CN103446576B - 一种幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法 - Google Patents
一种幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103446576B CN103446576B CN201310415511.5A CN201310415511A CN103446576B CN 103446576 B CN103446576 B CN 103446576B CN 201310415511 A CN201310415511 A CN 201310415511A CN 103446576 B CN103446576 B CN 103446576B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- helicobacter pylori
- building
- animal models
- day
- time
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法，其包括：1、以4周龄雌性C57BL/6小鼠为试验动物，用混合抗生素灌胃3～7天；所述的混合抗生素为庆大霉素、万古霉素和制霉菌素；2、将步骤1灌胃后的C57BL/6小鼠饲养6～8天；3、接种幽门螺杆菌：将步骤2得到的C57BL/6小鼠禁食，用幽门螺杆菌菌液灌胃，8～12小时后进食；所述的步骤3的接种频率为：隔日1次，共2～4次；4、将经步骤3，2～4次接种后的小鼠进行饲养。本发明的建模方法实验时间短、操作次数少、感染幽门螺杆菌数量级高、感染时间长久，模型能广泛应用于相关研究的幽门螺杆菌感染动物的方法。
Description
技术领域
本发明涉及微生物学和实验动物学领域，特别涉及一种幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法。
背景技术
幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）被公认为是胃炎、消化性溃疡和胃癌的主要致病因子，人是幽门螺杆菌感染的唯一易感宿主。在发达国家，幽门螺杆菌感染率约为50%左右，而在发展中国家则达到60%以上。为此，国内外研究者正在通过建立幽门螺杆菌感染的动物模型，研究幽门螺杆菌致病机理、特异性防治以及一些药物或微生态制剂的疗效。
国内外关于幽门螺杆菌感染动物模型的报道中，以豚鼠、裸鼠作为实验动物的，由于易死亡、自身的免疫缺陷等问题，使得建模成功率低于80%，且模型应用受到一定局限；以小鼠CD1、Ba1b/c A以及Ba1b/c等品种作为实验动物的，则感染率不高，且模型不稳定。其他以猴子、沙鼠、小猪等动物为模型的，存在价格昂贵、数量少、饲养条件高、感染困难等限制因素。同时，所有报道中的建模实验时间较长，连续灌胃且次数较多，大大增加了建模时动物的死亡率和并发症的产生。因此，对于幽门螺杆菌机理、药物应用等研究，一个稳定的、重现性好的动物模型进行临床前的动物实验是必要的，找到一种普通的、易于饲养的动物，建立一个建模时间短、操作次数少、感染幽门螺杆菌数量级高、建模致死率低的动物模型建立方法，为幽门螺杆菌感染的彻底攻克奠定了基础。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于，为了克服现有技术中建立幽门螺杆菌感染的动物模型可控性差、不稳定，成功率不高，建模时间较长，操作复杂，成本较高，一般实验室中难于建立等缺陷，而提供了一种幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法。本发明的建模方法实验时间短、操作次数少、感染幽门螺杆菌数量级高、感染时间长久，模型能广泛应用于相关研究的幽门螺杆菌感染动物的方法。
本发明通过下述技术方案解决上述技术问题：
本发明提供了一种幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法，其包括以下步骤：
步骤1、以4周龄雌性C57BL/6小鼠为试验动物，用混合抗生素灌胃3～7天；所述的混合抗生素为庆大霉素、万古霉素和制霉菌素；
步骤2、将步骤1灌胃后的C57BL/6小鼠饲养6～8天；
步骤3、接种幽门螺杆菌：将步骤2得到的C57BL/6小鼠禁食，用幽门螺杆菌菌液灌胃，8～12小时后进食；
所述的步骤3的接种频率为：隔日1次，共2～4次；
步骤4、将经步骤3，2～4次接种后的小鼠进行饲养。
步骤1中，用混合抗生素灌胃可以有效降低小鼠胃部原有菌群对幽门螺杆菌感染建立的影响。所述的灌胃的方法可参考本领域中常规的灌胃方法进行。所述的用混合抗生素灌胃的天数优选7天。
步骤1中，所述的4周龄雌性C57BL/6小鼠可为本领域常规的4周龄雌性C57BL/6小鼠，一般体重都在11g±1～2g。
步骤1中，所述的混合抗生素中，较佳地，庆大霉素0.058～0.062万单位/只/天，万古霉素1.2～1.7mg/只/天，制霉菌素0.72～0.77万单位/只/天；更佳地，庆大霉素0.062万单位/只/天，万古霉素1.7mg/只/天，制霉菌素0.77万单位/只/天。
步骤2中，所述的饲养可为本领域中常规的饲养方法，一般在SPF级环境中饲养。所述的SPF（specific-pathogen-free）级环境为：温度22±2℃，，湿度56±5%，1周换2-3次垫料，控制12h光照，12h黑暗；饲料：常规饲料；自由进食、进水。
步骤2中，所述的饲养的时间优选为7天。
步骤3中，所述的禁食的时间优选12～24h，更优选24h。
步骤3中，所述的幽门螺杆菌菌液为将幽门螺杆菌菌体悬于其液体培养基中形成的菌液；所述的幽门螺杆菌菌液中，所述的液体培养基可为BHI（brain heart infusion）。
步骤3中，所述的幽门螺杆菌优选为幽门螺杆菌悉尼菌株SS1（H.pyloriSydney strain SS1，Hp SS1）。
步骤3中，所述的幽门螺杆菌菌液中，其细菌密度优选大于1×108cfu/mL，更优选为1×109cfu/mL。
