CN103333944A - 甘薯软腐病抗性鉴定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种农作物病虫害抗性鉴定方法，具体的说就是一种甘薯软腐病抗性鉴定方法。该方法科学，过程简单易于操作，每个品种取3块中等大小的薯块，经严格消毒晾干后，切薯块中部薯片，每薯块切3个薯片，每薯片厚度为8mm，置于放有灭菌湿润滤纸保湿的灭菌培养皿中，接种1块6mm的甘薯软腐病菌菌碟于薯片中央，将接种好的薯片置于26℃生化培养箱中培养，期间加无菌水保湿一次。21小时后将鉴定材料取出，量取薯片病斑直径并计算病情指数，以病情指数进行分级，评价品种的抗感特性。
Description
技术领域
本发明涉及一种农作物病虫害抗性鉴定方法，具体的说就是一种甘薯软腐病抗性鉴定方法，属农业植保领域。
背景技术
甘薯软腐病（sweet potato soft rot），由黑根霉菌(Rhizopus nigricans Ehvb.)引起，为甘薯贮藏期的主要病害之一，分布广泛且全国各甘薯生产区均有发生。发病后，病原菌分泌果胶酶，溶解细胞壁中的果胶质，使组织软腐，且蔓延迅速，常使全窑腐烂，造成严重的经挤损失。抗病品种的选育和推广是控制该病害的主要手段。准确评价品种的抗性显得尤其重要。多年的抗性鉴定方法研究工作表明：采用薯块伤口接菌碟法、薯块喷孢子液法和孢子液针刺法等接种软腐病菌，一旦病菌成功侵染薯块，甘薯组织软腐很快，且蔓延迅速，在抗性调查测定过程中，病斑侵入深度和病斑组织腐烂量等指标的视觉误差较大，且不易测量，无法定量分析供试品种的抗性，因而，其稳定性差，效果也较差，不宜作为甘薯软腐病鉴定方法使用。不能有效应用于甘薯育种研究中的抗性鉴定。
发明内容
本发明的目的是为克服软腐病菌侵染迅速很难定量分析供试品种的抗病性，提供一种甘薯软腐病抗性鉴定方法，每个品种取3块中等大小的薯块，经严格消毒晾干后，切薯块中部薯片，每薯块切3个薯片，每薯片厚度为8mm，置于放有灭菌湿润滤纸保湿的灭菌培养皿中，接种1块6mm的甘薯软腐病菌菌碟于薯片中央，将接种好的薯片置于26℃生化培养箱中培养，期间加无菌水保湿一次。21小时后将鉴定材料取出，量取薯片发病直径，分别计算防效，以平均防效进行分级，评价品种的抗感特性。
本发明是以如下技术方案实现的：一种甘薯软腐病抗性鉴定方法，每个品种取3块中等大小的薯块，经严格消毒晾干后，切薯块中部薯片，每薯块切3个薯片，每薯片厚度为8mm，置于放有灭菌湿润滤纸保湿的灭菌培养皿中，接种1块6mm的甘薯软腐病菌菌碟于薯片中央，将接种好的薯片置于26℃生化培养箱中培养，期间加无菌水保湿一次；21小时后将鉴定材料取出，量取薯片发病直径，分别计算防效，以平均防效进行分级，评价品种的抗感特性；具体按如下步骤进行：
（1）病原菌分离和准备：从中国农科院甘薯研究所甘薯库中取带软腐病薯块，按常规消毒，再用无菌刀将病健交接处的组织切成薄片移到PDA培养基上培养，经分离纯化，并经柯赫氏法则验证确定；于26℃下在PDA平板上培养，获病原菌纯培养；在活化1天后的软腐病菌平板中打取6mm菌碟，将菌碟置于PDA培养基平板中央，26℃生化培养箱中培养1天，将培养好的软腐病菌平板打取菌碟；
（2）平板消毒保湿：将灭菌后的滤纸置于培养皿中，喷无菌水至滤纸湿润后备用；
（3）参试品种准备：选14个甘薯品种，每品种准备三块中等大小（50mm≤薯块中部直径≤70mm）的薯块，清洗晾干后用质量浓度75%的酒精消毒，消毒后切薯块中部薯片，厚度为8mm，每薯块切3个薯片，用高感软腐病品种烟25做对照；将切好的薯片分别置于保湿好的消毒平板中；
（4）接种鉴定：每个薯片中央接种1个菌碟，接种后的平板置于26℃生化培养箱中培养，期间加无菌水保湿一次使底部滤纸湿润即可；
（5）调查评价：接种21小时后将平板取出，量取薯片横切面上薯片发病的直径，按分级标准进行分级并计算病情指数，根据病情指数进行品种的抗感特性评价，甘薯品种软腐病病抗性水平按照以下标准进行确定：
高抗病情指数≤20；
抗病20＜病情指数≤40；
中抗40＜病情指数≤60；
感病60＜病情指数≤80；
高感80＜病情指数。
所述的分级标准是：
0级：薯片正常无任何病症；
1级：薯片病斑直径≤10mm；
2级：10mm＜薯片病斑直径≤20mm；
3级：20mm＜薯片病斑直径≤30mm；
4级：薯片病斑直径＞30mm；
所述的病情指数计算公式为：
本发明的优点是：该鉴定方法科学，省时省力，过程简单易于操作，以经严格消毒的薯块切片接种1个6mm的甘薯软腐病菌菌碟，26℃生化培养箱中培养21小时，根据薯片病斑直径分级并计算病情指数进行抗性评价最为有效。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例
（1）病原菌分离和准备：从中国农科院甘薯研究所甘薯库中取带软腐病薯块，按常规消毒，再用无菌刀将病健交接处的组织切成薄片移到PDA培养基上培养，经分离纯化，并经柯赫氏法则验证确定。26℃下在PDA平板上培养，获病原菌纯培养。在活化1天后的软腐病菌平板中打取6mm菌碟，将菌碟置于PDA培养基平板中央，26℃生化培养箱中培养1天，将培养好的软腐病菌平板打取菌碟。
（2）平板消毒保湿：将灭菌后的滤纸置于培养皿中，用喷壶喷无菌水至滤纸湿润后备用。
（3）参试品种准备：选表1所示的14个甘薯品种，每品种准备三块中等大小的薯块，清洗晾干后用75%的酒精消毒，消毒后切薯块中部薯片，厚度为8mm，每薯块切3个薯片，用高感软腐病品种烟25做对照。将切好的薯片分别置于保湿好的消毒平板中。
（4）接种鉴定：每个薯片中央接种1个菌碟，接种后的平板置于26℃生化培养箱中培养，期间加无菌水保湿一次。
（5）调查评价：接种21小时后将平板取出，量取薯片横切面上薯片发病的直径，按以下分级标准进行分级并计算病情指数，根据病情指数进行品种的抗感特性评价。
分级标准：
0级：薯片正常无任何病症；
1级：薯片病斑直径≤10mm；
2级：10mm＜薯片病斑直径≤20mm；
3级：20mm＜薯片病斑直径≤30mm；
4级：薯片病斑直径＞30mm；
病情指数计算公式：
甘薯品种软腐病病抗性水平按照以下标准进行确定：
高抗病情指数≤20；
抗病20＜病情指数≤40；
中抗40＜病情指数≤60；
感病60＜病情指数≤80；
高感80＜病情指数。
结果如表1所示。
表1：薯片病情指数调查对抗性评价的影响
Table:2：Effect of Resistance Identification by Disease incidence Survey
*HR:高抗，high resistance;R:抗，resistance;MR：中抗，middle resistance；HS:高感，high susceptibility;S:感，susceptibility；MS：中感，middle susceptibility
结论：
从表1看出：接种软腐病菌病置于26℃生化培养箱中培养21小时后调查薯片发病直径，并计算平均防效进行评价，其中：商15-1对甘薯软腐病的抗性级别为“抗病”；Y10-1、 商17-2和胜利百号对甘薯软腐病的抗性级别为“中抗”；商20-1、商16-1、商17-1和徐18对甘薯软腐病的抗性级别为“感病”；其余6个品种对甘薯软腐病的抗性级别均为“高感”。
Claims (3)
1.一种甘薯软腐病抗性鉴定方法，其特征是：每个品种取3块中等大小的薯块，经严格消毒晾干后，切薯块中部薯片，每薯块切3个薯片，每薯片厚度为8mm，置于放有灭菌湿润滤纸保湿的灭菌培养皿中，接种1块6mm的甘薯软腐病菌菌碟于薯片中央，将接种好的薯片置于26℃生化培养箱中培养，期间加无菌水保湿一次；21小时后将鉴定材料取出，量取薯片发病直径，分别计算防效，以平均防效进行分级，评价品种的抗感特性；具体按如下步骤进行：
（1）病原菌分离和准备：从中国农科院甘薯研究所甘薯库中取带软腐病薯块，按常规消毒，再用无菌刀将病健交接处的组织切成薄片移到PDA培养基上培养，经分离纯化，并经柯赫氏法则验证确定；于26℃下在PDA平板上培养，获病原菌纯培养；在活化1天后的软腐病菌平板中打取6mm菌碟，将菌碟置于PDA培养基平板中央，26℃生化培养箱中培养1天，将培养好的软腐病菌平板打取菌碟；
（2）平板消毒保湿：将灭菌后的滤纸置于培养皿中，喷无菌水至滤纸湿润后备用；
（3）参试品种准备：选14个甘薯品种，每品种准备三块薯块，大小为50mm≤薯块中部直径≤70mm，清洗晾干后用质量浓度75%的酒精消毒，消毒后切薯块中部薯片，厚度为8mm，每薯块切3个薯片，用高感软腐病品种烟25做对照；将切好的薯片分别置于保湿好的消毒平板中；
（4）接种鉴定：每个薯片中央接种1个菌碟，接种后的平板置于26℃生化培养箱中培养，期间加无菌水保湿一次使底部滤纸湿润即可；
（5）调查评价：接种21小时后将平板取出，量取薯片横切面上薯片发病的直径，按分级标准进行分级并计算病情指数，根据病情指数进行品种的抗感特性评价，甘薯品种软腐病病抗性水平按照以下标准进行确定：
高抗病情指数≤20；
抗病20＜病情指数≤40；
中抗40＜病情指数≤60；
感病60＜病情指数≤80；
高感80＜病情指数。
2.根据权利要求1所述的甘薯软腐病抗性鉴定方法，其特征是：所述的分级标准 是：
0级：薯片正常无任何病症；
1级：薯片病斑直径≤10mm；
2级：10mm＜薯片病斑直径≤20mm；
3级：20mm＜薯片病斑直径≤30mm；
4级：薯片病斑直径＞30mm。
3.根据权利要求1所述的甘薯软腐病抗性鉴定方法，其特征是：所述的病情指数计算公式为：
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