CN103110939A - 诱导肿瘤特异性免疫的疫苗及其应用 - Google Patents
诱导肿瘤特异性免疫的疫苗及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103110939A CN103110939A CN2012104065538A CN201210406553A CN103110939A CN 103110939 A CN103110939 A CN 103110939A CN 2012104065538 A CN2012104065538 A CN 2012104065538A CN 201210406553 A CN201210406553 A CN 201210406553A CN 103110939 A CN103110939 A CN 103110939A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tumor
- vaccine
- adenovirus
- vaccinia virus
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 195
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 73
- 230000036039 immunity Effects 0.000 title claims abstract description 38
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims description 13
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims abstract description 86
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims abstract description 84
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 28
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 23
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 21
- 241001135569 Human adenovirus 5 Species 0.000 claims abstract description 8
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 37
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 36
- 229940030156 cell vaccine Drugs 0.000 claims description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 9
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 8
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 8
- 101150035509 N1L gene Proteins 0.000 claims description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 4
- 102100036846 C-C motif chemokine 21 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100020715 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Human genes 0.000 claims description 2
- 101710162577 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Proteins 0.000 claims description 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 2
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 claims description 2
- 101000713085 Homo sapiens C-C motif chemokine 21 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000853009 Homo sapiens Interleukin-24 Proteins 0.000 claims description 2
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 claims description 2
- 102000004556 Interleukin-15 Receptors Human genes 0.000 claims description 2
- 108010017535 Interleukin-15 Receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100030704 Interleukin-21 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010065637 Interleukin-23 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000013264 Interleukin-23 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100036671 Interleukin-24 Human genes 0.000 claims description 2
