CN103238514A - 一种桃红令箭荷花杂种的育种方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种桃红令箭荷花杂种的育种方法，采用小花令箭×（粉紫令箭×白花令箭）复合杂交中的三交方式，获得三交杂种；在无菌接种室内，获得三交杂种F1的无菌植株，对三交杂种F1无菌苗进行增殖培养及生根培养，炼苗处理后移栽；对移栽后的三交杂种F1组培苗进行水分及肥料管理，并加强病害防治；对三交杂种F1的后代进行选择与鉴定。本发明通过复合杂交的三交方式获得综合多个亲本优良性状的令箭荷花杂种优良单株；通过杂种组织培养加强了对杂种种子阶段和苗期的选择，并较快增加了杂种后代的繁殖系数；结合扦插繁殖建立了杂种优良单株的无性系；培育优良令箭荷花复合杂交杂种的育种时间缩短2～3年；实用性强，具有较强的推广与应用价值。

Description

一种桃红令箭荷花杂种的育种方法

技术领域

本发明属于花卉遗传育种领域，涉及一种桃红令箭荷花杂种的育种方法。

背景技术

令箭荷花又名令箭、孔雀仙人掌、孔雀兰、红花孔雀，属仙人掌科令箭荷花属，原产墨西哥，是热带雨林中附生类型的多年生多浆类植物。令箭荷花属植物有2个种，其中令箭荷花花型大，花筒短，花被开张翻卷，重瓣或复瓣，花色极为丰富，又具微香，是一种色、姿、香俱佳的优良盆花；同属相近种的小花令箭荷花，花小，着花繁密。令箭荷花喜阳光和通风良好的环境，抗旱性强，不耐寒，宜植于疏松、肥沃和排水良好的偏酸性土壤中。一般供盆栽观赏。

令箭荷花的繁殖以无性繁殖方法中的扦插繁殖为主，也可分株和嫁接繁殖，或者通过组织培养进行快速繁殖。采用组织培养的方法既可获得较高的繁殖系数，还能起到复壮的作用。令箭荷花育种的主要目标是选育出花色更为丰富、花型更为奇特美观、抗逆性更强的品种。令箭荷花新品种选育多用杂交育种方法。复合杂交是指有两个亲本参与的杂交，可使多个亲本优缺点相互弥补，能丰富后代遗传基础，可能选出优点突出或突破性品种。但复合杂交比单交所需年限长，工作量大，所需试验地面积、人力、物力都较多。令箭荷花组织培养和扦插繁殖可建立数量较大的杂种后代无性系，给其杂交育种尤其是复合杂交育种提供了极大的方便。通过杂交手段选育出优良个体后，便可直接通过无性繁殖的方式稳定其遗传特性，并在生产中得到应用，而不需经过多代选择获得纯系后再加以利用。

发明内容

本发明提供了一种桃红令箭荷花杂种的育种方法，旨在解决传统复合杂交育种中所需年限长，工作量大，所需试验地面积、人力、物力都较多的问题。

本发明的目的在于提供一种桃红令箭荷花杂种的育种方法，该桃红令箭荷花杂种的培育方法包括以下步骤：

步骤一，采用小花令箭×（粉紫令箭×白花令箭）复合杂交中的三交方式，选用综合性状优良品种作为杂交的母本，将具有重要目标性状的亲本作为第二次杂交的亲本，获得三交杂种；

步骤二，在无菌接种室内，获得三交杂种F1的无菌植株，对三交杂种F1无菌苗进行增殖培养及生根培养，炼苗处理后移栽；

步骤三，对移栽后的三交杂种F1组培苗进行水分及肥料管理，并加强病害防治；

步骤四，对三交杂种F1的后代进行选择与鉴定。

进一步，在步骤一中，采用小花令箭×（粉紫令箭×白花令箭）三交方式，选用综合性状优良品种作为杂交的母本，将具有重要目标性状的亲本作为第二次杂交的亲本，获得花型大、花色艳丽、着花较密、花形美丽、观赏价值高、适应性强的桃红色令箭荷花杂种的具体实现方法为：

选用令箭荷花属大轮花种、花形为海帽形、花萼深红色、花瓣艳粉色、喉部黄绿色、花丝白色、花柱浅粉色品种粉紫令箭作母本，选用令箭荷花属大轮花种、花形为海帽形、花萼黄绿色、花瓣、花丝和花柱均为白色、喉部黄绿色品种白花令箭作父本进行第一次杂交，得到单交杂种；

