CN103550543A - 一种治疗仔猪腹泻的中药及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗仔猪腹泻的中药及其制备方法，由中药组分为：葛根90-110份、白茅根90-110份、五倍子70-90份、槐叶40-60份、莱菔子40-60份、桂枝40-60份、甘草10-30份的中药发酵获得。本发明采用复合益生菌固态发酵工艺，提供最佳的发酵中药的发酵工艺参数，提供出治愈率和预防率效果好的治疗仔猪腹泻的中药，为复合益生菌发酵中药生产提供参考。

Description

一种治疗仔猪腹泻的中药及其制备方法

技术领域

本发明属于兽药领域，尤其涉及一种治疗仔猪腹泻的中药及其制备方法。 

背景技术

我国是世界第一养猪大国，在养猪生产中，仔猪腹泻是一个全球性的问题，长期困扰着养猪业的发展，该病流行面广，终年发病，即使幸免于死的仔猪也常引起生长缓慢，饲料报酬降低，造成重大经济损失。 

仔猪腹泻对仔猪成活率和后期增重都具有严重影响，是制约养猪业发展的重要疾病。目前仔猪腹泻的防治普遍采用抗生素、激素、化学合成药物。这些物质的长期使用可使病源微生物产生耐药性，并会造成畜产品药物残留，威胁人类健康。 

该病目前尚无有效免疫方法，药物治疗仍是主要防治手段。长期以来，兽医临床上通常采用抗菌药物治疗，但随着抗生素的长期应用，产生耐药菌株而降低疗效。为此，人们在积极探索既具有抗菌作用，又具有调节机体免疫机能的药物，用于该病的防治。祖国传统医学中的某些中药具有与西药相似的抗菌作用，又不易产生耐药性，不存在药物残留问题，为人们提供了新的研究内容。 

目前对复合益生菌发酵中药研究报道不多，且均集中于发酵饲料方面的研究；即使是发酵饲料方面也仅仅是多集中在产品的品质与应用效果。 

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种疗效好、无残留、安全可靠的治疗仔猪腹泻的益生菌固态发酵中药制剂。 

本发明的目的是通过以下技术方案实现的： 

一种治疗仔猪腹泻的中药，由中药组分为：葛根90-110份、白茅根90-110份、五倍子70-90份、槐叶40-60份、莱菔子40-60份、桂枝40-60份、甘草10-30份的中药发酵获得。 

一种治疗仔猪腹泻的中药的制备方法，其特征在于：步骤如下： 

将所述各中药组分粉碎过80目筛，混合均匀， 

发酵辅料：麦麸180-220份、小麦粉240-260份； 

发酵原料：中药组分与发酵辅料充分混合，分成10等份，每份100g，备用；复合益生菌发酵液：其中活菌数≥50×108cfu/ml、乳酸菌数12×108cfu/ml；将复合益生菌发酵液按一定比例接种到发酵原料，以蒸馏水调节发酵水分， 拌匀后装入密封的锡箔袋，放入培养箱发酵培养。 

发酵条件：5.0wt%接种量、40wt%发酵水分、30～35℃、发酵3-5天。而且，所述中药组分为： 

葛根100份、白茅根100份、五倍子80份、槐叶50份、莱菔子50份、桂枝50份、甘草20份，各药材粉碎过80目筛，与发酵辅料充分混合均匀，分成10等份，每份100g，备用。 

而且，成分是乳酸杆菌、酵母菌、枯草芽胞杆菌。 

本发明的优点和积极效果是： 

1、本发明采用复合益生菌固态发酵工艺，提供最佳的发酵中药的发酵工艺参数，提供出治愈率和预防率效果好的治疗仔猪腹泻的中药，为复合益生菌发酵中药生产提供参考。 

2、本发明在仔猪日粮中添加不同添加剂对断奶仔猪生长性能的影响效果，发酵中药组和金霉素组的头均增重和头均耗料均显著高于(P<0.05)空白对照组，发酵中药组显著降低了断奶仔猪小肠和结肠内容物中有害菌大肠杆菌和沙门氏菌的数量，而能够增加双歧杆菌和乳酸菌的数量。 

