CN103118547A - 受保护的α-淀粉酶 - Google Patents

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Abstract

本发明描述一种受保护的α-淀粉酶。造粒和包封技术，其中缓释材料和pH敏感的材料用来保护α-淀粉酶免于在低pH下失活。据发现受保护的α-淀粉酶在酸(pH3.0)中处理长达3小时后高度稳定。当在pH3.0中处理1小时然后用脂肪酶和胰酶在pH7.0中处理2小时以模仿体内环境时，据发现α-淀粉酶完全释放并可测量。此外，受保护的α-淀粉酶表现出比未受保护的α-淀粉酶优越的效力。受保护的α-淀粉酶还证实提高的热稳定性。

Description

受保护的α-淀粉酶
背景技术
本申请要求2010年1月15日提交的美国专利申请系列号61/295,444的优先权，并且其整体援引加入本文。
本发明一般涉及用于提高饲料的可消化性的酶，更具体地，涉及受保护以免被酸或热失活的α-淀粉酶。
动物的主要能量来源日粮淀粉被口腔和小肠中的内源性淀粉酶降解为葡萄糖；正是葡萄糖向动物提供能量。但是，动物，特别是年幼动物中内源性淀粉酶的短缺限制淀粉的利用，并且降低饲料的营养潜力。外源性淀粉酶已使用几十年以提高淀粉的可消化性和提高动物的生长性能。
口腔和小肠是消化淀粉的部位。在pH中性环境中，唾液分泌和胰酶中的淀粉酶将淀粉降解为单糖，然后单糖被小肠吸收和代谢以释放能量。饲料一般快速通过口腔和食道，因此在这里仅发生低水平的淀粉消化。与此相反，其中环境更为水性并且停留时间长得多的小肠是淀粉消化最重要的部位。因此，对于有效的外源性淀粉酶，其需要在小肠中表现良好。为了实现这个，外源性淀粉酶需要抗胃的低pH，从而其在进入小肠时保持活性。
目前没有抗酸的商业的细菌来源的α-淀粉酶，包括RefinedTMα-淀粉酶(Jiangmen China)和(Novozymes)。这些酸敏感的α-淀粉酶在到达发生淀粉降解的小肠之前被胃酸不可逆地失活。开发抗酸α-淀粉酶以最大化外源性α-淀粉酶的效率会填补市场需要。
发明概述
受保护的酶是用控释材料包衣普通α-淀粉酶来制备。在此有两种机制用于受保护的产品。具有一个或多个羧基的聚合物用于包衣。这种材料仅在超过5.0的pH下溶解，因此提供pH-控释。为了以时间依赖性方式控制释放，还使用甲基丙烯酸共聚物和PEG。
本发明要求保护的酶产品使用包封技术以提供对胃的酸性环境的抗性，在胃环境中不释放，并且在肠道环境中释放。
本发明要求保护的酶产品使用三种不同机制以有助于严格控制的释放。
本发明要求保护的酶产品可以用于但不限于提高单胃动物中的可消化性。
本发明要求保护的酶产品可以用于但不限于配合饲料和人膳食补充剂。
本发明要求保护的酶产品可以为了不同目的而以不同比例用于但不限于普通的未包封的α-淀粉酶。
本发明要求保护的酶产品可以用于但不限于家禽、猪和其他单胃动物的日粮以提高淀粉消化。
这种酶产品的优选剂量为250-1000g/吨。在一优选实施方案中，产品的最终施用为每吨成品饲料150-500单位的酶活性。
附图说明
图1是用来制备本发明的酶产品的过程图。
图2是本发明的受保护的α-淀粉酶在酸性环境、中性环境以及存在脂肪酶和胰酶的中性环境中的释放曲线图。
图3是RefinedTMα-淀粉酶与本发明的受保护的α-淀粉酶对从玉米粉释放的还原糖的影响的比较图。
图4是受保护的α-淀粉酶补充剂对肉鸡最终体重的影响的图(A、B、C表示柱内的不同字母不同，p<0.05；a、b表示柱内的不同字母显著不同，p<0.01)。
图5是受保护的α-淀粉酶补充剂对肉鸡不同生长期的ADFI的影响的图。
图6是受保护的α-淀粉酶补充剂对肉鸡不同生长期的ADG的影响的图(A、B表示柱内的不同字母不同，p<0.05；a、b表示柱内的不同字母显著不同，p<0.01)。
图7是受保护的α-淀粉酶补充剂对肉鸡不同生长期的FCR的影响的图(A、B、C表示柱内的不同字母不同，p<0.05；a、b表示柱内的不同字母显著不同，p<0.01)。
图8是受保护的α-淀粉酶补充剂对肉鸡的营养代谢可用性的影响的图(A、B、C表示柱内的不同字母不同，p<0.05；a、b表示柱内的不同字母显著不同，p<0.01)。
具体实施方式
如本文所用，α-淀粉酶包括在降解具有α-键或连接的淀粉中具有酶促活性的任何组合物。本发明的α-淀粉酶核心可以包含赋形剂，包括微晶纤维素、滑石粉、硬脂酸钙、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、聚(乙二醇)、甘油和水。所述核心优选包含50%-85%的α-淀粉酶以及50%-15%的一种或多种赋形剂和在该范围内的任何组合物。
如本文所用，pH敏感型聚合物是改变其特征应答pH变化的聚合物。优选聚合物为肠溶聚合物，其在肠的较少酸性环境中相对更易溶解并且在胃的更为酸性环境中相对较少溶解。
肠溶包衣可以是基本上常规的包衣材料，例如肠溶聚合物，如醋酞纤维素、琥珀酸醋酸纤维素、邻苯二甲酸甲基纤维素、邻苯二甲酸乙基羟基纤维素、聚甲基丙烯酸酯、聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯、聚丁酸乙烯乙酸酯、乙烯乙酸酯-马来酸酐共聚物、苯乙烯-马来酸单酯共聚物、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸酯-甲基丙烯酸-丙烯酸辛酯共聚物等。这些材料可以单独或组合使用，或者连同上述材料以外的其他聚合物使用。所述肠溶包衣还可以包括赋形剂，例如烷基纤维素衍生物如乙基纤维素，交联聚合物如苯乙烯-二乙烯基苯共聚物，具有羟基的多糖如葡聚糖，用双官能交联剂处理的纤维素衍生物如表氯醇、二氯丙醇、1,2-,3,4-二环氧丁烷等，滑石粉，硬脂酸钙，PEG 6000，柠檬酸三乙酯以及水。所述肠溶包衣还可以包括淀粉和/或糊精。