将单交杂种播种育苗，F1后代中筛选获得花形为帽罩形、花萼黄色、花瓣、花柱和喉部均为白色、花丝黄绿色的微香型大轮花优良单株黄白令箭；

用令箭荷花属小轮花种、花形为器皿形、着花繁密、花萼和花瓣粉红色、花丝白色、花柱浅粉色、喉部黄绿色的小花令箭作母本，单交杂种F1优良单株黄白令箭作父本进行第二次杂交获得三交杂种。

进一步，在步骤二中，在无菌接种室内，获得三交杂种F1组培苗的实现方法为：

在无菌接种室内的超净工作台上选择三交杂种饱满的种子用0.1%HgCl₂消毒15min，无菌水冲洗3～4次后，接种于培养基MS+BA1.0mg·L^-1+IBA0.25mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+琼脂6.0g·L^-1（pH=5.8）上，先在25℃±2℃下暗培养4周，待种子萌芽后转光照时间14h·d^-1、光照强度2500lx、温度25℃±2℃下培养3周，获得三交杂种F1的无菌植株并编号，一粒种子对应一个编号；

对三交杂种F1无菌苗进行增殖培养的实现方法为：

将建立的无菌三交杂种F1植株，剪去根系留下茎段转接到MS+ZT0.5mg·L^-1+NAA0.2mg·L^-1+水解酪蛋白（CH）500mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+琼脂6.0g·L^-1（pH5.8）培养基中，在光照时间14h·d^-1、光照强度2500lx、温度25℃条件下培养8周；

对三交杂种F1苗进行生根培养的实现方法为：

剪取2cm以上健壮单个的茎段，置于1/2MS+NAA0.5mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+琼脂6.0g·L^-1(pH5.8)培养基中，在光照时间14h·d^-1、光照强度2500lx、温度25℃条件下培养7周，90%以上茎段发育为根系发达的健壮植株；

对生根培养后的三交杂种F1苗进行炼苗移栽的实现方法为：

待三交杂种F1苗生根培养至根长2.0～2.5cm、株高3～4cm的植株时，在无菌培养室内逐步去除瓶膜炼苗7d，准备移栽；

基质、花盆在移栽前2d用800倍多菌灵溶液浸泡10～12h，晾干备用，将生根三交杂种F1组培苗从培养瓶中小心取出，在流水下小心洗去根部培养基，避免损伤根系，小心将植株移栽到盛装珍珠岩:腐叶土（V:V=1:1）混合基质的塑料花盆中，浇透定根水，搭建塑料小拱棚，保持湿度65%～70%、温度25℃±2℃，并注意通风透气，移栽21d后每7d喷1次500～800倍微生物有机液体肥。

进一步，在步骤三中，对移栽后的三交F1组培苗进行水分管理时，以保持基质中性偏干为度；对移栽后的三交杂种F1组培苗进行肥料管理时：春季新茎萌发前可喷施1次0.1%～0.3%的尿素，随后每3周左右喷施0.3%尿素液+0.2%磷酸二氢钾（KH₂PO₄）或0.1%～0.3%有机液体肥，入冬前盆土撒施少量缓效性有机颗粒肥并浇透水，入冬后基本不再施肥并适当控制浇水；

对移栽后的三交杂种F1组培苗进行病害防治时：夏秋高温季节注意通风，发现茎段上有病斑时及时用25%多菌灵可湿性粉剂或甲基托布津800～1000倍液喷施植株，每10天喷施1次，连续喷施2～3次。

进一步，在步骤四，对三交杂种F1的后代进行选择与鉴定的实现方法为：

第一次杂交杂种（单交F1）优良单株选择与无性繁殖：选择获得了花形为帽罩形、花萼黄色、花瓣、花柱和喉部均为白色、花丝黄绿色的微香型大轮花单交F1优良单株黄白令箭，并采用茎段扦插繁殖建立黄白令箭无性系；

第二次杂交杂种（三交F1）优良单株选择与无性繁殖：第二次杂交获得的三交杂种F1，选择饱满的种子为外植体进行离体培养建立无菌植株，并对供试种子逐一编号；对能正常萌芽的三交杂种F1无菌植株通过茎段增殖培养和生根培养建立数量较多的无性系；三交杂种F1组培苗移栽3年后有一株系连续4年开放花形为器皿形、花萼深桃红色、花瓣桃红色、喉部亮黄绿色、花丝和花柱均为浅粉色、着花密度中等、观赏价值高、病虫害少、适应性强的大轮花，且各项性状表现稳定，将此株系命名为桃红令箭；再取其茎段扦插繁殖建立桃红令箭无性系；

三交杂种优株桃红令箭的鉴定：一是通过形态学鉴定，开花后连续4年重点对桃红令箭及其亲本的植株形态、花蕾直径和纵径、花朵直径、花期进行观察记载和测量，并使用英国皇家园艺学会比色卡对花筒、花萼、花瓣、花丝和花柱的色泽进行对比分析；二是通过花粉亚显微形态鉴定，花期采集花粉制样，用扫描电镜观测桃红令箭及其亲本花粉粒大小、外壁纹饰、刺穴大小和密度。

进一步，对三交杂种优株桃红令箭进行鉴定时，桃红令箭的花色偏向于两次杂交中的母本粉紫令箭和小花令箭，但比亲本花色更亮丽；花形与第二次杂交的母本小花令箭相似；花型大小偏向于第一次杂交中的父母本白花令箭和粉紫令箭；着花密度介于第二次杂交的亲本间；花粉粒大小介于大轮花和小轮花亲本间，花粉粒形状及外壁纹饰既有各亲本的共性，即近球形、刺穴纹饰，又有本身的特征。

本发明提供的桃红令箭荷花杂种的育种方法，采用小花令箭×（粉紫令箭×白花令箭）三交方式，选用花型大、花色鲜艳、花形美丽的粉紫令箭作为第一次杂交的母本，将花色艳丽、着花繁密、花形美丽的小花令箭作为第二次杂交母本，获得三交杂种；在无菌接种室内，获得三交杂种F1的无菌植株，对三交杂种F1无菌苗进行增殖培养及生根培养，炼苗处理后移栽；对移栽后的三交杂种F1组培苗进行水分及肥料管理，并加强病害防治；对三交杂种F1的后代进行选择与鉴定，获得花型大、花色艳丽、着花较密、花形美丽、观赏价值高、适应性强的桃红令箭荷花杂种。本发明通过复合杂交的三交方式获得综合多个亲本优良性状的令箭荷花优良单株；通过杂种组织培养加强了对杂种种子阶段和苗期的选择，并较快增加了杂种后代的繁殖系数；结合扦插繁殖建立了杂种优良单株的无性系；培育优良令箭荷花复合杂交杂种的育种时间缩短2～3年；实用性强，具有较强的推广与应用价值。

附图说明

图1是本发明实施例提供的桃红令箭荷花杂种的育种方法的实现流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步的详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定发明。

图1示出了本发明实施例提供的桃红令箭荷花杂种的育种方法的实现流程。

该桃红令箭荷花杂种的育种方法包括以下步骤：

在步骤S101中，采用小花令箭×（粉紫令箭×白花令箭）三交方式，选用综合性状优良品种作为杂交的母本，将具有重要目标性状的亲本作为第二次杂交的亲本，获得三交杂种；

在步骤S102中，在无菌接种室内，获得三交杂种F1的无菌植株，对三交杂种F1无菌苗进行增殖培养及生根培养，炼苗处理后移栽；

在步骤S103中，对移栽后的三交杂种F1组培苗进行水分及肥料管理，并加强病害防治；

在步骤S104中，对三交杂种F1的后代进行选择与鉴定。

在本发明实施例中，在步骤S101中，采用小花令箭×（粉紫令箭×白花令箭）三交方式，选用综合性状优良品种作为杂交的母本，将具有重要目标性状的亲本作为第二次杂交的亲本，获得花型大、花色艳丽、着花较密、花形美丽、观赏价值高、适应性强的桃红色令箭荷花杂种的具体实现方法为：

选用令箭荷花属大轮花种、花形为海帽形、花萼深红色、花瓣艳粉色、喉部黄绿色、花丝白色、花柱浅粉色品种粉紫令箭作母本，选用令箭荷花属大轮花种、花形为海帽形、花萼黄绿色、花瓣、花丝和花柱均为白色、喉部黄绿色品种白花令箭作父本进行第一次杂交，得到单交杂种；

将单交杂种播种育苗，F1后代中筛选获得花形为帽罩形、花萼黄色、花瓣、花柱和喉部均为白色、花丝黄绿色的微香型大轮花优良单株黄白令箭；

用令箭荷花属小轮花种、花形为器皿形、着花繁密、花萼和花瓣粉红色、花丝白色、花柱浅粉色、喉部黄绿色的小花令箭作母本，单交杂种F1优良单株黄白令箭作父本进行第二次杂交获得三交杂种。

4、在本发明实施例中，在步骤S102中，在无菌接种室内，获得三交杂种F1的组培苗的实现方法为：

在无菌接种室内的超净工作台上选择三交杂种饱满的种子用0.1%HgCl₂消毒15min，无菌水冲洗3～4次后，接种于培养基MS+BA1.0mg·L^-1+IBA0.25mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+琼脂6.0g·L^-1（pH=5.8）上，先在25℃±2℃下暗培养4周，待种子萌芽后转光照时间14h·d^-1、光照强度2500lx、温度25℃±2℃下培养3周，获得三交杂种F1的无菌植株并编号，一粒种子对应一个编号；

对三交杂种F1无菌苗进行增殖培养的实现方法为：

将建立的无菌三交杂种F1植株，剪去根系留下茎段转接到MS+ZT0.5mg·L^-1+NAA0.2mg·L^-1+水解酪蛋白（CH）500mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+琼脂6.0g·L^-1（pH5.8）培养基中，在光照时间14h·d^-1、光照强度2500lx、温度25℃条件下培养8周；

对三交杂种F1苗进行生根培养的实现方法为：

剪取2cm以上健壮单个的茎段，置于1/2MS+NAA0.5mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+琼脂6.0g·L^-1(pH5.8)培养基中，在光照时间14h·d^-1、光照强度2500lx、温度25℃条件下培养7周，90%以上茎段发育为根系发达的健壮植株；

对生根培养后的三交杂种F1苗进行炼苗移栽的实现方法为：

待三交杂种F1苗生根培养至根长2.0～2.5cm、株高3～4cm的植株时，在无菌培养室内逐步去除瓶膜炼苗7d，准备移栽；

基质、花盆在移栽前2d用800倍多菌灵溶液浸泡10～12h，晾干备用，将生根三交杂种F1组培苗从培养瓶中小心取出，在流水下小心洗去根部培养基，避免损伤根系，小心将植株移栽到盛装珍珠岩:腐叶土（V:V=1:1）混合基质的塑料花盆中，浇透定根水，搭建塑料小拱棚，保持湿度65%～70%、温度25℃±2℃，并注意通风透气，移栽21d后每7d喷1次500～800倍微生物有机液体肥。

在本发明实施例中，在步骤S103中，对移栽后的三交杂种F1组培苗进行水分管理时，以保持基质中性偏干为度；对移栽后的三交杂种F1组培苗进行肥料管理时：春季新茎萌发前可喷施1次0.1%～0.3%的尿素，随后每3周左右喷施0.3%尿素液+0.2%磷酸二氢钾（KH₂PO₄）或0.1%～0.3%有机液体肥，入冬前盆土撒施少量缓效性有机颗粒肥并浇透水，入冬后基本不再施肥并适当控制浇水；

对移栽后的三交杂种F1组培苗进行病害防治时：夏秋高温季节注意通风，发现茎段上有病斑时及时用25%多菌灵可湿性粉剂或甲基托布津800～1000倍液喷施植株，每10天喷施1次，连续喷施2～3次。

在本发明实施例中，在步骤S104，对三交杂种F1的后代进行选择与鉴定的实现方法为：

第一次杂交杂种（单交F1）优良单株选择与无性繁殖：选择获得了花形为帽罩形、花萼黄色、花瓣、花柱和喉部均为白色、花丝黄绿色的微香型大轮花单交F1优良单株黄白令箭，并采用茎段扦插繁殖建立黄白令箭无性系；

第二次杂交杂种（三交F1）优良单株选择与无性繁殖：第二次杂交获得的三交杂种F1，选择饱满的种子为外植体进行离体培养建立无菌植株，并对供试种子逐一编号；对能正常萌芽的三交杂种F1无菌植株通过茎段增殖培养和生根培养建立数量较多的无性系；三交杂种F1组培苗移栽3年后有一株系连续4年开放花形为器皿形、花萼深桃红色、花瓣桃红色、喉部亮黄绿色、花丝和花柱均为浅粉色、着花密度中等、观赏价值高、病虫害少、适应性强的大轮花，且各项性状表现稳定，将此株系命名为桃红令箭；再取其茎段扦插繁殖建立桃红令箭无性系；

三交杂种优株桃红令箭的鉴定：一是通过形态学鉴定，开花后连续4年重点对桃红令箭及其亲本的植株形态、花蕾直径和纵径、花朵直径、花期进行观察记载和测量，并使用英国皇家园艺学会比色卡对花筒、花萼、花瓣、花丝和花柱的色泽进行对比分析；二是通过花粉亚显微形态鉴定，花期采集花粉制样，用扫描电镜观测桃红令箭及其亲本花粉粒大小、外壁纹饰、刺穴大小和密度。

在本发明实施例中，对三交杂种优株桃红令箭进行鉴定时，桃红令箭的花色偏向于两次杂交中的母本粉紫令箭和小花令箭，但比亲本花色更亮丽；花形与第二次杂交母本小花令箭相似；花型大小偏向于第一次杂交中的父母本白花令箭和粉紫令箭；着花密度介于第二次杂交的亲本间；花粉粒大小介于大轮花和小轮花亲本间，花粉粒形状及外壁纹饰既有各亲本的共性，即近球形、刺穴纹饰，又有本身的特征。

结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。

步骤S101，获得桃红色令箭荷花三交杂种

（1）杂交方式：采用小花令箭×（粉紫令箭×白花令箭）三交方式；

（2）亲本选配原则：将综合性状好的或具有主要育种目标性状的亲本放在最后一次杂交；

（3）杂交技术：首先选用令箭荷花属大轮花种、花形为海帽形、花萼深红色、花瓣艳粉色、喉部黄绿色、花丝白色、花柱浅粉色品种粉紫令箭作母本，选用令箭荷花属大轮花种花形为海帽形、花萼黄绿色、花瓣、花丝和花柱均为白色、喉部黄绿色品种白花令箭作父本进行第一次杂交，得到单交杂种。将单交F1播种育苗，在后代中筛选获得花形为帽罩形、花萼黄色、花瓣、花柱和喉部均为白色、花丝黄绿色的微香型大轮花单交F1优良单株黄白令箭。为培育着花较密、色泽艳丽的令箭荷花新品种，再用令箭荷花属小轮花种、花形为器皿形、着花繁密、花萼和花瓣粉红色、花丝白色、花柱浅粉色、喉部黄绿色的小花令箭作母本、单交杂种优良单株黄白令箭作父本进行第二次杂交获得三交杂种F1。

步骤S102，离体培养三交杂种F1

（1）无菌材料的建立

无菌接种室内，在无菌接种室内的超净工作台上选择三交杂种饱满的种子用0.1%HgCl₂消毒15min，无菌水冲洗3～4次后，接种于培养基MS+BA1.0mg·L^-1+IBA0.25mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+琼脂6.0g·L^-1（pH=5.8）上，先在25℃±2℃下暗培养4周，待种子萌芽后转光照时间14h·d^-1、光照强度2500lx、温度25℃±2℃下培养3周，获得三交杂种F1的无菌植株并编号，一粒种子对应一个编号；

（2）三交杂种F1无菌苗的增殖培养

将建立的无菌三交杂种F1植株，剪去根系留下茎段转接到MS+ZT0.5mg·L^-1+NAA0.2mg·L^-1+水解酪蛋白（CH）500mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+琼脂6.0g·L^-1（pH5.8）培养基中，在光照时间14h·d^-1、光照强度2500lx、温度25℃条件下培养8周可增殖近7倍；

（3）三交杂种F1苗的生根培养

剪取2.0cm以上健壮单个的茎段，置于1/2MS+NAA0.5mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+琼脂6.0g·L^-1(pH5.8)培养基中，在光照时间14h·d^-1、光照强度2500lx、温度25℃条件下培养7周，90%以上茎段发育为根系发达的健壮植株；

（4）炼苗移栽

待生根培养材料长至根长2.0～2.5cm、株高3～4cm的植株时，在无菌培养室内逐步去除瓶膜炼苗7d，准备移栽；

基质、花盆在移栽前2d用800倍多菌灵溶液浸泡10～12h，晾干备用。将生根三交杂种组培苗从培养瓶中小心取出，在流水下小心洗去根部培养基，避免损伤根系，小心将植株移栽到盛装珍珠岩:腐叶土（V:V=1:1）混合基质的塑料花盆中，浇透定根水，搭建塑料小拱棚，保持湿度65%～70%、温度25℃±2℃，并注意通风透气。移栽21d后每7d喷1次500～800倍微生物有机液体肥，2个月后植株成活率可达90.0%以上，并有50.0%以上的植株萌发新梢。移栽4个月后，大部分植株茎段中上部由圆柱形变为扁平状，披针似令箭。

步骤S103，管理三交杂种F1组培苗

（1）离体培养时每粒杂种建立的无菌植物及其增殖、生根后代应编号，对应标注；

（2）离体培养的杂种组培苗移栽成活并萌发新稍后应加强管理。水分管理：以保持基质中性偏干为度。肥料管理：春季新茎萌发前可喷施1次0.1%～0.3%的尿素，随后每3周左右喷施0.3%尿素液+0.2%磷酸二氢钾（KH₂PO₄）或0.1%～0.3%有机液体肥。入冬前盆土撒施少量缓效性有机颗粒肥并浇透水；入冬后基本不再施肥并适当控制浇水；病害防治：夏秋高温季节注意通风，发现茎段上有病斑时及时用25%多菌灵可湿性粉剂或甲基托布津等800～1000倍液喷施植株，每10天喷施1次，连续喷施2～3次。

步骤S104，选择与鉴定三交杂种F1的后代

（1）第一次杂交杂种（单交F1）优良单株选择与无性繁殖：由于令箭荷花为异花授粉植物，因此亲本多为杂合体，故杂交后有大量的分离出现。同时，由于营养系可通过无性繁殖方式将其优良性状固定下来，故在杂交一代进行选择。单交F1后代中，选择获得了花形为帽罩形、花萼黄色、花瓣、花柱和喉部均为白色、花丝黄绿色的微香型大轮花优良单株黄白令箭，并采用茎段扦插繁殖建立黄白令箭无性系；

（2）第二次杂交杂种（三交F1）优良单株选择与无性繁殖：第二次杂交获得的三交杂种F1，选择饱满的种子为外植体进行离体培养建立无菌植株，并对供试种子逐一编号；对能正常萌芽的三交杂种F1无菌植株通过茎段增殖培养和生根培养建立数量较多的无性系；三交杂种F1组培苗移栽3年后有一株系连续4年开放花形为器皿形、花萼深桃红色、花瓣桃红色、喉部亮黄绿色、花丝和花柱均为浅粉色、着花密度中等、观赏价值高、病虫害少、适应性强的大轮花，且各项性状表现稳定，将此株系命名为桃红令箭；再取其茎段扦插繁殖建立桃红令箭无性系；

（3）三交杂种优株桃红令箭的鉴定：一是通过形态学鉴定，开花后连续4年重点对桃红令箭及其亲本的植株形态、花蕾直径和纵径、花朵直径、花期进行观察记载和测量，并使用英国皇家园艺学会比色卡对花筒、花萼、花瓣、花丝和花柱的色泽进行对比分析。二是通过花粉亚显微形态鉴定。花期采集花粉制样，用扫描电镜观测桃红令箭及其亲本花粉粒大小、外壁纹饰、刺穴大小和密度。结果表明桃红令箭的花色偏向于两次杂交中的母本粉紫令箭和小花令箭，但比亲本花色更亮丽；花形与第二次杂交母本小花令箭相似；花型大小偏向于第一次杂交中的父母本白花令箭和粉紫令箭；着花密度介于第二次杂交的亲本间；花粉粒大小介于大轮花和小轮花亲本间，花粉粒形状及外壁纹饰既有各亲本的共性，即近球形、刺穴纹饰，又有本身的特征，应是真杂种。

本发明用令箭荷花属的大轮花种粉紫令箭、白花令箭以及小轮花种小花令箭作为亲本。选育目标为通过多亲本多次杂交，选育花型大、花色艳丽、着花较密、花形美丽、观赏价值高、适应性强的令箭荷花新种质。

本发明实施例提供的桃红令箭荷花杂种的育种方法，采用小花令箭×（粉紫令箭×白花令箭）三交方式，选用花型大、花色鲜艳、花形美丽的粉紫令箭作为第一次杂交的母本，将花色艳丽、着花繁密、花形美丽的小花令箭作为第二次杂交母本，获得三交杂种；在无菌接种室内，获得三交杂种F1的无菌植株，对三交杂种F1无菌苗进行增殖培养及生根培养，炼苗处理后移栽；对移栽后的三交杂种F1组培苗进行水分及肥料管理，并加强病害防治；对三交杂种F1的后代进行选择与鉴定，获得花型大、花色艳丽、着花较密、花形美丽、观赏价值高、适应性强的桃红令箭荷花杂种。本发明通过复合杂交的三交方式获得综合多个亲本优良性状的令箭荷花优良单株；通过杂种组织培养加强了对杂种种子阶段和苗期的选择，并较快增加了杂种后代的繁殖系数；结合扦插繁殖建立了杂种优良单株的无性系；培育优良令箭荷花复合杂交杂种的育种时间缩短2～3年；实用性强，具有较强的推广与应用价值。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种桃红令箭荷花杂种的育种方法，其特征在于，该桃红令箭荷花杂种的培育方法包括以下步骤：

步骤一，采用小花令箭×（粉紫令箭×白花令箭）复合杂交中的三交方式，选用综合性状优良品种作为杂交的母本，将具有重要目标性状的亲本作为第二次杂交的亲本，获得三交杂种；

步骤二，在无菌接种室内，获得三交杂种F1的无菌植株，对三交杂种F1无菌苗进行增殖培养及生根培养，炼苗处理后移栽；

步骤三，对移栽后的三交杂种F1组培苗进行水分及肥料管理，并加强病害防治；

步骤四，对三交杂种F1的后代进行选择与鉴定。

2.如权利要求1所述的桃红令箭荷花杂种的育种方法，其特征在于，在步骤一中，采用小花令箭×（粉紫令箭×白花令箭）三交方式，选用综合性状优良品种作为杂交的母本，将具有目标性状的亲本作为第二次杂交的亲本，具体实现方法为：

选用令箭荷花属大轮花种、花形为海帽形、花萼深红色、花瓣艳粉色、喉部黄绿色、花丝白色、花柱浅粉色品种粉紫令箭作母本，选用令箭荷花属大轮花种、花形为海帽形、花萼黄绿色、花瓣、花丝和花柱均为白色、喉部黄绿色品种白花令箭作父本进行第一次杂交，得到单交杂种；

将单交杂种播种育苗，F1后代中筛选获得花形为帽罩形、花萼黄色、花瓣、花柱和喉部均为白色、花丝黄绿色的微香型大轮花优良单株黄白令箭；

用令箭荷花属小轮花种、花形为器皿形、着花繁密、花萼和花瓣粉红色、花丝白色、花柱浅粉色、喉部黄绿色的小花令箭作母本，单交杂种F1优良单株黄白令箭作父本进行第二次杂交获得三交杂种。

3.如权利要求1所述的桃红令箭荷花杂种的育种方法，其特征在于，在步骤二中，在无菌接种室内，获得三交杂种F1的无菌植株的实现方法为：

在无菌接种室内的超净工作台上选择三交杂种饱满的种子用0.1%HgCl₂消毒15min，无菌水冲洗3～4次后，接种于培养基MS+BA1.0mg·L^-1+IBA0.25mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+琼脂6.0g·L^-1（pH=5.8）上，先在25℃±2℃下暗培养4周，待种子萌芽后转光照时间14h·d^-1、光照强度2500lx、温度25℃±2℃下培养3周，获得三交杂种F1的无菌植株并编号，一粒种子对应一个编号；

对三交杂种F1无菌苗进行增殖培养的实现方法为：

将建立的无菌三交杂种F1植株，剪去根系留下茎段转接到MS+ZT0.5mg·L^-1+NAA0.2mg·L^-1+水解酪蛋白（CH）500mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+琼脂6.0g·L^-1，pH=5.8的培养基中，在光照时间14h·d^-1、光照强度2500lx、温度25℃条件下培养8周；