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 claims description 2
- 101150003725 TK gene Proteins 0.000 claims description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 2
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 claims description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 22
- 230000007774 longterm Effects 0.000 abstract description 8
- 239000013598 vector Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000174 oncolytic effect Effects 0.000 abstract 3
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 abstract 1
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 abstract 1
- 229940083538 smallpox vaccine Drugs 0.000 abstract 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 30
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 30
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 21
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 16
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 14
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 13
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 10
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 8
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 8
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 8
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 7
- 230000003263 anti-adenoviral effect Effects 0.000 description 7
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 7
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 7
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 7
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 6
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 6
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 6
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 208000010370 Adenoviridae Infections Diseases 0.000 description 5
- 206010060931 Adenovirus infection Diseases 0.000 description 5
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 5
- 208000011589 adenoviridae infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 4
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 4
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 4
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 3
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 229940124856 vaccine component Drugs 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 2
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 101710114676 E1B 55 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000700662 Fowlpox virus Species 0.000 description 1
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 206010062049 Lymphocytic infiltration Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 240000002853 Nelumbo nucifera Species 0.000 description 1
- 235000006508 Nelumbo nucifera Nutrition 0.000 description 1
- 235000006510 Nelumbo pentapetala Nutrition 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 208000001203 Smallpox Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 241000870995 Variola Species 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 229940021704 adenovirus vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229940029030 dendritic cell vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000013427 histology analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 229940032219 immunotherapy vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 229940023143 protein vaccine Drugs 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 201000010174 renal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012109 statistical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 229940124954 vaccinia virus vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/235—Adenoviridae
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K2039/55527—Interleukins
- A61K2039/55538—IL-12
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
- A61K35/761—Adenovirus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10111—Atadenovirus, e.g. ovine adenovirus D
- C12N2710/10132—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10111—Atadenovirus, e.g. ovine adenovirus D
- C12N2710/10134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
- C12N2710/24141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/24143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种由腺病毒和痘苗病毒载体组成的疫苗及其在治疗肿瘤上的应用，该疫苗包括溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒，两种病毒按先后序贯使用，其中溶肿瘤腺病毒为复制性人5型腺病毒，痘苗病毒为用于天花疫苗的痘苗病毒。本发明将溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒序贯联合制成疫苗，能提高其抗肿瘤活性，比反向联合或单独病毒作用能产生更强的细胞免疫反应，使用效果更佳，表现出长期的肿瘤特异性免疫。本发明的肿瘤疫苗能将肿瘤根除，并产生长期的肿瘤特异性免疫，可用于人或动物各种肿瘤的治疗，并能有效防止肿瘤复发，具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及肿瘤治疗及预防领域，特别是涉及一种由两种病毒载体组成的疫苗及其在治疗肿瘤上的应用。
背景技术
当今，肿瘤已成为威胁人类健康的重大疾病，每年世界上约有一千万新发肿瘤病人，尽管我们对肿瘤发生、发展和转移的分子机理有了较深的理解，肿瘤外科治疗、化疗、放疗、靶向治疗及其他治疗方法也取得较大进展，但是对多数实体肿瘤，其整体生存率几十年来并无显著提高。因此，需要开发新的方法来治疗肿瘤和防止治疗后的肿瘤复发。