本发明的pH敏感型聚合物包衣优选包含50%-85%的pH敏感型聚合物以及50%-15%的赋形剂，包括在所述范围内的任何组合物。
如本文所用，缓释聚合物包括聚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸共聚物C型、羟甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、亲水性聚合物如纤维素衍生物、乙基纤维素或者脂肪族化合物，包括巴西棕榈蜡。这些材料可以单独或组合使用，或者连同上述材料以外的其他聚合物使用。所述缓释聚合物包衣还可以包括赋形剂，例如烷基纤维素衍生物如乙基纤维素，交联聚合物如苯乙烯-二乙烯基苯共聚物，具有羟基的多糖如葡聚糖，用双官能交联剂处理的纤维素衍生物如表氯醇、二氯丙醇、1,2-,3,4-二环氧丁烷等，滑石粉，硬脂酸钙，PEG 6000，柠檬酸三乙酯以及水。所述缓释聚合物包衣还可以包括淀粉和/或糊精。
本发明的缓释聚合物包衣优选包含50%-85%的缓释聚合物以及50%-15%的赋形剂，包括在所述范围内的任何组合物。
实施例1
如表1所示的配方制备受保护的α-淀粉酶。
表1.受保护的α-淀粉酶的配方
Figure BDA00002015417600041
实施例2
为了开发绕过胃的α-淀粉酶并评价产物，测量4个参数以评价受保护的淀粉酶：1)体外测试的在酸性pH中的抗性和在中性pH中的有效释放，2)两步糖释放测定以模仿胃和小肠中的消化，3)三步糖释放测定以模仿口腔和食道、胃和小肠中的消化，以及4)热稳定性。
材料和方法
酶.获得RefinedTMα-淀粉酶(来自枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)，可获得自Jiangmen,China)和BAN 800TM(来自解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)，可获得自Novozymes)。两种酶均为粉末形式。
受保护的α-淀粉酶包含约30%(w/w)的RefinedTMα-淀粉酶。将α-淀粉酶与聚合物(包括胶粘剂和润滑剂)混合均匀。所有包衣材料均在中国农业部出版的饲料原料的准许列表(positive list)中。将混合物挤成长棒，然后将其切成柱状颗粒。将该柱状颗粒打磨成抛光的圆形微粒，并且用pH敏感型聚合物包封，所述pH敏感型聚合物在低pH中稳定，但是在中性pH中溶解。包衣在微粒周围形成半透膜。消化液可以通过半透膜缓慢进入颗粒，并且因此释放α-淀粉酶。该过程如图1所示。
在这个试验中使用三种
Figure BDA00002015417600051
Dry(Kemin Industries,Inc.)制剂。一种是目前使用RefinedTMα-淀粉酶的
Figure BDA00002015417600052
Dry。第二种制剂通过用等重量的受保护的α-淀粉酶代替Dry中的RefinedTMα-淀粉酶来制备。第三种制剂通过用等酶促活性的受保护的α-淀粉酶代替
Figure BDA00002015417600054
Dry中的RefinedTMα-淀粉酶来制备。这三种制剂的酶促活性如表2所列。
表2.三种
Figure BDA00002015417600055
Dry制剂的酶促活性，U/g
Figure BDA00002015417600056
底物.在这个试验中使用玉米粉和实验室制备的配合饲料。所述配合饲料由50%玉米粉、10%小麦粉和40%大豆粉组成。
溶液.磷酸盐缓冲液用于测定酸抗性、从微粒释放α-淀粉酶的时间进程以及通过酶释放还原糖。通过将200g的NaH2PO4和120g的K2HPO4溶于1000ml去离子水并用去离子水使体积为2L来制备1M磷酸盐缓冲液储备溶液。通过用约800ml去离子水稀释10ml磷酸盐缓冲液储备溶液、用2M的NaOH将pH调整至6.8并用去离子水使体积为1L来制备0.01M磷酸盐缓冲液(pH6.8)。通过用约800ml去离子水稀释50ml磷酸盐缓冲液储备溶液、用2M的HCl将pH调整至2.0并用去离子水使体积为1L来制备0.05M磷酸盐缓冲液(pH2.0)。通过用约400ml去离子水稀释500ml磷酸盐缓冲液储备溶液、用10M的NaOH将pH调整至7.0并用去离子水使体积为1L来制备0.5M磷酸盐缓冲液(pH7.0)。
测定酶促活性.利用Phadebas片作为底物测定α-淀粉酶的活性。Phadebas片是与牛血清白蛋白和缓冲物质混合的交联的不溶性蓝色淀粉聚合物。悬浮于水中之后，淀粉被α淀粉酶水解，产生可溶性蓝色片段。在620nm下测量的所得蓝色溶液的吸光度是α淀粉酶活性的函数。通过基本上如美国专利申请2009/0004327所述的测定来确定β-葡聚糖酶、纤维素酶、蛋白酶、木聚糖酶和果胶酶，该文献整体援引加入本文。
热稳定性.将10克干酶放入各烧杯并用80或90°C的蒸汽处理5或10min。处理之后，将烧杯冷却至室温，并且利用Phadebas片方法测量处理之前和之后的活性。计算残余活性比初始活性的比值以反映酶的热稳定性。
酸稳定性.将10克RefinedTMα-淀粉酶和BAN 800TM在烧杯中用100ml磷酸盐缓冲液(pH3.0)分别处理15和30分钟。将溶液调回至pH7.0，并且利用Phadebas片方法测量残余的和最初的酶促活性。残余活性比最初活性的比值用来反映酸稳定性。
将受保护的α-淀粉酶用磷酸盐缓冲液(pH3.0)处理1小时，然后用脂肪酶(25U/L缓冲液，Leveking Co.)和胰酶(2.5g/L)在pH7.0中处理2小时。利用Phadebas片方法测量缓冲液中的残余活性。通过研磨微粒然后利用Phadebas片方法测试来测量最初的酶促活性。残余活性比最初活性的比值用来反映总效率，所述总效率包含对酸性pH的抗性和中性pH下酶释放的效率。