对三交杂种F1苗进行生根培养的实现方法为：

剪取2cm以上健壮单个的茎段，置于1/2MS+NAA0.5mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+琼脂6.0g·L^-1(pH5.8)培养基中，在光照时间14h·d^-1、光照强度2500lx、温度25℃条件下培养7周，90%以上茎段发育为根系发达的健壮植株；

对生根培养后的三交杂种F1苗进行炼苗移栽的实现方法为：

待三交杂种F1苗生根培养至根长2.0～2.5cm、株高3～4cm的植株时，在无菌培养室内逐步去除瓶膜炼苗7d，准备移栽；

基质、花盆在移栽前2d用800倍多菌灵溶液浸泡10～12h，晾干备用，将生根三交杂种F1组培苗从培养瓶中小心取出，在流水下小心洗去根部培养基，避免损伤根系，小心将植株移栽到盛装珍珠岩、腐叶土混合基质的塑料花盆中，浇透定根水，搭建塑料小拱棚，保持湿度65%～70%、温度25℃±2℃，并注意通风透气，移栽21d后每7d喷1次500～800倍微生物有机液体肥。

4.如权利要求1所述的桃红令箭荷花杂种的育种方法，其特征在于，混合基质中珍珠岩:腐叶土的体积比为V:V=1:1。

5.如权利要求1所述的桃红令箭荷花杂种的育种方法，其特征在于，在步骤三中，对移栽后的三交杂种F1组培苗进行水分管理时，以保持基质中性偏干为度；对移栽后的三交杂种F1组培苗进行肥料管理时：春季新茎萌发前可喷施1次0.1%～0.3%的尿素，随后每3周左右喷施0.3%尿素液+0.2%磷酸二氢钾或0.1%～0.3%有机液体肥，入冬前盆土撒施少量缓效性有机颗粒肥并浇透水，入冬后基本不再施肥并适当控制浇水；

对移栽后的三交杂种F1组培苗进行病害防治时：夏秋高温季节注意通风，发现茎段上有病斑时及时用25%多菌灵可湿性粉剂或甲基托布津800～1000倍液喷施植株，每10天喷施1次，连续喷施2～3次。

6.如权利要求1所述的桃红令箭荷花杂种的育种方法，其特征在于，在步骤四，对三交杂种F1的后代进行选择与鉴定的实现方法为：

第一次杂交杂种优良单株选择与无性繁殖：选择获得了花形为帽罩形、花萼黄色、花瓣、花柱和喉部均为白色、花丝黄绿色的微香型大轮花单交F1优良单株黄白令箭，并采用茎段扦插繁殖建立黄白令箭无性系；

第二次杂交杂种优良单株选择与无性繁殖：第二次杂交获得的三交杂种F1，选择饱满的种子为外植体进行离体培养建立无菌植株，并对供试种子逐一编号；对能正常萌芽的三交杂种F1无菌植株通过茎段增殖培养和生根培养建立数量较多的无性系；三交杂种F1组培苗移栽3年后有一株系连续4年开放花形为器皿形、花萼深桃红色、花瓣桃红色、喉部亮黄绿色、花丝和花柱均为浅粉色、着花密度中等、观赏价值高、病虫害少、适应性强的大轮花，且各项性状表现稳定，将此株系命名为桃红令箭；再取其茎段扦插繁殖建立桃红令箭无性系；

三交杂种优株桃红令箭的鉴定：一是通过形态学鉴定，开花后连续4年重点对桃红令箭及其亲本的植株形态、花蕾直径和纵径、花朵直径、花期进行观察记载和测量，并使用英国皇家园艺学会比色卡对花筒、花萼、花瓣、花丝和花柱的色泽进行对比分析；二是通过花粉亚显微形态鉴定，花期采集花粉制样，用扫描电镜观测桃红令箭及其亲本花粉粒大小、外壁纹饰、刺穴大小和密度。

7.如权利要求6所述的桃红令箭荷花杂种的育种方法，其特征在于，对三交杂种优株桃红令箭进行鉴定时，桃红令箭的花色偏向于两次杂交中的母本粉紫令箭和小花令箭，但比亲本花色更亮丽；花形与第二次杂交母本小花令箭相似；花型大小偏向于第一次杂交中的父母本白花令箭和粉紫令箭；着花密度介于第二次杂交的亲本间；花粉粒大小介于大轮花和小轮花亲本间，花粉粒形状及外壁纹饰既有各亲本的共性，即近球形、刺穴纹饰，又有本身的特征。

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