CN103435655A - 结合σ1受体的三羰基环戊二烯类配体化合物、其制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及结合σ₁受体的三羰基环戊二烯类配体化合物、其制备方法及应用，所述配体化合物的结构通式如（I）所示：其中，n=3或5，M为铼或锝-99m。本发明提供的三羰基环戊二烯类配体化合物对于σ₁受体具有高亲和力和中等选择性，为首次发现的具有纳摩尔数量级亲和力的σ₁受体配体。经过锝-99m标记，获得了具有较高的标记率，高的放射化学纯度，具备优良生物学性质，可应用于SPECT显像的示踪剂，突破了^99mTc标记的σ₁受体示踪剂进脑量低的瓶颈，具有广阔的临床应用前景。

Description

结合σ1受体的三羰基环戊二烯类配体化合物、其制备方法及应用

技术领域

本发明涉及放射性药物化学和临床核医学技术领域，具体地说，涉及一种结合σ₁受体的三羰基环戊二烯类配体化合物、其制备方法及应用。

背景技术

在放射性药物化学和临床核医学技术领域中，sigma(σ)受体是不同于阿片受体的一种新型受体，分为sigma-1(σ₁)和sigma-2(σ₂)两种亚型。

σ₁受体在脑及周围器官如心脏、脾、肾、肝、卵巢、睾丸、胎盘等表达较高。σ₁受体参与了中枢神经系统、内分泌系统、行为和免疫系统相关的功能调节。σ₁受体与内质网膜上的伴侣蛋白(BiP/GRP-78)通过蛋白-蛋白相互作用，调节离子通道、G-蛋白偶合受体、脂筏和其他信号蛋白等各种体内靶标。此外，σ₁受体还具有神经保护作用、抗精神病作用和安定作用等，对学习记忆，运动行为也有调节功能。基于自身广泛的调节功能，σ₁受体在神经精神类疾病和神经退行性疾病中起着重要作用。有研究表明，σ₁受体与精神分裂症、抑郁症、早老性痴呆和癫痫症、可卡因成瘾存在着一定的关系。通过[¹¹C]SA4503的体内显像研究表明，在帕金森和阿尔兹海默病人脑部都发现了σ₁受体表达降低。此外，σ₁受体在肿瘤，像胶质瘤、乳腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌等，也有高度表达。发展σ₁受体显像剂可以了解脑内σ₁受体的表达，从而发展与之相关的治疗药物，同时在病理学方面和临床诊断方面对于与σ₁受体表达相关的神经疾病进行更深入的了解。

目前，F-18标记的σ₁受体PET显像剂的研究较多，锝-99m标记的SPECT显像剂的研究较少。但由于F-18核素半衰期较短，其制备受到加速器的限制，且PET临床显像价格昂贵；而锝-99m由于其具有适宜的半衰期(T_1/2＝6.01h)，制备方便，且SPECT价格便宜等优良性质，因此研究具有高亲和性、高选择性，且在生物体内快速穿过血脑屏障的σ₁受体SPECT显像剂具有重要的临床应用前景和现实意义，也是当前本技术领域亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供结合σ₁受体的三羰基环戊二烯类配体化合物、其制备方法及应用。

为了实现本发明目的，本发明的一种结合σ₁受体的三羰基环戊二烯类配体化合物，其结构通式如(I)所示：

其中，n＝3或5，M为铼或锝-99m。

当式(I)中M为铼(Re)时，所述配体化合物的制备方法为：将式(II)的化合物与1-(3，4-亚甲基二氧苄)哌啶溶于甲苯和三乙胺溶液中，加入碘化钾，避光搅拌，110-120℃回流3-6h(优选115℃回流4h)即得。

其中，n＝3或5。

合成路线如下：

其中，n＝3(Re-4-W)，5(Re-6-W)。

前述方法中，还包括回流后旋去溶剂过硅胶柱进行纯化的步骤。纯化使用的淋洗剂为乙酸乙酯、石油醚和三乙胺的混合液。

配体Re-4-W的合成：将式(II)的化合物(4-溴丁酰基环戊二烯三羰基铼)50-60mg(优选55.0mg)与1-(3，4-亚甲基二氧苄)哌啶20-30mg(优选28.4mg)溶于1-10mL(优选2mL)甲苯和1-10mL(优选2mL)三乙胺溶液中，加入碘化钾5-20mg(优选9.1mg)，避光搅拌，110-120℃回流3-6h(优选115℃回流4h)。旋去溶剂，经200-300目的硅胶柱纯化，以乙酸乙酯∶石油醚∶三乙胺＝1∶5∶1(体积比)作为淋洗剂。

