CN103376317A - 不同疫苗适用性与经济性的现场判定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种不同疫苗适用性与经济性的现场判定方法，其包括：选定多组供试畜牧动物，免疫接种，确定抽样检测的数量，现场快速采血，分离血清，抗体检测，平均计算，判断各组的免疫效果，得到对应不同时期时各组的免疫效果数据，综合上述免疫效果数据，确定最佳疫苗品牌和使用剂量。本发明可根据不同养殖场条件的差异，直观、快速的得出疫苗的选用及采用剂量的判定方法，其方法简洁，可靠性强，使现代化养殖业的免疫更合理、更科学化。
Description
技术领域
本发明属于畜牧业生产领域，具体涉及一种不同疫苗适用性与经济性的现场判定方法。
背景技术
进入21世纪以来，禽流感、疯牛病、口蹄疫等动物疫病频繁发生，由动物疫病、药残等引起的食源性疾病数量不断上升，由食品卫生质量、动植物检验检疫而引起的贸易纠纷不断，全球食品安全、动植物健康和生态环境形势不容乐观，这些问题已成为影响各国公共健康和经济发展的重要因素。事实上，对于任何一个养殖场而言，长期生长的核心畜群的健康状况是有一定规律可循的，但是由于不同的养殖场环境条件、饲养管理水平、管理方式方法、动物营养状况都有差异，因此不同的养殖场动物核心群的健康规律都不一样，随之带来的商品代动物群健康也不一样。同时由于技术水平、检测技术和设备以及成本的限制，无法得到本场准确的动物健康规律，所以尽管目前国内养殖场在健康预防保健上面的投入越来越大，但效果却并不理想，也造成在疫病的监测与控制手段上未能规范，不能建立属于本场的疫病监测与控制系统，因此对某些重大动物疫病的发生与流行难以做到准确预警，及早采取防范措施，常常不是预防在前，而是处理于后，即使处理也往往是传播开来再采取相应对策，造成抗生素的大量使用和药物残留等问题，严重阻碍和影响养殖业的持续稳定发展。为此，研究能在养殖现场使用的动物健康数字化管理工程技术，不仅能促进畜牧业的健康、持续发展，也能满足国家政府制定相关政策的迫切需求。因此动物健康数字化管理工程技术的建立，将有利于养殖场自身对疫病的危害和危险进行评估，对疫病的控制情况做出总结，为养殖场制订适合自身的免疫、防治措施和如何应对提供重要依据。
由于目前市场上供应的疫苗品牌越来越多，养殖场客户大多数对于疫苗本身的专业理论研究有所欠缺，因此很难从供应商的描述以及外观分析上得出哪种疫苗更加适合本场使用以及使用的更加合理的剂量，再加上不同养殖场的饲养管理水平、环境条件、营养状况以及不同疫苗供应商生产工艺差别、病毒库的差异，使得疫苗本身在应用过程中差异化非常大，任何一个成功防疫养殖场的经验均不能直接套用在另外一个养殖场上，这就给养殖现场对于疫苗的选择提出了很大的难题。
发明内容
本发明的目的是为了克服上述问题，提供一种可以直观、快速的得出疫苗选用及采用剂量的判定方法和依据。
本发明的目的可以通过以下措施达到：
一种不同疫苗适用性与经济性的现场判定方法，其包括如下步骤：
a、选定健康、同龄、体重相近、性别比例相同的可以进行相应疫苗接种的多组供试畜牧动物；
b、选定几种不同品牌的同种疫苗，按照各自对应的推荐剂量以及在推荐剂量上加设的剂量，分别对各组供试畜牧动物进行不同品牌及不同剂量的免疫接种；
c、在接种后的畜牧动物体内产生抗体的理论时间之后，根据各组接种后的畜牧动物群体的大小，确定抽样检测的数量；
d、对各组接种后的畜牧动物群体进行抽样现场快速采血；
e、对采集到的血液离心处理，分离出血清；
f、采用与接种疫苗所对应的抗体检测试纸，对得到的血清进行抗体检测并记录检测结果；
g、将各组抽样的抗体检测结果统计后，进行平均计算，得到各组群体当前的该种抗体水平；
h、将各组群体当前的该种抗体水平与该种疫苗的安全值进行比较，判断各组的免疫效果；
i、在接种后的畜牧动物体内逐渐产生抗体的过程中，在多个不同的时期重复步骤c-h，得到对应不同时期时各组的免疫效果数据；
j、综合上述步骤得到的不同期各组的免疫效果数据，选择效果最佳、或兼具效果及成本优势、或在相同效果下最具成本优势的免疫接种组，确定该组的疫苗和剂量为该供试畜牧动物的最佳疫苗品牌和使用剂量。
本方法的流程包括：
确定试样动物群 
确定试样疫苗品种确定试用疫苗接种剂量
接种前对所有试样动物进行抗体水平的检测
确定可以接种后开始接种供试疫苗
等待抗体产生
抽取所有试样动物血液分离血清
血清滴定检测卡读取检测结果
记录数据计算平均值和差异
判定健康防疫效果及经济性
确定本场选用疫苗。
本发明的方法具体详述如下：
a、选定多组供试畜牧动物
本发明中的动物群体，可以如后备母畜群、怀孕母畜群、哺乳母畜群、种用公畜群或者青年种禽、产蛋种禽等。各组的健康、同龄、体重相近、性别比例相同，数量可相同也可不同。
本发明中所指的同龄是指出生日期在0～3天以内，进一步优选0～2天以内，以0～1天以内为最佳。
本发明中的“可以进行相应疫苗接种”是指该动物体内相应抗体的平均值低于该抗体的有效值，该动物可以进行接种。
本发明中的“抗体的有效值”是指起到相应免疫作用的抗体的最低水平以上的数值(即理论最低有效保护值之上的数值)，本发明的“疫苗安全值”与“疫苗的理想最低安全水平”均是指起到相应免疫作用的抗体的最低水平值，该数据根据不同的抗体类型都有不同，不同疫苗产生有效抗体都有该最低理论数值，也可以在实际免疫生产中，根据该抗体所对应的效果总结出针对实际不同实际条件的最低有效水平。
b、免疫接种
步骤b中，所述每种疫苗的推荐剂量以及在推荐剂量上加设的剂量呈梯度分布，如按照推荐剂量选择上下梯度、上中下梯度，或更多的梯度等。
在步骤b中，对不同品牌及不同剂量的免疫接种组，还可均进行相同品牌和剂量免疫接种的重复组，并在后续步骤中对重复组做相同的抗体检测和判断，以避免操作误差。
按照试验方案对供试动物进行疫苗接种后，观察接种反应，待健康状况、应激反应等一切正常后才继续后续操作。
c、确定抽样检测的数量
根据各组接种后的畜牧动物群体的大小，按下述比例确定抽样检测的数量：
家畜类动物：
| 群体大小（头） | 50以下 | 50-100 | 100-500 | 500-1000 | 1000以上 |
| 抽样比例（%） | 50 | 25 | 15 | 10 | 5 |
在不同群体大小的共有端点时，可以适用不同群体所对应的抽样比例，根据具体情况进行选择（如100头时可适用25%或15%的抽样比例）。下同。
种禽类动物：
| 群体大小（羽） | 500以下 | 500-1000 | 1000-2000 | 2000以上 |
| 抽样比例（%） | 25 | 15 | 10 | 5 |
商品禽类动物：
| 群体大小（羽） | 3000以下 | 3000-5000 | 5000以上 |
| 抽样比例（%） | 10 | 8 | 3 |
d、现场快速采血
家畜采用颈静脉（专职兽医采用较多）或者耳背经脉采血（普通养殖人员多采用）或者尾根静脉采血方法，家禽则可以采用颈静脉或翅内侧腋下静脉采血方法采集干净血液，采血量为1～2.5ml，放入专用离心管内，并编上记号，便于区别和记录；
e、血液离心处理
用相匹配的离心机（迷你型掌式离心机、80-1离心机）离心放置在离心管中的血液，2000转离心2分钟或者4000转离心1分钟，上清液为血清，备用。
f、血清滴定检测卡, 读取检测结果
取出相应的检测卡（如猪瘟抗体检测卡、猪蓝耳病抗体检测卡、猪伪狂犬抗体检测卡、猪口蹄疫抗体检测卡、禽流感抗体检测卡、猪流感抗体检测卡、猪圆环病毒抗体检测卡等），打开外封包装，平放检测卡，用记号笔编号登记然后用包装袋内配置的专用滴管，吸取血清足量，垂直向检测卡的滴液孔滴入3滴血清，检测卡观察窗层析面液体流动时开始计时，15-20分钟之间读取数据；
用和检测卡随同配备的读数比色卡进行比色对照（注意：最好在自然光下比色读取，避免强光照射，所以应尽量选择晴天进行检测），与比色卡上T线颜色最为接近的对应抗体滴度数据，即为该动物该种抗体的滴度水平，做记录并和检测卡编号一一对应；
g、输入数据库，计算平均值
将所有抽样检测个体的抗体数据输入数据库（或电脑EXCEL表），进行平均计算，所得结果即为该抽样群体当前的该种抗体的水平。
h、判断免疫效果
该种疫苗的安全值为该种疫苗的理想最低安全水平。