3、本发明提供的中药组分中葛根，性凉、气平、味甘，具清热、降火、排毒诸功效。能升阳解肌，透疹止泻，除烦止温。治伤寒、温热头痛项强，烦热消渴，泄泻，痢疾，癍疹不透。白茅根寒凉而味甚甘，能清血分之热，而不伤干燥，又不粘腻，故凉血而不虑其积瘀，以主吐衄呕血。泄降火逆，其效甚捷，故又主胃火哕逆呕吐，肺热气逆喘满。且甘寒而多脂液，虽降逆而异于苦燥，则又止渴生津，而清涤肺胃肠间之伏热，能疗消谷燥渴。五倍子有收敛、抗菌、解毒的作用，其味酸咸，能敛肺止血，化痰，止渴，收汗；其气寒，能散热毒疮肿；其性收，能除泄痢湿烂。槐叶能清肝泻火，凉血解毒，燥湿杀虫，主治壮热；肠风；尿血；痔疮；湿疹；疥癣；痈疮疔肿。治五痔，心痛，眼赤，杀腹藏虫及热，治皮肤风，并肠风泻血，赤白痢。莱菔子之功，长于利气。生能升，熟能降，升则吐风痰，散风寒，发疮疹；降则定痰喘咳嗽，调下痢后重，止内痛，皆是利气之效。桂枝能散寒解表，温通经脉，通阳化气。主风寒表证，寒湿痹痛，四肢厥冷，症瘕结块，小便不利，关节痹痛，痰饮蓄水，水肿等。甘草能益气补中，缓急止痛，润肺止咳，泻火解毒，调和诸药。主倦怠食少，肌瘦面黄，心悸气短，腹痛便溏，四肢挛急疼痛，，咳嗽气喘，咽喉肿痛，痈疮肿痛，药物、食物中毒。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性。 

附图说明

图1为本发明发酵中药流程图。 

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定 性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。 

一种治疗仔猪腹泻的中药，是一种发酵中药，中药组分为： 

葛根100g、白茅根100g、五倍子80g、槐叶50g、莱菔子50g、桂枝50g、甘草20g，各药材粉碎过80目筛， 

发酵辅料：麦麸200g、小麦粉250g； 

中药与辅料充分混合均匀，分成10等份，每份100g，备用。 

复合益生菌发酵液：上海生物工程技术有限公司提供，主要成分是乳酸杆菌、酵母菌、枯草芽胞杆菌等，其中活菌数≥50×10⁸cfu/ml、乳酸菌数12×10⁸cfu/ml。 

发酵条件：5.0%接种量、40%发酵水分、30～35℃、发酵3-5天较为合适。 

复合益生菌发酵液发酵培养基的配制：牛肉膏10g、酵母膏5g、K₂HPO₄2g、乙酸钠5g、葡萄糖20g、胰蛋白酶10g、柠檬酸钠2g、吐温-801ml、琼脂粉15-20g、MgSO₄2g、MnSO₄0.05g、加水至1L、pH6.0-6.8，121℃，高压灭菌20min，发酵方法为本领域公知技术，不具有特殊要求。 

发酵工艺具体如下： 

将复合益生菌发酵液按一定比例接种到发酵原料，以蒸馏水调节发酵水分，拌匀后装入密封的锡箔袋，放入培养箱发酵培养，按要求采样检测，流程如图1。 

为确定复合益生菌发酵中药生产工艺参数，开展如下试验： 

①在发酵水分40%，复合益生菌发酵液接种量2.5%、5.0%、7.5%、发酵温度30℃，发酵3天，采样检测； 

②在发酵水分为40%，菌种接种量为5%、发酵温度25℃、30℃、35℃，发酵第3天采样检测； 

③在发酵水分为30%、40%、50%，菌种接种量为5%、发酵温度30℃、发酵第3天采样检测； 

④在发酵水分40%，复合益生菌发酵液接种量5%，发酵温度35℃，发酵0、1、3、5、7、10、15天后，采样检测。 

数据测定 

1、发酵中药感官评定：从颜色、气味、质地等方面对发酵中药进行评定。 

2、细菌总数测定： 

按照国家标准GB13093-91测定方法如下： 

（1）原理 

将试样稀释至适当浓度，用特定的培养基，在30±1℃下培养72±3h，计数平板中长出的菌落数，计算每克试样中的细菌数量。 

（2）操作步骤 

①采样 

采样时必须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具，如灭菌牛皮纸袋或广口瓶，金属勺和刀，在卫生学调查基础上，采取有代表性的样品，样品采集后应尽快检验，否则应将样品放在低温干燥处。 

