CN103242439A - 一种丝胶的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明适用于生物材料制备领域，提供了一种丝胶的提取方法，所述方法包括：丝绸废水用超滤膜过滤后离心，取上清液；在所述上清液中边搅拌边慢慢加入饱和硫酸铵溶液后，将所述溶液放在磁力搅拌器上搅拌，使蛋白质充分沉淀；离心所述溶液，弃上清液保留沉淀；将所述沉淀物加蒸馏水搅拌后采用固相萃取法分离出的硫酸铵，得到纯的蛋白质溶液；用低温干燥法使所述蛋白质溶液结晶，得到纯的丝胶蛋白粉。本发明安全、高效、节能，所提取蛋白质的生物活性不被破坏，适用于工业化生产。

Description

一种丝胶的提取方法
技术领域
本发明属于生物材料制备领域，尤其涉及一种丝胶的提取方法。
背景技术
蚕丝加工产生的丝绸废水中含有高浓度的丝胶蛋白，其浑浊度和COD含量很高，如不经处理直接排放会严重污染水源，引起周围环境的恶化。
蚕丝中丝胶的含量约占25-30％，而丝胶和丝素是含氮的高分子化合物，同属蛋白质，而蛋白质水解的最终产物是氨基酸。根据研究，组成蛋白质的氨基酸有20多种，而组成丝素和丝胶的氨基酸各有18种，且成份相似，丝胶蛋白这一资源占茧丝资源总量的1/4以上，而丝胶在纺织品涂层、生物材料、医药、化妆品等领域具有广泛的应用前景。
现有的从丝绸废水中提取丝胶的技术主要有：有机溶剂法、冰冻法、化学混凝法和超滤法等。由于丝胶成分的复杂性和不稳定性，以上几种方法均未能地在沉淀和分离环节取得良好的效果，以至于在提取的过程中出现丝胶蛋白的生物活性被破坏、造成的污染无法解决等问题，而且提取率低、成本耗费量大，很难应用于大规模的工业化生产。
发明内容
本发明提供了一种丝胶的提取方法，旨在解决现有技术中丝胶蛋白的生物活性被破坏、造成污染，且提取率低、成本耗费量大的问题。
本发明实施例是这样实现的，一种丝胶的提取方法，所述方法包括下述步骤：
丝绸废水用超滤膜过滤后离心，取上清液；
在所述上清液中边搅拌边慢慢加入饱和硫酸铵溶液后，将所述溶液放在磁力搅拌器上搅拌，使蛋白质充分沉淀；
离心所述溶液，弃上清液保留沉淀；
将所述沉淀物加蒸馏水搅拌后采用固相萃取法分离出的硫酸铵，得到纯的蛋白质溶液；
用低温干燥法使所述蛋白质溶液结晶，得到纯的丝胶蛋白粉。
本发明实施例安全、高效、节能，所提取蛋白质的生物活性不被破坏，适用于工业化生产。
附图说明
图1表示本发明实施例一提供的丝胶提取方法的实现流程图。
图2表示本发明实施例二提供的丝胶提取方法的实现流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例一
图1示出了本发明实施例提供的丝胶提取方法的实现流程，详述如下：
在步骤S101中，将100g丝绸废水用超滤膜过滤后离心，取上清液；
在本发明实施例中，以丝绸废水进行回收提取。
在步骤S102中，在上清液中边搅拌边慢慢加入饱和硫酸铵溶液后，将溶液放在磁力搅拌器上搅拌，使蛋白质充分沉淀；
在本发明实施例中的硫酸铵((NH4)2SO4)在生物学上的用途很多，多用于蛋白纯化工艺方面，因为硫酸铵属于惰性物质，不易与其他生物活性物质发生反应，在纯化过程中能最大程度的保护蛋白活性，另外，硫酸铵的可溶性极好，能形成高盐环境，对于蛋白沉淀与后续的高盐纯化做准备。硫酸铵与蒸馏水以7.67∶10的质量比例搅拌混合，即得到饱和度为100％的硫酸铵溶液(SAS)。
在步骤S103中，离心溶液，弃上清液保留沉淀；
在本发明实施例中，以5000转/min离心40分钟，取上清液。
在步骤S104中，将沉淀物加蒸馏水搅拌后采用固相萃取法分离出的硫酸铵，得到纯的蛋白质溶液；
在本发明实施例中的固相萃取技术是基于液-固相色谱理论，采用选择性吸附、选择性洗脱的方式对样品进行富集、分离、纯化，是一种包括液相和固相的物理萃取过程；也可以将其近似的看作一种简单的色谱过程。SPE是利用选择性吸附与选择性洗脱的液相色谱法分离原理。较常用的方法是使液体样品通过一吸附剂，保留其中被测物质，再选用适当强度溶剂冲去杂质，然后用少量良溶剂洗脱被测物质，从而达到快速分离净化与浓缩的目的。也可选择性吸附干扰杂质，而让被测物质流出；或同时吸附杂质和被测物质，再使用合适的溶剂选择性洗脱被测物质。