i、不同时期的免疫效果
在步骤i中，多个不同的时期进一步选自接种后的畜牧动物体内产生抗体的理论时间之后的第2～5天、第6～8天、第9～14天，如延后3天、7天、10天等。
在等待产生抗体的理论时间之前的1-3天，也可以进行一次随机的抽血检测，以观察抗体产生前的抗体水平，用以与其他时期的抗体水平进行对比。
j、确定最佳疫苗品牌和剂量
在确定过程中，还可进一步考虑各组的差异幅度，并核算投入成本。
如无特别指出，本发明中的“多个”是指两个以上（包括两个）。
本发明可根据不同养殖场条件的差异，直观、快速的得出疫苗的选用及采用剂量的判定方法，其方法简洁，可靠性强，使现代化养殖业的免疫更合理、更科学化，其进一步：
1、可以快速、准确、低成本找到养殖场动物健康的规律，使养殖场管理者对动物健康信息了然于胸；
2、可以极大的避免盲目防疫；
3、可以及时验证防疫效果，避免主观武断防疫效果；
4、可以快速选择到适合本场的最佳防疫方案；
5、全面彻底提高动物健康水平，减少疾病发生；
6、对出栏动物的本身安全、健康指标可以做到现场提供，快速判别，减少了成为畜产品后再发现安全问题时所造成的损失的事故机会，杜绝社会性浪费。
具体实施方式
实施例1疫苗的选择
选择判断两种猪瘟疫苗（脾淋苗）免疫效果及接种剂量
1、选择供试猪：猪场选取25-26日龄乳仔猪8窝，每窝数量为12头，体重和性别比例均等，各窝随机抽样50%，即抽取6头猪并标记；
2、采血：每头抽样猪用耳背静脉或尾根静脉采血0.5-1ml，放入1.5的离心管中；
3、离心分离血清：将装有血样的离心管放入掌式LX-100离心机中，2000转离心1-2分钟（以血清分离清晰为标准，当血清不清晰时可适当延长离心时间）；
4、检测卡准备：取出猪瘟抗体快速检测试纸卡，开封后平放在桌面，记号笔进行标记（标记应该和血样记号对应）；
5、滴定反应：用检测卡包装袋内配置的定量滴管吸取血清，从检测卡滴液孔上方垂直缓慢而准确的逐滴滴入3滴血清，并开始计时；
6、结果判定：15-20分钟之间用比色读数卡读数，20分钟后结果无效。
a首先判定检测卡本次检测是否有效，主要看检测卡观测窗对应C线位置色带是否出现，如果出现表示本次检测卡结果有效，可以读数；如果C线没有出现，表示本次检测结果无效，需要重新换卡滴定检测；
b将检测卡的C线对齐比色读数卡的C线，对比检测卡上T线颜色与比色读数卡上T线颜色最为接近的位置，该位置所对应的数据即为本次血清猪瘟抗体的检测数据；
经过检测当前试验猪群的猪瘟抗体水平如下（表9）：
| 组别 | 仔猪1 | 仔猪2 | 仔猪3 | 仔猪4 | 仔猪5 | 仔猪6 | 平均值 | 与有效值16比较 | 结论判断 |
| 组1 | 8 | 16 | 4 | 0 | 8 | 8 | 7.3 | ＜有效值 | 可以接种 |
| 组1重复 | 4 | 8 | 8 | 16 | 4 | 4 | 7.3 | ＜有效值 | 可以接种 |
| 组2 | 8 | 0 | 0 | 8 | 16 | 4 | 6 | ＜有效值 | 可以接种 |
| 组2重复 | 4 | 8 | 8 | 4 | 4 | 0 | 4.7 | ＜有效值 | 可以接种 |
| 组3 | 0 | 16 | 4 | 8 | 4 | 8 | 6.7 | ＜有效值 | 可以接种 |
| 组3重复 | 8 | 8 | 4 | 4 | 4 | 0 | 4.7 | ＜有效值 | 可以接种 |
| 组4 | 8 | 8 | 8 | 0 | 4 | 4 | 5.3 | ＜有效值 | 可以接种 |
| 组4重复 | 0 | 0 | 0 | 8 | 16 | 8 | 5.3 | ＜有效值 | 可以接种 |
7、检测结论：本群试验各组猪瘟抗体水平较低，处于保护值之下，可以进行接种。
8、试验分组及设计
a两种不同品牌猪瘟疫苗各设两个剂量，每个剂量一个重复，具体如下（表10）：
| 组别 | 疫苗1 | 疫苗2 |
| 组1 | 1头份 | |
| 组1重复 | 1头份 | |
| 组2 | 3头份 | |
| 组2重复 | 3头份 | |
| 组3 | 1头份 | |
