CN103513042A - 用于预测或早期诊断妊娠高血压疾病的试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种用于预测或早期诊断妊娠高血压疾病的试剂盒，所述试剂盒用于妊娠6周龄之后孕妇血浆、血清、尿液或胎盘中标志物的测定，所述标志物选自sMet、SerpinF2、睾酮、雌二醇中的至少一种。通过对大样本进行验证表明，即将患有子痫前期或具有极强子痫前期患病倾向性的人群在妊娠14周龄之后血浆中sMet水平极显著低于正常孕妇，即将患有子痫前期或具有子痫前期患病倾向性人群在妊娠期血浆中SerpinF2或To/E2水平极显著高于正常孕妇。该结果远优于目前被认为预测子痫前期或子痫前期倾向性前景最好的血管生成因子（如VEGF、PlGF）和抗血管生成因子（如sFlt-1和sEndoglin），有助于子痫前期的预测及诊断。

Description

用于预测或早期诊断妊娠高血压疾病的试剂盒
技术领域
本发明涉及一种检测试剂盒，具体地说，涉及一种用于预测或早期诊断妊娠高血压疾病的试剂盒。
背景技术
子痫前期(preeclampsia)是一种以高血压和蛋白尿为特征的妊娠期高血压疾病。该疾病的发病率为孕妇人群的2-7%，是目前导致母婴死亡的主要原因之一。子痫前期的典型临床特征于孕20周之后，可通过血压和尿液检查高血压和蛋白尿而得以发现。然而，这些临床特征出现之前，孕妇及其所孕育的胎儿既已遭受了病理损害。因此，在子痫前期临床特征出现之前的特异的早期诊断可使母婴得到及时有效的处理，从而减少母婴所受的风险。目前的各种常规检查并不能作为子痫前期的早期诊断方法，临床上缺乏一种能在孕早期(妊娠6-13周)或中期(妊娠14-26周)子痫前期症状出现之前，有效诊断预测子痫前期发病或发病倾向性的方法。子痫前的病因目前尚不清楚，但普遍认为胎盘在母体子宫内植入过浅是该疾病的主要诱因之一。因此，目前普遍认为具有良好前景的子痫前期的预测分子，如PlGF和sFlt-1等，大多是对胎盘发育具有重要功能的激素、因子或相应的拮抗分子。
目前，血管生成因子(如VEGF、PlGF)和抗血管生成因子(如sFlt-1、sEndoglin)被普遍认为是预测子痫前期前景最好的分子。然而，这类分子对于人群中子痫前期患者检测的灵敏性达不到临床要求的标准，而且不能有效区别子痫前期和一些其它的产科疾病，如IUGR。
c-Met是一种位于细胞膜上的受体酪氨酸激酶。c-Met的配体为肝细胞生长因子(HGF)，二者结合可促进细胞的增殖、迁移和侵润。HGF/c-Met系统不仅对胎盘的发育和形成起作用，还对肾脏正常滤过功能的维持起着重要作用。可溶性Met(sMet)是成熟c-Met在细胞膜上被蛋白酶剪切下来的胞外片段。
SerpinF2是纤溶系统中纤溶酶(plasmin)的天然抑制剂，其高表达可抑制纤溶过程从而促进血栓累积。有证据表明，子痫前期胎盘中存在较高的纤维蛋白沉积，该现象可能会降低胎盘血流的供应，从而与子痫相关。
辜酮(To)和雌二醇(E2)是人体内雄激素和雌激素的主要存在形式。在非孕妇女中，雌、雄激素主要由卵巢合成。在妊娠期，由于卵巢的功能被抑制，雌、雄激素主要由胎盘合成。
目前，已知孕妇外周血中可以检测到一定水平的sMet、SerpinF2、辜酮和雌二醇等分子。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于预测或早期诊断妊娠高血压疾病的试剂盒，特别是一种用于子痫前期的预测和诊断的试剂盒。
为了实现本发明目的，本发明首先提供用于预测或早期诊断妊娠高血压疾病的标志物，所述标志物选自sMet、SerpinF2、辜酮、雌二醇中的至少一种。
优选地，所述标志物为sMet，以及SerpinF2、辜酮或雌二醇中的至少一种。
更优选地，所述标志物为sMet、SerpinF2、辜酮和雌二醇。
所述标志物应用于妊娠6周龄后孕妇血浆、血清、尿液或胎盘中相关标志物的测定。
所述标志物应用于妊娠14周龄后孕妇血浆、血清、尿液或胎盘中相关标志物的测定。
所述标志物用于胎盘中SerpinF2蛋白水平和/或基因水平的测定。
所述标志物用于胎盘中辜酮和雌二醇的测定。
本发明还提供一种用于预测或早期诊断妊娠高血压疾病的试剂盒，所述试剂盒包括特异性结合sMet的抗体或检测sMet的试剂。
前述试剂盒还包括特异性结合SerpinF2的抗体或检测SerpinF2的试剂。
前述试剂盒还包括特异性结合辜酮的抗体或检测辜酮的试剂。
前述试剂盒还包括特异性结合雌二醇的抗体或检测雌二醇的试剂。
本发明中涉及的抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体，还可以为标记抗体。
本发明提供了在子痫前期症状出现前诊断预测子痫前期或子痫前期发病倾向性的方法及应用。
血浆中sMet在正常妊娠和不同的妊娠疾病情况下随妊娠时间的变化如图1所示。在妊娠14周后，患有重度子痫前期或慢高合并重度子痫前期(与子痫前期症状类似，但高血压症状在孕前就已经存在)的病例血浆sMet水平极显著低于其他组别。所述sMet包括Met基因(GenBank ID：4233)经转录和翻译得到的多肤分子或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等抗原性的氨基酸序列，它们的编码基因，以及与该多肤特异性结合的抗体。
血浆中SerpinF2在子痫前期和正常妊娠情况下随妊娠时间的变化如图2A所示。妊娠6周后，患有子痫前期的病例血浆SerpinF2水平极显著高于正常妊娠者。子痫前期胎盘中SerpinF2蛋白和核酸表达升高的情况如图2B所示。所述SerpinF2包括SerpinF2基因(GenBank ID：5345)经转录和翻译得到的多肤分子或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等抗原性的氨基酸序列，它们的编码基因，以及与该多肤特异性结合的抗体。
子痫前期病例血浆中辜酮(To)在孕早期(11-14周)、中期(21-26周)的升高如图3A和图3B所示，而雌二醇(E2)在孕早期(11-14周)、中期(21-26周)的降低情况如图4A和图4B所示。所述To和E2包括相应的类固醇激素分子，以及与该分子特异性结合的抗体。
sMet、SerpinF2、辜酮、以及雌二醇在人类血浆、血清或尿液中的测定可采用常规的免疫分析方法，如ELISA、RIA等。其他方法，如比色法或色谱(包括气相、液相)法，也可用于上述分子的测定。
SerpinF2在人类胎盘中的测定可采用常规的分子生物学方法，如蛋白印迹、RT-PCR、RT-rea ltime qPCR等。一些其他方法，如ELISA也可用于对上述分子的测定。
利用公式可以将2种或更多的预测指标综合联用，用于预测子痫前期。典型的(并不是所有的)公式为数学公式和算式。依据所用公式的不同，显著高于或低于参照值被诊断为子痫前期。
sMet可以单独用于诊断预测子痫前期或子痫前期发病倾向性，也可以与SerpinF2或To/E2相互联用得到更加准确的子痫前期诊断结果。此外，达里描述的多种诊断方法也可以与其他的方法相互联用，以得到更加准确的子痫前期或子痫诊断结果。
对sMet，或sMet与SerpinF2或To/E2的相互联用，或sMet与其他的方法或SerpinF2或To/E2的相互联用，可以在怀孕6周之后的1个或多个时间点独立进行水平检测，若相关水平检测的总体结果与对照水平相比发生变化，则可诊断为相关对象患有子痫前期，或具有子痫前期患病倾向性。
本发明同时为诊断试剂盒的生产提供了依据。如果诊断试剂盒中包括sMet、或SerpinF2、或To、或E2的抗体，无论sMet、或SerpinF2、或To、或E2的抗体或多肤是否被标记，无论sMet、或SerpinF2、或To、或E2的抗体或多肤是否被底物结合，只要存在sMet、或SerpinF2、或To、或E2的抗体与相关多肤结合并通过相关标记测定含量，即可以对子痫前期作出诊断预测。常规的ELISA即通过抗体-底物间相互结合来检测相应的分子或化合物，并可以作为试剂盒。
本发明首次提出即将患有重度子痫前期或具有极强重度子痫前期患病倾向性的人群在妊娠14周之后血浆中sMet水平极显著低于正常人群和其他几种妊娠疾病。即将患有子痫前期或具有子痫前期患病倾向性人群在妊娠期血浆中SerpinF2或To/E2水平极显著高于正常人群。
对大样本进行验证，结果表明，血浆中sMet的水平可以极清楚地区别重度子痫前期和其他妊娠病例(如早产、妊娠糖尿病、FGR、妊娠高血压、慢性高血压或轻度子痫前期)及对照病例。在妊娠15-20周时，相关的灵敏性和特异性均大于0.95；在妊娠21-26周时，相关的灵敏性和特异性大于0.98。该结果远优于目前被认为预测子痫前期或子痫前期倾向性前景最好的血管生成因子(如VEGF、PlGF)和抗血管生成因子(如sFlt-1、sEndoglin)。
附图说明
图1显示血浆中sMet水平随孕周的变化；其中，0：重度子痫前期；1：正常对照；2：早产；3：妊娠糖尿病；4：新生儿体重过低；5：
轻度子痫前期；6：妊娠高血压；7：慢性高血压；8：轻度慢高合并子痫前期；9：重度慢高合并子痫前期。
图2为SerpinF2在子痫前期患者和正常妊娠者中的变化；其中，A图显示子痫前期和正常妊娠在妊娠期内血浆PAP(SerpinF2-纤溶酶复合物)水平的变化，*表示与对照组相比p＜0.05；**表示与对照组相比p＜0.01；B图显示SerpinF2 mRNA在子痫前期患者和正常妊娠孕妇胎盘中的表达(误差线表示标准差)；C图显示SerpinF2蛋白在子痫前期患者和正常妊娠孕妇胎盘中的表达。*表示与对照组相比p＜0.05。
图3为正常妊娠和子痫前期血浆中辜酮(To)在孕早、中和晚期的水平；其中，A图显示孕早期(11-14周)血浆中辜酮的水平；B图显示孕中期(21-26周)血浆中辜酮的水平；C图显示孕晚期(27-34周)血浆中辜酮的水平。*表示与对照组相比p＜0.05；**表示与对照组相比p＜0.01。
图4为正常妊娠和子痫前期血浆中雌二醇(E2)在孕早、中和晚期的水平；其中，A图显示孕早期(11-14周)血浆中雌二醇的水平；B图显示孕中期(21-26周)血浆中雌二醇的水平；C图显示孕晚期(27-34周)血浆中雌二醇的水平。*表示与对照组相比p＜0.05；**表示与对照组相比p＜0.01。
图5为每个病例sMet水平随孕周变化的折线图；其中，A图显示正常对照、早产、妊娠糖尿病以及新生儿体重过低的病例与重度子痫前期病例之间的差别；B图显示轻度子痫前期、妊娠高血压、慢性高血压、慢高合并轻度子痫前期以及慢高合并重度子痫前期病例与重度子痫前期病例之间的差别。0：重度子痫前期；1：正常对照；2：早产；3：妊娠糖尿病；4：新生儿体重过低5：轻度子痫前期；6：妊娠高血压；7：慢性高血压；8：慢高合并轻度子痫前期；9：慢高合并重度子痫前期。
图6为妊娠15-26周的最佳截断点及其对重度子痫前期的分辨力；其中，A图表示妊娠15-20以及21-26周的最佳截断点在总体sMet水平中的位置；B图表示妊娠15-20周时最佳截断点(284.5ng/mL)对重度子痫前期的具体分辨效果；C图表示妊娠21-26周时最佳截断点(295.6ng/mL)对重度子痫前期的具体分辨效果。
图7为验证队列中血浆sMet水平对重度子痫前期的分辨效果；其中，A图表示验证队列中正常病例和重度子痫前期病例的血浆sMet的平均水平，误差线表示平均标准误(SEM)；B图为用散点图显示重度子痫前期病例的血浆sMet水平与正常病例的血浆sMet水平的重叠度；C图为分辨重度子痫前期病例和对照病例的ROC曲线及其AUC值；D图表示在训练队列中妊娠15-20周时最佳截断点(284.5ng/mL)对验证队列中重度子痫前期的具体分辨效果。
图8为正常妊娠和子痫前期血浆中辜酮和雌二醇的比率(To/E2)在孕早、中和晚期的水平；其中，A图显示孕早期(11-14周)血浆中To/E2的水平；B图显示孕中期(21-26周)血浆中To/E2的水平；C图显示孕晚期(27-34周)血浆中To/E2的水平。*表示与对照组相比p＜0.05；**表示与对照组相比p＜0.01。
图9为血浆中辜酮和雌二醇的比率(To/E2)对重度子痫前期和正常妊娠的分辨效果，以为ROC曲线及其AUC值表示；其中，A图显示孕早期(11-14周)；B图显示孕中期(21-26周)；C图显示孕晚期(27-34周)。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
实施例1 sMet在预测或早期诊断妊娠高血压疾病中的应用
1、实验设计
该实验可分为训练-验证(training-validation)2个部分。训练研究的队列包括3336名中国汉族妊娠妇女。对这些孕妇在妊娠6-10、11-14、15-20、21-26、27-34周以及＞34周时血浆中sMet水平进行了测定。验证研究队列包括62名正常妊娠的中国汉族妇女，及62名患有子痫前期的中国汉族妇女。对这些孕妇在妊娠14-20周时血浆中sMet的水平进行了测定。
该研究得到了中国科学院动物研究所道德委员会、北京大学第三附属医院道德委员会、北京大学第一附属医院道德委员会以及北京密云医院道德委员会的批准。参与研究的病人签署了知情同意书。
2、实验所涉及的病人和样本
训练研究所涉及的前瞻性队列未自于2009年6月至2010年12月北京大学第三医院产前定期保健人群。该人群共包括3336例孕妇，其中194例多胎妊娠，5例的年龄小于18岁或大于45岁，23例于妊娠28周前分娩，784例患有与高血压无关的其他疾病。以上病例均被排除于本次研究之外。在余下的2330个病例中，1911例为正常妊娠，78例为重度子痫前期，77例为轻度子痫前期，102例为早产，21例为妊娠期糖尿病，11例为胎儿生长受限，32例为妊娠期高血压，41例为慢性高血压，57例为慢高合并子痫前期。本人群中的孕妇均在妊娠6-10、11-14、15-20、21-26、27-34周以及＞34周时收集2mL外周血并获得血浆。所收获的血浆均在取血后12小时内保存于-80℃条件下。
验证研究所涉及的前瞻性队列来自于2009年7月至2011年9月北京大学第一医院和北京密云医院进行唐氏筛查的孕妇人群。该人群包括2455名孕妇，所有孕妇的血液样品均于妊娠14-20周获得。所收获的血浆均在取血后12小时内保存于-80℃条件下。在这些孕妇中随机选取了62例正常妊娠对照和62例重度子痫前期病例进行sMet检测。
孕期综合征的定义按照Williams产科学(23版)和国际妊娠高血压学会的界定进行。患有肾病或胎儿染色体异常的病例不在本研究的范畴内。正常妊娠病例定义为妊娠前身体健康，孕期无明显症状表现，妊娠37周后分娩，且新生儿体重正常的病例。重度子痫前期指没有慢性高血压病史，但在妊娠期20周后2次独立检查中均出现收缩压＞160mmHg或舒张压＞110mmHg；并伴随有明显蛋白尿(＞2g/24h或2次间隔大于4小时独立试纸条测定为3+)。轻度子痫前期指在妊娠期20周后2次独立检查中均出现收缩压在140-160mmHg之间或舒张压在90-110mmHg之间，并伴随有300mg-2g/24h或2次间隔大于4小时独立试纸条测定为2+的蛋白尿。早发和迟发的子痫前期的界定主要依据子痫前期的临床症状是否在妊娠34周之前出现。妊娠高血压定义为妊娠20周后出现的血压高于140/90mmHg，但并不伴随有蛋白尿。慢性高血压指妊娠前即患有且持续至妊娠的高血压。慢高合并子痫前期指慢性高血压和子痫前期的合并症，也可以进一步按照蛋白尿是否＞2g/24h分为重度和轻度两组。早产定义为早于37周的分娩。胎儿生长受限定义为新生儿出生体重小于对应周龄的第10百分位。妊娠糖尿病定义为未妊娠时血糖正常，而孕期出现高血糖的状况，但不伴随有高血压。所有早产和胎儿生长受限的病例均不伴随有高血压或糖尿病。
3、血浆中sMet水平的测量
血浆中sMet的水平采用ELISA方法测量，所有操作均按照R&D公司生产的ELISA检测试剂说明书进行。测量人员事先并不知道所测样本的具体情况。所有的样品均作复孔，并根据样品和标准品在450nm波长下的吸光值计算样品浓度。ELISA测定共重复3次，最终的结果为3次实验的平均值。
4、数学统计
进行数学统计的人员不参与sMet的测定过程。Mann-Whitney U检测用于分析正常妊娠组与以下病例组间sMet水平的差异，如早产、妊娠糖尿病、胎儿生长受限、妊娠高血压、慢性高血压、慢高合并轻度子痫前期、慢高合并重度子痫前期、轻度子痫前期、以及重度子痫前期。所有的检验都是双尾检验，且P＜0.05认为差异显著。ROC分析用于检验血浆sMet水平对子痫前期的预测价值。ROC曲线以每一个测量得到的sMet水平为一个截断点，通过连续计算出相应的1-特异性和敏感性，并描点作图而成。最佳截断点定义为特异性和敏感性之和最大的数值。所有的分析采用R软件包完成。
5、妊娠病例特征总结
相关病例的临床特征情况详见表1和表2。
在训练人群中，并发高血压的病例组，包括妊娠高血压、慢性高血压、慢高合并轻度子痫前期、慢高合并重度子痫前期、轻度子痫前期和重度子痫前期，其收缩压和舒张压与对照相比极显著升高。尿蛋白仅在并发有子痫前期的病例中检测到，包括慢高合并轻度子痫前期、慢高合并重度子痫前期、轻度子痫前期和重度子痫前期。正常妊娠组的妊娠时间显著长于具有合并症的病例。除妊娠糖尿病病例和妊娠高血压病例外，其他具有合并症的病例组新生儿出生体重均小于正常妊娠者。糖耐量在组间没有显著变化。
在验证人群中，重度子痫前期病例较正常妊娠者表现出显著增高的血压、蛋白尿水平、身高-体重指数(BMI)以及低的新生儿出生体重。
6、训练实验-妊娠过程中血浆sMet水平的变化
进行训练实验的样本来自前述条款2的队列中随机选择的120例正常妊娠，以及所有的早产、妊娠糖尿病、胎儿生长受限、妊娠高血压、慢性高血压、慢高合并轻度子痫前期、慢高合并重度子痫前期、轻度子痫前期以及重度子痫前期病例。每个病例在妊娠6-10、11-14、15-20、21-26、27-34，以及＞34周时的血浆均进行sMet水平测量。结果如图1所示，在正常妊娠者中，血浆sMet平均水平于妊娠6-10周时高达566ng/mL，随着妊娠进程，血浆sMet水平会逐渐降低，至妊娠15-20周时降低至343ng/mL；但在妊娠21-26周时，血浆sMet水平有一明显高峰，达到460ng/mL；在随后的妊娠期内又逐渐降低，分娩前降至280ng/mL。早产、妊娠糖尿病、胎儿生长受限、妊娠高血压、慢性高血压、慢高合并轻度子痫前期、以及轻度子痫前期患者血浆sMet水平的变化趋势与正常妊娠类似(图1)。值得注意的是，重度子痫前期以及慢高合并重度子痫前期的病例中，血浆sMet水平自妊娠6-10周直至分娩呈现持续降低模式，在妊娠21-26周也没有出现类似正常妊娠组的高峰。从孕11-14周开始直至分娩，重度子痫前期以及慢高合并重度子痫前期的病例中血浆sMet水平一直显著低于正常妊娠及其他各个病例组。
为了更好地描述各种妊娠期合并症中sMet水平的变化情况，本发明汇总制作了每个病例sMet水平随孕周变化的折线图，如图4所示。所有的78例重度子痫前期病例和18例慢高合并重度子痫前期病例中，sMet水平均一地表现为随妊娠时间加长而逐渐下降，并且在妊娠20-27周时较正常妊娠、早产、妊娠糖尿病、胎儿生长受限、妊娠高血压、慢性高血压、慢高合并轻度子痫前期和轻度子痫前期均有明显的降低，呈现一个极明显的间隔(图5)，提示在这个时间段内血浆sMet水平可能对重度子痫前期和慢高合并重度子痫前期具有很好的诊断预测价值。
7、ROC分析sMet与重度子痫前期发病倾向性的关系
本发明进而利用ROC分析，检测sMet对重度子痫前期的预测和诊断能力。如表3所示，从AUC值可以看出，妊娠15周之后，血浆sMet水平能有效区分重度子痫前期以及慢高合并重度子痫前期与其他各种妊娠状况，包括正常妊娠和早产、妊娠糖尿病、胎儿生长受限、妊娠高血压、慢性高血压、轻度子痫前期、慢高合并轻度子痫前期等。在妊娠15-20周、21-26周和27-34周时，所有区别重度子痫前期与其他组别(除去慢高合并重度子痫前期)的AUC值均大于0.95。尤其值得注意的是，在妊娠21-26周时，区别重度子痫前期和其他所有组别(除去慢高合并重度子痫前期)的AUC值均达到理想值1.00，区别重度子痫前期和慢高合并轻度子痫前期的AUC值高达0.98。这些结果说明妊娠早中期血浆sMet水平对重度子痫前期有极强的分辨能力，在妊娠21-26周龄时甚至具备准确的诊断能力。
为进一步探索用于诊断重度子痫前期的血浆sMet的参考阈值，将正常妊娠、早产、妊娠糖尿病、胎儿生长受限、妊娠高血压、慢性高血压、慢高合并轻度子痫前期、以及轻度子痫前期等各组病例合并为一组，称为“非重度子痫前期组”；将重度子痫前期和慢高合并重度子痫前期合并为一组，称为“重度子痫前期组”。对这两组之间进行ROC分析，确定在妊娠21-26周时sMet水平的最佳截断点为295.6ng/ml，此时预测“重度子痫前期”的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值以及AUC分别为1.00、0.995、0.980、1.00和0.998；在妊娠15-20周时sMet水平的最佳截断点为284.5ng/mL，此时预测“重度子痫前期”的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值以及AUC分别为0.948、0.935、0.798、0.988和0.980。如图6所示，妊娠15-20周时若以最佳截断点284.5ng/mL做分割，此时的预测准确率为0.937；在539例病例中，出现了29例(5.3%)假阳性诊断和5例(0.92%)假阴性诊断；妊娠15-20周时若以最佳截断点295.6ng/mL做分割，此时的预测准确率为0.996；在539例病例中，仅出现2例(0.37%)假阳性诊断且没有假阴性诊断。这些结果有力地证明了血浆中sMet水平在妊娠15周时即具有极好预测潜力，在妊娠21-26周时则具有优越的诊断潜力。
8、验证实验-在独立队列中检测血浆sMet水平对重度子痫前期的预测潜力
本发明在北京大学第一医院和北京密云医院选取了一个独立于训练队列的验证队列，其病例的血浆样本收集于妊娠14-20周。在该队列中，按照病例-对照分析法，随机选取了62例正常妊娠和62例重度子痫前期病例，进行血浆sMet水平测定。
与预期相符，重度子痫前期病例的血浆sMet平均水平为215.74ng/mL，显著低于正常妊娠的320.87ng/mL(图7A)；散点图显示血浆sMet水平在重度子痫前期病例的与正常妊娠组间有较小的重叠度(图7B)；ROC分析显示，区别重度子痫前期和正常妊娠组的AUC值达到0.986(图7C)；当应用训练研究中总结出来的最佳截断点284.5ng/mL做分割时，存在11例(8.87%)假阳性病例和1例(0.81%)假阴性病例(图7D)，其预测的准确率为0.903。上述结果能够很好地对应于训练队列中在15-20周得到的结果。
实施例2 SerpinF2在预测或早期诊断妊娠高血压疾病中的应用
1、病例的选择和血浆样本收集
本研究采用前瞻性巢式病例-对照研究，研究方案得到中国科学院动物研究所和北京大学第一医院道德伦理委员会的批准。研究对象为2005年11月到2007年12月在北京大学第一医院进行产前保健的孕妇，分别于妊娠不同阶段收集孕妇外周血，待分娩后根据妊娠结局将受试者分为正常妊娠组和重度子痫前期组。入选的研究对象均排除慢性高血压、糖尿病、肾病病史、双胎、肝炎、肿瘤等疾病和病史；正常妊娠的界定标准为：妊娠前各项指标正常，妊娠期未发生高血压、蛋白尿等子痫前期的临床指征和其它妊娠疾病；重度子痫前期的界定按照国际妊娠高血压学会的制定的标准：妊娠前无高血压、蛋白尿病史，妊娠20周后收缩压≥160mmHg和/或舒张压110≥mmHg，伴随24小时蛋白尿≥2g或定性为++以上。在妊娠8-14周、15-18周、19-24周、25-31周、32-36周以及36-40周分别采集上述研究对象外周静脉血2ml，EDTA抗凝，4℃放置2-3小时后4000rpm离心20分钟，收集上清即为血浆。血浆分装为250μL每管，-80℃储存待用。
2、血浆中SerpinF2含量的ELISA分析
血浆中SerpinF2通常与纤溶酶Plasmin结合成为复合物PAP，并且与Plasmin结合的SerpinF2是其功能性组分，因而PAP复合物浓度反映了SerpinF2的浓度。PAP浓度采用人PAP ELISA试剂盒(购自武汉EIAab Science公司)测定。具体操作步骤按照试剂盒说明进行。酶标仪测定波长为450nm。
3、妊娠过程中血浆PAP浓度的变化
重度子痫前期病例和正常妊娠者不同阶段血浆中PAP的ELISA测定结果如图2所示。正常妊娠过程中，血浆PAP水平随妊娠进程而逐渐升高，妊娠6-14周平均浓度约为0.1μg/mL，至妊娠15-18周迅速升高至0.59μg/mL，随后呈现缓慢上升趋势，分娩前(36-40周)达到峰值，约为1.0μg/mL。重度子痫前期组血浆PAP水平随妊娠周龄的变化模式与正常妊娠组相似，但在各个妊娠阶段其浓度远远高于相应的正常对照，妊娠6-14周、15-18周、19-24周、25-31周、32-35周和36-40周的水平分别为相应对照组的9.24倍、2.95倍、2.38倍、2.32倍、1.95倍和1.97倍(图2A)。
对血浆PAP浓度进行ROC分析，通过计算妊娠各阶段AUC、准确度、灵敏度、最佳截断值(cut-off value)等指标，判定血浆PAP水平对子痫前期的预测价值(表4)。结果表明血浆PAP水平是预测重度子痫前期的理想指标，在妊娠各个阶段都有较好的预测价值，尤其在妊娠6-14周和15-18周其预测价值更高，AUC值分别达到0.937和0.804，最佳截断值分别为0.117μg/mL和1.04μg/mL。
4、子痫前期胎盘中SerpinF2蛋白及核酸的表达
选取重度子痫前期和分娩周龄匹配的正常妊娠胎盘各12例，分别用实时定量PCR法和蛋白质印迹法检测SerpinF2基因的核酸水平和所编码的蛋白水平。结果如图2B、2C所示，重度子痫前期胎盘中SerpinF2的核酸水平达到正常胎盘的约2倍，蛋白水平为正常胎盘中的约2.4倍。
实施例3辜酮和雌二醇在预测或早期诊断妊娠高血压疾病中的应用
1、实验所涉及的病例和样本
研究所涉及的前瞻性队列来自于2009年6月至2010年12月北京大学第三医院产前定期保健人群。该人群共包括3336例孕妇，其中194例多胎妊娠，5例的年龄小于18岁或大于45岁，23例于妊娠28周前分娩，784例患有与高血压无关的其他疾病。以上病例均被排除于本次研究之外。在余下的2330个病例中，1911例为正常妊娠，78例为重度子痫前期，其余为其他妊娠合并症。本人群中的病例均在妊娠6-10、11-14、15-20、21-26、27-34周以及＞34周时采集2mL外周血并获得血浆。所采集的血浆均在取血后12小时内保存于-80℃条件下。
2、血浆中辜酮(To)和雌二醇(E2)含量的测定：
随机选取40例正常妊娠和40例重度子痫前期病例，取其妊娠11-14周、21-26周和27-34周的血浆样本，进行辜酮(To)和雌二醇(E2)含量的测定。采用Immulite2000化学发光免疫分析仪(购自德国Siemens公司)进行全自动检测。测定雌二醇时用雌激素稀释液(购自德国Siemens公司)将血浆稀释20倍，测定辜酮时用生理盐水将血浆稀释4倍。具体操作步骤按照Immulite2000化学发光免疫分析系统的说明进行。
3、妊娠不同阶段血浆辜酮(To)和雌二醇(E2)浓度的变化
重度子痫前期病例和正常妊娠者不同阶段血浆中辜酮和雌二醇的测定结果如图3和图4所示。无论是在妊娠早期(11-14周)、中期(21-26周)、或晚期(27-34周)，子痫前期病例组的血浆辜酮水平较正常妊娠者均有显著上升(图3)，而血浆雌二醇则有显著下降(图4)。辜酮与雌二醇的比值(To/E2)在重度子痫前期病例和正常妊娠者之间具有更小的重叠度(图8)，说明该指标具有更好的区别重度子痫前期病例和正常妊娠者的能力。
对血浆To/E2绘制ROC曲线，通过计算妊娠各阶段AUC值，判定血浆To/E2水平对子痫前期的预测价值(图9)。结果表明血浆To/E2水平对于预测重度子痫前期具有一定价值，在妊娠21-26周和27-34周时AUC值分别为0.749和0.779(图9B、9C)，可作为预测或诊断重度子痫前期的一个有力辅助指标。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，达对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Figure BDA00003860378800161
Figure BDA00003860378800181
Figure BDA00003860378800191

Claims (10)

1.用于预测或早期诊断妊娠高血压疾病的标志物，其特征在于，所述标志物选自sMet、SerpinF2、睾酮、雌二醇中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的标志物，其特征在于，所述标志物为sMet，以及SerpinF2、睾酮、雌二醇中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的标志物，其特征在于，所述标志物为sMet、SerpinF2、睾酮和雌二醇。
4.根据权利要求1-3任一项所述的标志物，其特征在于，所述标志物用于妊娠6周龄后孕妇血浆、血清、尿液或胎盘中sMet、SerpinF2、睾酮和/或雌二醇的测定。
5.根据权利要求1-3任一项所述的标志物，其特征在于，所述标志物用于妊娠14周龄后孕妇血浆、血清、尿液或胎盘中sMet、SerpinF2、睾酮和/或雌二醇的测定。
6.根据权利要求1-3任一项所述的标志物，其特征在于，所述标志物用于胎盘中SerpinF2蛋白水平和/或基因水平的测定。
7.根据权利要求1-3任一项所述的标志物，其特征在于，所述标志物用于胎盘中睾酮和雌二醇的测定。
8.用于预测或早期诊断妊娠高血压疾病的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括特异性结合sMet、SerpinF2、睾酮和/或雌二醇的抗体，或者检测sMet、SerpinF2、睾酮和/或雌二醇的试剂。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。
10.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体为标记抗体。
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015039419A1 (zh) * 2013-09-23 2015-03-26 中国科学院动物研究所 用于预测或早期诊断妊娠高血压疾病的试剂盒
CN109072479A (zh) * 2015-12-04 2018-12-21 Nx产前公司 使用循环微粒对自发性早产风险进行分层
CN110514849A (zh) * 2019-08-24 2019-11-29 牡丹江师范学院 一种雌性东北虎超早孕检测方法
WO2021073518A1 (zh) * 2019-10-17 2021-04-22 中国科学院动物研究所 纤溶酶抑制因子的抑制剂用于预防或治疗子痫前期或子痫的用途
WO2023004626A1 (zh) * 2021-07-28 2023-02-02 北京沙东生物技术有限公司 一种骨髓瘤生物标志物serpinf2及其应用
CN116953255A (zh) * 2023-07-27 2023-10-27 山东大学 血清中总IgM和/或总IgG在子痫前期预测或诊断中的应用
US11835530B2 (en) 2012-12-28 2023-12-05 Nx Prenatal Inc. Detection of microparticle-associated proteins associated with spontaneous preterm birth

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008100161A1 (en) * 2007-02-12 2008-08-21 The New Zealand Institute For Plant And Food Research Limited Surface plasmon resonance assay for steroids
CN101680884A (zh) * 2007-05-05 2010-03-24 西安大略大学 检测先兆子痫的方法
CN102483418A (zh) * 2008-10-31 2012-05-30 耶鲁大学 先兆子痫检测和治疗的方法和组合物