在本发明实施例中，在2℃的温度下边搅拌边慢慢加入饱和硫酸铵溶液到上清液中，使其体积比达到1∶1，然后将溶液放在磁力搅拌器上搅8个小时，使蛋白质充分沉淀。蛋白质溶液以5000转/min离心50分钟，弃上清液保留沉淀，沉淀物再加蒸馏水搅拌，使溶液含水量达到70％，然后采用固相萃取法分离出的硫酸铵，得到纯的蛋白质溶液。
在步骤S105中，用低温干燥法使所述蛋白质溶液结晶，得到纯的丝胶蛋白粉。
在本发明实施例中，用低温干燥法使蛋白质溶液结晶，得到丝胶蛋白粉6.8g左右。
将本发明实施例得到的丝胶粉进行氨基酸分析，结果如表1：
成分 毫微克/微升 克/100克 百分含量
谷氨酸 17732.55 0.1065 7.77
天门冬氨酸 42865.15 0.2575 18.79
苏氨酸 17447.20 0.1048 7.65
丝氨酸 56136.50 0.3373 24.61
甘氨酸 20394.40 0.1225 8.94
丙氨酸 12181.05 0.0732 5.34
胱氨酸 1645.68 0.0099 0.72
缬氨酸 11213.55 0.0674 4.92
甲硫氨酸 406.13 0.0024 0.18
亮氨酸 10643.70 0.0639 4.67
异亮氨酸 5225.45 0.0314 2.29
酪氨酸 2626.99 0.0518 1.15
赖氨酸 2312.10 0.0139 1.01
苯丙氨酸 4197.79 0.0252 1.84
氨 4539.01 0.0273 1.99
精氨酸 12607.70 0.0757 5.56
脯氨酸 1378.65 0.0083 0.60
组氨酸 4533.66 0.0272 1.99
总计 228087.23 1.3704 100.00
表1
在本发明实施例中，观察上表可知，天门冬氨酸和丝氨酸在废水提取物中含量大于40％，亲水性氨基酸(赖氨酸、组氨酸、天门冬氨酸、丝氨酸、丝氨酸等)的含量在70％以上，证实提取物为丝胶蛋白。
实施例二
图2表示本发明实施例二提供的丝胶提取方法的实现流程图。
在步骤S201中，将1000Kg丝绸废水用超滤膜过滤后离心，取上清液；
在本发明实施例中，以丝绸废水进行回收提取。
在步骤S202中，在上清液中边搅拌边慢慢加入饱和硫酸铵溶液后，将溶液放在磁力搅拌器上搅拌，使蛋白质充分沉淀；
在步骤S203中，离心溶液，弃上清液保留沉淀；
在本发明实施例中，以5000转/min离心50分钟，取上清液。
在步骤S204中，将沉淀物加蒸馏水搅拌后采用固相萃取法分离出的硫酸铵，得到纯的蛋白质溶液；
在本发明实施例中，在2℃的温度下边搅拌边慢慢加入饱和硫酸铵溶液到上清液中，使其体积比达到1∶1，然后将溶液放在磁力搅拌器上搅6个小时，使蛋白质充分沉淀。蛋白质溶液以5000转/min离心50分钟，弃上清液保留沉淀，沉淀物再加蒸馏水搅拌，使溶液含水量达到70％，然后采用固相萃取法分离出的硫酸铵，得到纯的蛋白质溶液。
在步骤S205中，用低温干燥法使所述蛋白质溶液结晶，得到纯的丝胶蛋白粉。
在本发明实施例中，用低温干燥法使蛋白质溶液结晶，得到丝胶蛋白粉6.7Kg左右。
在本发明实施例中，抽出其中100g进行氨基酸成分分析，结果如表2所示：
成分 毫微克/微升 克/100克 百分含量
天门冬氨酸 42865.13 0.2574 18.79
丝氨酸 56133.50 0.3370 24.60
谷氨酸 17732.60 0.1068 7.78
甘氨酸 20394.40 0.1225 8.94
丙氨酸 12181.05 0.0732 5.34
精氨酸 12607.70 0.0757 5.56
亮氨酸 10643.70 0.0639 4.67
异亮氨酸 5225.45 0.0314 2.29
缬氨酸 11213.55 0.0674 4.92
总计 184294.07 1.1353 83.08
表2
在本发明实施例中，表2数据显示，丝胶各主要成分所占例与实验室结果基本一致，因此本发明方法应用于工业化生产是可行的。
本发明实施例安全、高效、节能，所提取蛋白质的生物活性不被破坏，适用于工业化生产。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种丝胶的提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： 