配体Re-6-W的合成：将式(II)的化合物(6-溴己酰基环戊二烯三羰基铼)60-70mg(优选66.3mg)与1-(3，4-亚甲基二氧苄)哌啶50-60mg(优选57.0mg)溶于1-10mL(优选2mL)甲苯和1-10mL(优选2mL)三乙胺溶液中，加入碘化钾10-20mg(优选12.9mg)，避光搅拌，110-120℃回流3-6h(优选115℃回流4h)。旋去溶剂，经200-300目的硅胶柱纯化，以乙酸乙酯∶石油醚∶三乙胺＝5∶20∶1(体积比)作为淋洗剂。

当式(I)中M为锝-99m(^99mTc)时，即锝-99m标记的σ₁受体的三羰基环戊二烯类配体化合物的制备方法包括以下步骤：

i)标记前体的合成：将式(III)的化合物与1-(3，4-亚甲基二氧苄)哌啶溶于甲苯和三乙胺溶液中，加入碘化钾，避光搅拌，110-120℃回流3-6h(优选115℃回流4h)，即得标记前体；

其中，n＝3；

ii)锝-99m标记的σ₁受体的三羰基环戊二烯类配体化合物的制备：将标记前体和Mn(CO)₅Br溶于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加入^99mTcO₄ ^-水溶液，130-150℃反应50-70min(优选140℃反应60min)即得。

合成路线如下：

其中，n＝3(Fe-4-W)。

其中，n＝3([^99mTc]Tc-4-W)。

当式(III)中n＝3时，所述锝-99m标记的σ₁受体的三羰基环戊二烯类配体化合物的制备方法包括以下步骤：

a)标记前体Fe-4-W的合成：将式(III)的化合物(4-溴丁酰基二茂铁)280-320mg(优选300.0mg)与1-(3，4-亚甲基二氧苄)哌啶50-70mg(优选56.2mg)溶于1-10mL(优选4mL)甲苯和1-10mL(优选4mL)三乙胺溶液中，加入碘化钾15-30mg(优选19.7mg)，避光搅拌，110-120℃回流3-6h(优选115℃回流4h)。旋去溶剂，经200-300目的硅胶柱分离纯化，以石油醚∶三乙胺＝10∶1(体积比)作为淋洗剂，即得Fe-4-W(4-(3，4-亚甲基二氧苄基哌嗪)-丁基酮-1-二茂铁)；

b)锝-99m标记的σ₁受体的三羰基环戊二烯类配体化合物的制备：将标记前体Fe-4-W 0.8-1.5mg(优选1.0mg)和Mn(CO)₅Br 2-5mg(优选3.0mg)溶于0.6-1.2mL(优选0.6mL)DMF中，加入0.5-1mL^99mTcO₄ ^-水溶液(40-100mCi/mL)，130-150℃反应50-70min(优选140℃反应60min)，反应结束后，冷却至室温，测定总放射性活度。补加3mL水，用三氯甲烷萃取，测定放射性活度，浓缩后，通过HPLC进行产物的分离纯化，即得。

本发明还提供所述结合σ₁受体的三羰基环戊二烯类配体化合物在制备用于单光子发射计算机断层成像术(SPECT)的显像剂/示踪剂中的应用。

本发明还提供根据所述结合σ₁受体的三羰基环戊二烯类配体化合物制备的用于SPECT的显像剂/示踪剂。

本发明提供的三羰基环戊二烯类σ₁受体的配体化合物对于σ₁受体具有高亲和力和中等选择性，经过锝-99m标记，获得了具有较高的标记率，高的放射化学纯度，具备优良生物学性质，可应用于SPECT显像的示踪剂，突破了^99mTc标记的σ₁受体示踪剂进脑量低的瓶颈，具有广阔的临床应用前景。

附图说明

图1为本发明实施例4中[^99mTc]Tc-4-W的体外细胞结合实验结果。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。