步骤3中，所述的灌胃的方法可为本领域常规的灌胃方法。所述的灌胃的次数优选3次。
步骤3中，所述的幽门螺杆菌菌液灌胃量优选0.18～0.22mL/只/次，更优选0.2mL/只/次。
步骤3中，所述的接种频率优选为：隔日1次，共3次。
步骤4中，所述的饲养的方法可为本领域常规的饲养方法，一般在SPF级环境中饲养。所述的SPF（specific-pathogen-free）级环境为：温度22±2℃，，湿度56±5%，1周换2-3次垫料，控制12h光照，12h黑暗；饲料：常规饲料；自由进食、进水。所述的饲养的时间优选为两周。
所述的幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法后，还可通过抽检确定步骤来确定是否将幽门螺杆菌定殖于胃部。
所述的抽检确定步骤优选包括：将经过上述步骤1～步骤4处理的C57BL/6小鼠禁食24h后处死，取幽门端，通过尿素酶实验、细菌培养和病理切片验证幽门螺杆菌是否定殖于胃部。所述的抽检确定步骤可参考文献：“建立幽门螺杆菌感染BALB/c小鼠动物模型”，《使用临床医药杂志》，2013年第17卷第1期，P27-P33。
本发明中，小鼠进食的饲料可为本领域中常规的饲养饲料。
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明中除所述的幽门螺杆菌菌株外，所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：本发明的建模方法实验时间短、操作次数少、感染幽门螺杆菌数量级高、感染时间长久，模型能广泛应用于各项幽门螺杆菌相关研究。
附图说明
图1为阴性对照小鼠胃组织切片。
图2为阳性对照小鼠胃组织切片。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
下述实施例中涉及的饲养均是在SPF级环境下进行饲养，具体条件为：温度22±2℃，，湿度56±5%，1周换2-3次垫料，控制12h光照，12h黑暗；饲料：常规饲料；自由进食、进水。
庆大霉素、万古霉素、制霉菌素：上海闪晶生物公司。
幽门螺杆菌悉尼菌株SS1（H.pylori Sydney strain SS1，Hp SS1）：仁济医院惠赠。所述的幽门螺杆菌悉尼菌株SS1在以下文献中被报道：“幽门螺杆菌（SS1）感染及其胃炎的小鼠模型”，《中国微生态杂志》，2003年6月第15卷第3期。
BHI培养基：Oxoid公司。
实施例1:
4周龄雌性C57BL/6小鼠，48只，体重11g±1～2g，混合抗生素灌胃7天（方案：庆大霉素0.062万单位/只/天，万古霉素1.7mg/只/天，制霉菌素0.77万单位/只/天）→正常饲养一周→接种幽门螺杆菌：小鼠禁食24h后，0.18mL/只/次的幽门螺杆菌菌液灌胃，细菌密度1×109cfu/mL，8小时后进食。隔日1次，共3次→饲养两周→抽检确定。建模抽检的接种成功率100%，建模成活率96%。
实施例2：
4周龄雌性C57BL/6小鼠，48只，体重11g±1～2g，混合抗生素灌胃7天（方案：庆大霉素0.058万单位/只/天，万古霉素1.2mg/只/天，制霉菌素0.72万单位/只/天）→正常饲养6天→接种幽门螺杆菌：小鼠禁食24h后，0.2mL/只/次的幽门螺杆菌菌液灌胃，细菌密度1×109cfu/mL，8小时后进食。隔日1次，共3次→饲养两周→抽检确定。建模抽检的接种成功率100%，建模成活率100%。
实施例3：
4周龄雌性C57BL/6小鼠，48只，体重11g±1～2g，混合抗生素灌胃3天（方案：庆大霉素0.062万单位/只/天，万古霉素1.5mg/只/天，制霉菌素0.77万单位/只/天）→正常饲养6天→接种幽门螺杆菌：小鼠禁食24h后，0.22mL/只/次的幽门螺杆菌菌液灌胃，细菌密度1×109cfu/mL，12小时后进食。隔日1次，共2次→饲养两周→抽检确定。建模抽检的接种成功率100%，建模成活率100%。
实施例4：
4周龄雌性C57BL/6小鼠，48只，体重11g±1～2g，混合抗生素灌胃7天（方案：庆大霉素0.062万单位/只/天，万古霉素1.7g/只/天，制霉菌素0.77万单位/只/天）→正常饲养8天→接种幽门螺杆菌：小鼠禁食12h后，0.22mL/只/次的幽门螺杆菌菌液灌胃，细菌密度1×108cfu/mL，12小时后进食。隔日1次，共4次→饲养两周→抽检确定。建模抽检的接种成功率100%，建模成活率94%。
效果实施例1
1、建模评估
1）尿素酶实验：取小鼠近幽门端1/3的胃，立即置于尿素酶快速检测卡（珠海丽珠试剂有限公司）中，24h后观察。
结论：抽检小鼠尿素酶反应均为阳性。
2）细菌培养：将实施例1的小鼠胃组织幽门端的1/3与400μL BHI置于无菌的玻璃匀浆器内匀浆数次，分别取匀浆液的10倍和100倍的无菌生理盐水（浓度0.75%，氯化钠相对于溶液的质量百分数，经灭菌处理的生理盐水）稀释液各100μL（样本I、样本II、样本III）涂板，培养后镜检菌落并进行菌落计数，结果如表1所示。
表1建模抽检幽门螺杆菌菌落计数结果
3）病理学检查：甲醛固定的胃组织，石蜡包埋，切成6μm厚的组织切片，做苏木素-伊红（HE）染色和Giemsa染色，出据病理检查报告。
通过HE和Giemsa染色观察可知，幽门螺杆菌主要定殖于胃小凹。图1为阴性对照（HE染色，放大倍数，×400），未见炎症细胞浸润，胃小凹中未见幽门螺杆菌；图2为阳性结果（Giemsa染色，放大倍数，×400），箭头指向为胃小凹中的幽门螺杆菌，胃窦黏膜固有层见炎症细胞浸润。
报告显示，出现炎症的小鼠胃黏膜病理变化：胃黏膜炎症主要发生在胃窦部。胃窦黏膜固有层（黏膜深层较明显）见少量单核细胞浸润，个别小鼠胃黏膜见少量中性粒细胞浸润，部分表浅层少量淋巴细胞浸润。未见萎缩和肠化。Giemsa染色可明显看到幽门螺杆菌菌体。
根据尿素酶试验、胃组织活菌计数的结果以及病理切片观察，抽检的C57BL/6小鼠均成功地被幽门螺杆菌感染，幽门螺杆菌在被感染小鼠胃内的定殖量为4～20×104cfu/g胃组织，表明所采用的建模方法建立幽门螺杆菌动物感染模型成功。