CN103109192A (zh) * 2010-06-18 2013-05-15 塞尚公司 用于妊娠性高血压和先兆子痫的预后和风险评估的标志物

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011075842A1 (en) * 2009-12-21 2011-06-30 Kenny Louise C Metabolomic biomarker signature of pre-eclampsia risk
CN103038645B (zh) * 2010-04-13 2016-05-04 迈卡蒂斯股份有限公司 用于妊娠的高血压疾病的生物标志物
AU2011340630B2 (en) * 2010-12-06 2017-01-19 Mycartis Nv Biomarkers and parameters for hypertensive disorders of pregnancy
CN103513042A (zh) * 2013-09-23 2014-01-15 中国科学院动物研究所 用于预测或早期诊断妊娠高血压疾病的试剂盒

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008100161A1 (en) * 2007-02-12 2008-08-21 The New Zealand Institute For Plant And Food Research Limited Surface plasmon resonance assay for steroids
CN101680884A (zh) * 2007-05-05 2010-03-24 西安大略大学 检测先兆子痫的方法
CN102483418A (zh) * 2008-10-31 2012-05-30 耶鲁大学 先兆子痫检测和治疗的方法和组合物
CN103109192A (zh) * 2010-06-18 2013-05-15 塞尚公司 用于妊娠性高血压和先兆子痫的预后和风险评估的标志物

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
D LI ET AL.: "Identification of serpinF2 as the early plasma biomarker for risk of severe preeclampsia", 《AMERICAN JOURNAL OF REPRODUCTIVE IMMINOLOGY》 *
曹卫平等: "子痫前期患者免疫功能变化及其与雌孕激素水平关系的研究", 《中国妇幼保健》 *
杨艳艳等: "人胎盘滋养层细胞中c-Met蛋白的剪切机制研究", 《中国细胞生物学学会个体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要》 *
高鸣燕等: "血睾酮水平与妊娠期高血压疾病的相关研究", 《医学研究杂志》 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11835530B2 (en) 2012-12-28 2023-12-05 Nx Prenatal Inc. Detection of microparticle-associated proteins associated with spontaneous preterm birth
WO2015039419A1 (zh) * 2013-09-23 2015-03-26 中国科学院动物研究所 用于预测或早期诊断妊娠高血压疾病的试剂盒
CN109072479A (zh) * 2015-12-04 2018-12-21 Nx产前公司 使用循环微粒对自发性早产风险进行分层
CN110514849A (zh) * 2019-08-24 2019-11-29 牡丹江师范学院 一种雌性东北虎超早孕检测方法
WO2021073518A1 (zh) * 2019-10-17 2021-04-22 中国科学院动物研究所 纤溶酶抑制因子的抑制剂用于预防或治疗子痫前期或子痫的用途
WO2023004626A1 (zh) * 2021-07-28 2023-02-02 北京沙东生物技术有限公司 一种骨髓瘤生物标志物serpinf2及其应用
CN116953255A (zh) * 2023-07-27 2023-10-27 山东大学 血清中总IgM和/或总IgG在子痫前期预测或诊断中的应用

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