实施例1  结合σ₁受体的三羰基环戊二烯类配体化合物(Re-4-W)的合成

将Re-4-Br(4-溴丁酰基环戊二烯三羰基铼)55.0mg与1-(3，4-亚甲基二氧苄)哌啶28.4mg溶于2mL甲苯和2mL三乙胺溶液中，加入碘化钾9.1mg，避光搅拌，115℃回流4h。旋去溶剂，经200-300目的硅胶柱纯化，以乙酸乙酯∶石油醚∶三乙胺＝1∶5∶1(体积比)作为淋洗剂，得到桔红色液体11.2mg(产率15.7％)，即化合物Re-4-W。产物结构经核磁共振分析和高分辨质谱确定，结果：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：6.83(s，1H)，6.73(s，2H)，5.97(t，J＝2.1Hz，2H)，5.93(s，2H)，5.38(t，J＝2.1Hz，2H)，3.39(s，2H)，2.60(t，J＝6.9Hz，2H)，2.42-2.33(m，10H)，1.90-1.83(m，10H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ：194.69，191.91，147.58，146.56，131.91，122.25，109.54，107.82，100.84，96.62，87.73，85.05，62.69，57.31，52.96，52.69，36.56，21.60。ESI-MS，[M+H]⁺(m/z)：623.1317；calcd：623.1321。

合成路线如下：

实施例2  结合σ₁受体的三羰基环戊二烯类配体化合物(Re-6-W)的合成

将Re-6-Br(6-溴己酰基环戊二烯三羰基铼)66.3mg与1-(3，4-亚甲基二氧苄)哌啶57.0mg溶于2mL甲苯和2mL三乙胺溶液中，加入碘化钾12.9mg，避光搅拌，115℃回流4h。旋去溶剂，经200-300目的硅胶柱纯化，以乙酸乙酯∶石油醚∶三乙胺＝5∶20∶1(体积比)作为淋洗剂，得到桔红色液体38.0mg(产率46.1％)，即化合物Re-6-W。产物经核磁共振分析，结果：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：6.85(s，1H)，6.74(s，2H)，5.98(t，J＝2.2Hz，2H)，5.94(s，2H)，5.40(t，J＝2.2Hz，2H)，3.41(s，2H)，2.59(t，J＝7.3Hz，2H)，2.46(s，8H)，2.34(t，J＝7.3Hz，2H)，1.73-1.66(m，2H)，1.56-1.48(m，2H)，1.37-1.29(m，2H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ：195.05，191.80，147.57，146.52，132.12，122.20，109.51，107.79，100.81，96.20，87.80，85.12，62.76，58.42，53.24，52.93，38.71，27.08，26.65，24.25。

合成路线如下：

其中，n＝5。

实施例3  锝-99m标记的σ₁受体的三羰基环戊二烯类配体化合物(Tc-4-W)的合成

包括以下步骤：

(1)标记前体Fe-4-W的合成：将4-溴丁酰基二茂铁300.0mg与1-(3，4-亚甲基二氧苄)哌啶56.2mg溶于4mL甲苯和4mL三乙胺溶液中，加入碘化钾19.7mg，避光搅拌，115℃回流4h。旋去溶剂，经200-300目的硅胶柱分离纯化，以石油醚∶三乙胺＝10∶1(体积比)作为淋洗剂，得到桔红色固体97.5mg(产率74.1％)，即化合物Fe-4-W。产物结构经核磁共振分析和质谱确定，结果：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：6.84(s，1H)，6.73(s，2H)，5.93(s，2H)，4.78(t，J＝1.7Hz，2H)，4.48(t，J＝1.7Hz，2H)，4.19(s，5H)，3.41(s，2H)，2.75(t，J＝7.2 Hz，2H)，2.47(s，8H)，2.43(t，J＝7.3Hz，2H)，1.94-1.86(m，2H)。ESI-MS，[M+H]⁺(m/z＝475.2)。

(2)锝-99m标记的σ₁受体的三羰基环戊二烯类配体化合物Tc-4-W的制备：将标记前体Fe-4-W 1.0mg和Mn(CO)₅Br 3.0mg溶于0.6mL DMF中，加入0.5-1mL^99mTcO₄ ^-水溶液(40-100mCi/mL)，140℃反应1h，反应结束后，冷却至室温，测定总放射性活度。补加3mL水，用三氯甲烷萃取，测定放射性活度，浓缩后，通过HPLC进行产物的分离纯化。采用Venusil MP C18，250×4.6mm分析柱(Agela公司)，HPLC分离的条件为，采用二元梯度淋洗(35％B，体积分数)，A相为0.1％TFA的水溶液，B相为0.1％TFA的乙腈溶液。通过HPLC分离鉴定，放射化学纯度大于99％，标记率为52％-67％。