根据饲料仓库、饲料垛的大小和类型，分层定点采样，一般可分三层五点或分层随机采样，不同点的样品，充分混合后，取500g左右，小量存贮的饲料可使用金属小勺采取上、中、下各部位的样品混合。 

②试样稀释及培养 

a.无菌称取试样10.0g，放入含有90mL稀释液的灭菌三角烧瓶内（瓶内领先加有适当数量的玻璃珠）。经充分振摇，制1∶10的均匀稀释液。最好置振荡器中以8000-10000r/min的速度处理2-3min。 

b.用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，沿管壁慢慢注入含有9mL稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均匀，作成1∶100的稀释液。 

c.另取一支1mL灭菌吸管，按上述操作顺序，作10倍递增稀释，如此每递增稀释一次，即更换一支吸管。 

d.根据饲料卫生标准要求或对试样污染程度的估计，选择2-3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。 

e.稀释液移入平皿后，应及时将凉至46±1℃的平板计数用培养基（可放置46±1℃水浴锅内保温）注入平皿约15mL，小心转动平皿使试样与培养基充分混匀。从稀释试样到倾注培养基之间，时间不能超过15min。 

f.待琼脂凝固后，倒置平皿于30±1℃恒温箱内培养72±3h取出，计数平板内菌落数目，菌落数乘以稀释倍数，即得每克试样所含细菌总数。 

③菌落计数方法 

作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时借助于放大镜检查，以防遗漏。在计数出各平板菌落数后，求出同一稀释度两个平板菌落的平均数。 

3、乳酸菌数测定 

准确称取发酵中药10g，倒入100ml无菌水中，摇床150-160rpm，37℃，30min摇匀。将菌液适当梯度稀释，吸取1mL稀释液于灭菌培养皿中，然后倒入45℃-50℃的MRS培养基，混匀。37℃恒温培养72h后，进行菌落计数。 

3、乳酸测定 

按照乳酸检测试剂盒说明书操作进行，具体如下： 

取样品见表1，10倍稀释，摇床37℃，150-160rpm，30min摇匀，取上清，作为测定样本； 

混匀，530nm，1cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度值。计算： 

乳酸含量=(OD_U-OD_B)×C_S/(OD_S-OD_B)×C_prot

式中，OD_U为测定管吸光度，OD_S为标准管吸光度，OD_B为空白管吸光度，C_S为3mmol/L标准浓度，C_prot为样本中蛋白质含量（gprot/L）；再根据其分子量90.08折算为所占干物质的比重。 

5、总氨基酸测定 

操作方法按照说明书进行，具体如下： 

取样品见表2，10倍稀释，摇床37℃，150-160rpm，30分钟摇匀，取上清，作为测定样本。同时取样本进行蛋白测定。 

表2总氨基酸测定操作步骤 

混匀，3500rpm离心10分钟，取上清液于650nm处，1cm光径，蒸馏水调零比色，测定各管吸光度值。计算： 

总氨基酸含量=(OD_U-OD_B)×C_S×C_prot/(OD_S-OD_B) 

式中，OD_U为测定管吸光度，OD_S为标准管吸光度，ODB为空白管吸光度，C_S为50mmol/L氨基酸标准溶液，C_prot为样本中蛋白质含量（gprot/L）；再根据常见20种氨基酸的平均分子量138，将其折算为所占发酵中药总氮的比重。 