受保护的a-淀粉酶的释放动力学.通过将10g受保护的α-淀粉酶在100ml磷酸盐缓冲液(pH7.0)中温育3小时来测试受保护的α-淀粉酶在中性pH中的释放动力学。每30分钟采样1毫升，并且测定α-淀粉酶活性。计算释放活性比初始活性的比值。为了测量在中性pH以及脂肪酶和胰酶存在下的释放动力学，条件相同，除了在温育中包括脂肪酶(25U/L)和胰酶(2.5g/L)。
对于用pH3.0的磷酸盐缓冲液处理，将10g受保护的α-淀粉酶在烧杯中与100ml磷酸缓冲液温育0.5、1.0、1.5、2.0、2.5和3.0小时。将未释放的颗粒收集、研磨并测定颗粒中剩余的活性。释放活性比初始活性的比值计算为：
释放比(%)=100X(A-At)/A，
其中A和At分别为初始活性和在t时间颗粒中剩余的活性。
体外测试方法.进行实验以评价在胃和小肠(两步)以及口腔和食道加上胃和小肠(三步)的环境中的α-淀粉酶保护。在第一轮中，利用两步法，用玉米粉和配合饲料作为底物，基于其释放还原糖的能力来评价受保护的α-淀粉酶和未受保护的RefinedTMα-淀粉酶制剂。在第二轮中，利用两步法，用玉米粉和配合饲料作为底物，测试三种
Figure BDA00002015417600071
制剂(表1)的还原糖释放。在第三轮中，采用三步法以测定通过RefinedTMα-淀粉酶和受保护的α-淀粉酶从玉米粉释放还原糖。在所有体外测试中使用的酶剂量均为10g/kg底物，这是
Figure BDA00002015417600072
Dry的推荐剂量的10倍。
在两步法中，将10g底物在50ml的1.5g/L胃蛋白酶溶液(将1.5g胃蛋白酶溶于1L的0.05M磷酸盐缓冲液，pH2.0)中于37°C下温育1h。然后加入100ml的0.5M磷酸缓冲液(pH7.0)，并且在37°C下温育4h。根据标准Somogyi-Nelson测定来确定缓冲液中的还原糖含量。在三步法中，将10g底物在25ml的0.01M磷酸缓冲液(pH6.8)中于37°C下温育5min。然后加入50ml的1.5g/L胃蛋白酶溶液，并且将底物在37°C下温育1h。最后，加入100ml的0.5M磷酸缓冲液(pH7.0)，并且继续温育额外的4h。在温育结束是测量还原糖含量。
数据分析.利用统计软件SAS(v6.12,1996)通过ANOVA分析数据。多重比较测试使用邓肯多重范围测试。当p<0.05时称为显著性，而当p<0.01时称为高显著性。
结果
酸稳定性
RefinedTMα-淀粉酶或BAN 800TM α-淀粉酶的酸稳定性的评价如表3所总结。将两种酶均用低pH处理15或30分钟然后用中性pH处理以测量剩余活性。RefinedTMα-淀粉酶或BAN 800TMα-淀粉酶均不抗酸。当在pH3下处理15分钟时很少至没有α-淀粉酶幸存，表明这两种来源中的α-淀粉酶被低pH不可逆地失活。
表3.通过酸处理的Refined TM α-淀粉酶和BAN 800TM的初始和剩余活性
Figure BDA00002015417600081
为了评价受保护的α-淀粉酶的酸稳定性，必须考虑两个因素。第一个因素是淀粉酶在酸性环境中的保护，而第二个因素是淀粉酶在中性pH中的释放。这两个因素不可以分开，因为在酸性pH中渗漏的酶立即失活。因此，首先我们测试在酸性和中性pH中的释放动力学。与未受保护的淀粉酶相比，受保护的α-淀粉酶在用低pH处理后非常稳定，在3小时中仅释放约15%的淀粉酶(图2)，表明在酸性pH下有非常少的渗漏并且在中性pH下有非常有效的释放。
当用pH7.0磷酸盐缓冲液处理3小时时，大约55%的α-淀粉酶以每半小时10%初始活性的速率平稳地释放入缓冲液(R2=0.98)(图2)。这表明受保护的α-淀粉酶是pH控制和时间控制的，这两者对于通过酸性pH和在中性pH中逐步释放是重要的。仅释放55%的包衣酶的原因是包衣材料包含氢化植物油，其需要脂肪酶以降解。因为在这个测定中不包括胰酶，所以仅有释放效率。因此，进行另一测试，使用相同条件但存在脂肪酶和胰酶。超过60%的酶在1小时中释放并且约85%在3小时中释放(图2)，表明受保护的α-淀粉酶不仅是时间控制和pH控制的，还是脂肪酶/胰酶依赖性的，所有这些对于体内的有效保护和a-淀粉酶在小肠中释放是重要的。
为了检测受保护的α-淀粉酶在与体内条件更接近的条件中的行为，我们测量酸性处理1小时并用脂肪酶和胰酶在中性pH下处理2小时后的总释放活性。与释放曲线的结果一致，当处理1小时时，在pH 3中α-淀粉酶在微粒内受良好保护并且几乎没有α-淀粉酶损失，因为1小时对于小颗粒通过胃并流入肠足够长。此外，几乎所有绕过的淀粉酶在中性pH下与脂肪酶和胰酶温育2小时后释放，虽然其在酸性环境中非常耐受。保留约98%的活性，表明在酸性pH下有非常少的渗漏并且在小肠中有非常有效的释放。
表4.受保护的α-淀粉酶的初始和剩余活性，U/g
Figure BDA00002015417600091
通过两步法对还原糖的释放的影响
用两步法测试的补充α-淀粉酶对还原糖的释放的影响的结果如表4所示。在两种处理下，与空白对照相比，RefinedTMα-淀粉酶显示在还原糖中没有效果(p>0.05)。这个结果与酸稳定性的结果一致，其中RefinedTMα-淀粉酶的所有活性在低pH下均丧失，因此未观察到对从底物产生还原糖的影响。
相比之下，受保护的α-淀粉酶与空白对照相比表现出还原糖释放的增加(表5)。这个结果与酸稳定性的数据一致，其中在低pH下处理时保留所有活性，因此剩余活性可以在中性pH下对底物作用并释放更多还原糖。当与空白对照和RefinedTMα-淀粉酶样品相比时，在玉米和配合饲料底物上利用受保护的α-淀粉酶释放的还原糖的量均显著增加(p<0.01)。当补充等重量或等酶促活性的受保护的α-淀粉酶时均观察到这种显著增加。此外，虽然RefinedTMα-淀粉酶的酶促活性比受保护的α-淀粉酶高4倍，但是其还原糖显著较低。
表5.受保护的α-淀粉酶与Refined TM α-淀粉酶对从玉米粉和混合饲料 释放的还原糖的影响的比较，通过两步法测试，mg/g底物，n=3
Figure BDA00002015417600101
A,B,C行内具有不同字母的平均值显著不同(p<0.05)