肿瘤免疫治疗是一种具有潜能的肿瘤治疗方法，因免疫治疗发挥抗肿瘤作用的机制与常规的化、放疗和靶向治疗截然不同。免疫治疗从全身系统来治疗肿瘤，不会有交叉抵抗，更为重要的是，发挥抗肿瘤作用的T细胞和B细胞能特异地识别肿瘤细胞和正常细胞之间微小差异的肿瘤相关抗原，能提供特异杀伤作用，但所引起的毒性非常低。在所有的肿瘤免疫治疗中，细胞毒性T细胞(Cytotoxic T Lymphocytes，CTL) 所介导的肿瘤免疫在抗肿瘤中发挥着最为重要的作用。但是，在肿瘤发生过中机体自然的抗肿瘤T细胞免疫反应被严重削弱，不能阻止肿瘤的发生发展。为此，通过激活肿瘤靶向性的CTL肿瘤疫苗对肿瘤治疗和防止肿瘤复发是具有很大潜力的肿瘤治疗方法。
肿瘤疫苗根据应用目的可分为治疗性疫苗和预防性疫苗。前者针对已发癌症病人，后者针对正常人群和高危人群的预防。肿瘤疫苗根据方法不同大致包括六大类别：蛋白抗原/佐剂疫苗、DNA 疫苗、病毒载体为基础的疫苗、肿瘤细胞疫苗、树突状细胞疫苗和独特抗体疫苗。以上这些疫苗在临床中的应用潜能多数已被检测，尽管临床前和早期临床实验显示以上各种方法能产生肿瘤特异免疫反应，但在大样本临床实验中，目前未有任何肿瘤疫苗显示足够强大的抗肿瘤效果。
以病毒载体为基础的疫苗已显示许多优越性，如成本低、有效、安全，能方便地使用更多人群，该类疫苗已在人感染性疾病和肿瘤治疗中显示出其潜能。过去二十多年的研究表明，使用不同载体进行激发、增强（prime-boost) 方案是诱导机体特异免疫反应的最有效方法。临床前和早期临床实验结果显示，序贯使用表达肿瘤相关抗原如CEA、MUC1及免疫共刺激分子的痘苗病毒载体和禽痘病毒载体能产生较强的肿瘤特异T细胞免疫反应。但是这种异原性的激发、增强疫苗方法在大样品三期临床实验中并没有显示出显著效果。因此，需要深入研究肿瘤抗原、载体和机体免疫反应之间的相互作用，从而研制新的肿瘤疫苗。
复制选择性溶肿瘤病毒是一种新的治疗肿瘤方法。在2005年，具有E1B-55K基因缺失的腺病毒（H101，上海三维生物技术有限公司）作为世界上第一个与化疗药物联合治疗头颈部肿瘤的药物被批准。尽管其在临床上较为安全，但溶肿瘤腺病毒作为单一制剂的药效尚有限，因而更进一步开发更加有效的病毒来治疗肿瘤显得十分迫切。
痘苗病毒（Vaccinia virus，VV）的许多内在优点使得其非常适合作为溶肿瘤制剂治疗肿瘤。近几年来，我们对溶肿瘤痘苗病毒作为治疗人类肿瘤的药物进行了全面研究，发现作为预防天花的痘苗病毒VVLister株在体外具有杀伤肿瘤的特性，尤其是对溶肿瘤腺病毒不敏感的肿瘤，痘苗病毒在体内也显示出强大的抗肿瘤效果。由于单独利用复制选择性溶肿瘤病毒的安全性好，但是其临床效果较差，改善这些溶肿瘤病毒的治疗效果已迫在眉睫。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：提供一种按照特定顺序序贯使用的包含腺病毒和痘苗病毒的疫苗，该疫苗能诱导肿瘤产生特异性免疫，可用于治疗肿瘤和防止肿瘤的复发。
本发明的技术方案：
一种诱导肿瘤特异性免疫的疫苗，所述疫苗包括溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒，两种病毒按先后序贯使用。
所述溶肿瘤腺病毒为复制性腺病毒，痘苗病毒为用于天花疫苗的痘苗病毒。
所述溶肿瘤腺病毒为复制性人5型腺病毒，痘苗病毒为用于天花疫苗的李斯特株痘苗病毒。
所述溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒是经过如下改造得到的：将溶肿瘤腺病毒中的E1ACR2、E1B19k、E3gp19K基因中的一个或多个删除，或将VAI RNA病毒基因删除；或将痘苗病毒中的TK基因和/或N1L基因删除。
所述溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒通过表达肿瘤相关抗原、免疫调节基因和/或免疫调节蛋白的抗体，以增强疫苗效果。
所述免疫调节基因为GM-CSF、Flt3L、IL7、IL12、41BBL、CCL21、IL24、IL2、IL15、IL15受体、IL21和IL23中的一种。
一种诱导肿瘤特异性免疫的细胞疫苗，所述细胞疫苗包括A组分溶肿瘤腺病毒和B组分痘苗病毒，将A组分在体外感染自身肿瘤细胞、异体肿瘤细胞或表达肿瘤相关抗原的细胞，制成感染A组分的细胞疫苗A’，将B组分按同样方法制成感染B组分的细胞疫苗B’，然后将细胞疫苗A’、B’按先后顺序序贯使用。
所述的疫苗或细胞疫苗在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。
本发明中腺病毒和痘苗病毒组成的疫苗能诱导肿瘤产生特异性免疫，产生的抗肿瘤效果首次在皮下建立的金黄地鼠胰腺癌HPD-1NR模型中被研究。试验中采用6个剂量的溶肿瘤腺病毒（5×108PFU，低于常规剂量1×1010PFU）或痘苗病毒（5×107PFU，低于常规剂量1×109PFU）作为单一制剂在已建立的胰腺癌HPD-1NR肿瘤模型中不能诱导明显的肿瘤抑制；而用3个剂量的腺病毒（5×108PFU）并随之采用3个剂量的痘苗病毒（5×107PFU），可导致明显的抗肿瘤效果。然而，反向联合使用痘苗病毒和腺病毒尽管有25%左右的动物在同一时间点肿瘤完全消失，但与单个病毒的治疗效果并无显著差异，治疗效果较差。
利用腺病毒和痘苗病毒这种特定的序贯免疫方法，肿瘤治愈率和荷瘤动物的生存期明显提高，大约75%的动物在研究的4个月结束前仍然存活；在建立的肾癌HaK模型中也表现出同样的治疗效果。结果显示，序贯使用腺病毒和痘苗病毒比反向联合或单独病毒应用的效果更佳。上述研究提示这种序贯联合的治疗方案能使用于多种肿瘤。
为了证实序贯联合两种不同的溶肿瘤病毒是否能降低宿主对每一种病毒的体液免疫反应，不同治疗方案后在动物血清中检测了所有抗腺病毒和痘苗病毒的循环抗体和特异性的中和抗体水平。结果显示，抗腺病毒和痘苗病毒的总抗体在各个不同组之间无差异（P>0.05）。事实上，腺病毒和痘苗病毒疫苗的序贯联合治疗诱导的抗腺病毒的抗体水平稍高于单独腺病毒组，中和抗体水平和总抗体水平一致，各组之间无明显差异。这些结果表明，序贯联合腺病毒和痘苗病毒介导的强大抗肿瘤效果不是由于对每个病毒体液免疫的降低所导致的。
