CN103217518B - 一种血片支架在体外诊断试剂中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种血片支架在体外诊断试剂中的应用,所述方法包括以下步骤:(1)用自动打孔机和血片支架从滤纸片干血斑上打下直径为3~5mm的血片,备用;(2)采用体外诊断试剂检测方法进行检测;其中,所述步骤(1)中的血片支架包括:条状的基片和固接于所述基片正面的多个支柱所述自动打孔机从滤纸片干血斑上打下血片并将血片卡装在所述血片支架的支柱上。与现有方法相比,本发明方法由于血片卡装在所述血片支架的支柱上,血片在微孔反应板的溶液中处于悬浮状态,振荡反应完成后不需要将微孔中的血片甩出,直接将血片支架取出即可,有效缩短了检测所需时间,提高检测结果的稳定性、精密度和灵敏度。
Description
技术领域
本发明涉及一种以滤纸片干血斑为检测样本进行体外诊断试剂检测的方法,尤其是一种采用血片支架在以滤纸片干血斑为样本进行新生儿筛查、产前筛查及其他体外诊断试剂的检测中的应用。
背景技术
目前,利用滤纸片干血斑进行疾病检测已广泛应用于新生儿疾病筛查领域,由于新生儿血量少,不易采集血液提取血清进行检测,而滤纸片干血斑法有着检测需要的采血量少,且标本制备完成后易于保存和运输,有利于标本的分散采集、集中检测等优势,得到很多新生儿筛查检测人员的认可。
但是,在传统利用滤纸片干血斑法进行检测的过程中,需要使用打孔钳将制备好的滤纸片干血斑切成一定大小的血片,将切好的血片放入微孔反应板中的指定微孔内,振荡反应完成后还需要将微孔中的血片甩出。整个实验操作步骤相对繁琐,而且这些操作无法实现全自动,使得这种检测方法仅在新生儿检测项目上得到应用,没有在产前筛查及其他检测领域得到应用。
新生儿疾病筛查是运用当今先进的定量实验室检测手段,在每一例活产新生儿中,发现那些危害严重的先天性代谢遗传疾病,以达到早期诊断,早期治疗,从而避免新生儿重要脏器(脑、肝、肾等)的不可逆损害导致的死亡或小儿生长发育和智能发育的延迟。我国以先天性甲状腺功能减低(CH)和苯丙酮尿症(PKU)作为新生儿疾病筛查的主要病种,部分地区还进行了先天性肾上腺皮质增生症和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症等疾病的筛查。目前我国《母婴保健法》要求至少开展先CH和PKU两项筛查。我国新生儿筛查检测的推荐方法有时间分辨荧光免疫分析法和荧光分析法。
产前筛查是指通过简便、经济和较少创伤的检测方法,从孕妇群中发现某些先天性缺陷和遗传性疾病胎儿的高风险孕妇,以便进一步明确诊断。产前筛查,为产前诊断技术的组成部分,有利于提高产前诊断的效率。根据2010年卫生部发布的《胎儿常见染色体异常和开放性神经管缺陷的产前筛查与诊断技术标准》,产前筛查的目标基本主要是一些常见染色体疾病(如21-三体(唐氏综合症)、18-三体综合症和13-三体综合症以及性染色体的异常,其次为染色体结构异常)和开放性神经管缺陷(包括无脑儿和开放性脊柱裂)。目前,产前筛查中心利用超声、母血清学检测等技术对孕妇进行筛查。常用的标记为有:PAPP-A(妊娠相关血浆蛋白A)、AFP(甲胎蛋白)、HCG(人绒毛膜促性腺激素)、Free-βhCG(人绒毛膜促性腺激素游离β亚基)、μE3(游离雌三醇)、Inh-A(抑制素A)。我国产前筛查血清学检测的推荐方法有酶联免疫法、时间分辨荧光免疫分析法和化学发光法,其中以时间分辨荧光免疫分析法应用最为广泛。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种血片支架在以滤纸片干血斑为检测样本进行体外诊断检测中的应用,采用所述血片支架进行体外诊断检测,可使检测程序简化,实现检测自动化,有效缩短检测所需时间,提高检测结果的稳定性、精密度和灵敏度。
为实现上述目的,本发明采取的技术方案为:一种血片支架在体外诊断试剂中的应用,包括以下步骤:
(1)用自动打孔机和血片支架从滤纸片干血斑上打下直径为3~5mm的血片,备用;