合成路线如下：

实施例4  σ₁受体配体及相应的^99mTc标记的化合物的性能

本实施例中涉及的σ₁受体配体及相应的^99mTc标记的化合物由实施例1-3中制备。

1.竞争结合实验(K_i值测定)：σ受体配体化合物对σ受体的体外亲和力用竞争结合分析方法测定。对σ₁受体的亲和力采用大鼠脑皮质膜蛋白和[³H]pentazocine进行测定；对σ₂受体的亲和力采用大鼠肝膜蛋白和[³H]DTG，在10μM dextrallorphan存在的条件下进行测定。

1)膜蛋白在冰上解冻后，用缓冲溶液(50mM TRIS-HCl，pH 7.4，21℃)稀释，再次匀浆，放入高速冷冻离心机中(15,000r/min，4℃)离心15min，弃上清液，蛋白部分加27mL缓冲溶液待用。

2)将待测化合物配制成10^-3至10^-12连续稀释的水溶液。

3)在硅胶玻璃管中分别加入500μL膜蛋白，300μL待测化合物的溶液，500μL的放射性配体和一定量的缓冲溶液，非特异性结合试剂采用1mM氟哌啶醇。该竞争结合实验的温育温度为21℃，温育时间为120min。

4)用细胞收集器分离蛋白-配体复合物和游离的放射性配体，然后测定与膜蛋白结合的放射性配体的放射性活度。

实验重复三次，用迭代非线性曲线拟合法得出使放射性配体与受体结合量减少一半所需化合物的浓度(IC₅₀值)，应用Cheng-Prusoff方程，由IC₅₀值计算得出抑制常数(K_i值)。通过受体结合分析实验对化合物进行σ₁受体和σ₂受体的抑制常数的测定。通过竞争结合曲线求得上述化合物抑制放射性配体与σ₁受体或σ₂受体结合一半时所需的浓度IC₅₀值。通过Cheng-Prusoff方程(1)计算得出化合物对σ₁受体和σ₂受体的K_i值。

$K_i=\frac{\left[{\mathrm{IC}}_{50}\right]}{1+\left[\mathrm{LT}\right]/K_d}---\left(1\right)$

式(1)中，[LT]为放射性配体的浓度，K_d为放射性配体与受体结合的平衡解离常数，K_d可通过Scatchard法求得，由上述的K_d和IC₅₀值，可应用式(1)计算出各配体的K_i值，计算结果见表1。

表1  受体配体对σ₁受体和σ₂受体的抑制常数

通过上述的竞争结合实验结果可知，合成后的σ₁受体配体Re-4-W对于σ₁受体具有高的亲和性(在纳摩尔数量级，K_iσ₁＝2.11nM)和中等的选择性，是目前首次报道的具有纳摩尔数量级亲和性的用于SPECT显像的σ₁受体示踪剂；本发明的铼化合物及相应的锝-99m标记化合物，尤其是化合物Tc-4-W有潜力填补目前σ₁受体配体用于临床SPECT显像的空白。

2[^99mTc]Tc-4-W的体外细胞结合实验

细胞结合实验采用荷C6胶质瘤细胞系。C6细胞在培养基中培育至满瓶后，按常规方法收获，计数，离心，然后用培养基稀释到约2×10⁵个细胞/mL。将稀释好的细胞涡旋或震荡均匀，然后以0.5mL/孔接种于12孔板中。接种好的孔板于培养箱中孵育24h。将形成单层贴壁细胞的孔板取出，然后向每个孔板中加入1mL PBS，吸出洗去表面死去或脱落的细胞。将12孔板按实验需要分好区域，分别向对应的孔板中加入1mL相应的培养基、[^99mTc]Tc-4-W和相应的抑制剂三者的混合液。加盖室温放置15min，30min，60min。将孔板中所有的培养基完全吸出。然后分别向所有孔板中加入2mL冰冷的PBS(pH 7.4，含0.2％BSA)，最后将所有缓冲液吸出。将所有孔板中加入1M NaOH1mL，室温下放置10min，然后用移液枪吸取溶液轻轻冲洗孔板底部，使细胞完全脱离，吸取孔板内所有溶液和细胞测定其放射性计数。每个孔板的放射性百分剂量通过比较等量的加入放射性剂量计算。体外细胞结合实验结果见表2和图1。

表2  [^99mTc]Tc-4-W体外细胞结合实验(％ID/细胞)

