CN103271022B - 肿腿蜂携带层出镰刀菌防治杨十斑吉丁虫幼虫的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种肿腿蜂携带层出镰刀菌防治杨十斑吉丁虫幼虫的方法，该方法利用白蜡吉丁肿腿蜂携带层出镰刀菌主动传染杨十斑吉丁幼虫，在白蜡吉丁肿腿蜂寄生的同时，增加杨十斑吉丁幼虫感染虫生真菌的机率，由于白蜡吉丁肿腿蜂和虫生病原真菌的协同复合效应，对杨十斑吉丁幼虫的防治有增效作用，提高了杨十斑吉丁幼虫死亡率，对寄主有较强的选择性和专化性，对高等动植物无毒害作用，不污染环境，具有可持续控制作用。该方法合理，可操作性强。解决了杨十斑吉丁防治难度大、防治效果差、农药残留等问题。为杨十斑吉丁幼虫的防治提供了新的途径。
Description
技术领域
本发明涉及一种杨十斑吉丁虫（Melanophila picta Pallas）幼虫防治技术方法，具体涉及白蜡吉丁肿腿蜂Sclerodermus pupariae携带层出镰刀菌Fusarium proliferatum防治杨十斑吉丁虫幼虫的方法。
背景技术
杨十斑吉丁初龄幼虫在树皮与木质部间为害，取食树木的韧皮部组织，随着虫龄的增长逐渐深入，直达形成层，虫粪不外排，造成杨、柳等为害树木死亡，其为隐蔽性生活的特点用常规防治手段很难达到良好的防治效果，危害严重时每株虫口密度可达50-60头,甚至高达百头,被害株率可达到60-90％，严重者造成整片树林死亡,使政府林农投资和苦心经营十几年的林木毁于一旦，影响森林面积的进一步扩大，对新疆防护林体系和生态安全构成威胁。
目前，杨十斑吉丁生物防治方法具有以虫治虫、以菌治虫，不污染环境、维护生态内部平衡、可持续稳定防治的特点。肿腿蜂能够自行寻找、发现并寄生杨十斑吉丁这类隐蔽性危害的害虫。利用天敌微生物防治是生物防治有效手段之一，但在实际的应用中，天敌微生物防治效果受环境因子的影响较大，由于杨十斑吉丁幼虫在树干内危害，喷洒天敌微生物很难直接接触到幼虫虫体，造成防治效果不稳定。
本发明由白蜡吉丁肿腿蜂携带层出镰刀菌，利用肿腿蜂对寄主杨十斑吉丁的靶向性，对杨十斑吉丁幼虫进行虫生真菌的感染，提高杨十斑吉丁幼虫死亡率，提高生物防治效果。
发明内容
本发明目的在于，提供一种肿腿蜂携带层出镰刀菌防治杨十斑吉丁幼虫的方法，该方法利用白蜡吉丁肿腿蜂携带层出镰刀菌主动传染杨十斑吉丁幼虫，在肿腿蜂寄生的同时，增加杨十斑吉丁幼虫感染虫生真菌的机率，由于白蜡吉丁肿腿蜂和虫生病原真菌的协同复合效应，对杨十斑吉丁幼虫的防治有增效作用，提高了杨十斑吉丁幼虫死亡率。对寄主有较强的选择性和专化性，对高等动植物无毒害作用，不污染环境，具有可持续控制作用。该技术方法合理，可操作性强。解决了杨十斑吉丁防治现有方法防治难度大、防治效果差、农药残留等问题，为杨十斑吉丁幼虫的防治提供了新的途径。
本发明所述的一种肿腿蜂携带层出镰刀菌防治杨十斑吉丁幼虫的方法，按下列步骤进行：
a、虫生真菌培养：将层出镰刀菌接种于PDA平板上，温度23-28℃，培养5-7天，将纯培养的菌株接种于15mm×150mm 的PDA试管斜面中，温度23-28℃培养至产生大量分生孢子；
b、肿腿蜂带菌：选取健康活泼的白蜡吉丁肿腿蜂，将白蜡吉丁肿腿蜂放于已产孢的层出镰刀菌试管斜面中，塞好棉塞任其爬行12-24小时；
c、带菌肿腿蜂释放：在杨十斑吉丁虫幼虫尚未化蛹之前，选择晴好天气，风力不大，气温在20-30℃，释放携带层出镰刀菌的白蜡吉丁肿腿蜂，放蜂时，拔掉试管棉塞，将试管斜放在树木根部或将管口套在树木的小枝上，带菌白蜡吉丁肿腿蜂即可自行爬出试管，寻找杨十斑吉丁幼虫。
