CN103565818A

CN103565818A - 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备防治化疗药物盐酸阿霉素诱导的肝脏损伤药物中的应用

Info

Publication number: CN103565818A
Application number: CN201210252579.1A
Authority: CN
Inventors: 殷卫海; 马英鑫; 王班; 古宏晨; 王璐
Original assignee: Shanghai Jiaotong University
Current assignee: Shanghai Jiaotong University
Priority date: 2012-07-20
Filing date: 2012-07-20
Publication date: 2014-02-12

Abstract

本发明涉及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在药学领域中的应用,更具体地说是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备防治化疗药物盐酸阿霉素诱导的肝脏损伤药物中的应用。NAD⁺不但可以有效防治化疗药物盐酸阿霉素造成的肝脏损伤，而且我们还发现NAD⁺可以有效杀死神经胶质肿瘤细胞、神经元肿瘤细胞、胃癌肿瘤细胞、肾癌肿瘤细胞或乳腺癌肿瘤细胞，对于正常原代细胞没有杀伤作用。

Description

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备防治化疗药物盐酸阿霉素诱导的肝脏损伤药物中的应用

技术领域

本发明涉及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在药学领域中的应用,更具体地说是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备防治化疗药物盐酸阿霉素诱导的肝脏损伤药物中的应用。

背景技术

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide,简称NAD⁺）的化学结构式是：

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法主要是以酵母为原料，酵母经沸水提取，醋酸铅酸化沉淀得粗品，经甲酸型阳离子交换树脂柱处理，精制而得。

化疗药物盐酸阿霉素用于治疗白血病，恶性淋巴瘤，多发性骨髓瘤，乳腺癌、肺癌、软组织肉瘤、胃癌、肝癌、结肠直肠癌、卵巢癌等肿瘤。其主要在肝脏代谢，大约有一半由胆汁中排出。肝功能不全将导致排泄更慢。临床长期使用阿霉素，极易造成肝脏损伤。

发明内容

在实验中首次发现：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在防治化疗药物盐酸阿霉素诱导的肝脏损伤中的应用,该药物具有明显的治疗作用。

本发明的目的是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸作为活性成分在制备预防或治疗化疗药物盐酸阿霉素诱导的肝脏损伤中药物的应用。

进一步的，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸作为唯一活性成分在制备预防或治疗化疗药物盐酸阿霉素诱导的肝脏损伤中药物的应用。

进一步的，上述其化疗药物盐酸阿霉素造成的肝脏损伤，为服用或注射阿霉素的人员。

进一步的，上述肝脏损伤，为血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶含量增加、肝脏组织中还原型谷胱甘肽GSH含量降低。

进一步的，所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸制备的药物组合物是片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、混悬剂、糖浆剂、各种肠溶制剂及注射剂。

本发明与现有技术相比所具有的积极效果在于：

NAD⁺不但可以有效防治化疗药物盐酸阿霉素造成的肝脏损伤，而且我们还发现NAD⁺可以有效杀死神经胶质肿瘤细胞、神经元肿瘤细胞、胃癌肿瘤细胞、肾癌肿瘤细胞或乳腺癌肿瘤细胞，对于正常原代细胞没有杀伤作用。为以后制作以NAD+为主要成分的抗化疗药物肝脏损伤的药物以及以NAD⁺为主要成分的药物在肿瘤病人的临床应用提供了重要的科学依据。

本实验还发现N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl cysteine，简称NAC）可以保护化疗药物盐酸阿霉素造成的肝脏损伤：有效降低学清楚谷丙转氨酶ALT，谷草转氨酶AST的浓度，并显著增加肝脏组织中GSH的含量。初步提示NAD⁺保护肝脏损伤的机制可能跟氧化应激有关。

附图说明

图1 NAD⁺对化疗药物盐酸阿霉素造成的血清中谷丙转氨酶的增加有保护作用。

图2 NAD⁺对化疗药物盐酸阿霉素造成的血清中谷草转氨酶的增加有保护作用。

图3 NAD⁺对对化疗药物盐酸阿霉素造成的肝脏组织中还原型谷胱甘肽（GSH）的降低有保护作用。

图4 NAC对化疗药物盐酸阿霉素造成的血清中谷丙转氨酶的增加有保护作用。

图5 NAC对化疗药物盐酸阿霉素造成的血清中谷草转氨酶的增加有保护作用。

图6NAC对对化疗药物盐酸阿霉素造成的肝脏组织中还原型谷胱甘肽（GSH）的降低有保护作用。

具体实施方式

本发明对烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备防治化疗药物盐酸阿霉素诱导的肝脏损伤药物中的应用的实验内容主要包括以下几个方面：

1.NAD⁺对化疗药物盐酸阿霉素造成的血清谷丙转氨酶ALT增加具有保护作用。

2.NAD⁺对化疗药物盐酸阿霉素造成的血清谷草转氨酶AST增加具有保护作用。

3. NAD⁺对盐酸阿霉素造成的肝脏组织还原型谷胱甘肽GSH下降具有保护作用。

下面通过药效学实验进一步说明NAD⁺在防治化疗药物阿霉素诱导的肝脏损伤中具有明显的治疗作用。

一、实验方法

1、动物操作

我们的研究是使用雄性ICR小鼠，重量在18-25g之间，在上海交通大学MED-X研究院进行动物实验。所有的操作流程均符合上海交通大学实验室动物保护和使用守则。所有的给药方式均为腹腔注射，预先注射一定浓度保护剂或生理盐水，1h后注射一定浓度盐酸阿霉素或生理盐水。给药完成后，鼠在动物房中进行饲养，条件为22-24℃，12小时的明/暗循环，并可自由进食取水。48h后牺牲小鼠，取血、取肝脏。

2、血清的制备

取血后，血液4℃过夜。6000rpm离心20min，取上清液。

3、血清中谷丙转氨酶（ALT/GPT）测定

将一定量的血清加入准备好的一定量的反应底物（丙氨酸和α—酮戊二酸）溶液，混匀，37℃水浴30min。实验管加入一定量2,4—二硝基苯肼，混匀，37℃水浴20min。加入0.4mol/L NAOH溶液，混匀，室温放置5min，505nm波长，测绝对OD，查标准曲线，求得相应ALT/GPT活力单位。具体参照南京建成公司谷丙转氨酶（ALT/GPT）测定试剂盒。

4、血清中谷草转氨酶（AST/GOT）测定

将一定量的血清加入准备好的反应底物（天门冬氨酸和α—酮戊二酸），混匀，37℃水浴30min。实验管加入一定量2,4—二硝基苯肼，混匀，37℃水浴20min。加入0.4mol/L NAOH溶液，混匀，室温放置5min，505nm波长，测绝对OD，查标准曲线，求得相应AST/GOT活力单位。具体参照南京建成公司谷草转氨酶（AST/GOT）测定试剂盒。

5、肝脏组织中还原型谷胱甘肽（GSH）的测定

称取一定量的肝脏组织，加入适量生理盐水，剪成碎块，超声破碎，12000rpm离心30min，取上清液。加入一定量的沉淀剂溶液，混匀，室温反应2min，4000rpm离心10min，取上清液。加入适量buffer、谷胱甘肽还原酶、5-5’—二硫基—双（2—硝基苯甲酸），混匀，室温反应5min，420nm处测定绝对OD值，查标准曲线，求的相应GSH浓度。具体参照南京建成公司还原型谷胱甘肽（GSH）的测定试剂盒。

6、统计分析

所有数据按照平均值+标准差的方式给出。数据使用单因素方差分析进行评估，然后使用Student-Newman-Keuls post hoc test。P值小于0.05认为是统计学显著的。

二、实验结果和讨论

1、NAD⁺对盐酸阿霉素造成的血清谷丙转氨酶ALT的增加具有保护作用。

老鼠腹腔注射盐酸阿霉素40mg/kg，48小时后牺牲老鼠，发现血清中的谷丙转氨酶ALT含量有明显增加，而这个效果，可以由100、200mg/kg的NAD+明显减轻。结果见图1。

2、NAD⁺对盐酸阿霉素造成的血清谷草转氨酶AST的增加具有保护作用。

老鼠腹腔注射盐酸阿霉素40mg/kg，48小时后牺牲老鼠，发现血清中的谷草转氨酶AST含量有明显增加，而这个效果，可以由200mg/kg的NAD+明显减轻。结果见图2。

3、NAD⁺对盐酸阿霉素造成的肝脏组织还原型谷胱甘肽GSH减少具有保护作用。

老鼠腹腔注射盐酸阿霉素20mg/kg，48小时后牺牲老鼠取肝脏组织，发现肝脏中的还原性谷胱甘肽GSH含量明显降低，而这个效果，可以由100、200mg/kg的NAD⁺明显减轻。结果见图3。

根据以上结果表明，NAD⁺(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸,Nicotinamide adenine dinucleotide，简称NAD⁺）可以保护常用化疗药盐酸阿霉素造成的肝脏损伤：有效降低血清中谷丙转氨酶ALT、谷草转氨酶AST的浓度，并且显著增加肝脏组织中GSH的含量。表明NAD⁺在制备防治化疗药物盐酸阿霉素药物中有重要应用价值。

进一步，NAD⁺防治化疗药物盐酸阿霉素诱导的肝脏损伤的机制：NAD⁺是至少部分是通过减少盐酸阿霉素诱导的肝脏氧化应激对肝脏加以保护的。因为我们发现了NAD⁺可以防止肝脏组织中还原型谷胱甘肽GSH含量的降低（图3），证明NAD⁺可以减少盐酸阿霉素诱导的肝脏氧化应激。而运用抗氧化剂N-acetyl cysteine也可以防止血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶的含量增加（图4，图5），并使防止还原型谷胱甘肽（GSH）的降低（图6）。这些结果共同提示NAD⁺通过减少盐酸阿霉素诱导的肝脏氧化应激防止了肝损伤。

Claims

1.烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备防治化疗药物盐酸阿霉素诱导的肝脏损伤药物中的应用，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的化学结构式是：

Figure 2012102525791100001DEST_PATH_IMAGE001

。

2.烟酰胺腺嘌呤二核苷酸作为活性成分在制备预防或治疗化疗药物盐酸阿霉素诱导的肝脏损伤中药物的应用。

3.烟酰胺腺嘌呤二核苷酸作为唯一活性成分在制备预防或治疗化疗药物盐酸阿霉素诱导的肝脏损伤中药物的应用。

4.根据权利要求1或2或3所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备防治化疗药物盐酸阿霉素诱导的肝脏损伤药物中的应用，所述肝脏损伤，为血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶含量增加、肝脏组织中还原型谷胱甘肽GSH含量降低。

5.根据权利要求1或2或3所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在制备防治化疗药物盐酸阿霉素诱导的肝脏损伤药物中的应用，所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸制备的药物组合物是片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、混悬剂、糖浆剂、各种肠溶制剂及注射剂。