注：HP为氟哌啶醇(Haloperidol)，DTG为二邻甲苯胍(1，3-Di-o-tolylguanidine)，SA4503为1-(3，4-dimethoxyphenethyl)-4-(3-phenylpropyl)piperazine dihydrochloride。

体外细胞结合实验结果显示，[^99mTc]Tc-4-W在C6胶质瘤细胞中有较高的摄取，在15min、30min、60min的摄取分别是2.98％ID、3.83％ID、4.05％ID。抑制实验结果显示，不同的抑制剂对该化合物有不同程度的抑制，随着抑制剂浓度的升高，抑制百分数有一定程度的升高。60min时氟哌啶醇在20μM、10μM、2μM的浓度分别抑制了60％、49％、37％，DTG在20μM、10μM、2μM的浓度分别抑制了33％、31％、21％，SA4503作为一种σ₁受体特异性配体，在20μM、10μM、2μM的浓度分别抑制了53％、44％、41％，说明化合物[^99mTc]Tc-4-W与C6胶质瘤细胞中的σ₁受体特异性结合。

3体内生物评价

3.1[^99mTc]Tc-4-W在小鼠体内的正常分布

取30只正常ICR雄性小鼠(22-25g)，于尾静脉注射0.1mL本发明化合物[^99mTc]Tc-4-W(约0.37MBq)，分别于注射后2min、15min、30min、1h、2h、4h断头处死，取脑、血、心、肝、脾、肺、肾、小肠、胃、肉、甲状腺等组织，称重并测定其放射性计数。每个脏器中的放射性百分剂量通过比较适度稀释的注射剂量计算，数据表示为每克脏器中的放射性百分剂量(％ID/g)。结果见表3。

表3  [^99mTc]Tc-4-W在小鼠体内的正常分布(％ID/g±SD，n＝4-5)

*表示为％ID/器官。

3.2[^99mTc]Tc-4-W在小鼠体内的抑制实验

取20只正常ICR雄性小鼠(22-25g)，于尾静脉提前注射0.1mL生理盐水或氟哌啶醇溶液(1mg/kg)，5min后注射0.1mL本发明化合物[^99mTc]Tc-4-W(约0.37MBq)，分别于注射后1h，2h断头处死，取脑、血、心、肝、脾、肺、肾、小肠、胃、肉、甲状腺等组织，称重并测定其放射性计数。每个脏器中的放射性百分剂量通过比较适度稀释的注射剂量计算，数据表示为每克脏器中的放射性百分剂量(％ID/g)。结果见表4。

从表4可以看出，化合物[^99mTc]Tc-4-W能够快速穿过血脑屏障，在脑中初始摄取值较高(2min时的摄取值是2.94±0.41％ID/g)，15min时的摄取达最大值(3.25±0.38％ID/g)，优于目前报道的其他σ₁受体配体的脑摄取值，突破了^99mTc标记的σ₁受体配体进脑量低的瓶颈。同时，在氟哌啶醇抑制实验中，氟哌啶醇能够很好的抑制该化合物在脑内的摄取(46％)，说明该化合物在脑内特异地与σ₁受体结合，同时在σ₁受体表达较高的脾中也得到较高的抑制(46％)。化合物[^99mTc]Tc-4-W在脑中有较好的滞留，在1h、2h、4h时的摄取值分别为1.52±0.17％ID/g、1.30±0.24％ID/g、1.05±0.16％ID/g，脑血比值在15min、30min、1h、2h、4h分别是3.28、3.03、2.92、2.50、3.28。化合物[^99mTc]Tc-4-W在脑内缓慢的清除。在σ₁受体表达较高的肺中的初始摄取值较高(35.08±8.01％ID/g)，但体内清除较快，在2h摄取仅为4.30±0.86％ID/g。同时，该化合物在甲状腺的摄取值不高，并且在4h之内无明显变化，说明化合物[^99mTc]Tc-4-W在体内无明显脱锝的现象，可发展成为一类非常有应用前景的用于SPECT显像的σ₁受体脑显像剂。

3.3[^99mTc]Tc-4-W在荷C6胶质瘤小鼠体内的生物评价

取10只ICR荷C6胶质瘤小鼠(25-30g)，于尾静脉提前注射0.1mL生理盐水或氟哌啶醇溶液(1mg/kg)或DTG溶液(3μmol/kg)，5min后注射0.1mL本发明化合物[^99mTc]Tc-4-W(约0.37MBq)，于注射化合物[^99mTc]Tc-4-W后1h断头处死，取脑、血、心、肝、脾、肺、肾、小肠、胃、肉、肿瘤等组织，称重并测定其放射性计数。每个脏器中的放射性百分剂量通过比较适度稀释的注射剂量计算，数据表示为每克脏器中的放射性百分剂量(％ID/g)。结果见表5。

实验结果显示，化合物[^99mTc]Tc-4-W在荷C6胶质瘤小鼠的肿瘤中摄取达2.18±0.37％ID/g(1h)，氟哌啶醇和DTG在1h分别抑制了47％和39％，说明化合物[^99mTc]Tc-4-W在肿瘤中特异地与σ受体结合。同时，氟哌啶醇在σ₁受体表达较高的脑、心、脾、肺中也有较高的抑制，分别抑制了50％、47％、47％、40％，DTG在脑、心、脾、肺分别抑制了30％、51％、43％、39％。说明化合物[^99mTc]Tc-4-W在体内与σ受体特异性结合。

以上实验结果表明，锝-99m标记的三羰基环戊二烯类σ₁受体配体对于σ₁受体具有高亲和力和中等选择性，经过锝-99m的标记，得到了具有较高的标记率，高的放射化学纯度，具备优良生物学性质，可应用于SPECT显像的示踪剂，突破了^99mTc标记的σ₁受体示踪剂进脑量低的瓶颈，具有广阔的临床应用前景。

虽然，上文中己经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (9)

1.结合σ₁受体的三羰基环戊二烯类配体化合物，其特征在于，其结构通式如（I）所示：

其中，n=3或5，M为铼或锝-99m。

2.制备权利要求1所述化合物的方法，其特征在于，当式（I）中M为铼时，所述配体化合物的制备方法为：将式（II）的化合物与1-(3,4-亚甲基二氧苄)哌啶溶于甲苯和三乙胺溶液中，加入碘化钾，避光搅拌，110-120℃回流3-6h即得；

其中，n=3或5。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，当式（I）中n=3时，制备方法为：将式（II）的化合物50-60mg与1-(3,4-亚甲基二氧苄)哌啶20-30mg溶于1-10mL甲苯和1-10mL三乙胺溶液中，加入碘化钾5-20mg，避光搅拌，110-120℃回流3-6h即得。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，当式（I）中n=5时，制备方法为：将式（II）的化合物60-70mg与1-(3,4-亚甲基二氧苄)哌啶50-60mg溶于1-10mL甲苯和1-10mL三乙胺溶液中，加入碘化钾10-20mg，避光搅拌，110-120℃回流3-6h即得。

5.根据权利要求2-4任一项所述的方法，其特征在于，还包括回流后旋去溶剂过硅胶柱进行纯化的步骤；纯化使用的淋洗剂为乙酸乙酯、石油醚和三乙胺的混合液。

6.制备权利要求1所述化合物的方法，其特征在于，当式（I）中M为锝-99m时，所述配体化合物的制备方法包括以下步骤：

i）标记前体的合成：将式（III）的化合物与1-(3,4-亚甲基二氧苄)哌啶溶于甲苯和三乙胺溶液中，加入碘化钾，避光搅拌，110-120℃回流3-6h即得标记前体；

其中，n=3；

ii）锝-99m标记的σ₁受体的三羰基环戊二烯类配体化合物的制备：将标记前体和Mn(CO)₅Br溶于N,N-二甲基甲酰胺中，加入^99mTcO₄ ^-水溶液，130-150℃反应50-70min即得。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，当式（III）中n=3时，制备方法包括以下步骤：

a）标记前体的合成：将式（III）的化合物280-320mg与1-(3,4-亚甲基二氧苄)哌啶50-60mg溶于1-10mL甲苯和1-10mL三乙胺溶液中，加入碘化钾15-30mg，避光搅拌，110-120℃回流3-6h即得；

b）锝-99m标记的σ₁受体三羰基环戊二烯类配体化合物的制备：将标记前体0.8-1.5mg和Mn(CO)₅Br2-5mg溶于0.6-1.2mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入40-100mCi/mL的^99mTcO₄ ^-水溶液0.5-1mL，130-150℃反应50-70min即得。

8.权利要求1所述化合物在制备用于单光子发射计算机断层成像术的显像剂中的应用。

9.根据权利要求1所述化合物制备的用于单光子发射计算机断层成像术的显像剂。

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