丝绸废水用超滤膜过滤后离心，取上清液； 
在所述上清液中边搅拌边慢慢加入饱和硫酸铵溶液后，将所述溶液放在磁力搅拌器上搅拌，使蛋白质充分沉淀； 
离心所述溶液，弃上清液保留沉淀； 
将所述沉淀物加蒸馏水搅拌后采用固相萃取法分离出的硫酸铵，得到纯的蛋白质溶液； 
用低温干燥法使所述蛋白质溶液结晶，得到纯的丝胶蛋白粉。 
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述丝绸废水用超滤膜过滤后离心是以5000转/min离心40-50分钟。 
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述加入的饱和硫酸铵溶液与上清液的体积比是1∶1。 
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述将所述溶液放在磁力搅拌器上的搅拌在0-5℃的温度条件下进行。 
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述将所述溶液放在磁力搅拌器上的搅拌时间为6-8个小时。 
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述离心所述溶液，弃上清液保留沉淀是在0-5℃的温度条件下进行。 
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104558136A (zh) * 2014-12-30 2015-04-29 苏州信望膜技术有限公司 一种从缫丝废水中获得丝胶蛋白的方法
CN105131099A (zh) * 2015-08-07 2015-12-09 辽宁大学 一种从柞蚕丝脱胶工业废水中制备丝胶蛋白的方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102584430A (zh) * 2012-01-10 2012-07-18 广西工学院 一种利用废弃茧丝蛋白制造氨基酸鱼塘肥水剂的方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102584430A (zh) * 2012-01-10 2012-07-18 广西工学院 一种利用废弃茧丝蛋白制造氨基酸鱼塘肥水剂的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
M.MONDAL ET AL.: "The silk proteins,sericin and fibroin in silkworm, Bombyx morilinn.,-a review", 《CASPIAN JOURNAL OF ENVIRONMENTAL SCIENCES》, vol. 5, no. 2, 31 December 2007 (2007-12-31), pages 63 - 67 *
李克弯等: "丝绵加工废水中回收提纯丝胶工艺研究", 《丝绸》, no. 8, 20 August 2010 (2010-08-20), pages 26 - 1 *
王璟琳等: "固相萃取技术及其应用", 《长冶学院学报》, vol. 22, no. 5, 15 October 2005 (2005-10-15), pages 21 - 26 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104558136A (zh) * 2014-12-30 2015-04-29 苏州信望膜技术有限公司 一种从缫丝废水中获得丝胶蛋白的方法
CN105131099A (zh) * 2015-08-07 2015-12-09 辽宁大学 一种从柞蚕丝脱胶工业废水中制备丝胶蛋白的方法
CN105131099B (zh) * 2015-08-07 2019-02-19 辽宁大学 一种从柞蚕丝脱胶工业废水中制备丝胶蛋白的方法

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