(2)采用体外诊断试剂检测方法进行检测;
其中,所述步骤(1)中的血片支架包括:条状的基片和固接于所述基片正面的多个支柱,所述自动打孔机从滤纸片干血斑上打下血片并将血片卡装在所述血片支架的支柱上。
本发明所述血片支架在体外诊断试剂中的应用,采用自动打孔机和血片支架从滤纸片干血斑上打下校准品、质控品以及样本,所述血片支架的基片正面设多个支柱,所述自动打孔机与血片支架配合使用,自动打孔机从滤纸片干血斑上打下血片并将血片卡装在所述血片支架的支柱上,与现有方法直接将打下的血片放置于微孔反应板中、血片完全浸入微孔中的溶液中相比,本发明所述方法由于血片卡装在所述血片支架的支柱上,血片在微孔反应板的溶液中处于悬浮状态,使用后不需要再将微孔中的血片甩出,直接将血片支架取出即可,克服了现有技术中实验操作步骤繁琐的问题,节省了操作时间,有利于自动化的实现。
作为本发明所述血片支架在体外诊断试剂中的应用的优选实施方式,所述血片支架的支柱末端部为椎体。当所述血片支架的支柱末端部为椎体时,便于将自动打孔机从滤纸片干血斑上打下的血片卡装在所述血片支架的支柱上。
作为本发明所述血片支架在体外诊断试剂中的应用的优选实施方式,所述血片支架还包括设于所述基片背面的齿条、设于所述基片侧面的多个定位部,所述定位部与所述支柱一一对应,所述支柱末端部的锥体与支柱的主体之间设有环形凹槽。当所述血片支架设计为此种结构时,自动打孔机的齿轮驱动本血片支架中的齿条从而推动血片支架带动支柱在自动打孔机中进行步进移动,实现步进式自动走位,自动打孔机自动将血片裁切好,然后逐一卡装在血片支架的支柱所设置的环形凹槽而固定,实现血片卡装的自动化。在卡装的过程中,基片侧面的定位部与自动打孔机对应的部件进行对接从而实现精确定位,保证自动化卡装过程顺利进行,避免了繁琐的手工操作,使血片卡装过程得以简化。
作为本发明所述血片支架在体外诊断试剂中的应用的优选实施方式,所述血片支架的支柱沿基片长度方向沿直线等距排列。
作为本发明所述血片支架在体外诊断试剂中的应用的优选实施方式,所述血片支架的齿条的宽度小于所述基片的宽度。
作为本发明所述血片支架在体外诊断试剂中的应用的优选实施方式,所述血片支架的支柱的主体部分为锥形或圆柱形。
作为本发明所述血片支架在体外诊断试剂中的应用的优选实施方式,所述血片支架的定位部为三角槽或弧形凹槽。
作为本发明所述血片支架在体外诊断试剂中的应用的优选实施方式,所述血片支架的定位部为三角棱或弧形凸棱。
作为本发明所述血片支架在体外诊断试剂中的应用的优选实施方式,所述步骤(2)中的体外诊断试剂检测方法为时间分辨荧光免疫分析法、化学发光法、酶联免疫法或荧光分析法。时间分辨荧光免疫分析法是利用荧光发射体的荧光寿命差别,将其荧光分开的荧光光谱技术,该方法能省时、省工、省试剂和样品,具有经济和高效等突出优点,特别用于多项目的联合筛查实验和一些珍贵样品的检测,是标记免疫学分析的发展方向。荧光分析法是利用某些物质被紫外线光照射后所发生的能反映出该物质特性的荧光,可以进行定性或定量分析的方法。荧光分析是一种先进的分析方法,它比电子探针法、质谱法、光谱法、极谱法等都应用的较广泛和普及,其所用的设备较简单,具有分析灵敏度高、选择性强和使用简便的特点。
本发明所述血片支架在体外诊断试剂中的应用,提供了一种简化检测程序、实现检测自动化的体外诊断检测方法,与现有方法中使用打孔钳将制备好的滤纸片干血斑切成一定大小的血片、然后将切好的血片放入微孔反应板中的指定微孔内相比,不仅减少了因长期手工使用打孔钳打孔带来的手部疼痛甚至手部畸形,减少了手工打孔时,血片飞脱带来的样本脱孔、错调等不稳定因素,而且有效缩短了检测所需时间,提高检测结果的稳定性、精密度和灵敏度,可广泛应用于产前筛查和新生儿疾病筛查的时间分辨荧光免疫分析法的试剂盒和荧光分析法试剂盒,如新生儿促甲状腺激素测定试剂盒和苯丙氨酸测定试剂盒。
附图说明
图1为本发明所述血片支架一种实施例的主视结构示意图。
图2为图1中A的局部结构放大图。
图3为图1所示血片支架带有血片时的俯视结构示意图。
图4为采用本发明所述方法与常规检测方法所测新生儿滤纸片干血斑样本中促甲状腺素浓度值的比较图。
图5为采用本发明所述方法与常规检测方法所测新生儿滤纸片干血斑样本中苯丙氨酸浓度值的比较图。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点,下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
如图1所示,本发明中所述的血片支架,其包括条状(平板状)的基片10和固接于所述基片10正面的多个支柱12。使用时,动打孔机与血片支架配合使用,自动打孔机从滤纸片干血斑上打下血片并将血片卡装在所述血片支架的支柱12上。由于血片卡装在所述血片支架的支柱12上,血片在微孔反应板的溶液中处于悬浮状态,使用后不需要再将微孔中的血片甩出,直接将血片支架取出即可。
较佳地,如附图1所示,所述血片支架的支柱12末端部为椎体15。当所述血片支架的支柱12末端部为椎体15时,便于将自动打孔机从滤纸片干血斑上打下的血片卡装在所述血片支架的支柱12上。
更佳地,如附图1、2和3所示,所述血片支架还包括设于所述基片10背面的齿条18、设于所述基片10侧面的多个定位部22,所述定位部22与所述支柱12一一对应,所述支柱12末端部的锥体15与支柱12的主体之间设有环形凹槽16。其中血片支架的基片10的正面设多个支柱12,支柱12设有环形凹槽16,再通过自动打孔机的齿轮驱动本血片支架中的齿条从而推动血片支架带动支柱12在对应的自动打孔机中进行步进移动,实现步进式自动走位,自动打孔机自动将血片裁切好并对切出来的血片打孔,然后逐一卡装在血片支架的支柱所设置的环形凹槽而固定,实现血片卡装的自动化。在卡装的过程中,基片侧面的定位部22与自动打孔机对应的部件进行对接从而实现精确定位,保证自动化卡装过程顺利进行,避免了繁琐的手工操作,使血片卡装过程得以简化。各个单独的裁切出的滤纸干血片卡在血片支架的支柱处,便于后续对一个血片支架的血片一次性同步进行的实验检验作业,加速检验过程。
血片用支柱12的锥体15插入并将血片卡于环形凹槽16,实现固定,然后通过齿条18在自动打孔机对应的齿轮驱动下前行,从而使干血片打孔后能够逐一卡入步进式前行的血片支架的支柱,卡装过程得以机械化自动化,使血片支架所支撑的各个单独的血片可以同步进行检测检验。环形凹槽16可以使血片固定到支柱12上,不会脱落。
较佳地,所述支柱12沿基片长度方向沿直线等距排列,使得血片可以逐一等距步进式前移推进,每次推进的距离一致,便于设备的运作,使得血片卡装过程自动化得以顺利实现。
较佳地,所述齿条18的宽度小于所述基片的宽度,使得基片的两侧可与自动打孔机进行嵌接以及定位,保证移动顺畅可靠且定位准确到位。
较佳地,所述支柱12的主体部分为锥形或圆柱形,自身圆滑易于卡接血片,该形状的结构体更坚固强度更有保证。
较佳地,所述定位部22为三角槽或弧形凹槽,对应地与楔形或柱形面接触定位,形成精确到位的定位,对血片卡装过程起到定位保证。三角槽与楔形体定位更加精确,但其楔形体容易碰坏或刮花基片,损坏三角槽,扩大三角槽,造成后期定位不精确。弧形凹槽定位精确度较低,但其损坏风险较低,使用寿命稍长。
较佳地,所述定位部22为三角棱或弧形凸棱,对应地三角槽或弧形凹槽设于设备与其相配合进行定位。
本发明中所述血片支架一般通体为硬塑料,所述血片支架的支柱全长一般在10~15毫米,每条基片上设置的支柱一般为8或12根。所述基片背面设有齿条,方便打孔设备带动。所述血片支架制造简单,适合于全自动打孔设备,重量轻,价格低廉,耐腐蚀性能好。
实施例1 新生儿滤纸片干血斑样本中促甲状腺素浓度的测定
本实施例分为实验组和对照组,实验组:新生儿促甲状腺激素测定试剂盒(时间分辨荧光免疫分析法)采用血片支架进行滤纸片干血斑采样及实验反应,对照组:新生儿促甲状腺激素测定试剂盒(时间分辨荧光免疫分析法)直接将干血斑样本打入微孔板孔中反应,两种实验操作过程如下述。
对照组的新生儿促甲状腺激素测定试剂盒采用直接将干血斑样本打入微孔板孔中反应(下称直接打孔法)的操作步骤:
①校准品、质控品、待测样本的打孔:用打孔钳从滤纸片干血斑上直接打下直径为3mm(1/8inch)的校准品、质控品以及样本(打下纸片须被血液浸透),并依次放置于微孔反应板中,每孔一片。控制打孔的一致性,使纸片尽量一致;
②加入铕标记物工作液:向每孔中加入150μl已配好的铕标记物工作液,并加贴封片;
③孵育:微孔反应板条在室温下,先用振荡器快速振荡15分钟,在2~8℃静置过夜,第二天再于室温下缓慢振荡孵育60分钟(此为过夜孵育法);或者用振荡器快速振荡15分钟,然后再室温下缓慢振荡4小时(此为快速孵育法);
注:快速振荡15分钟是为了将血中hTSH从纸片中尽量提取出来;
④洗板:孵育结束后,吸取滤纸片,用洗板机洗涤6次,拍干;
⑤加入增强液:洗涤完成后,向每孔中加入增强液150μl;
⑥检测:微孔反应板条于室温下缓慢振荡5分钟后上机检测,在30分钟内完成检测。
实验组的新生儿促甲状腺激素测定试剂盒采用血片支架将干血斑样本打入微孔板孔中反应(下称血片支架法)的操作步骤:
①校准品、质控品、待测样本的打孔:用自动打孔机和血片支架从滤纸片干血斑上打下并固定直径为3mm(1/8inch)的校准品、质控品以及样本(打下纸片须被血液浸透),备用;
②加入铕标记物工作液:向每孔中加入150μl已配好的铕标记物工作液,依次将打好在血片支架上的校准品、质控品以及样本放入板孔中,盖上盖子或用自封袋装好放在振荡器上;
③孵育:室温下缓慢振荡2小时;
④洗板:孵育结束后,扔掉血片支架,用洗板机洗涤6次,拍干;
⑤加入增强液:洗涤完成后,向每孔中加入增强液150μl;
⑥检测:微孔反应板条于室温下缓慢振荡5分钟后上机检测,在30分钟内完成检测。
实验组和对照组所测新生儿滤纸片干血斑样本中促甲状腺激素浓度值的比较见图4,相关系数为r=0.9992。实验组和对照组的分析性能指标如表1所示:
表1 实验组和对照组的分析性能指标
由图4及表1可知,本实施例中,其中,(1)步骤①所述:“校准品、质控品、待测样本的打孔”,采用血片支架采集滤纸片干血斑样本可通过自动打孔机实现自动化;减少因长期手工使用打孔钳打孔带来的手部疼痛甚至手部畸形;减少手工打孔,纸片飞脱带来的样本脱孔、错调等不稳定因素。(2)步骤③所述:“孵育”,血片支架法较直接打孔法明显大大节约了孵育时间。(3))步骤④所述:“洗板”前,血片支架法只需要提起支柱并弃掉就可以进行下一步的洗板,而直接打孔法需要通过负压吸引器逐孔吸取反应后的滤纸片或通过操作者直接将缓冲液和反应后的滤纸片甩掉后才能进行下一步的洗板。直接打孔法去滤纸片的过程繁复费事,甚至会导致不必要的交叉污染。
实施例2 新生儿滤纸片干血斑样品中苯丙氨酸浓度的测定
本实施例分为实验组和对照组,实验组:苯丙氨酸测定试剂盒(荧光分析法)采用血片支架进行滤纸片干血斑采样及实验反应,对照组:苯丙氨酸测定试剂盒(荧光分析法)直接将干血斑样本打入微孔板孔中反应,两种实验操作过程如下述。
对照组的苯丙氨酸测定试剂盒采用直接将干血斑样本打入微孔板中反应(下称直接打孔法)的操作步骤:
①校准品、质控品、待测样本的打孔:用打孔钳从滤纸片干血斑上直接打下直径为3mm(1/8inch)的校准品、质控品以及样本(打下纸片须被血液浸透),并依次放置于“U”型板的微孔中,每孔一片。控制打孔的一致性,使纸片尽量一致;
②提取:向每孔中加入配制好的Phe提取液80μl,并加贴封片。在室温下,缓慢振荡30分钟;
③转移:从“U”型板中转移50μl Phe提取液至白色反应板对应的孔中;
④孵育:再向白色反应板中加入茚三酮工作液50μl/孔,混匀,放入60℃温育箱中静置孵育60分钟;
⑤加铜试剂:孵育完成后,立即加入200μl/孔冷的铜试剂工作液(刚从冰箱取出,不复温),混匀,静置15分钟后检测;
⑥检测:使用对应的程序进行检测,检测工作在20分钟内完成。(激发波长390nm,接收波长486nm)。
实验组的苯丙氨酸测定试剂盒采用血片支架将干血斑样本打入微孔板孔中反应(下称血片支架法)的操作步骤:
①校准品、质控品、待测样本的打孔:用自动打孔机和血片支架从滤纸片干血斑上打下并固定直径为3mm(1/8inch)的校准品、质控品以及样本(打下纸片须被血液浸透),并依次放置于白色反应板的微孔中,每孔一片,控制打孔的一致性,使纸片尽量一致;
②提取:向每孔中加入配制好的Phe提取液120μl,在室温下缓慢振荡30分钟;振荡结束后,扔掉血片支架;
③孵育:再向白色反应板中加入茚三酮工作液50μl/孔,并加贴封片,于恒温孵育箱中60℃静置孵育60分钟;
④加铜试剂:孵育完成后,立即加入150μl/孔冷的铜试剂工作液(刚从冰箱取出,不复温),混匀,静置15分钟后检测;
⑤检测:使用对应的程序进行检测,检测工作在20分钟内完成,(激发波长390nm,接收波长486nm)。
实验组和对照组所测新生儿滤纸片干血斑样本中苯丙氨酸浓度值的比较见图5,相关系数为r=0.9979。实验组和对照组的分析性能指标如表2所示:
表2 实验组和对照组的分析性能指标
由图5和表2可知,本实施例中,其中(1)步骤①所述:“校准品、质控品、待测样本的打孔”,采用血片支架采集滤纸片干血斑样本可通过自动打孔机实现自动化;减少因长期手工使用打孔钳打孔带来的手部疼痛甚至手部畸形;减少手工打孔,纸片飞脱带来的样本脱孔、错调等不稳定因素。(2)步骤②所述“提取”,血片支架法直接将样本带入白色反应板中,不需要“U”型板微孔板;减少一次性“U”型板微孔板的成本或反复使用导致的非特异反应。(3)步骤③所述:“转移”,血片支架法只需直接丢弃后加入反应试剂,较直接打孔法节约了转移所需时间和转移所用吸嘴。
本发明通过使用血片支架对滤纸片干血斑样本进行取样,结合现有以滤纸片干血斑为检测样本的产前筛查、新生儿疾病筛查等项目,为多项检测提供高效、便捷及稳妥的样本处理方法,简化了检测程序,实现检测自动化,缩短检测时间,提高检测结果的稳定性、精密度和灵敏度,为产前筛查和新生儿疾病筛查的普及奠定了良好的技术基础,对我国的产前筛查和新生儿疾病筛查事业有着重要的意义。
最后所应当说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制,尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (8)
1.一种血片支架在体外诊断试剂中的应用,其特征在于,包括以下步骤:
(1)用自动打孔机和血片支架从滤纸片干血斑上打下直径为3~5mm的血片,备用;
(2)采用体外诊断试剂检测方法进行检测;
其中,所述步骤(1)中的血片支架包括:条状的基片和固接于所述基片正面的多个支柱,所述自动打孔机从滤纸片干血斑上打下血片并将血片卡装在所述血片支架的支柱上;
所述步骤(2)中的体外诊断试剂检测方法为时间分辨荧光免疫分析法、化学发光法、酶联免疫法或荧光分析法。
2.如权利要求1所述的血片支架在体外诊断试剂中的应用,其特征在于,所述血片支架的支柱末端部为椎体。
3.如权利要求2所述的血片支架在体外诊断试剂中的应用,其特征在于,所述血片支架还包括设于所述基片背面的齿条、设于所述基片侧面的多个定位部,所述定位部与所述支柱一一对应,所述支柱末端部的锥体与支柱的主体之间设有环形凹槽。
4.如权利要求1或2或3所述的血片支架在体外诊断试剂中的应用,其特征在于,所述血片支架的支柱沿基片长度方向沿直线等距排列。
5.如权利要求3所述的血片支架在体外诊断试剂中的应用,其特征在于,所述血片支架的齿条的宽度小于所述基片的宽度。
6.如权利要求1或2或3所述的血片支架在体外诊断试剂中的应用,其特征在于,所述血片支架的支柱的主体部分为锥形或圆柱形。
7.如权利要求3所述的血片支架在体外诊断试剂中的应用,其特征在于,所述血片支架的定位部为三角槽或弧形凹槽。
8.如权利要求3所述的血片支架在体外诊断试剂中的应用,其特征在于,所述血片支架的定位部为三角棱或弧形凸棱。
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