2、感染稳定性评估
上述实验确定建模成功后，每隔2周、4周、6周、8周……分别随机抽取小鼠重复以上三步评估实验，结果显示，此感染模型可持续6～8个月，且感染数量级不低于104cfu/g胃组织。
对比例1：
4周龄雌性C57BL/6小鼠，48只，体重11g±1～2g，接种幽门螺杆菌：小鼠禁食24h后，0.22mL/只/次的幽门螺杆菌菌液灌胃，细菌密度1×109cfu/mL，24小时后进食。隔日1次，共3次→饲养两周→抽检确定。
建模评估：
1）尿素酶实验：抽检小鼠中尿素酶反应1只为弱阳性，其余均为阴性。
2）细菌培养：抽检10只小鼠，其中3只胃组织样本菌落数分别为60cfu/g胃组织、35cfu/g胃组织、20cfu/g胃组织，其余均为0cfu/g胃组织。
结论：建模未成功。
对比例2：
4周龄雌性C57BL/6小鼠，48只，体重11g±1～2g，混合抗生素灌胃3天（方案：庆大霉素0.062万单位/只/天，万古霉素1.5mg/只/天，制霉菌素0.77万单位/只/天）→接种幽门螺杆菌：小鼠禁食24h后，0.22mL/只/次的幽门螺杆菌菌液灌胃，细菌密度1×109cfu/mL，12小时后进食。隔日1次，共2次→饲养两周→抽检确定。
建模评估：
1）尿素酶实验：抽检小鼠尿素酶反应均为阴性。
2）细菌培养：抽检小鼠胃组织培养，均无幽门螺杆菌菌落生成。
结论：建模未成功。
Claims (12)
1.一种幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法，其包括以下步骤：
步骤1、以4周龄雌性C57BL/6小鼠为试验动物，用混合抗生素灌胃3～7天；所述的混合抗生素为庆大霉素、万古霉素和制霉菌素；
步骤2、将步骤1灌胃后的C57BL/6小鼠饲养6～8天；
步骤3、接种幽门螺杆菌：将步骤2得到的C57BL/6小鼠禁食，用幽门螺杆菌菌液灌胃，8～12小时后进食；
所述的步骤3的接种频率为：隔日1次，共2～4次；
步骤4、将经步骤3，2～4次接种后的小鼠进行饲养。
2.如权利要求1所述的幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法，其特征在于：步骤1中，所述的混合抗生素中，庆大霉素0.058～0.062万单位/只/天，万古霉素1.2～1.7mg/只/天，制霉菌素0.72～0.77万单位/只/天。
3.如权利要求2所述的幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法，其特征在于：步骤1中，所述的混合抗生素中，庆大霉素0.062万单位/只/天，万古霉素1.7mg/只/天，制霉菌素0.77万单位/只/天。
4.如权利要求1所述的幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法，其特征在于：步骤3中，所述的禁食时间为12～24小时。
5.如权利要求1所述的幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法，其特征在于：步骤3中，所述的幽门螺杆菌为幽门螺杆菌悉尼菌株SS1(H.pyloriSydney strain SS1,Hp SS1)。
6.如权利要求1所述的幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法，其特征在于：步骤3中，所述的幽门螺杆菌菌液为将幽门螺杆菌菌体悬于其液体培养基中形成的菌液；所述的幽门螺杆菌菌液中，所述的液体培养基为BHI。
7.如权利要求1所述的幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法，其特征在于：步骤3中，所述的幽门螺杆菌菌液中，其细菌密度大于1×108cfu/mL。
8.如权利要求1所述的幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法，其特征在于：步骤3中，所述的幽门螺杆菌菌液中，其细菌密度为1×109cfu/mL。
9.如权利要求1所述的幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法，其特征在于：步骤3中，所述的幽门螺杆菌菌液灌胃量为0.18～0.22mL/只/次。
10.如权利要求1所述的幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法，其特征在于：步骤3中，所述的幽门螺杆菌菌液灌胃量为0.2mL/只/次。
11.如权利要求1所述的幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法，其特征在于：步骤4中，所述的饲养的时间为两周。
12.如权利要求1或11所述的幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法，其特征在于：所述的饲养在SPF级环境中饲养；所述的SPF级环境为：温度22±2℃，湿度56±5％，1周换2-3次垫料，控制12h光照，12h黑暗；饲料：常规饲料；自由进食、进水。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310415511.5A CN103446576B (zh) | 2013-09-12 | 2013-09-12 | 一种幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310415511.5A CN103446576B (zh) | 2013-09-12 | 2013-09-12 | 一种幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103446576A CN103446576A (zh) | 2013-12-18 |
| CN103446576B true CN103446576B (zh) | 2014-10-08 |
Family
ID=49729688