| 组3重复 | 1头份 | |
| 组4 | 3头份 | |
| 组4重复 | 3头份 |
b各窝仔猪于27日龄开始按照选择试验分组及剂量要求开始正常免疫接种，接种后观察仔猪健康状况、应激反应，一切正常。
9、接种后效果抽测：
a接种后7天第一次随机抽样采血，抽样比例50%；操作步骤参考2-6，结果见表11
b接种后10天第二次随机抽样采血，抽样比例50%操作步骤参考2-6，结构见表12；
c接种后15天第三次随机抽样采血，抽样比例50%；操作步骤参考2-6，结果见表13
第七天检测结果（表11）：
| 组别 | 仔猪1 | 仔猪2 | 仔猪3 | 仔猪4 | 仔猪5 | 仔猪6 | 平均值 | 与安全值16比较 | 结论判断 |
| 组1 | 0 | 4 | 8 | 16 | 32 | 0 | 10 | ＜有效值 | 没有保护力 |
| 组1重复 | 8 | 16 | 32 | 0 | 0 | 8 | 10.7 | ＜有效值 | 没有保护力 |
| 组2 | 16 | 8 | 32 | 16 | 0 | 8 | 13.3 | ＜有效值 | 没有保护力 |
| 组2重复 | 4 | 32 | 16 | 0 | 8 | 16 | 12.7 | ＜有效值 | 没有保护力 |
| 组3 | 32 | 64 | 32 | 32 | 16 | 32 | 34.7 | ＞有效值 | 有效，较整齐 |
| 组3重复 | 16 | 32 | 16 | 32 | 32 | 64 | 32 | ＞有效值 | 有效 不整齐 |
| 组4 | 16 | 16 | 32 | 32 | 16 | 32 | 24 | ＞有效值 | 有效 不整齐 |
| 组4重复 | 32 | 64 | 16 | 32 | 64 | 64 | 45.3 | ＞有效值 | 有效 不整齐 |
结论判定：组1、组1重复、组2、组2重复均没有产生有效抗体，组3、组3重复、组4、组4重复均产生了有效抗体，但是组3、组4及组4重复抗体不整齐，所有抗体的水平均处于上升期；
第十天检测结果（表12）：
| 组别 | 仔猪1 | 仔猪2 | 仔猪3 | 仔猪4 | 仔猪5 | 仔猪6 | 平均值 | 与安全值16比较 | 结论判断 |
| 组1 | 4 | 8 | 8 | 16 | 8 | 4 | 8 | ＜有效值 | 没有保护力 |
| 组1重复 | 8 | 4 | 4 | 4 | 8 | 16 | 5.5 | ＜有效值 | 没有保护力 |
| 组2 | 4 | 32 | 8 | 16 | 32 | 4 | 16 | ＝有效值 | 保护力不强 |
| 组2重复 | 8 | 4 | 32 | 16 | 16 | 8 | 14 | ＜有效值 | 没有保护力 |
| 组3 | 128 | 128 | 128 | 64 | 64 | 64 | 96 | ＞有效值 | 有效，整齐 |
| 组3重复 | 64 | 128 | 64 | 128 | 128 | 128 | 106.7 | ＞有效值 | 有效 比较整齐 |
| 组4 | 128 | 256 | 64 | 64 | 256 | 32 | 133.3 | ＞有效值 | 有效 不整齐 |
| 组4重复 | 64 | 128 | 128 | 256 | 32 | 64 | 112 | ＞有效值 | 有效 不整齐 |
结论判定：组1、组1重复未产生有效抗体，没有保护力；组2、组2重复产生有效抗体但是保护力不强；组3、组3重复已经产生了较高水平的抗体，且整齐度较好；组4、组4重复也产生了较高的有效抗体，但是抗体非常不整齐；
第十五天检测结果（表13）：
| 组别 | 仔猪1 | 仔猪2 | 仔猪3 | 仔猪4 | 仔猪5 | 仔猪6 | 平均值 | 与安全值16比较 | 结论判断 |
| 组1 | 16 | 16 | 8 | 32 | 64 | 8 | 24 | ＞有效值 | 低保护力 |
| 组1重复 | 16 | 16 | 32 | 32 | 64 | 8 | 28 | ＞有效值 | 低保护力 |
| 组2 | 0 | 32 | 16 | 8 | 16 | 4 | 12.7 | ＜有效值 | 没有保护力 |