6、粗蛋白测定 

采用凯氏定氮法； 

7、粗蛋白体外消化率 

采用胃蛋白酶-胰蛋白酶两步法进行测定，具体步骤如下： 

（1）胃蛋白酶处理 

①称取0.5g中药样品2份，分别置于250ml带盖三角瓶中(每个样品测2个平行样)。 

②准确称取1.777g胃蛋白酶(准确到0.001g)，置于体积100ml、pH值1.4的HCl-KC1缓冲液中。 

③用移液管移取30ml上述混合液置于三角瓶中。 

④将三角瓶置于(40±0.1)℃台式恒温摇床中，以其温度达到40℃时开始计时，震荡3h，频率为80次/min。 

（2）胰蛋白酶处理 

①准确称取4mg胰蛋白酶(准确到0.001g)，置于体积1000ml、pH值6.8的KH₂PO₄-NaOH缓冲液中，放入冰箱中备用(温度为4～6℃)。 

②从摇床中按顺序取下三角瓶。用0.2mol/ml的NaOH溶液滴定消化液，使其pH值6.8，各量取15mlKH₂PO₄-NaOH缓冲液置于三角瓶中，然后再分别用移液管吸取15mlKH₂PO₄-NaOH-胰蛋白酶混合液置于另一个三角瓶中。 

③继续在(40±0.1)℃下震荡培养3h。 

④用320目尼龙滤布和抽滤装置过滤消化液，并用温水反复冲洗培养用的三角瓶(3～4次)，将洗液加入消化液中过滤，用洗瓶多次冲洗滤渣。 

⑤将滤渣放入65℃恒温烘箱中烘干1h用凯氏定氮法测定滤渣的含氮量，计算消化率。 

（3）空白试验 

按上述各步骤进行，但不加入样品。测定胃蛋白酶-胰蛋白酶复合处理空白试验的含氮量。 

体外消化率计算方法 

粗蛋白消化率(％)=100×(发酵中药样品中粗蛋白含量-消化后滤渣粗蛋白含量)/发酵中药样品粗蛋白含量 

8、铵态氮测定 

用苯酚-次氯酸钠比色法测定，具体步骤如下： 

取发酵鲜样10g，加入100ml蒸馏水，搅拌均匀，4℃冰箱放置20h，并不时摇晃，制成浸提液。 

将浸提液加入放入离心管，10000rpm离心12min，取50μl上清液于试管中（调零的空白试管加50μl蒸馏水），依次加入A试剂和B试剂各3ml，用漩涡振荡器充分混合，将试管置60℃水浴10min，然后用冷水冷却，取5ml溶液比色。 

铵态氮标准曲线的绘制：按顺序编号六支试管0、1、2、3、4、5，依次加入NH₄Cl标准液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1ml，再依次加入蒸馏水5、4.8、4.6、4.4、4.2、4ml，有漩涡振荡器充分混合，各管中NH₄Cl浓度依次为0、2、4、6、8、10mg/ml，将零号管作为空白管，其余五管作为上述四种浓度的标准管。制成标准曲线。 

9、干物质回收率（DMR） 

按中药发酵前后重量和干物质（DM）含量计算，具体为：准确称量发酵前后中药重量，并测定发酵前后中药含水量，算出发酵前后中药干物质重量，发酵 后中药干物质比发酵前中药干物质重量，即为干物质回收率。 

10、数据处理 

试验数据用Excel2003和SPSS11软件进行相关性及单因素方差分析。 

结果与分析 

1、复合益生菌接种量对发酵中药的影响 

复合益生菌接种量对中药发酵的影响试验结果如表3所示，从表中可知不同接种量发酵后，发酵中药粗蛋白含量无变化（P>0.05）；高接种量（7.5%）时，发酵中药铵态氮、细菌总数和乳酸菌数高于其他两组（P<0.01），干物质回收率降低（P<0.01）；低接种量（2.5%），pH较高（P>0.05）；中等接种量（5.0%），细菌总数和乳酸菌数高于低接种量组，而低于高接种量组（P<0.01）。 

表3复合益生菌接种量对中药发酵的影响 

由表4可见，高接种量（7.5%）发酵中药为深褐色、酸味刺鼻、质地较差；中等接种量（5%）为金黄色、有芳香味、质地良好；低接种量（2.5%）发酵中药酸味较弱。 

表4不同接种量发酵后中药的感官评定结果 

2、水分对发酵中药的影响 

水分对发酵中药的影响试验结果如表5所示，从表中可知不同水分发酵后，粗蛋白含量无显著变化（P>0.05）；高水分（50%）发酵时铵态氮和细菌总数显著提高（P<0.01），干物质回收率显著降低（P<0.01）；低水分（30%）发酵时，pH值明显提高（P<0.05）；40%发酵水分时，乳酸菌数高于其他两组（P<0.01）， 干物质回收率较高水分发酵组高（P<0.01），而较低水分发酵组低（P>0.01）。 

表5水分对发酵中药的影响 

由表6可见，低水分（30%）发酵产品亮黄色、酸味、质地干散；中等水分（40%）时为金黄色、芳香味、质地良好；高水分（50%）为深褐色、刺鼻酸味、结块严重。 

表6不同水分发酵后中药的感官评定结果 

3、温度对发酵中药的影响 

温度对发酵中药的影响试验结果如表7所示，从中可知发酵温度对粗蛋白含量和干物质回收率无显著影响（P>0.05）；发酵温度低时，细菌总数降低（P<0.01），pH值较高（P<0.05）；随发酵温度升高，乳酸菌显著升高（P<0.01），pH值降低。 

表7温度对发酵中药的影响 

由表8可见，低温度（25℃）发酵产品淡黄色、酸味弱、质地良好；中等温度（30℃）时为淡黄色、酸味、质地良好；高水分（35℃）为金黄色、芳香味、质地良好。 

表8不同温度发酵后中药的感官评定结果 

4、发酵时间对中药的影响 

不同发酵时间粗蛋白无明显变化，游离氨基酸在发酵开始阶段逐渐升高，至发酵7天后又显著降低，铵态氮和粗蛋白体外消化率随发酵时间逐渐升高，干物质回收率则降低明显（见表9）。 

表9发酵时间对粗蛋白、FAA-N/tN和NH3-N/tN等的影响 

发酵前3天总菌数及乳酸菌增加明显；pH显著下降，此后维持在较低水平；发酵前5天乳酸含量持续上升，而后维持在较高水平；对乳酸和pH进行相关性检验，求得Pearson相关系数为-0.954，且显著性水平为0.001，因而两者存在显著负相关（见表10）。 

表10发酵时间对pH、菌数和乳酸的影响 

从表11可知，发酵前期中药酸味较弱，至第3天为金黄色、芳香味、质地良好，持续发酵则中药颜色加深、酸味刺鼻、品质变差。 

表11不同时间发酵后中药的感官评定结果 

5、关于发酵工艺参数的确定 

本试验通过发酵中药感官品质评定、乳酸菌数、pH、铵态氮和干物质回收率等指标，确定发酵的最佳工艺参数。 

本试验中，接种量、水分、发酵温度较低时，乳酸菌数量较少、pH较高（P<0.01）。接种量5.0%时，乳酸菌数量较多，铵态氮、DMR与低接种量无显著差异，却明显优于高接种量；水分高时铵态氮含量较高，中药干物质回收率较低（P<0.01）；低温发酵（25℃）明显影响了微生物的繁殖，致使乳酸菌减少、pH较高，30与35℃发酵相比较，除乳酸菌数量较低外，其他基本一致，但此时乳酸菌也已达到较高的水平（15.8×10⁸cfu/g）；发酵时间对产品品质有显著的影响，在细菌总数、乳酸菌数、游离氨基酸、铵态氮、回收率和感官变化尤为明显。综合上述并结合经济效益原则，本试验以5.0%接种量、40%发酵水分、30～35℃、发酵3-5天较为合适。 

2.6发酵可提高中药品质 

本试验中，通过对细菌总数、乳酸菌数、乳酸和pH的分析得知，发酵前期，细菌总数最高，微生物发酵糖类产酸和厌氧程度的逐渐加强，使环境更有利于乳酸杆菌的增殖，产生大量的乳酸；随着乳酸的升高，中药pH值降低，继续发酵，则乳酸菌在数量上成为优势菌群，产生大量乳酸，pH值随之下降，转而抑制了其他微生物的生长，使得细菌总数降低；发酵继续进行，则乳酸菌自身繁殖也受到了抑制，数量急剧降低。当乳酸含量达到最高时，乳酸菌数量已经下降，且发酵中药表观品质变差。 