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310415511.5A Active CN103446576B (zh) | 2013-09-12 | 2013-09-12 | 一种幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103446576B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104888236A (zh) * | 2015-05-11 | 2015-09-09 | 陈志龙 | 一种用于光动力药物筛选的尖锐湿疣动物模型 |
| CN107349225A (zh) * | 2017-07-06 | 2017-11-17 | 广州医科大学附属第五医院 | 一种粪菌移植的实验小鼠模型及构建方法 |
| CN109010379A (zh) * | 2018-06-28 | 2018-12-18 | 右江民族医学院 | 慢性萎缩性胃炎动物模型的制备方法 |
| CN110122412A (zh) * | 2019-05-21 | 2019-08-16 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 一种肺部菌群移植啮齿动物模型的构建方法 |
| CN110122413A (zh) * | 2019-05-21 | 2019-08-16 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 一种肺部菌群啮齿动物模型的构建方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1141978C (zh) * | 2001-01-09 | 2004-03-17 | 复旦大学 | 一种用幽门螺杆菌感染小鼠的方法 |
| CN101209254B (zh) * | 2006-12-29 | 2011-04-20 | 江苏正大天晴药业股份有限公司 | 多羟基没食子酰基-β-D-葡萄糖衍生物的用途 |
-
2013
- 2013-09-12 CN CN201310415511.5A patent/CN103446576B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1141978C (zh) * | 2001-01-09 | 2004-03-17 | 复旦大学 | 一种用幽门螺杆菌感染小鼠的方法 |
| CN101209254B (zh) * | 2006-12-29 | 2011-04-20 | 江苏正大天晴药业股份有限公司 | 多羟基没食子酰基-β-D-葡萄糖衍生物的用途 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 刘翔，等.《SPF级BALB_c小鼠感染幽门螺杆菌的造模方法研究》.《临床和实验医学杂志》.2007,第6卷(第7期),3-5. * |
| 马欢,等.《幽门螺杆菌慢性感染BALB/C小鼠的实验性研究》.《第九次全国消化系统疾病学术会议专题报告论文集》.2009,138. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103446576A (zh) | 2013-12-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103446576B (zh) | 一种幽门螺杆菌感染动物模型的建立方法 | |
| Huang et al. | Chemodetection and destruction of host urea allows Helicobacter pylori to locate the epithelium | |
| Gal-Mor et al. | Same species, different diseases: how and why typhoidal and non-typhoidal Salmonella enterica serovars differ | |
| Brinkman et al. | Gut microbiota affects sensitivity to acute DSS-induced colitis independently of host genotype | |
| Duar et al. | Comparative genome analysis of Bifidobacterium longum subsp. infantis strains reveals variation in human milk oligosaccharide utilization genes among commercial probiotics | |
| Eisenberg et al. | Approved and novel strategies in diagnostics of rat bite fever and other Streptobacillus infections in humans and animals | |
| Azcarate-Peril et al. | Acute necrotizing enterocolitis of preterm piglets is characterized by dysbiosis of ileal mucosa-associated bacteria | |
| Kachrimanidou et al. | Clostridioides (Clostridium) difficile in food-producing animals, horses and household pets: a comprehensive review | |
| Vannucci et al. | Evidence of host adaptation in Lawsonia intracellularis infections | |