| 组2重复 | 128 | 64 | 128 | 256 | 64 | 16 | 109.3 | ＞有效值 | 有保护力，不整齐 |
| 组3 | 256 | 256 | 256 | 256 | 256 | 256 | 256 | ＞有效值 | 高效，整齐 |
| 组3重复 | 256 | 256 | 256 | 256 | 256 | 256 | 256 | ＞有效值 | 高效 整齐 |
| 组4 | 512 | 256 | 128 | 128 | 64 | 64 | 192 | ＞有效值 | 有效 不整齐 |
| 组4重复 | 256 | 256 | 256 | 32 | 128 | 128 | 176 | ＞有效值 | 有效 不整齐 |
结论判定：组1、组1重复产生有效抗体，水平较低，保护力差；组2未产生有效抗体，免疫失败；组2重复产生有效抗体，但是整齐度很差；组3、组3重复已经产生了较高水平的抗体，且整齐度好；组4、组4重复也产生了较高的有效抗体，但是抗体非常不整齐；
10、结论：根据效果最后确定首选猪瘟疫苗为疫苗2，首选剂量为1头份。
Claims (7)
1. 一种不同疫苗适用性与经济性的现场判定方法，其特征在于：包括如下步骤：
a、选定健康、同龄、体重相近、性别比例相同的可以进行相应疫苗接种的多组供试畜牧动物；
b、选定几种不同品牌的同种疫苗，按照各自对应的推荐剂量以及在推荐剂量上加设的剂量，分别对各组供试畜牧动物进行不同品牌及不同剂量的免疫接种；
c、在接种后的畜牧动物体内产生抗体的理论时间之后，根据各组接种后的畜牧动物群体的大小，确定抽样检测的数量；
d、对各组接种后的畜牧动物群体进行抽样现场快速采血；
e、对采集到的血液离心处理，分离出血清；
f、采用与接种疫苗所对应的抗体检测试纸，对得到的血清进行抗体检测并记录检测结果；
g、将各组抽样的抗体检测结果统计后，进行平均计算，得到各组群体当前的该种抗体水平；
h、将各组群体当前的该种抗体水平与该种疫苗的安全值进行比较，判断各组的免疫效果；
i、在接种后的畜牧动物体内逐渐产生抗体的过程中，在多个不同的时期重复步骤c-h，得到对应不同时期时各组的免疫效果数据；
j、综合上述步骤得到的不同期各组的免疫效果数据，选择效果最佳、或兼具效果及成本优势、或在相同效果下最具成本优势的免疫接种组，确定该组的疫苗和剂量为该供试畜牧动物的最佳疫苗品牌和使用剂量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤b中，所述每种疫苗的推荐剂量以及在推荐剂量上加设的剂量呈梯度分布。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤b中，对不同品牌及不同剂量的免疫接种组，均进行相同品牌和剂量免疫接种的重复组，并在后续步骤中对重复组做相同的抗体检测和判断。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤c中，根据各组接种后的畜牧动物群体的大小，按下述比例确定抽样检测的数量：
家畜类动物：
种禽类动物：
商品禽类动物：
。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤d中，对各组接种后的畜牧动物群体进行抽样现场快速采血过程中，家畜类动物采用颈静脉或耳背经脉采血的方法采集干净血液，家禽类动物采用颈静脉或翅内侧腋下静脉采血的方法采集干净血液；采血量为1～2.5ml。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：该种疫苗的安全值为该种疫苗的理想最低安全水平。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤i中，所述多个不同的时期选自接种后的畜牧动物体内产生抗体的理论时间之后的第2～5天、第6～8天、第9～14天。
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