CN103630630B - 一种山豆根药材中苦参碱的含量测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种山豆根药材中苦参碱的含量测定方法，其特征在于将苦参碱（MT）、氧化苦参碱（OMT）、氧化槐果碱（OSC）及槐果碱（SC）在过量还原剂的条件下只以苦参碱一种形式存在，确定了一个较为简便的提取工艺，不用繁琐的前处理手段，而且液相条件缓和，出峰时间较早，分离度及峰形良好，具有普遍的适用性。
Description
技术领域
本发明涉及一种山豆根药材中苦参碱的含量测定方法。
背景技术
山豆根为豆科植物越南槐Sophora tonkinensis Gagnep 的干燥根和根茎。功能与主治清热解毒，消肿利咽，用于火毒蕴结，乳蛾喉痹，咽喉肿痛，齿龈肿痛，口舌生疮。
山豆根同苦参药材一样，主含苦参碱Matrine（MT）和氧化苦参碱 Oxymatrine （OMT），为喹诺里西啶类生物碱，具有抗炎、抗肿瘤、镇痛、抗心律失常等作用。但由于提取工艺不同，二者在一定条件下可以相互转化，2010版《中国药典》含量测定项规定测定其苦参碱和氧化苦参碱的总量不少于0.70%。但是由于其提取工艺繁琐，需要正相色谱柱（氨基柱），而且流动相条件较为苛刻，需要使用大量的磷酸，对液相柱子的寿命造成较大影响，故其适应性收到一定限制，现有技术中也有不少关于山豆根或苦参药材的含量测定方法，旨在提供一种流动相简单的反相色谱法。如：ZL201010533935.8提供了一种苦参药材及其制剂中苦参碱和氧化苦参碱同时定量新方法，以含水甲醇提取，氧化铝柱除杂，以乙腈-甲醇-乙醇-0.1%磷酸为流动相，同时测定苦参中苦参碱和氧化苦参碱的含量。
发明内容
通过研究，不同的提取工艺除了得到苦参碱（MT）和氧化苦参碱（OMT）不同以外，还发现有其他物质对测定结果有干扰，山豆根药材中除了MT和OMT外，还存在大量的氧化槐果碱Oxysophocarpine（OSC），及微量的 Sophocarpine（SC），此二者也为山豆根中的活性成分，而且在一定条件下可与苦参碱的结构相互转化，而目前报道的含量测定方法只考虑到MT和OMT的总量，具有一定的局限性。
本发明公开了一种山豆根药材中苦参碱的含量测定方法，其特征在于将苦参碱（MT）、氧化苦参碱（OMT）、氧化槐果碱（OSC）及槐果碱（SC）在过量还原剂的条件下只以苦参碱一种形式存在，确定了一个较为简便的提取工艺，不用繁琐的前处理手段，而且液相条件缓和，出峰时间较早，分离度及峰形良好，具有普遍的适用性。
本发明通过如下技术手段实现：
一种山豆根药材中苦参碱的含量测定方法，其特征在于：
（1）色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以异丙醇:乙腈:0.1%磷酸（74:18:8）为流动相；检测波长为210nm；理论板数按苦参碱峰计算应不低于2000；
（2）对照品溶液的制备取苦参碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含苦参碱20μg溶液，即得;
（3）供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇50ml，密塞，称定重量，放置30分钟，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，再称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml与10%亚硫酸氢钠溶液5ml混合，涡旋震荡5min，滤过，取续滤液，即得；
（4）测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定。
本发明沿用了药典的提取方法，保证了提取效率的同时又克服了药典工艺之不足，考虑到与苦参碱结构相互影响的因素，同时又避免通过过多的标准品建立含量测定方法所造成的困难。
通过方法学考察，采用加样回收试验，结果表明：苦参碱的平均回收率为101.33%（n=9），RSD为2.13（见表1）；精密度（见表2）、稳定性（见表3）、重复性（见表4）、柱子适用性（见表5），试验均符合方法学要求。
所用仪器为：岛津LC-20A，LC-20AT泵，SPD-20A检测器，SIL-20进样器；LCsoluton色谱工作站；KQ5200B型超声清洗器。
药典提取方法（a）与本发明方法提取（b）的区别见图1；可见本发明可将OMT、SC、OSC还原为MT。色谱条件为：甲醇：乙腈：乙醇：0.1%磷酸溶液（42：36：10：12）；色谱柱：GL Sciences Inertsil ODS-SP 5μm 4.6×250mm。
附图说明
图1 药典提取方法（a）与本发明方法提取（b）的区别
图2 本发明方法所测得的液相色谱图
具体实施方式
实施例1
（1）色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以异丙醇:乙腈:0.1%磷酸（74:18:8）为流动相；检测波长为210nm；理论板数按苦参碱峰计算应不低于2000；
（2）对照品溶液的制备取苦参碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含苦参碱20μg溶液，即得;
（3）供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇50ml，密塞，称定重量，放置30分钟，超声处理(功率250W，频率40kHz) 30分钟，再称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml与10%亚硫酸氢钠溶液5ml混合，涡旋震荡5min，滤过，取续滤液，即得；
（4）测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定。
实施例2
取以药典方法测定山豆根中苦参碱和氧化苦参碱总含量为18.17mg/g的药材，按照实施例1方法测定，以苦参碱（MT）计，含19.98mg/g，出峰时间6.621为苦参碱MT，分离度6.96；拖尾因子1.02；见图2。
实施例2
取以药典方法测定山豆根中苦参碱和氧化苦参碱总含量为6.12mg/g的药材，按照实施例1方法测定，以苦参碱（MT）计，含7.78mg/g，出峰时间6.629，分离度7.08；拖尾因子1.01。
方法学试验数据如下：
表1回收率试验结果
表2 精密度试验结果
结果 对照品溶液、样品溶液中苦参碱峰面积RSD％均小于2.0，表明精密度良好。
表3 药材样品溶液稳定性试验结果
表4 重现性试验结果
表 5 柱子适用性
Claims (1)
1.一种山豆根药材中苦参碱的含量测定方法，其特征在于：
（1）色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以异丙醇：乙腈：0.1%磷酸（74:18:8）为流动相；检测波长为210nm；理论板数按苦参碱峰计算应不低于2000；
（2）对照品溶液的制备：取苦参碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含苦参碱20μg 溶液，即得；
（3）供试品溶液的制备取本品粉末约0.5g，过三号筛，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇50ml，密塞，称定重量，放置30分钟，超声处理30分钟，功率250W，频率40kHz，再称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml与10%亚硫酸氢钠溶液5ml混合，涡旋震荡5min，滤过，取续滤液，即得;
（4）测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪,测定。
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