饲喂试验效果 

1、试验动物、材料与方法 

1.1试验动物及分组 

取胎次一致、体重相近的健康“杜长大”三元杂交28日龄断奶仔猪150头，公母各半，按试验要求随机分为三组，即空白对照组、复合益生菌发酵中药组、金霉素药物对照组。每组设5个重复，每个重复10头，每个重复公母各半。 

1.2日粮及营养水平 

基础日粮参照美国NRC(1998)断奶仔猪的营养需要配合成粉状全价料。复合益生菌发酵中药组饲喂基础日粮并添加发酵中药（200g/t）、金霉素药物对照组饲喂基础日粮并添加金霉素（75g/t）、空白对照组只饲喂基础日粮。 

日粮组成及主要营养成分见表12。 

表12基础日粮组成与营养水平 

4%预混料配方（每吨全价料中）：石粉3.0kg、磷酸氢钙11kg、抗氧化剂0.2kg、罗氏多维0.4kg、氯化胆碱0.8kg、防霉剂1.0kg、食盐3.0kg、甜味剂0.6kg、蛋氨酸0.5kg、赖氨酸2.3kg、苏氨酸0.5kg、硫酸亚铁0.6kg、硫酸铜0.03kg、硫酸锌0.45kg、硫酸锰0.02kg、1%亚硒酸钠0.005kg、1%碘酸钾0.00275kg，其余为米糠，作为载体。 

1.3试验猪的饲养管理 

试验在试验猪场进行。 

试验前对猪舍进行严格消毒。试验猪采用群饲，自由采食和饮水。预饲期7天，正试期为21天。试验期间每天记录耗料量，并观察记录仔猪粪便情况，粪便分为正常、稀软、粘稠、水样和血便5个等级，后4个等级判断为腹泻。按每个重复(每栏)计算试验猪的日平均采食量、平均日增重、料重比。 

仔猪腹泻发生率(%)=试验期间腹泻次数/(仔猪数×试验天数)×100%。 

仔猪死亡率(%)=试验仔猪死亡数/试验仔猪数×100%。 

1.4试验猪的屠宰 

宰前禁饲24小时，禁饲期间自由饮水，宰前称重。饲养试验结束后，随机从每组的每个重复中选取体重相近的健康仔猪各2头(公母各半)，共30头，在无菌操作条件下屠宰、解剖。 

肌注4%戊巴比妥钠溶液(每千克体重40mg)进行麻醉，待麻醉完全后，切开腹腔，进行屠宰取样。 

1.5样品的收集与保存 

1.5.1肠道内容物样品的收集与保存 

在选定的试验猪消化道相同部位取小肠和结肠内容物各约2g，无菌操作条件下进行。将所采样品放入消毒容器，保持温度4℃。将所采样品在最短时间内运回实验室，并在无菌操作室内将样品与生理盐水进行充分混合后，对肠道内容物中有害菌大肠杆菌、沙门氏菌和有益菌乳酸杆菌、双歧杆菌分别进行检测。 

1.5.2小肠各段样品的收集与保存 

在十二指肠结肠韧带后10cm取空肠样，在空肠与回肠交界处回盲韧带后10cm取回肠样。各处样品取样2块，每块大小均为0.5cm×0.5cm。样块分别用生理盐水洗净，并用滤纸吸干；然后分别浸入10%甲醛固定液和2.5%戊二醛固定液中，置4℃冰箱保存，用显微镜测各肠段形态结构的变化。 

1.6样品分析 

肠道菌群检测 

稀释液配制:在超净工作台中取各段肠内容物各1.0克，分别放入无菌试管中并做好标记。然后配制不同比例稀释液，在无菌试管中加入无菌稀释液9.0ml，在磁力震荡器震荡3-5分钟，此液为10倍稀释液；然后再吸取1.0ml于另一无菌试管，加入9.0ml无菌稀释液进行10^-2稀释，即为100倍稀释液；振荡后，再依次进行10^-3-10^-6倍稀释。分别将不同肠段、不同稀释度的0.1ml稀释液涂抹于各鉴别培养基上。 