| Serrano et al. | Influence of the ovine genital tract microbiota on the species artificial insemination outcome. A pilot study in commercial sheep farms | |
| Grégoire et al. | Laboratory diagnosis of bovine abortions caused by non-maintenance pathogenic Leptospira spp.: necropsy, serology and molecular study out of a Belgian experience | |
| Matsui et al. | Development of New PCR Primers by Comparative Genomics for the Detection of H elicobacter suis in Gastric Biopsy Specimens | |
| Psareva et al. | Retrospective study of Listeria monocytogenes isolated in the territory of inner Eurasia from 1947 to 1999 | |
| Splichal et al. | Colonization of germ-free piglets with commensal Lactobacillus amylovorus, Lactobacillus mucosae, and probiotic E. coli Nissle 1917 and their interference with Salmonella Typhimurium | |
| Lesellier et al. | Bioreactor-grown bacillus of Calmette and Guérin (BCG) vaccine protects badgers against virulent Mycobacterium bovis when administered orally: identifying limitations in baited vaccine delivery | |
| Luppi et al. | Diagnostic Approach to Enteric Disorders in Pigs | |
| Wang et al. | Rational use of danofloxacin for treatment of Mycoplasma gallisepticum in chickens based on the clinical breakpoint and lung microbiota shift | |
| Ramljak et al. | Skin Culturable Microbiota in Farmed European Seabass (Dicentrarchus labrax) in Two Aquacultures with and without Antibiotic Use | |
| Fernández et al. | Effects of paratuberculosis vaccination at different ages in a dairy goat herd: a 2-year follow-up | |
| Dekker et al. | Simultaneous quantification and differentiation of Streptococcus suis serotypes 2 and 9 by quantitative real-time PCR, evaluated in tonsillar and nasal samples of pigs | |
| Espiritu et al. | Genotypic and phenotypic characterization of Treponema phagedenis from bovine digital dermatitis | |
| Martins et al. | The efficacy of vaccination in the prevention of renal and genital leptospirosis in experimentally infected sheep | |
| Habets et al. | Identification of Shigatoxigenic and enteropathogenic Escherichia coli serotypes in healthy young dairy calves in Belgium by recto-anal mucosal swabbing | |
| Tsekouras et al. | Detection of enterotoxigenic escherichia coli and clostridia in the aetiology of neonatal piglet diarrhoea: important factors for their prevention | |
| Galluzzo et al. | Detection of Mycoplasma agalactiae in Ticks (Rhipicephalus bursa) collected by sheep and goats in Sicily (South-Italy), endemic area for contagious agalactia |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |