和鉴定预后较差的亚组”(Analysis of FLT3-activating mutationsin 979 patients with acute myelogenous leukemia: association with FABsubtypes and identification of subgroups with poor prognosis). Blood.2002;99:4326-4335.
U Bacher,Haferlach C,W Kern等,“AML中FLT3-TKD突变的预后相关性：组合问题-3082位患者的分析”(Prognostic relevance of FLT3-TKD mutations in AML:thecombination matters-an analysis of 3082patients).Blood.2008; 111:2527-2537.
T Kindler,Lipka DB和Fischer T.“FLT3作为AML中的治疗靶标：这些年后仍是难点”(FLT3 as a therapeutic target in AML:still challenging after all theseyears).Blood.2010;116:5089-102.
Liu,Y和N Gray.“结合无活性激酶构象的抑制剂的理性设计”(Rational designof inhibitors that bind to inactive kinase conformations).Nature Chem.Biol.2006;2:358-354.
A Ramachandran,Marshall H和Jain V.“克莱拉尼，III类受体酪氨酸激酶的新I型突变体特异性抑制剂，优先结合磷酸化激酶”(Crenolanib,a novel type I, mutantspecific inhibitor of class III receptor tyrosine kinases,preferentiallybinds to phosphorylated kinases).Cancer Res.2012;72(8增刊):3683.
J Zhang,Yang PL和Gray NS.,“用小分子激酶抑制剂瞄准癌症打靶” (Targetingcancer with small molecule kinase inhibitors).Nat Rev Cancer.2009;9: 28-39.
PW Manley,Cowan-Jacob SW,Mestan J.“用于治疗慢性髓性白血病的 Bcr-Abl激酶抑制剂的结构生物学、设计和临床开发中的进展”(Advances in the structuralbiology,design and clinical development of Bcr-Abl kinase inhibitors for thetreatment of chronic myeloid leukaemia).Biochim.Biophis.Acta.2005; 1754:3-13.
PT Wan等,“B-RAF的致癌突变激活RAF-ERK信号传导途径的机制” (Mechanism ofactivation of the RAF-ERK signaling pathway by oncogenic mutations of B-RAF).Cell.2004;116:855-867.
生物学过程参考文献
MA Fabian等.“临床激酶抑制剂的小分子激酶相互作用图”(A small molecule-kinases interaction map for clinical kinase inhibitors).Nat Biotechnol. 2005;23:329-336.
MW Karaman等.“激酶抑制剂选择性的定量分析”(A quantitative analysis ofkinase inhibitor selectivity).Nat Biotechnol.2008;26:127-132.
TA Carter等.“抑制ABL、KIT和EGF受体激酶的耐药性突变体”(Inhibition ofdrug-resistant mutants of ABL,KIT,and EGF receptor kinases).Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2005;102:11011-11016.

Claims (36)

1.一种治疗或预防有效量的式I所示的克莱拉尼的苯磺酸盐作为制备抑制或降低患有血液学恶性肿瘤的对象中失调的FLT3酪氨酸激酶活性或表达的药物的应用：
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述血液学恶性肿瘤选自以下的至少一种：白血病、骨髓瘤、骨髓增殖性疾病、或骨髓增生异常综合征。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述治疗和预防有效量是每天50-500毫克。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化合物的给药是连续、间歇、全身性或局部给药中的至少一种。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，失调的FLT3进一步限定为组成型活性的突变FLT3。
6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化合物通过口服、静脉内或腹膜内给药。
7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述FLT3是FLT-ITD或FLT-TKD的至少一种。
8.如权利要求1所述的应用，其特征在于，每天给予所述治疗或预防有效量的化合物，只要所述对象需要治疗血液学恶性肿瘤。
9.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化合物与另一细胞毒性或靶定之药剂以顺次或相伴方式中的至少一种提供给新诊断的血液学恶性肿瘤患者或复发/难治的血液学恶性肿瘤患者以维持现有患者的消退。
10.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化合物作为单一药剂或与另一细胞毒性或靶定之药剂组合提供给新诊断的血液学恶性肿瘤患者或复发/难治的血液学恶性肿瘤患者以维持消退。
11.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化合物作为单一药剂或与另一细胞毒性或靶定之药剂组合提供给新诊断的血液学恶性肿瘤儿科患者或复发/难治的血液学恶性肿瘤儿科患者以维持消退。
12.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述患者是对一先前FLT3酪氨酸激酶抑制剂会复发/难治的患者。
13.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述式I所示化合物或其药学上可接受的盐是溶液、乳液或混悬液的形式。
14.一种治疗有效量的克莱拉尼作为制备治疗血液学恶性肿瘤药物的应用，其特征在于，所述血液学恶性肿瘤的特征在于失调的FLT3受体酪氨酸激酶活性，且所述血液学恶性肿瘤选自以下的至少一种：白血病、骨髓瘤、骨髓增殖性疾病、或骨髓增生异常综合征，其中所述克莱拉尼为苯磺酸克莱拉尼。
15.如权利要求14所述的应用，其特征在于，所述化合物经口服、静脉内或腹膜内给药。
16.如权利要求14所述的应用，其特征在于，所述FLT3是FLT-ITD或FLT-TKD的至少一种。
17.如权利要求14所述的应用，其特征在于，所述克莱拉尼与化疗、放疗或外科手术以顺次或相伴方式中的至少一种提供于新诊断的血液学恶性肿瘤患者或复发/难治的血液学恶性肿瘤患者以维持消退。
18.如权利要求14所述的应用，其特征在于，所述克莱拉尼作为单一药剂或与化疗、放疗或外科手术组合形式提供，以治疗患有血液学恶性肿瘤的儿科患者。
19.如权利要求14所述的应用，其特征在于，所述克莱拉尼在新诊断的血液学恶性肿瘤患者中的标准诱导治疗或高剂量诱导治疗中的至少一种之后作为单一药剂提供。
20.如权利要求14所述的应用，其特征在于，所述克莱拉尼作为单一药剂提供以治疗标准或高剂量化疗、放疗或外科手术难治的或在标准或高剂量化疗、放疗或外科手术之后复发的血液学恶性肿瘤的患者。
21.如权利要求14所述的应用，其特征在于，所述患者是至少一种其它酪氨酸激酶抑制剂难治的患者。
22.如权利要求14所述的应用，其特征在于，其中所述患者在治疗前被识别为需要治疗血液学恶性肿瘤者。
23.一种治疗有效量的克莱拉尼作为制备药物的应用，所述药物用于给药予需要特异性抑制FLT3受体酪氨酸激酶的哺乳动物，其中患者样品于给药前被获得，且确定是失调的受体酪氨酸激酶，其中所述克莱拉尼为苯磺酸克莱拉尼。
24.如权利要求23所述的应用，其特征在于，所述失调的受体酪氨酸激酶存在于选自以下的至少一种的血液学恶性肿瘤：白血病、骨髓瘤、骨髓增殖性疾病、或骨髓增生异常综合征。
25.如权利要求23所述的应用，其特征在于，所述治疗和预防有效量是每天15-500毫克。
26.如权利要求23所述的应用，其特征在于，所述化合物的给药是连续、间歇、全身性或局部给药中的至少一种。
27.如权利要求23所述的应用，其特征在于，失调的FLT3进一步限定为组成型活性的突变FLT3。
28.如权利要求23所述的应用，其特征在于，所述化合物经口服、静脉内或腹膜内给药。
29.如权利要求23所述的应用，其特征在于，所述FLT3是FLT-ITD或FLT-TKD的至少一种。
30.如权利要求23所述的应用，其特征在于，每天给予所述治疗或预防有效量的所述化合物，只要对象需要治疗血液学恶性肿瘤。
31.如权利要求23所述的应用，其特征在于，所述患者被提供治疗且其后一个或多个患者样品被获得以测定疗效，以及治疗是持续直至血液学恶性肿瘤减轻或消除。
32.如权利要求23所述的应用，其特征在于，所述化合物与另一细胞毒性或靶定之药剂以顺次或相伴方式中的至少一种提供给新诊断的血液学恶性肿瘤患者或复发/难治的血液学恶性肿瘤患者以维持消退。
33.如权利要求23所述的应用，其特征在于，所述化合物作为单一药剂提供或与另一细胞毒性或靶定之药剂组合提供给新诊断的血液学恶性肿瘤患者或复发/难治的血液学恶性肿瘤患者以维持消退。
34.如权利要求23所述的应用，其特征在于，所述化合物作为单一药剂提供或与另一细胞毒性或靶定之药剂组合提供给新诊断的血液学恶性肿瘤儿科患者或复发/难治的血液学恶性肿瘤儿科患者以维持消退。
35.如权利要求23所述的应用，其特征在于，所述患者是对一先前之FLT3酪氨酸激酶抑制剂会复发/难治的患者。
36.如权利要求14或23所述的应用，其特征在于：所述克莱拉尼或其盐是溶液、乳液或混悬液的形式。
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Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2861066C (en) 2012-01-12 2024-01-02 Yale University Compounds and methods for the enhanced degradation of targeted proteins and other polypeptides by an e3 ubiquitin ligase
JP6407504B2 (ja) * 2012-09-21 2018-10-17 アログ・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＡｒｏｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． 恒常的に活性であるリン酸化型ｆｌｔ３キナーゼの阻害方法
US11642340B2 (en) 2012-09-26 2023-05-09 Arog Pharmaceuticals, Inc. Method of inhibiting mutant C-KIT
US10835525B2 (en) 2012-09-26 2020-11-17 Arog Pharmaceuticals, Inc. Method of inhibiting mutant C-KIT
TWI599356B (zh) 2012-09-26 2017-09-21 安羅格製藥有限責任公司 抑制突變型ｃ－ｋｉｔ的方法
BR112015016282A2 (pt) * 2013-01-07 2017-07-11 Arog Pharmaceuticals Inc crenolanibe para tratamento de distúrbios proliferativos de flt3 mutado
GB201311891D0 (en) 2013-07-03 2013-08-14 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Novel compound
GB201311888D0 (en) 2013-07-03 2013-08-14 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Novel compounds
AU2016232705C1 (en) 2015-03-18 2021-06-17 Arvinas, Inc. Compounds and methods for the enhanced degradation of targeted proteins
US10806737B2 (en) 2016-12-23 2020-10-20 Arvinas Operations, Inc. Compounds and methods for the targeted degradation of fetal liver kinase polypeptides
KR20190101406A (ko) 2016-12-23 2019-08-30 아비나스 오퍼레이션스, 인코포레이티드 Egfr 단백질분해 표적화 키메라 분자 및 관련 사용 방법
CN117510491A (zh) 2016-12-23 2024-02-06 阿尔维纳斯运营股份有限公司 用于迅速加速性纤维肉瘤多肽的靶向降解的化合物和方法
US11173211B2 (en) 2016-12-23 2021-11-16 Arvinas Operations, Inc. Compounds and methods for the targeted degradation of rapidly accelerated Fibrosarcoma polypeptides
EP3743066A4 (en) 2018-01-26 2021-09-08 Yale University IMIDE BASED MODULATORS OF PROTEOLYSIS AND METHOD OF USE
CN110840893A (zh) * 2018-12-13 2020-02-28 安罗格制药有限责任公司 含克莱拉尼的药物组合物及其用途
CN115175901B (zh) 2019-12-19 2024-03-22 阿尔维纳斯运营股份有限公司 用于雄激素受体的靶向降解的化合物和方法
WO2022019998A1 (en) 2020-07-20 2022-01-27 Arog Pharmaceuticals, Inc. Crystal forms of crenolanib and methods of use thereof
US20220079934A1 (en) * 2020-09-17 2022-03-17 Arog Pharmaceuticals, Inc. Crenolanib for treating pain
US11969420B2 (en) 2020-10-30 2024-04-30 Arog Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy of crenolanib and apoptosis pathway agents for the treatment of proliferative disorders
CN113683594B (zh) * 2021-09-07 2022-12-27 曲靖师范学院 一种喹啉-苯并咪唑盐类化合物及其合成方法和应用
WO2024054591A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Arvinas Operations, Inc. Rapidly accelerated fibrosarcoma (raf) degrading compounds and associated methods of use

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5990146A (en) 1997-08-20 1999-11-23 Warner-Lambert Company Benzimidazoles for inhibiting protein tyrosine kinase mediated cellular proliferation
WO1999016755A1 (en) 1997-09-26 1999-04-08 Merck & Co., Inc. Novel angiogenesis inhibitors
UA75055C2 (uk) 1999-11-30 2006-03-15 Пфайзер Продактс Інк. Похідні бензоімідазолу, що використовуються як антипроліферативний засіб, фармацевтична композиція на їх основі
AU2002226877B2 (en) 2000-10-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Orally active salts with tyrosine kinase activity
AR035885A1 (es) 2001-05-14 2004-07-21 Novartis Ag Derivados de 4-amino-5-fenil-7-ciclobutilpirrolo (2,3-d)pirimidina, un proceso para su preparacion, una composicion farmaceutica y el uso de dichos derivados para la preparacion de una composicion farmaceutica
WO2003024969A1 (en) 2001-09-14 2003-03-27 Merck & Co., Inc. Tyrosine kinase inhibitors