a,b,c行内具有不同字母的平均值高度显著不同(p<0.01)。
除了检测单一酶，还检测用受保护的α-淀粉酶代替
Figure BDA00002015417600102
Dry中的RefinedTMα-淀粉酶的效果。使用三种制剂：I)常规
Figure BDA00002015417600103
Dry，II)其中用等重量的受保护的α-淀粉酶代替RefinedTMα-淀粉酶的
Figure BDA00002015417600104
Dry，以及III)其中用等酶促活性的受保护的α-淀粉酶代替RefinedTMα-淀粉酶的
Figure BDA00002015417600105
Dry(参见表1中的酶活性)。结果如表5所总结。与表4中的结果一致，包含受保护的α-淀粉酶的
Figure BDA00002015417600106
II和III制剂与空白对照和
Figure BDA00002015417600107
I制剂相比表现出更高的还原糖释放。此外，
Figure BDA00002015417600108
III释放比II显著更多的还原糖(p<0.01)。但是，
Figure BDA000020154176001010
III与II相比还包含约4倍的受保护的α-淀粉酶，因此
Figure BDA000020154176001012
II制剂中增加的还原糖释放可能是基于活性的剂量效应。此外，当比较由于
Figure BDA000020154176001013
I(表6)和RefinedTMα-淀粉酶(表5)而释放的还原糖的量时，
Figure BDA000020154176001014
I制剂表现出较高水平的还原糖。
Figure BDA000020154176001015
I包含木聚糖酶、β-葡聚糖酶和纤维素酶，并且这些非淀粉多糖酶还可以将非淀粉多糖降解为还原糖。因此，在
Figure BDA000020154176001016
I处理中观察到的还原糖增加可以归因于非淀粉多糖酶和它们之间的协同作用。
表6.不同
Figure BDA000020154176001017
制剂对从玉米粉和混合饲料释放的还原糖的影响 的比较，通过两步法测试，mg/g底物，n=3
A,B,C行内具有不同字母的平均值不同(p<0.05)。
a,b,c行内具有不同字母的平均值显著不同(p<0.01)。
通过三步法对还原糖的释放的影响
已知α-淀粉酶为快速作用的酶；因此，其可能在口腔和食道中消化显著量的淀粉，可能使得不需要酸抗性的α-淀粉酶。因此，设计三步法，其并入两步法，并且还包括温育步骤以模仿口腔和食道以研究RefinedTM和受保护的α-淀粉酶对这两个额外部位的淀粉消化的影响。
通过三步法测试的从玉米底物释放还原糖的结果如图3所示。与其中RefinedTMα-淀粉酶表现出没有效果的两步测定相比，在三步测定中，RefinedTMα-淀粉酶与对照相比表现出显著效果(p<0.01)。这些结果证实RefinedTMα-淀粉酶在模仿口腔和食道的第一步中释放显著量的还原糖。
用等量的受保护的α-淀粉酶活性取代RefinedTMα-淀粉酶的效果与通过两步法测试的结果一致。还原糖显著高于其他三种处理(p<0.01)，表明尽管RefinedTMα-淀粉酶在口腔和食道中降解部分淀粉，受保护的α-淀粉酶比RefinedTMα-淀粉酶更有效。等重量的受保护的α-淀粉酶表现出比RefinedTMα-淀粉酶和等酶促活性的受保护的α-淀粉酶弱的反应(p<0.01)，表明受保护的α-淀粉酶的剂量应当进一步优化。
以前，我们筛选RefinedTMα-淀粉酶并发现其为高度热稳定的淀粉酶，因此其用于目前所有的酶共混物作为α-淀粉酶的来源。RefinedTMα-淀粉酶和受保护的α-淀粉酶的热稳定性在表7中给出。RefinedTMα-淀粉酶在所有处理后保留其活性的>90%，除了在90°C中10min，其中活性为87.3%。当将RefinedTMα-淀粉酶造粒并包封入受保护的α-淀粉酶时，在80°C保持5分钟、90°C保持5分钟和90°C保持10分钟观察到稳定性的统计显著改善(p<0.05)。此外，在最严格的测试条件(90°C保持5和10分钟)下，改善的统计显著性甚至更明显(p<0.01)。
表7.Refined TM α-淀粉酶和受保护的α-淀粉酶的热稳定性，%
Figure BDA00002015417600111
讨论
开发方法以保护酸敏感的α-淀粉酶免于胃的低pH环境，以便允许该酶以完全活性状态到达其主要活性部位小肠。在动物中应用α-淀粉酶的问题之一是缺少可用的酸性α-淀粉酶。在单胃动物中，胃中的pH一般为2.5-3.0。从胃至下消化道，pH值逐步升至7.8。因此理想的外源性消化酶需要抗胃中的低pH。不幸的是，市场中几乎所有的α-淀粉酶均无法满足这个要求。RefinedTMα-淀粉酶和BAN 800TM通过pH 3处理15分钟后完全失活。因此RefinedTMα-淀粉酶或BAN 800TMα-淀粉酶均不会以活性状态到达小肠，并且因此不能在这个部位降解淀粉。受保护的α-淀粉酶在pH3.0下稳定至少3小时，表明其可以安全通过胃并以活性状态到达小肠。
两步法用来模仿胃/小肠环境。在两步法中，单一酶形式或
Figure BDA00002015417600121
Dry形式的受保护的α-淀粉酶与RefinedTMα-淀粉酶相比从测试底物释放显著更多的还原糖(p<0.01)。相比之下，RefinedTMα-淀粉酶在释放还原糖表现出没有效果，这与酸稳定性测试一致。
然而，在动物试验中，RefinedTMα-淀粉酶在动物生产性能中仍表现出一定水平的效力，因此，推测α-淀粉酶是快速作用的酶，并且其在口腔和食道开始作用。为了测试这个，设计三步法以模仿口腔/食道/胃/小肠环境中的淀粉消化。饲料在口腔和食道中仅停留很短的时间，并且口腔和食道的环境并不非常湿润，因此假设在这些部位的淀粉消化量是有限的。但是，RefinedTMα-淀粉酶在三步模型中与两步模型相比表现出增加的还原糖释放，表明α-淀粉酶在口腔和食道中的确降解淀粉。然而，当检测释放的总还原糖时，受保护的α-淀粉酶仍比RefinedTMα-淀粉酶更有效。