肠道菌培养基及培养:肠道中的厌氧菌生长在Wilkins chalgren琼脂培养基上，37℃厌氧培养48小时后进行菌落计数。需氧菌生长在脑心浸液琼脂培养基上，37℃有氧培养24小时后进行菌落计数。大肠杆菌和沙门氏菌分别接种于麦康凯培养基及沙门氏志贺氏属琼脂培养基中，37℃有氧培养24小时后进行菌 落计数。乳酸菌和双歧杆菌分别接种于乳酸杆菌选择性培养基(LBS)及双歧杆菌选择性培养基(BS)上，37℃厌氧培养48小时后进行菌落计数。 

各类肠道菌计数:肠道微生物数量采用平板菌落计数法进行计数并统计，计数方法采用平板划线计数法。先计算每克样品中细菌数量，公式为：每克样本所含细菌数=菌落数均值×稀释倍数/样品质量，然后用每克肠道内容物中细菌个数的对数(logcfu/g)表示。各稀释度设3个重复。根据肠道菌群形态及细胞形态、革兰氏染色情况、耗氧性等来鉴定细菌。 

1.7数据处理 

采用SAS(6.12版)软件对数据进行单因素方差分析。所有数据均以平均值±标准误差表示，各处理间平均值的比较采用Duncan’s多重比较进行差异显著性检验。差异显著性用P<0.05表示。 

2结果与分析 

2.1发酵中药对仔猪腹泻的预防作用 

空白对照组仔猪饲料中未添加药物，仔猪腹泻严重。空白对照组在21天试验期内共记录腹泻247次，腹泻发生率为23.52%，显著高于发酵中药组和金霉素组。发病仔猪精神萎靡、厌食，频繁排泄带粘液的稀粪，肛门周围被粪便污染。严重者表现眼窝凹陷，有脱水症状，食欲差，有个别仔猪由于腹泻严重脱水死亡，见表13. 

表13发酵中药对仔猪腹泻的预防作用 

2.2不同处理对生长性能的影响 

日粮中添加不同添加剂对断奶仔猪生长性能的影响效果见表14。 

表14发酵中药对断奶仔猪生长性能的影响 

注:表中同列不同上标字母a、b表示差异显著，P<0.05。 

由表14可见，发酵中药组和金霉素组的头均增重和头均耗料均显著高于(P<0.05)空白对照组。 

2.3不同处理对肠道不同菌群的影响 

不同处理对仔猪肠道内不同菌的影响见表15。 

表15不同处理对仔猪肠道菌群的影响(logcfu/g) 

由表15可见，与空白对照组、金霉素组相比，发酵中药组显著降低了断奶仔猪小肠和结肠内容物中有害菌大肠杆菌和沙门氏菌的数量，而能够增加双歧杆菌和乳酸菌的数量。 

Claims (4)

1.一种治疗仔猪腹泻的中药，其特征在于：由中药组分为：葛根90-110份、白茅根90-110份、五倍子70-90份、槐叶40-60份、莱菔子40-60份、桂枝40-60份、甘草10-30份的中药发酵获得。

2.一种如权利要求1所述的治疗仔猪腹泻的中药的制备方法，其特征在于：步骤如下：

将所述各中药组分粉碎过80目筛，混合均匀，

发酵辅料：麦麸180-220份、小麦粉240-260份；

发酵原料：中药组分与发酵辅料充分混合，分成10等份，每份100g，备用；

复合益生菌发酵液：其中活菌数≥50×10⁸cfu/ml、乳酸菌数12×10⁸cfu/ml；

将复合益生菌发酵液按一定比例接种到发酵原料，以蒸馏水调节发酵水分，拌匀后装入密封的锡箔袋，放入培养箱发酵培养。

发酵条件：5.0wt%接种量、40wt%发酵水分、30～35℃、发酵3-5天。

3.根据权利2所述的治疗仔猪腹泻的中药的制备方法，其特征在于：所述中药组分为：

葛根100份、白茅根100份、五倍子80份、槐叶50份、莱菔子50份、桂枝50份、甘草20份，各药材粉碎过80目筛，与发酵辅料充分混合均匀，分成10等份，每份100g，备用。

4.根据权利2所述的治疗仔猪腹泻的中药的制备方法，其特征在于：成分是乳酸杆菌、酵母菌、枯草芽胞杆菌。

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