为了进一步证实序贯向肿瘤组织中注射复制性腺病毒和痘苗病毒是一种有效的肿瘤疫苗方法，进行动态检测金黄地鼠脾脏内肿瘤特异CTL 的水平。结果发现，在腺病毒3次治疗而后痘苗病毒3次治疗的组与其它治疗组比较，能产生更高水平的肿瘤特异CTL，提示病毒能诱导肿瘤特异性免疫，可见，该序贯联合病毒疫苗是体内诱导肿瘤特异性免疫的有效方法。
此外，本发明发现由序贯联合病毒治疗肿瘤产生的肿瘤特异性免疫作用效果是长期的，可用于防止肿瘤复发。为了证明此效果，利用序贯联合治疗后HPD-1NR肿瘤完全消失的动物（肿瘤消失一个月后），将原始的胰腺癌细胞HPD-1NR或肾癌细胞HaK分别重新接种上述治疗后的动物。结果发现，序贯联合溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒能导致肿瘤的根除和产生长期的肿瘤特异性免疫。
本发明的积极有益效果：
（1）本发明首次采用序贯联合腺病毒和痘苗病毒作为疫苗治疗体内肿瘤，主要是基于病毒反应的不同机制和利用宿主对感染的肿瘤细胞免疫反应的可能性，由于第一种病毒诱导的特异性免疫反应对第二种治疗病毒不会产生影响，第二种病毒溶解肿瘤细胞所释放的肿瘤相关抗原和细胞因子，可大大增强第一种病毒诱导的肿瘤免疫力。
（2）本发明将溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒序贯联合制成疫苗，能提高其抗肿瘤活性，比反向联合或单独病毒作用产生更强的细胞免疫反应，使用效果更佳。试验表明，序贯联合疫苗治疗HPD-1NR肿瘤、HaK肿瘤的效果较好，治疗HPD-1NR、Hak肿瘤的金黄地鼠的存活时间较长，为序贯联合溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒作为新的抗肿瘤治疗模式提供了有力证据。
（3）序贯联合疫苗所诱导的体液免疫反应和肿瘤特异性的免疫反应表明，序贯联合溶肿瘤病毒和痘苗病毒组的金黄地鼠血清中抗腺病毒总抗体或抗痘苗病毒总抗体的水平与其他组无明显差异；治愈的金黄地鼠接种HPD-1NR细胞不长肿瘤，表现出长期的肿瘤特异性免疫。
（4）本发明的肿瘤疫苗能将肿瘤根除，并产生长期的肿瘤特异性免疫，可用于人或动物各种肿瘤的治疗，并能有效防止肿瘤复发，该疫苗将具有广阔的应用前景。本发明为设计病毒免疫治疗疫苗提供了新的技术手段和方法，将是一种十分有前景的治疗人类肿瘤的疫苗。
附图说明
图1，采用不同疫苗治疗HPD-1NR肿瘤的生长曲线，可看出腺病毒和痘苗病毒的序贯联合治疗组能显著抑制肿瘤的生长。
图2，采用不同疫苗治疗HPD-1NR肿瘤的动物的生存曲线，可看出腺病毒和痘苗病毒的序贯联合治疗组能显著增加金黄地鼠的存活时间。
图3，采用不同疫苗治疗HaK肿瘤生长曲线，可看出腺病毒和痘苗病毒的序贯联合治疗组能显著抑制肿瘤的生长。
图4，采用不同疫苗治疗HaK肿瘤的动物的生存曲线，可看出腺病毒和痘苗病毒的序贯联合治疗组能显著增加金黄地鼠的存活时间。
图5，采用不同疫苗治疗肿瘤后的浸润淋巴细胞数比较图，可看出序贯联合腺病毒和痘苗病毒实验组能显著诱导肿瘤细胞内淋巴细胞的浸润。
图6，采用不同疫苗治疗肿瘤后的半胱天冬氨酸阳性细胞数比较图，可看出序贯联合腺病毒和痘苗病毒实验组能诱导高水平的肿瘤细胞凋亡。
图7，不同疫苗治疗后第10天的金黄地鼠血清中抗腺病毒的总抗体图，该图显示序贯联合溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒组的金黄地鼠血清中抗腺病毒总抗体水平与其他组比较没有显著差异。
图8，不同疫苗治疗后第10天的金黄地鼠血清中抗痘苗病毒的总抗体图，该图显示序贯联合溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒组的金黄地鼠血清中抗痘苗病毒总抗体水平与其他组比较没有显著差异。
图9，采用不同疫苗治疗后第10天的金黄地鼠的脾细胞对HPD-1NR细胞的杀伤作用示意图，该图显示序贯联合溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒组的金黄地鼠的脾细胞对HPD-1NR细胞的杀伤作用明显高于其他组，说明该序贯疫苗能引起高水平肿瘤特异免疫细胞。
图10，采用不同疫苗治疗后第10天的金黄地鼠的脾细胞对HaK细胞的杀伤作用示意图，显示各组金黄地鼠的脾细胞对非靶向HaK细胞没有明显的杀伤作用，各组无明显差异，说明序贯使用腺病毒和痘苗病毒所引起肿瘤免疫力是肿瘤类型特异性的。
图11，腺病毒和痘苗病毒的序贯免疫治疗后，肿瘤完全清除的金黄地鼠重新接种肿瘤细胞的肿瘤生长曲线，可看出，接种HPD-1NR后肿瘤不再生长，接种HaK细胞后肿瘤则正常生长，表现出针对HPD1-NR肿瘤的特异性免疫能力。
图12，未治疗的金黄地鼠重新接种肿瘤细胞的肿瘤生长曲线，可看出，未治疗的金黄地鼠接种HPD-1NR和HaK细胞后，肿瘤都能正常生长。
图13，dl331和dl309感染的DT6606细胞免疫接种小鼠后的肿瘤生长曲线，可看出，删除VAI RNA基因的dl331腺病毒与未删除VAI基因的dl309腺病毒相比，能显著抑制肿瘤生长。
图14，采用修饰过的腺病毒和痘苗病毒序贯免疫后的肿瘤生长曲线，可看出，表达IL12治疗基因的腺病毒作为疫苗组分之一进行序贯免疫治疗，能显著抑制大负荷种植瘤的生长。
图15，采用修饰过的腺病毒和痘苗病毒序贯免疫后肿瘤的清除率，可看出，表达IL12治疗基因的腺病毒作为疫苗组分之一进行序贯免疫治疗，能显著增加大负荷种植瘤的完全清除率。
图16，修饰过的痘苗病毒诱导动物产生的干扰素γ（IFN γ）的比较图，可看出，删除N1L基因的痘苗病毒（VVLΔTKN1L）治疗组，其脾脏细胞在肿瘤特异性抗原刺激下产生更多IFN-γ。