α-淀粉酶还表现出改善的热稳定性。该结果可以表明造粒和包封的方法还可以用来保护其他热不稳定的酶。
结论
总的来说，开发方法以保护酸敏感的α-淀粉酶免于在胃的酸性环境中失活。当暴露15分钟时，RefinedTMα-淀粉酶和BAN 800TMα-淀粉酶均被低pH不可逆地失活，而受保护的α-淀粉酶在pH 3.0中稳定至少3小时，并且在脂肪酶/胰酶的存在下于pH7.0中完全释放。在用单一酶形式或
Figure BDA00002015417600131
Dry形式的受保护的α-淀粉酶处理时从玉米和混合饲料释放的还原糖显著高于用RefinedTMα-淀粉酶处理的还原糖(p<0.01)。此外，受保护的α-淀粉酶还证实提高的热稳定性。合在一起，受保护的α-淀粉酶是高度酸稳定和热稳定的，并且可以通过胃和在小肠中释放以提高淀粉的可消化性。
实施例3
在成熟公鸡中进行代谢试验以研究未受保护的
Figure BDA00002015417600132
α-淀粉酶、胃-受保护的α-淀粉酶以及它们的混合物(不同比例)对基于玉米-大豆的日粮的营养物的表观代谢能(AME)和可消化性的影响。
将总计36只重量相近的Arbor Acres(AA)出栏的种公鸡(finishedbreeder rooster)随机分配至6组，每个重复一只鸡，并且每种处理6个重复。将A组用米糠(媒介物)处理并用作空白对照。将B至F组分别用比例为0:100、25:75、50:50、75:25和100:0(活性/活性)的胃-受保护的α-淀粉酶与未受保护的α-淀粉酶的混合物处理。所述制剂的α-淀粉酶活性为300U/g，并且施用剂量为500g/吨成品饲料。实验持续11天，包括7天预实验期和4天正式实验期。测定AME以及干物质的可消化性(DDM)、粗蛋白的可消化性(DCP)和醚提取物的可消化性(DEE)。数据表明补充受保护或未受保护形式的外部α-淀粉酶与空白对照相比显著提高这些参数。此外，包括胃受保护的α-淀粉酶在提高AME、能量利用和干物质可消化性中是重要的。
以前的体外研究表明细菌来源的
Figure BDA00002015417600133
商业α-淀粉酶被胃环境的酸性pH不可逆地失活。保护α-淀粉酶免于酸失活在整个胃肠道中提供比未受保护的Jinzhiα-淀粉酶更好的表现。然而，还发现Jinzhiα-淀粉酶在短时间内于口腔和食道中降解部分淀粉。因此，与单独补充受保护的α-淀粉酶或未受保护的α-淀粉酶相比，补充受保护的α-淀粉酶与未受保护的α-淀粉酶的混合物可以对动物生产性能更有效。
为了测定应用受保护的α-淀粉酶的最佳比例，如以前所述利用成熟种公鸡中的经典生物测定进行代谢试验以研究未受保护的Jinzhiα-淀粉酶、胃-受保护的α-淀粉酶以及它们的不同比例的混合物对基于玉米-大豆的日粮的营养物的表观代谢能(AME)和可消化性的影响。
材料和方法
试验地点.代谢试验和化学分析分别在Heibei Incubation of BreederFarm in Fushun City，Liaoning Province和Liaoning Shihua University，P.R.C.进行。
动物和方法.在这个试验中，将总计36只体重相近的Arbor Acres (AA)出栏的种公鸡(7kg体重)随机分配至6组，即A、B、C、D、E和F组，每个重复一只鸡，并且每种处理6个重复。将A、B、C、D、E和F组分别用α-淀粉酶制剂I、II、III、IV、V和VI以500g/T成品饲料的剂量处理。所述酶制剂在Kemin Agrifoods China的实验室中制备，并且成分如表8所列。试验持续11天，包括7天的预实验期和4天的正式实验期。
α-淀粉酶制剂由Kemin Agrifoods China提供。未受保护的α-淀粉酶(来自枯草芽胞杆菌)购自Jiangmen,China并获得自Kemin AgrifoodsChina仓库。如以前所述，受保护的淀粉酶获得自SkyPharm。这个试验中使用的预混物购自Wellhope Agri-Tech Co.,Ltd(表9)。在这个试验中使用基于玉米-大豆的日粮，其根据种公鸡的营养需要来设计(NutrientRequirements of Poultry:Nineth Revised Edition (NRC 1994))。实验日粮组成和营养水平如表9所列。
表8.实验制剂的信息。
Figure BDA00002015417600142
表9.实验基础日粮组成。
Figure BDA00002015417600143
营养水平
Figure BDA00002015417600151
CP:粗蛋白
EE:醚提取物
试验动物管理.在整个实验期间，使试验鸡单独在代谢笼中，自由获得水和自然光照。在预实验期中，使鸡自由获得实验日粮。在第8天，将所有鸡禁食48h以清空胃肠道中的食物残余。在第10天，将鸡强制喂食70g(体重的约1%)前述实验饲料。利用附件收集盘(accessory collection pan)收集所有排泄物48h。收集后立即小心地去除污染物如羽毛、鳞片和碎片，然后将排泄物在18°C下储存于密封容器中以防止微生物发酵。
测定的参数.如AOAC(Official Methods of Analysis (15th edition),AOAC,Arlington,VA,USA(1990))所述测定日粮和排泄物中能量、干物质、粗蛋白和醚提取物的含量。所有分析均重复进行。将所有排泄物和日粮在80°C下干燥24h。称重之前允许干燥的排泄物和日粮平衡至大气条件。采集代表性样品并研磨以通过0.45-mm筛。表10中的方程式用来计算AME、DDM、DCP、DEE。
表10-用于计算AME、DDM、DCP、DEE的方程式
GE=总能量
Figure BDA00002015417600153