WO2003024931A1 (en) 2001-09-14 2003-03-27 Merck & Co., Inc. Tyrosine kinase inhibitors
TWI259081B (en) 2001-10-26 2006-08-01 Sugen Inc Treatment of acute myeloid leukemia with indolinone compounds
CN101703509A (zh) 2001-10-30 2010-05-12 诺瓦提斯公司 作为flt3受体酪氨酸激酶活性抑制剂的星形孢菌素衍生物
DE60205776T2 (de) 2001-12-27 2006-06-14 Theravance Inc Indolinon-derivative als protein-kinasehemmer
TW200406374A (en) 2002-05-29 2004-05-01 Novartis Ag Diaryl urea derivatives useful for the treatment of protein kinase dependent diseases
MY141867A (en) 2002-06-20 2010-07-16 Vertex Pharma Substituted pyrimidines useful as protein kinase inhibitors
GB0215676D0 (en) 2002-07-05 2002-08-14 Novartis Ag Organic compounds
NZ538715A (en) 2002-08-14 2007-07-27 Vertex Pharma Protein kinase inhibitors and uses thereof
AU2003288899B2 (en) 2002-08-23 2009-09-03 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Benzimidazole quinolinones and uses thereof
PA8580301A1 (es) 2002-08-28 2005-05-24 Pfizer Prod Inc Nuevos derivados de benzoimidazol utiles como agentes antiproliferativos
AU2003280599A1 (en) 2002-10-29 2004-05-25 Kirin Beer Kabushiki Kaisha QUINOLINE DERIVATIVES AND QUINAZOLINE DERIVATIVES INHIBITING AUTOPHOSPHORYLATION OF Flt3 AND MEDICINAL COMPOSITIONS CONTAINING THE SAME
EP1565187A4 (en) 2002-11-13 2010-02-17 Novartis Vaccines & Diagnostic CANCER TREATMENT METHODS AND RELATED METHODS
CL2003002353A1 (es) 2002-11-15 2005-02-04 Vertex Pharma Compuestos derivados de diaminotriazoles, inhibidores d ela proteina quinasa; composicion farmaceutica; procedimiento de preparacion; y su uso del compuesto en el tratamiento de enfermedades de desordenes alergicos, proliferacion, autoinmunes, condic
EP1581526B1 (en) 2002-12-18 2009-03-11 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Benzisoxazole derivatives useful as inhibitors of protein kinases
RU2323214C2 (ru) 2003-06-24 2008-04-27 Пфайзер Продактс Инк. Способы получения производных 1-[2-(бензимидазол-1-ил)хинолин-8-ил]пиперидин-4-иламина
WO2006038111A1 (en) * 2004-10-07 2006-04-13 Pfizer Products Inc. Benzoimidazole derivatives useful as antiproliferative agents
WO2012052757A1 (en) * 2010-10-20 2012-04-26 Astrazeneca Ab Tumour phenotype patient selection method
KR101546693B1 (ko) 2011-02-28 2015-08-24 칼리토르 사이언시즈, 엘엘씨 치환된 퀴놀린 화합물 및 그 사용 방법
JP6407504B2 (ja) 2012-09-21 2018-10-17 アログ・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＡｒｏｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． 恒常的に活性であるリン酸化型ｆｌｔ３キナーゼの阻害方法
TWI599356B (zh) 2012-09-26 2017-09-21 安羅格製藥有限責任公司 抑制突變型ｃ－ｋｉｔ的方法
BR112015016282A2 (pt) 2013-01-07 2017-07-11 Arog Pharmaceuticals Inc crenolanibe para tratamento de distúrbios proliferativos de flt3 mutado

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