CN103315128A - 酪蛋白粉及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种酪蛋白粉及其制备方法。该方法包括如下步骤：对脱脂乳进行三次微滤浓缩后得到微滤截留液，将所述微滤截留液依次进行真空浓缩和喷雾干燥，得到所述酪蛋白粉。本发明采用微滤、真空浓缩和低温喷雾干燥技术得到的酪蛋白粉，与传统的干酪素或酪蛋白酸盐相比，未经酸化和酶凝，保持了牛乳酪蛋白的原始胶束结构，加工品质特性优良，风味纯正，在食品工业中具有广泛的应用前景。

Description

酪蛋白粉及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种酪蛋白粉及其制备方法，属于乳品加工领域。 

背景技术

牛乳中的蛋白质主要有酪蛋白和乳清蛋白两种，人们已经利用牛乳生产出了全乳蛋白、酪蛋白和乳清蛋白三种不同类型的乳蛋白产品，其中酪蛋白产品主要为干酪素和酪蛋白酸钠两种。干酪素是在脱脂乳中加入酸或凝乳酶使酪蛋白沉淀，再经过洗涤、脱水、造粒干燥、粉碎而制得的粉末或颗粒状产品，呈白色或微黄色，几乎不溶于水，在碱性溶液中溶解；由于干酪素具有溶解性差的特点，因此其在食品加工领域中的应用受到了一定的限制，主要应用在化工等领域，如皮革、造纸、涂料、塑料、纺织、胶水等行业。为改善干酪素的溶解性，扩大其在食品领域中的应用，将干酪素经氢氧化钠、碳酸钠或碳酸氢钠等处理后，喷雾干燥制得酪蛋白酸钠，酪蛋白酸钠一般含有85％的蛋白质，易溶于水，具有很强的乳化、增稠和持水性能，已广泛地应用在肉制品、焙烤食品、乳制品的加工过程中。与干酪素相比，酪蛋白酸钠的溶解性虽有很大提高，在食品中取得了广泛地应用，但生产过程中酸或酶的加入，不仅使牛乳中的酪蛋白胶束发生解离和聚集，一定程度上降低了酪蛋白的功能特性，而且产品的风味不纯正。 

膜分离技术作为一项新技术，由于具有节能、降耗、无污染及操作温度低等的优点，在乳品工业中已取得了广泛的应用，如回收乳清、脱脂乳浓缩、微滤除菌等，其中，应用膜技术对乳蛋白的分离已成为目前国内外研究的热点课题。膜分离技术是一种纯粹的物理筛分过程，生产过程中不需添加任何化学物质，而且操作温度低，不会破坏乳蛋白的天然结构，生产出的乳蛋白产品具有更好的功能特性，在食品加工领域具有更广泛的应用前景。 

迄今为止，新西兰等国已使用膜技术工业化生产出乳蛋白浓缩物(MPC，milk protein concentrate)，出口至世界各地。MPC中酪蛋白的天然胶束结构没有破坏，乳清蛋白变性程度低，而且保留了牛乳中二者的原始比例，展现出了比酪蛋白酸钠更好的功能特性，目前MPC已广泛应用在干酪、冷冻甜品、高蛋白运动饮料、肉制品、能量棒和营养补充品等食品的生产加工中，并且正逐渐取代酪蛋白酸钠在食品中的应用。 

发明内容

本发明的目的是提供一种酪蛋白粉及其制备方法。 

本发明提供的制备酪蛋白粉的方法，包括如下步骤：对脱脂乳进行微滤浓缩，得到所述酪蛋白粉。 

上述方法中，所述脱脂乳中脂肪的质量百分含量小于0.08％，具体可为0.06％或0.07％或0.06-0.07％，以防止脂肪球引起的膜孔堵塞； 

所述脱脂乳为按照包括如下步骤方法制备而得：将原料乳杀菌后离心。其中，所述原料乳中，干物质的质量百分含量不低于11％，具体可为12.54％或13.01％或12.54％-13.01％，酸度为18-20°T，細菌总数不高于50万个/mL，具体为4.8万个/mL； 

所述原料乳杀菌包括：将所述原料乳先在72℃-80℃加热12s-20s，以抑制微生物在整个生产过程中的生长和繁殖，同时又防止乳清蛋白发生变性，再于58℃进行一段冷却，再于50℃进行二段冷却，以保证在下一步的离心脱脂过程中，料液温度保持在45℃-50℃，获得最佳的脱脂效果； 

所述离心步骤中，温度为45℃-50℃，转速为6000r/min-15000r/min，具体为15000r/min，入料流速为80L/h-100L/h，具体为100L/h。 

所述微滤浓缩的次数为三次； 

所述三次微滤浓缩步骤是为了分离脱脂乳中酪蛋白和乳清蛋白，同时提高料液的固形物含量，降低蒸发浓缩所需的时间和成本。 

三次所述微滤浓缩步骤具体包括： 

a、将所述脱脂乳通过微滤浓缩至浓缩倍数为4-7倍时得到第一次微滤截留液，第一次微滤结束； 

b、再一次性加水至第一次微滤截留液和加入水的总质量为所述脱脂乳质量的1/2倍，继续微滤浓缩至浓缩倍数为4-7倍时得到第二次微滤截留液，第二次微滤结束； 

c、再一次性加水至第二次微滤截留液和加入水的总质量为所述脱脂乳质量的1/2倍，继续微滤浓缩至浓缩倍数为4-7倍时，第三次微滤结束，得到第三次微滤截留液； 

三次所述微滤浓缩步骤更具体包括： 

a、将所述脱脂乳通过微滤浓缩至浓缩倍数为5倍时得到第一次微滤截留液，第一次微滤结束； 

b、再一次性加水至第一次微滤截留液和加入水的总质量为所述脱脂乳质量的1/2倍，继续微滤浓缩至浓缩倍数为5倍时得到第二次微滤截留液，第二次微滤结束； 

c、再一次性加水至第二次微滤截留液和加入水的总质量为所述脱脂乳质量的1/2倍，继续微滤浓缩至浓缩倍数为6倍时，第三次微滤结束，得到第三次微滤截留液。 

所述三次微滤步骤中，所用膜的孔径为200nm-300nm； 

所述膜为陶瓷中空纤维膜或管式陶瓷膜，主要是由于此两种无机膜具有污染低、易清洗、耐酸碱、耐受温度范围广、寿命长的特点。 

料液温度为45℃-50℃，进口压力为3-5bar，具体为3.5bar或4bar或3.5-4bar，出 口压力为1-2bar，具体为1.5bar或2bar或1.5-2bar，料液的循环流量为25L/min-30L/min，具体为25L/min或27L/min或25-27L/min，不可大于30L/min，这是由于循环流量过大会导致料液产生大量的泡沫甚至会溢出。 

所述微滤浓缩步骤所得微滤截留液中，干物质的质量百分含量为17.50％-18.10％，具体为17.8％或17.95％或17.8-17.95％，总蛋白的质量百分含量为15.60％-16.10％，具体为15.9％或16.05％或15.9-16.05％，酪蛋白的质量百分含量为14.20％-15.10％，具体为14.9％或14.97％或14.9％-14.97％。 

所述方法还包括如下步骤： 

在所述微滤浓缩步骤之后，将所得微滤截留液依次进行真空浓缩和干燥； 

所述真空浓缩步骤中，真空度为0.08-0.09MPa，温度为50℃-70℃，具体可为60℃或50℃或50-60℃，这是为了避免温度过高对酪蛋白粉溶解性产生不良影响；浓缩的终点为固形物的质量百分含量为30％～35％； 

所述喷雾干燥步骤中，进口温度为140℃-150℃，进口温度较低，这是为避免进口温度过高导致酪蛋白可溶性降低；出口温度为50℃-60℃，具体可为50℃或54℃或50-54℃，雾化压力为1.5bar-2.5bar，具体可为1.5bar和2bar，雾化压力过低，酪蛋白粉的粒度不均匀，雾化压力过高，粉体粒度过细，入料流量为3-5kg/h，具体可为3.5kg/h或4kg/h或3.5-4kg/h。 

按照上述方法制备得到的酪蛋白粉，及含有该酪蛋白粉的食品，也属于本发明的保护范围。 

所述酪蛋白主要包括α-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白。 

该酪蛋白粉色泽呈白色，风味较淡，颗粒均一，含钙高，溶解性好，具有可溶性，其中蛋白的质量百分含量不低于85％，具体为85.6％-95％或86.1％-95％或85.6-86.1％；酪蛋白的质量百分含量不低于80％，具体为80.8％-81.3％或80.8-96％或81.3％-96％；室温下的溶解度不低于85g，具体为87.8g-89.5g。具体的，所得酪蛋白粉的各项指标如表1所示。 

表1、酪蛋白粉的主要成分含量及各项指标 

本发明使用微滤膜分离的方法实现了对脱脂乳中酪蛋白的分离浓缩与提纯，并使用真空浓缩和低温喷雾干燥技术成功制备了酪蛋白粉，此酪蛋白粉蛋白含量(wt/wt)在85％以上，酪蛋白含量(wt/wt)在80％以上，室温下溶解度大于85g，与酪蛋白酸钠相比酪蛋白的胶束结构未被破坏风味纯正，因此可作为酪蛋白酸钠的替代品广泛应用于食品加工领域中。 

附图说明

图1为膜分离过程中脱脂乳、截留液和渗透液的聚丙烯酰胺凝胶电泳图。 

图2为实施例1中三次微滤所得渗透液，从左到又依次为第一次微滤渗透液、第二次微滤渗透液和第三次微滤渗透液。 

图3为实施例2中三次微滤所得渗透液，从左到又依次为第一次微滤渗透液、第二次微滤渗透液和第三次微滤渗透液。 

图4为实施例1所得酪蛋白粉的实物图。 

具体实施方式

下述实例中所使用的实验方法若无特殊说明，均为常规方法。 

下述实例中所用试剂和材料若无特殊说明，均可从商业途径获得。 

下述实例中所用原料乳购自中国农业大学西校区动物科学学院或北京三元绿荷乳牛养殖场；微滤设备购自凯能高科技工程有限公司(上海)；真空浓缩设备购自上海德大天壹化工设备有限公司；喷雾干燥设备购自GEA工程技术中国有限公司；杀菌机购自上海沃迪科技有限公司；乳脂分离机购自英国armfield公司。 

实施例1、酪蛋白粉的制备 

(1)杀菌：取原料乳50L，原料乳中干物质的质量百分含量为12.54％，酸度18°T，细菌总数4.8万个/mL；将该原料乳于杀菌机中在72℃加热15s后，于58℃进行一段冷却，再于50℃进行二段冷却。 

(2)离心脱脂：将50L步骤1)处理后的原料乳，在温度为49℃，离心转速为15000r/min、入料流速100L/h下进行乳脂离心分离，耗时30min，得到脂肪的质量百分含量为0.07％的脱脂乳48kg。 

(3)三次微滤浓缩：将步骤2)所得脱脂乳全部投入微滤设备中，并通过开启冷凝水将温度稳定在50℃；膜材料选用孔径为300nm的管式陶瓷膜；进口压力为3.5bar，出口压力为1.5bar，截留液循环流速为25L/min； 

将脱脂乳通过微滤浓缩至浓缩倍数为5倍时得到第一次微滤截留液，第一次微滤 结束； 

再一次性加入去离子水14.4kg至加入的水和第一次微滤截留液的总质量占原脱脂乳质量的1/2倍，继续微滤浓缩至浓缩倍数为5倍时得到第二次微滤截留液，第二次微滤结束； 

再一次性加入去离子水14.4kg至加入的水和第二次微滤截留液的总质量占原脱脂乳质量的1/2倍，继续微滤浓缩至浓缩倍数为6倍时，第三次微滤结束，得微滤截留液8kg。 

该微滤截留液中，干物质含量(wt/wt)为17.80％，总蛋白含量(wt/wt)为15.90％，酪蛋白含量(wt/wt)为14.90％。 

将膜分离过程中脱脂乳、截留液和渗透液进行SDS-PAGE，其中电泳支持介质由浓缩胶和分离胶组成，浓缩胶的凝胶浓度为5％，分离胶的凝胶浓度为12％。其中，凝胶浓度均是指凝胶溶液中丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的总质量浓度。 

所用分离胶具体按如下方法配制：由3.3ml蒸馏水、4.0ml质量分数30％的丙烯酰胺溶液、2.5ml1.5M Tris-HCl(pH8.8)、0.1ml质量分数10％的十二烷基磺酸钠溶液、0.1ml质量分数10％的过硫酸铵溶液和4μl四甲基乙二胺溶液先后混合配制而成， 

浓缩胶具体按如下方法配制：由4.1ml蒸馏水、1.0ml质量分数30％的丙烯酰胺溶液、0.75ml1.0M Tris-HCl(pH6.8)，0.06ml质量分数10％的十二烷基磺酸钠溶液、0.06ml质量分数10％的过硫酸铵溶液和6μl四甲基乙二胺溶液先后混合配制而成。 

脱脂乳稀释12倍，截留液稀释30倍，渗透液稀释2倍，分别与5×样品缓冲液以体积比1∶1混合，沸水浴5min，取10μL上样。样品在浓缩胶时电压为80V，待溴酚蓝前沿进入分离胶后，调压为120V，待溴酚蓝下沿距离下缘1cm时结束电泳。电泳结束后，采用1％考马斯亮蓝G250染色，并用脱色液脱色至条带清晰后摄像。 

其中，5×样品缓冲液具体按如下方法配制：量取1M pH6.8的Tris-HCl1.25ml，甘油2.5ml，称取十二烷基磺酸钠SDS固体粉末0.5g，溴酚兰25mg，加入去离子水溶解后定容至5ml。小份(500μl)分装后，于室温保存。使用前将25μl的β-装巯基乙醇加入到每小份中去。加入β-巯基乙醇的上样Buffer可以在室温下保存一个月。 

所得结果如图1所示。图中脱脂乳、截留液和渗透液分别取自该实施例所用脱脂乳、第一次微滤结束时所得微滤截留液和第一次微滤结束时所得渗透液。 

由图1可以看出，与脱脂乳和截留液相比，微滤渗透液中只含有α-乳白蛋白和β-乳球蛋白两种乳清蛋白，不含有任何一种酪蛋白，这一现象充分证明了所用无机膜能够将酪蛋白与乳清蛋白进行分离。 

对步骤3)截留液和渗透液中酪蛋白和乳清蛋白的含量变化进行了动态监测(见表2和表3)，并计算出了三次微滤过程中乳清蛋白的脱除率(见表4)。 

表2、三次微滤过程中截留液蛋白组分百分含量(wt/wt)变化 

注1：结果为三次平行测定结果的均值，采用SAS9.0统计软件用LSD法对每一列数据进行显著性分析(p＜0.05) 

注2：参照GB-5009.5-2010测定总氮，参照GB/T-2008乳与乳制品中非蛋白氮含量的测定方法测定非蛋白氮，参照AOAC2000method.998.05.33.2.64方法测定非酪蛋白氮含量；其中真蛋白＝粗蛋白-非蛋白氮×6.38；酪蛋白＝真蛋白-非酪蛋白氮×6.38；乳清蛋白＝真蛋白-酪蛋白。 

注3：样品阶段1、阶段2、阶段3分别取自第一次微滤、第二次微滤、第三次微滤结束时刻的截留液。 

注4：酪蛋白含量为α-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白的含量之和；乳清蛋白含量为β-乳球蛋白和α-乳白蛋白的含量之和。 

表3、三次微滤过程中渗透液蛋白组分百分含量(wt/wt)变化 

注1：结果为三次平行测定结果的均值，采用SAS9.0统计软件用LSD法对每一列数据进行显著性分析(p＜0.05) 

注2：参照GB-5009.5-2010测定总氮，参照GB/T-2008乳与乳制品中非蛋白氮含量的测定方法测定非蛋白氮，参照AOAC2000method.998.05.33.2.64方法测定非酪蛋白氮含量；其中，真蛋白＝粗蛋白-非蛋白氮×6.38；酪蛋白＝真蛋白-非酪蛋白氮×6.38；乳清蛋白＝真蛋白-酪蛋白。注3：样品阶段1、阶段2、阶段3分别取自第一次微滤、第二次微滤、第三次微滤结束时刻的渗透液。 

表4、三次微滤过程中乳清蛋白脱除率变化 

由表2、表3和表4可以看出三次微滤过程中，酪蛋白全部被截留、乳清蛋白不断发生渗透且渗透液中只含有乳清蛋白，随着微滤次数的增加，酪蛋白的蛋白纯度不断提高，乳清蛋白脱除率也逐步增加。当三次微滤全部结束时，截留液中酪蛋白的蛋白纯度为94.18，乳清蛋白脱除率达98.11％。 

(4)真空浓缩：将步骤3)所得微滤截留液进行真空蒸发浓缩，蒸发浓缩的加热温度为50℃，真空度为0.08MPa，浓缩至固形物含量(wt/wt)为30％时停止浓缩。 

(5)喷雾干燥：将步骤4)所得浓缩液在进口温度150℃，出口温度54℃，雾化压力1.5bar，入料流量3.5kg/h条件下进行喷雾干燥，得到本发明提供的酪蛋白粉。 

该酪蛋白粉的实物图如图4所示。由图可知，该酪蛋白粉的色泽呈白色，颗粒均一。 

此酪蛋白粉中各主要成分含量及各项指标的测定方法及检测结果如表5所示。 

表5、酪蛋白粉的主要成分含量及各项指标 

实施例2、酪蛋白粉的制备 

(1)杀菌：取原料乳100L，原料乳中干物质的质量百分含量为13.01％，酸度18°T，细菌总数4.8万个/mL；将该原料乳于杀菌机中在80℃加热15s后，于58℃进行一段冷却，再于50℃进行二段冷却。 

(2)离心脱脂：将100L步骤1)处理后的原料乳，在温度为45℃、转速为12000r/min、入料流速为90L/h的条件下进行乳脂离心分离，得到脂肪的质量百分含量为0.06％的脱脂乳96kg。 

(3)三次微滤浓缩：将步骤2)所得脱脂乳全部投入微滤设备中，并通过开启冷凝水将料液温度稳定在50℃；膜材料选用孔径为300nm的管式陶瓷膜；进口压力为4bar，出口压力为2bar，截留液循环流速为27L/min； 

将脱脂乳通过微滤浓缩至浓缩倍数为5倍时，第一次微滤结束； 

再一次性加入去离子水28.8kg至加入的水和第一次微滤截留液的总质量占原脱脂乳质量的1/2倍，继续微滤至浓缩倍数为5时，第二次微滤结束； 

再一次性加入去离子水28.8kg至加入的水和第二次微滤截留液的总质量占原脱脂乳质量的1/2倍，继续微滤至浓缩倍数为6时，第三次微滤结束，得微滤截留液16kg； 

该步骤所得微滤截留液中干物质含量(wt/wt)为17.95％，总蛋白含量(wt/wt)为16.05％，酪蛋白含量(wt/wt)为14.97％。 

另外，该过程中对截留液和渗透液中酪蛋白和乳清蛋白的含量变化进行了动态监测(见表6和表7)，并计算出了三次微滤过程中乳清蛋白的脱除率(见表8)。 

表6、三次微滤过程中截留液蛋白组分百分含量(wt/wt)变化 

注1：结果为三次平行测定结果的均值，采用SAS9.0统计软件用LSD法对每一列数据进行显著性分析(p＜0.05) 

注2：参照GB-5009.5-2010测定总氮，参照GB/T-2008乳与乳制品中非蛋白氮含量的测定方法测定非蛋白氮，参照AOAC2000method.998.05.33.2.64方法测定非酪蛋 白氮含量；其中真蛋白＝粗蛋白-非蛋白氮×6.38；酪蛋白＝真蛋白-非酪蛋白氮×6.38；乳清蛋白＝真蛋白-酪蛋白。 

注3：样品阶段1、阶段2、阶段3分别取自第一次微滤、第二次微滤、第三次微滤结束时刻的截留液。 

注4：酪蛋白含量为α-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白的含量之和；乳清蛋白含量为β-乳球蛋白和α-乳白蛋白的含量之和。 

表7、三次微滤过程中渗透液蛋白组分百分含量(wt/wt)变化 

注1：结果为三次平行测定结果的均值，采用SAS9.0统计软件用LSD法对每一列数据进行显著性分析(p＜0.05) 

注2：参照GB-5009.5-2010测定总氮，参照GB/T-2008乳与乳制品中非蛋白氮含量的测定方法测定非蛋白氮，参照AOAC2000method.998.05.33.2.64方法测定非酪蛋白氮含量；其中真蛋白＝粗蛋白-非蛋白氮×6.38；酪蛋白＝真蛋白-非酪蛋白氮×6.38； 

乳清蛋白＝真蛋白-酪蛋白。表8、三次微滤过程中乳清蛋白脱除率变化 

由表6、表7和表8可以看出在三次微滤过程中，酪蛋白全部被截留、乳清蛋白不断发生渗透且渗透液中只含有乳清蛋白，随着微滤次数的不断增加，酪蛋白的蛋白纯度不断提高，乳清蛋白脱除率也逐步增加。当三次微滤全部结束时，截留液中酪蛋白的蛋白纯度为93.74％，乳清蛋白脱除率达92.00％。 

(4)真空浓缩：将步骤3)所得微滤截留液进行真空蒸发浓缩，蒸发浓缩的加热温度为60℃，真空度为0.09MPa，浓缩至固形物含量(wt/wt)为30％时停止浓缩。 

(5)喷雾干燥：将步骤4)所得浓缩液在进口温度140℃，出口温度50℃，雾化压力2bar，入料流量4kg/h条件下进行喷雾干燥，得到本发明提供的酪蛋白粉。 

该酪蛋白粉的实物图如图4所示。由图可知，该酪蛋白粉的色泽呈白色，颗粒均一。 

此酪蛋白粉中各主要成分含量及各项指标的测定方法及检测结果如表9所示。 

表9、酪蛋白粉的主要成分含量及各项指标 

结合实施例1中数据可以发现，经过三次微滤工艺，酪蛋白的蛋白纯度在93％以上，乳清蛋白脱除率在90％以上，因此三次微滤完制备的截留液经蒸发浓缩和喷雾干燥后为酪蛋白粉。 

图2为实施例1中三次微滤所得渗透液，从左到又依次为第一次微滤渗透液、第二次微滤渗透液和第三次微滤渗透液。 

图3为实施例2中三次微滤所得渗透液，从左到又依次为第一次微滤渗透液、第二次微滤渗透液和第三次微滤渗透液。 

由图2和图3可以看出，实施例1和实施例2所得渗透液均澄清透明，这一现象再次证明了渗透液中不含有酪蛋白，酪蛋白被全部截留； 

此外，图2和图3中，渗透液颜色逐渐由青黄色变为无色，这是由料液稀释后渗透液中核黄素含量降低所致。 

Claims (10)

1.一种制备酪蛋白粉的方法，包括如下步骤：对脱脂乳进行微滤浓缩，得到所述酪蛋白粉。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述脱脂乳中，脂肪的质量百分含量小于0.08％；

所述脱脂乳为按照包括如下步骤方法制备而得：将原料乳杀菌后离心。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述原料乳中，干物质的质量百分含量不低于11％，酸度为18-20°T，細菌总数不高于50万个/mL；

所述原料乳杀菌包括：将所述原料乳先在72℃-80℃加热12s-20s后，于58℃进行一段冷却，再于50℃进行二段冷却；

所述离心步骤中，温度为45℃-50℃，转速为6000r/min-15000r/min，具体为15000r/min，入料流速为80L/h-100L/h，具体为100L/h。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述微滤浓缩的次数为三次；

三次所述微滤浓缩步骤具体包括：

a、将所述脱脂乳通过微滤浓缩至浓缩倍数为4-7倍时得到第一次微滤截留液，第一次微滤结束；

b、再一次性加水至第一次微滤截留液和加入水的总质量为所述脱脂乳质量的1/2倍，继续微滤浓缩至浓缩倍数为4-7倍时得到第二次微滤截留液，第二次微滤结束；

c、再一次性加水至第二次微滤截留液和加入水的总质量为所述脱脂乳质量的1/2倍，继续微滤浓缩至浓缩倍数为4-7倍时，第三次微滤结束，得到第三次微滤截留液；

三次所述微滤浓缩步骤更具体包括：

a、将所述脱脂乳通过微滤浓缩至浓缩倍数为5倍时得到第一次微滤截留液，第一次微滤结束；

b、再一次性加水至第一次微滤截留液和加入水的总质量为所述脱脂乳质量的1/2倍，继续微滤浓缩至浓缩倍数为5倍时得到第二次微滤截留液，第二次微滤结束；

c、再一次性加水至第二次微滤截留液和加入水的总质量为所述脱脂乳质量的1/2倍，继续微滤浓缩至浓缩倍数为6倍时，第三次微滤结束，得到第三次微滤截留液。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述三次微滤浓缩步骤中，所用膜的孔径均为200nm-300nm；

所述膜均为陶瓷中空纤维膜或管式陶瓷膜；

料液温度均为45℃-50℃，进口压力均为3-5bar，出口压力均为1-2bar，料液的循环流量均为25L/min-30L/min。

6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：所述微滤浓缩步骤所得微滤截留液中，干物质的质量百分含量为17.50％-18.10％，总蛋白的质量百分含量为15.60％-16.10％，酪蛋白的质量百分含量为14.20％-15.10％。

7.根据权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于：所述方法还包括如下步骤：

在所述微滤浓缩步骤之后，将所得微滤截留液依次进行真空浓缩和干燥；

所述真空浓缩步骤中，真空度为0.08-0.09MPa，温度为50℃-70℃，浓缩的终点为固形物的质量百分含量为30％～35％；

所述干燥为喷雾干燥；

所述喷雾干燥步骤中，进口温度为140℃-150℃，出口温度为50℃-60℃，雾化压力为1.5bar-2.5bar，入料流量为3-5kg/h。

8.权利要求1-7任一所述方法制备得到的酪蛋白粉。

9.根据权利要求8所述的酪蛋白粉，其特征在于：所述酪蛋白粉中，蛋白的质量百分含量不低于85％，酪蛋白的质量百分含量不低于80％，室温下的溶解度不低于85g。

10.含有权利要求8或9所述酪蛋白粉的食品。

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