Figure BDA00002015417600161
Figure BDA00002015417600162
数据分析.利用统计软件SAS(v6.12,1996)通过ANOVA分析数据。多重比较测试使用邓肯多重范围测试。当p<0.05时称为显著性，而当p<0.01时称为高显著性。
结果
结果如表11所示。E组的AME为2414Kcal/kg，这在所有处理中是最高的(p<0.01)。B、C、D和F组之间AME没有显著差异(p>0.05)。然而，这4组的AME与空白对照相比在数字上或统计上均提高。能量的可消化性结果表现出与AME结果相同的趋势。
C和D组表现出统计上高于其他组的DDM(P<0.05)。在其他4组之间未观察到DDM的显著差异。所有5个处理组与空白对照(A组)相比均表现出提高的DCP(p<0.05)，并且这5组之间没有显著差异。唯一与对照显著不同的DEE是C组。
表11.Arbor Acres(AA)成熟种公鸡中酶制剂对基于玉米-大豆的日粮的 AME和营养物可消化性(D)的影响。
A,B,C列内的值显著不同(p<0.05)；
a，b,c列内的值高度显著不同(p<0.01)。
讨论
总的来说，补充外部α-淀粉酶与空白对照相比在统计上或数字上提高日粮能量的利用。与未受保护的α-淀粉酶相比，包含受保护的α-淀粉酶表现出明显益处。施用比例为75:25的胃-受保护的α-淀粉酶与未受保护的
Figure BDA00002015417600171
α-淀粉酶的混合物产生最佳AME值和能量利用(p<0.01)。施用比例为25:75和50:50的胃-受保护的α-淀粉酶与未受保护的Jinzhiα-淀粉酶的混合物显著提高干物质的可消化性(p<0.05)。因为AME一般与生长性能更相关，所以具有最高AME值(75:25)的比例表明α-淀粉酶的主要作用部位是小肠而不是口腔和食道。设计这些比例的生长性能试验以证实酶保护的效果。
实施例4
在肉鸡中进行饲养试验以研究胃-受保护的α-淀粉酶对基于玉米-大豆的日粮的生长性能和可消化性的影响。
材料和方法
实验材料和分析方法.用于这个实验的未受保护的α-淀粉酶和未受保护+缓释α-淀粉酶由Kemin Industries(Zhu Hai),Inc.提供。两种产品的α-淀粉酶活性均为300U/g。通过逐步稀释法将α-淀粉酶产品混入配合饲料。
实验动物和饲养管理.这个实验中使用540只健康的平均体重为42.1g的1日龄AA肉鸡，并且使它们住在National Feed Engineering TechnologyResearch Center的家禽试验基地。将实验鸡饲养在装有滴头饮水器(dripperdrinker)的3层网笼(90cm×60cm×40cm)中。鸡自由获得饲料和水。在育雏期的前3天期间将室温保持在33°C，然后降低3°C直至达到24°C。在第1天至第42天期间保持24h光照(15-20lux)和通风。将所有鸡在第7和28天针对新城疫免疫接种；在第14和21天针对法氏囊免疫接种。整个饲养期包括两个阶段：第1天至第21天的起动阶段和第22天至第42天的生长阶段。整个实验根据China Agricultural University发布的动物福利标准进行。
实验设计和实验日粮.将所有实验肉鸡随机分配至3种处理，每种处理6个重复并且每个重复30只鸡。将10只鸡关在一个笼中，并且将每3个笼视为1个重复。实验日粮设计如下：(1)对照组，基础日粮+500g米糠/t日粮；(2)未受保护组(第2组)，基础日粮+500g未受保护的α-淀粉酶/t日粮(300U/gα-淀粉酶活性)；(3)混合物组(第3组)，基础日粮+500g未受保护的α-淀粉酶+缓释α-淀粉酶/t日粮(300U/gα-淀粉酶活性)。玉米-大豆粉基础日粮根据NRC(1994)推荐来配制(参见表12)，并且实验日粮为粉状饲料。
表12基础日粮的组成和营养水平
Figure BDA00002015417600181
1每公斤饲料提供：Zn，60mg；Fe，95mg；Mn，80mg；Cu，10mg；I，0.35mg；Se，0.3mg；VA，10000IU；VD3，2750IU；VE，30IU；VK3，2mg；VB12，12μg；核黄素，6mg；烟酸，40mg；泛酸，12mg；吡哆醇，3mg；生物素，0.2mg；氯化胆碱，800mg。
分析指标和方法.在第21天和第42天测量体重和剩余饲料以计算平均每日增重(ADG)、平均每日饲料摄入量(ADFI)和饲料转化比(FCR)。在实验结束时计算死亡率。
在这个实验中应用粪便和尿的总集。在第23-28天期间，连续5天收集所有粪便和尿，去除羽毛和饲料并测量。混合均匀后，采集新鲜粪便和尿的样品并在65°C下干燥直至温度恒定。然后，在室温下吸水24h后，测量粪便和尿样品。在每天测量饲料的同时，采集100g实验日粮样品。将连续5天的日粮样品混合并分离。将日粮以及粪便和尿的样品通过40目筛研磨用于后来的分析。分别利用100-105°C干燥法、半微量凯氏定氮法、WZR-IA自动热量计和Tecator Soxhlet脂肪提取器法分析干物质(DM)、粗蛋白(CP)、能量和粗脂肪(EE)。
结果和讨论
据报道在家禽的日粮中补充包含淀粉酶的复合酶制剂可以提高每日增重和饲料转化比(Zenella et.al.,1999)，这与这个实验中观察到的淀粉酶对肉鸡生长性能的影响一致(图4)。
结果显示与对照组相比，补充了未受保护的α-淀粉酶或未受保护+缓释α-淀粉酶的组中的21日龄和42日龄肉鸡的体重显著较高(P<0.01)。在第21天，与未受保护的α-淀粉酶相比，混合物表现出较高的性能(p<0.05)，但是两组之间的差异不显著(P>0.05)(图1)。实验日粮对平均每日饲料摄入量(ADFI)、平均每日增重(ADGA)和饲料转化比(FCR)的影响分别如图5、6和7所示。在所有三个组中，不同生长阶段的ADFI均不受影响(P>0.05)；两个实验组中不同生长阶段和整个时期的ADG极高于对照组中的ADG(P<0.05)，但是两个实验组之间的差异不显著(P>0.05)；在所有组中，起始阶段的FCR没有不同(P>0.05)，但是补充了α-淀粉酶的组中生长阶段的FCR显著高于对照组中的FCR(P<0.05)，并且未受保护+缓释α-淀粉酶组中的FCR显著高于未受保护的α-淀粉酶组中的FCR；两个实验组中整个时期的FCR极高于对照组的FCR(P<0.01)，但是两个实验组之间的差异不显著(P>0.05)。