步骤b放入已产孢子的层出镰刀菌试管中每管白蜡吉丁肿腿蜂数量为20-35头。
本发明所述的白蜡吉丁肿腿蜂Sclerodermus pupariae从中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所生物防治研究室引进；
白蜡吉丁肿腿蜂，属膜翅目Hymenoptera，肿腿蜂科Bethylidae。形态特征：成虫性二型显著，雄性具翅，长约为2.5 mm。雌性部分有翅，长约3.0-4.0 mm，体较雄性大。翅与腹末齐平，触角比体短13节。头黑褐色方形。腹部背面可见7节。前足腿节膨大，各足胫节上有一端距。幼虫蛆型，乳白色，老熟后体长2.5 mm左右，宽0.60 mm左右。茧丝质、长椭圆型，初期为白色，后期为黄褐色。卵长椭圆型，乳白色半透明，一端略大。卵粒长约0.5 mm、宽约0.2mm。
层出镰刀菌 Fusarium proliferatum 菌落圆形, 菌丝体毛絮状, 生长旺盛, 外围一圈菌丝体生长稀疏, 后期中央菌丝体由白色转为紫色。大型分生孢子呈镰刀形或纺锤形, 无色透明, 具2-5个隔膜, 大小19-45μm×20-43μm; 小型分生孢子长卵形、梨形或肾形, 无色透明, 6-13μm×2-5μm。
层出镰刀菌 Fusarium proliferatum分离于自然感病死亡的杨十斑吉丁虫幼虫；
分离方法：将感病的杨十斑吉丁幼虫在无菌的条件下放于70%乙醇中1分钟直到虫体完全浸湿，用镊子取出后放入无菌水中洗涤3遍，再将样本放于稀 NaClO溶液中浸泡 1min，用无菌水再洗涤 3次。放入加有无菌滤纸的培养皿中，加入少量无菌水进行保湿。用无菌的解剖刀将感病部位取下一小块组织，转接到PDA平板上，置于恒温25℃、70%相对湿度的培养箱进行分离培养。纯化后将真菌进行转管、编号、低温保存。
本发明所述方法与现有技术相比，具有以下优点和卓著的效果：
① 本发明与现有防治方法不同，是“寄生性天敌昆虫+虫生真菌”的复合天敌防治方法，借助白蜡吉丁肿腿蜂的主动搜索和寄生能力，有利于层出镰刀菌附着于虫体上致病，利用白蜡吉丁肿腿蜂和虫生真菌的协同复合作用提高杨十斑吉丁幼虫死亡率；
② 层出镰刀菌的孢子散落在白蜡吉丁肿腿蜂搜索寄主途径中，这些散落在微环境中的孢子成为潜在的杨十斑吉丁虫致病因子。
附图说明
图1为本发明白蜡吉丁肿腿蜂图；
图2为本发明释放肿腿蜂携带层出镰刀菌（置于树干基部）；
图3为本发明释放肿腿蜂携带层出镰刀菌（置于树干枝杈上）；
图4为本发明杨十斑吉丁虫幼虫感菌图；
图5为本发明层出镰刀菌PDA培养图。
具体实施方式
实施例1
本发明所述白蜡吉丁肿腿蜂携带层出镰刀菌防治杨十斑吉丁幼虫的方法，在地处新疆克拉玛依市东南的克拉玛依造林减排基地，地理坐标为：东经：84°59′38.56〞，北纬45°28′1.34〞。为高密栽植杨树纯林，95％树种是都是俄罗斯杨，混有榆、胡杨、柳等其他树种，株距为1m，行距为2m。株均虫口密度13-20头，有虫株率75%进行验证，具体步骤如下：
a、虫生真菌培养：层出镰刀菌接种于PDA平板上，温度28℃培养5天，将纯培养的菌株接种于15mm×150mm的PDA试管斜面中，温度28℃培养9天，产生大量分生孢子；
b、肿腿蜂带菌：选取健康活泼的白蜡吉丁肿腿蜂，将白蜡吉丁肿腿蜂放于已产孢的层出镰刀菌试管斜面中，每管白蜡吉丁肿腿蜂数量为20头，塞好棉塞任其爬行24小时；
c、带菌肿腿蜂释放：在杨十斑吉丁幼虫尚未化蛹之前，选择近期无雨，风力不大，气温在30℃的晴好天气，释放携带层出镰刀菌的白蜡吉丁肿腿蜂，放蜂时，拔掉试管棉塞，将试管管口套挂在树木的小枝上，带菌白蜡吉丁肿腿蜂可自行爬出寻找寄主杨十斑吉丁幼虫。