许多研究者建议添加外源性淀粉酶可以补充年幼动物内源性酶分泌的缺乏，与营养物消化相关，因此提高生长性能。Pack和Bedford(1997)通过回顾许多肉鸡实验已报道，当在玉米大豆粉日粮中添加包含淀粉酶的复合酶制剂时，肉鸡的平均死亡率从7.9%下降至6.4%。Jin(2002)总结了在亚洲国家中进行的9个相似实验，表明补充包含淀粉酶的复合酶制剂可以将肉鸡的平均生长率提高3.5%并将FCR提高2.5-13.9%。这个结果与Ritz等人(1995)的发现一致，但是补充外源性淀粉酶对FCR没有影响，这与Gracia等人(2003)的报道一致。单一外源性淀粉酶对肉鸡起始阶段中的生长性能的影响有很大变化。Gracia等人(2003)报道当在玉米基础日粮中添加α-淀粉酶时，7日龄肉鸡的ADG增加9.4%(P<0.05)，并且FCR增加4.2%(P<0.05)。但是，Mahagna等人(1995)发现250μg/kg的淀粉酶补充物或1000μg/kg的蛋白酶复合酶制剂补充物对1-14日龄肉鸡的ADFI和生长性能没有影响。Gracia等人(2003)提出不同实验结果的多样性可能是由于淀粉酶的不同来源(解淀粉芽胞杆菌对枯草芽胞杆菌)、谷物的不同类型(玉米对高粱)、淀粉酶的不同添加活性以及不同饲料形式(颗粒对粉状)等。因此，不同添加水平可能是导致外源性淀粉酶补充物对年幼肉鸡生长性能的影响的差异的主要原因，并且这个推测由增重与添加水平之间的线性关系证实。
两个实验组中的能量和干物质的代谢可用性没有显著不同，但是极高于对照组中的能量和干物质的代谢可用性(P<0.01)；两个实验组中的粗脂肪的代谢可用性极高于对照组中的粗脂肪的代谢可用性(P<0.01)，并且未受保护+缓释α-淀粉酶中的粗脂肪的代谢可用性显著高于未受保护的α-淀粉酶组中的粗脂肪的代谢可用性(P<0.05)(图8)。Zanella等人(1999)报道当在玉米大豆粉日粮中添加复合酶(淀粉酶、蛋白酶和木聚糖酶)时，37日龄肉鸡的回肠淀粉可消化性和粪便淀粉可消化性分别从91.2%增加至93.0%和从98.2%增加至98.5%。Gracia等人(2003)报道α-淀粉酶可以显著提高28日龄肉鸡的有机物、淀粉和总能量的表观可用性。Ritz等人(1995)还发现在玉米-大豆粉日粮中补充包含淀粉酶的复合酶可以提高回肠能量可消化性。可能在生长阶段中肉鸡的消化系统发育良好，因此淀粉酶补充物可以提高淀粉和能量的可消化性，从而提高生长性能。Zenella等人(1999)通过利用二次回归旋转组合设计来研究AA肉鸡日粮中酶制剂的最佳添加水平，并且发现单一酶对增重的影响如下：淀粉酶>脂肪酶>中性蛋白酶。
结论
补充受保护的α-淀粉酶可以大大提高肉鸡的生长性能并增加能量、干物质和粗脂肪的代谢可用性。此外，与未受保护的α-淀粉酶相比，未受保护与缓释α-淀粉酶的混合物对肉鸡中的ADG、FCR和粗脂肪可用性具有更积极的作用。
实施例5
在小猪中进行饲养试验以研究胃-受保护的α-淀粉酶对小猪的生长性能的影响。
材料和方法
实验动物和设计.在这个实验中使用来自20窝(10±1只小猪/窝)的具有相似遗传背景的总计200只健康的7日龄小猪，并且将它们分配至4种处理(A、B、C和D)，每种处理5个重复，每个重复1窝。处理A为对照组，并且实验日粮为基础日粮；处理B中的实验日粮为补充了购自Danisco的
Figure BDA00002015417600211
TP 100的基础日粮；处理C中的实验日粮为补充了KemzymePS的基础日粮。Kemzyme PS中的α-淀粉酶由常规和缓释α-淀粉酶提供。处理D中的实验日粮为补充了Kemzyme Dry的基础日粮。Kemzyme Dry中的α-淀粉酶是常规的。基础日粮包括断奶前饲料(蠕变饲料)和断奶后饲料(起始饲料)。将实验小猪在21日龄断奶，在7日龄至28日龄喂食蠕变饲料并且在28日龄至42日龄喂食断奶后饲料。实验设计如表13所示。
表13实验设计
Figure BDA00002015417600212
基础日粮的组成和营养水平.断奶前期和断奶后期中基础日粮的组成和营养水平如表14和15所示。
表14断奶前饲料的组成和营养水平(％)
Figure BDA00002015417600213
Figure BDA00002015417600221
表15断奶后饲料的组成和营养水平(％)
Figure BDA00002015417600222
Figure BDA00002015417600231
饲养和管理.这个实验在Jiangxi Changqing Animal Husbandry Co.,Ltd.的Jin Xian Central养猪场进行。在农场中按照常规管理饲养实验小猪，在这里当7日龄时测量所有小猪的初始重量。利用特殊的饲料盘用蠕变饲料喂养所有实验小猪，并且所有实验小猪自由获得饲料、饮水和喂奶。将每天的过量饲料晾干并称重，每天计算饲料摄入量并记录。在21日龄时将所有实验小猪断奶，之后移至育儿圈(nursery pen)。在断奶后的前7天期间，仍然向小猪喂食蠕变饲料，并且从28日龄开始喂食断奶后饲料。实验持续时间为35天。
分析指标.当小猪在7日龄、21日龄、28日龄、35日龄和42日龄时将饲料和小猪的重量称重。利用重复作为单位计算平均窝重、每日增重(ADG)、每日饲料摄入量(ADFI)、饲料转化(F/G)和腹泻率。记录每种处理的死亡和淘汰数量，并且在实验结束时计算死亡和淘汰率。
数据分析和统计.利用SPSS 11.0通过方差分析和多重比较来分析所有数据。重复用作单位，并且当P<0.05时认为差异显著。每种处理的所有指标的结果显示为“平均值±SD”。
结果
受保护的饲料添加剂对7-21日龄小猪的生长性能的影响如表16所示。4种处理的ADG和ADFI没有显著不同(P>0.05)，但是处理C和D中的腹泻率显著低于对照组(P<0.05)，其中处理C中的小猪的腹泻率最低。
受保护的添加剂对21-28日龄小猪(断奶后7天内)的生长性能的影响如表17所示。处理B和D中的ADG高于处理A (对照组)中的ADG，但是差异不显著(P>0.05)。处理C中的ADG高于处理A(对照组)和B(P<0.05)。所有4种处理的ADFI和F/G的差异不显著(P>0.05)。处理A和C中的腹泻率没有显著不同，但是处理B和D中的腹泻率显著低于处理A(对照组)(P<0.05)。考虑到向小猪喂食蠕变饲料的整个时期，受保护的添加剂对生长性能没有显著影响。
受保护的添加剂对断奶小猪的生长性能的影响如表18-22所示。表19中显示在28-35日龄期间，处理C中的ADG显著高于处理A、B和D中的ADG(P<0.05)，但是处理A、B和D之间的差异不显著(P>0.05)。所有4种处理之间的ADFI和F/G的差异不显著，但是从表显示的处理C中的ADFI和F/G值高于其他3种处理。处理B、C和D中的小猪的腹泻率显著降低(P<0.05)。
表20显示在35-42日龄期间，当加入Kemin C时ADG显著升高(P<0.05)，并且甚至高于处理B中的ADG。处理D中的ADG有升高趋势(tread)，但是与对照组相比差异不显著。所有4种处理之间的ADFI的差异不显著，并且处理C中的F/G是最佳的，但是所有4种处理之间的差异不显著。当加入酶产品B、C和D时腹泻率显著降低(P<0.05)。
表21显示28-42日龄期间小猪的生长性能的结果与35-42日龄期间的结果相似。处理C中的ADG显著提高(P<0.05)，但是其他3种处理的ADG的差异不显著，并且所有4种处理之间的ADFI和F/G的差异不显著。
考虑到整个实验期，酶产品B、C和D对小猪的生长性能没有显著影响。但是，酶产品B、C和D对提高断奶后小猪的生长性能和降低小猪的腹泻率有积极作用。据显示受保护的饲料添加剂C取得最佳效果。
表16添加剂对断奶前小猪(7-21日龄)的生长性能的影响
Figure BDA00002015417600241
注意：这个表中不包括F/G，因为在哺乳期间饲料摄入量极低。
a，b行内具有不同字母的平均值不同，p<0.05
表17添加剂对断奶后小猪(21-28日龄)的生长性能的影响
Figure BDA00002015417600251
a，b行内具有不同字母的平均值不同，p<0.05
表18：A、B、C和D对小猪(7-28日龄)的生长性能的影响
a，b行内具有不同字母的平均值不同，p<0.05
表19：添加剂对断奶后小猪(28-35日龄)的生长性能的影响
Figure BDA00002015417600253
a,b行内具有不同字母的平均值不同，p<0.05
表20：添加剂对断奶后小猪(35-42日龄)的生长性能的影响
Figure BDA00002015417600261
a，b行内具有不同字母的平均值不同，p<0.05
表21：添加剂对断奶后小猪(28-42日龄)的生长性能的影响
Figure BDA00002015417600262
a，b行内具有不同字母的平均值不同，p<0.05
表22：添加剂对小猪(7-42日龄)的生长性能的影响
Figure BDA00002015417600263
a,b行内具有不同字母的平均值不同，p<0.05
结论
总的来说，所有三种酶在数字上显示出对提高断奶后小猪的生长性能和降低小猪的腹泻率的积极作用。在这三种酶中，Kemzyme PS取得最佳效果。
前文的描述和图表包含本发明的说明性实施方案。前述实施方案和本文所述的方法可以基于本领域技术人员的能力、经验和偏好而变化。仅以一定顺序列出方法的步骤对所述方法的步骤的顺序不构成任何限制。前文的描述和图表仅解释和说明本发明，而本发明并不限于此，除非权利要求这样限制。具有本公开的本领域技术人员能够对其进行修改和变动而不偏离本发明范围。

Claims (10)

1.一种受保护的α-淀粉酶动物饲料成分，其抗α-淀粉酶在单胃动物胃环境中的释放并对α-淀粉酶在肠环境中的释放敏感，其包含：
(a)包含α-淀粉酶的核心；
(b)包含pH敏感型聚合物的第一包衣；以及
(c)包含缓释聚合物的第二包衣。
2.如权利要求1的饲料成分，其中所述α-淀粉酶的核心包含50%-95%的α-淀粉酶和5%-50%的一种或多种赋形剂。
3.如权利要求2的饲料成分，其中所述赋形剂选自以下组中：微晶纤维素、滑石粉、硬脂酸钙、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、PEG 6000、甘油和水。
4.如权利要求1的饲料成分，其中所述pH敏感型聚合物包含50%-85%的肠溶型聚甲基丙烯酸酯和50%-15%的一种或多种赋形剂。
5.如权利要求4的饲料成分，其中所述赋形剂选自以下组中：滑石粉、硬脂酸钙、PEG 6000、柠檬酸三乙酯和水。
6.如权利要求1的饲料成分，其中所述缓释聚合物包含50%-85%的胃崩解型聚甲基丙烯酸酯和50%-15%的一种或多种赋形剂。
7.如权利要求6的饲料成分，其中所述赋形剂选自以下组中：滑石粉、硬脂酸钙、PEG 6000、羧甲基纤维素钠、羟丙甲纤维素、柠檬酸三乙酯和水。
8.一种动物饲料成分组合物，其包含如权利要求1的动物饲料成分与未受保护的α-淀粉酶的混合物。
9.如权利要求8的动物饲料成分，其中所述未受保护的α-淀粉酶占所述组合物的0.1%-20%。
10.一种改善单胃动物的日粮淀粉消化的方法，所述方法包括向动物喂食包含淀粉的饲料以及如权利要求1的动物饲料成分。
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