实施例2
本发明所述白蜡吉丁肿腿蜂携带层出镰刀菌防治杨十斑吉丁方法，在地处新疆克拉玛依市东南的克拉玛依造林减排基地，地理坐标为：东经：84°59′38.56〞，北纬45°28′1.34〞，为高密栽植杨树纯林，95％树种是都是俄罗斯杨，混有榆、胡杨、柳等其他树种，株距为1m，行距为2m。株均虫口密度13-20头，有虫株率75%进行验证，具体步骤如下：
a、虫生真菌培养：层出镰刀菌接种于PDA平板上，温度25℃培养6天，将纯培养的菌株接种于15mm×150mm的PDA试管斜面中，温度25℃培养11天，产生大量分生孢子；
b、肿腿蜂带菌：选取健康活泼的白蜡吉丁肿腿蜂，将白蜡吉丁肿腿蜂放于已产孢的层出镰刀菌试管斜面中，每管白蜡吉丁肿腿蜂数量为28头，塞好棉塞任其爬行18小时；
c、带菌肿腿蜂释放：在杨十斑吉丁幼虫尚未化蛹之前，选择近期无雨，风力不大，气温在25℃的晴好天气，释放携带层出镰刀菌的白蜡吉丁肿腿蜂，放蜂时，拔掉试管棉塞，将试管斜放在树木根部，带菌白蜡吉丁肿腿蜂可自行爬出寻找寄主杨十斑吉丁幼虫。
实施例3
本发明所述白蜡吉丁肿腿蜂携带层出镰刀菌防治杨十斑吉丁方法，在地处新疆克拉玛依市东南的克拉玛依造林减排基地，地理坐标为：东经：84°59′38.56〞，北纬45°28′1.34〞，为高密栽植杨树纯林，95％树种是都是俄罗斯杨，混有榆、胡杨、柳等其他树种，株距为1m，行距为2m，株均虫口密度13-20头，有虫株率75%进行验证，具体步骤如下：
a、虫生真菌培养：将层出镰刀菌接种于PDA平板上，温度23℃培养7天，将纯培养的菌株接种于15mm×150mm的PDA试管斜面中，温度23℃培养13天产生大量分生孢子；
b、肿腿蜂带菌：选取健康活泼的白蜡吉丁肿腿蜂，将白蜡吉丁肿腿蜂放于已产孢的层出镰刀菌试管斜面中，每管白蜡吉丁肿腿蜂数量为35头，塞好棉塞任其爬行12小时；
c、带菌肿腿蜂释放：在杨十斑吉丁幼虫尚未化蛹之前，选择近期无雨，风力不大，气温在20℃的晴好天气释放携带层出镰刀菌的白蜡吉丁肿腿蜂，放蜂时，拔掉试管棉塞，将试管斜放在树木根部，带菌白蜡吉丁肿腿蜂可自行爬出寻找寄主杨十斑吉丁幼虫。
通过2011、2012年连续2年防治情况调查:克拉玛依造林减排基地杨十斑吉丁虫为害有虫株率由75%下降到38.2%，白蜡吉丁肿腿蜂携带层出镰刀菌对杨十斑吉丁幼虫致死率可达到39.3%-49.7%，单独释放白蜡吉丁肿腿蜂对杨十斑吉丁幼虫致死率仅为23.7%-37.6%，而单独在林间喷施层出镰刀菌菌丝孢子悬浮液几乎没有杨十斑吉丁幼虫感染，说明白蜡吉丁肿腿蜂携带层出镰刀菌提高了杨十斑吉丁幼虫防治效果。
Claims (1)
1.一种肿腿蜂携带层出镰刀菌防治杨十斑吉丁幼虫的方法，其特征在于按下列步骤进行：
a、虫生真菌培养：将层出镰刀菌Fusarium proliferatum接种于PDA平板上，温度23-28℃，培养5-7天，将纯培养的菌株接种于15mm×150mm 的PDA试管斜面中，温度23-28℃培养至产生大量分生孢子；
b、肿腿蜂带菌：选取健康活泼的白蜡吉丁肿腿蜂，将白蜡吉丁肿腿蜂放于已产孢的层出镰刀菌试管斜面中，每管白蜡吉丁肿腿蜂数量为20-35头，塞好棉塞任其爬行12-24小时；
c、带菌肿腿蜂释放：在杨十斑吉丁虫幼虫尚未化蛹之前，选择晴好天气，风力不大，气温在20-30℃，释放携带层出镰刀菌的白蜡吉丁肿腿蜂，放蜂时，拔掉试管棉塞，将试管斜放在树木根部或将管口套在树木的小枝上，带菌白蜡吉丁肿腿蜂即可自行爬出试管，寻找杨十斑吉丁幼虫。
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