图17，不同肿瘤细胞疫苗的免疫效果比较图，可看出，先用腺病毒感染的HPD1-NR免疫、后用痘苗病毒感染的HPD1-NR加强免疫的序贯免疫实验组，在接种HPD1-NR肿瘤细胞后80%的实验动物的肿瘤不再生长，保护能力优于其它组。
具体实施方式
实例1：体内溶肿瘤病毒联合或单独治疗HPD-1NR和HaK金黄地鼠肿瘤模型的效果
将1×106个HPD-1NR或5×106个 HAK细胞于皮下接种6-8周龄金黄地鼠的右背侧面，十天后，当肿瘤直径达6-7mm时，随即分为五组，每组8只金黄地鼠，A组于第0、2、4、6、8和10天肿瘤内注射PBS；B组于第0、2、4、6、8和10天肿瘤内注射5×108 PFU腺病毒Ad5；C组于第0、2、4、6、8和10天肿瘤内注射5×107 PFU痘苗病毒VVLister；D组分别在第0、2和4天于肿瘤内注射5×108PFU 腺病毒Ad5，并接着于第6、8和10天注射5×107 PFU 痘苗病毒VVLister；E组分别在第0、2和4天于肿瘤内注射5×107PFU痘苗病毒VVLister，并接着于第6、8和10天注射5×108 PFU腺病毒Ad5。其中PBS、腺病毒Ad5、痘苗病毒VVLister每次的注射量均为100微升。
每周用游标卡尺测量肿瘤两次，每三天、每四天各测量一次，测量值为平均肿瘤大小±标准差，采用post-hoc Bonferroni的One-way ANOVA进行统计学处理。结果见图1至图4。
图1表明序贯联合溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒治疗HPD-1NR肿瘤的效果最好；图2表明序贯联合溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒治疗HPD-1NR肿瘤的金黄地鼠的存活时间较长；图3显示序贯联合溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒治疗HaK肿瘤的效果较好；图4表明序贯联合溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒治疗HaK肿瘤的金黄地鼠的存活时间较长。
实例2：序贯免疫溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒诱导肿瘤产生淋巴细胞浸润及肿瘤细胞凋亡。
如例1的免疫方法，在最后病毒治疗后的第10天金黄地鼠被处死，并收集肿瘤组织，进一步进行组织学和免疫组化分析，观察不同组肿瘤组织中免疫细胞的浸润和肿瘤细胞的凋亡情况。结果显示，在第10天腺病毒和痘苗病毒序贯免疫治疗组，肿瘤中有大量浸润淋巴细胞 （图5)，诱导更多的肿瘤细胞凋亡（图6）。
实例3：序贯免疫溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒、反向联合或单独的病毒治疗诱导的体液免疫反应和肿瘤特异性的免疫反应比较。
如例1的治疗方法，在病毒治疗后的第10天，将金黄地鼠处死并收集血清和脾脏。检测序贯联合溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒、反向联合或单独的病毒治疗诱导的体液免疫反应和肿瘤特异性的免疫反应。
血清中总抗体的检测：在96孔板中铺A549或CV1细胞，第二天将血清按2倍等比稀释，再加入腺病毒或痘苗病毒（100PFU），在培养箱培养一周后，观察每个孔内的细胞病变情况。肿瘤特异性免疫反应的检测：将脾脏细胞体外分离后，加入丝裂霉素C（2 mg/ml）处理的肿瘤细胞HPD1NR刺激，三天后将刺激后的脾脏细胞作为效应细胞，HPD1NR和HaK作为靶细胞或对照细胞混合在一起，检测效应细胞对靶细胞的杀伤作用。结果见图7至图10。
图7显示序贯免疫溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒组的金黄地鼠血清中抗腺病毒总抗体的水平与其他组比较没有显著性差异；图8显示序贯联合溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒组的金黄地鼠血清中抗痘苗病毒总抗体的水平与其他组比较没有显著性差异；
图9显示序贯免疫溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒组的金黄地鼠的脾细胞对HPD-1NR细胞的杀伤作用明显高于其他组，说明该序贯疫苗能引起高水平的肿瘤特异免疫细胞；图10显示各组金黄地鼠的脾细胞对非靶向HaK细胞没有明显的杀伤作用，各组无明显差异，说明序贯使用腺病毒和痘苗病毒所引起肿瘤免疫力是肿瘤类型特异性的。
实例4：序贯免疫溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒治愈的金黄地鼠，表现出长期的肿瘤特异性免疫。
如实例1中免疫方法，取肿瘤完全清除的金黄地鼠和未治疗的金黄地鼠，30天后重新接种1×106个HPD-1NR或5×106个HaK细胞于金黄地鼠的左侧面，每周用游标卡尺测量肿瘤两次，每三天、每四天各测量一次，测量值为平均肿瘤大小±标准差。
结果发现，当动物重新接种先前的HPD-1NR细胞时，观察到105天仍没有发现肿瘤生长，而利用HaK接种后发现4个动物中有3个动物的肿瘤生长迅速，一个动物最初利用HaK形成的肿瘤在63天后受到抑制，利用HPD-1NR或HaK细胞接种的对照动物中其肿瘤的生长迅速。见图11、图12。
图11、图12 表明序贯免疫溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒治愈的金黄地鼠接种HPD-1NR细胞不长肿瘤，表现为长期的肿瘤特异性免疫；接种HaK细胞的肿瘤则正常生长，表现出针对HPD1-NR肿瘤的特异性免疫能力；而未治疗的金黄地鼠接种HPD-1NR和HaK细胞后，肿瘤都能正常生长。
实例5：腺病毒删除VAI RNA基因后作为疫苗抑制肿瘤的效果。
在5-6周龄的C57小鼠背部右上侧接种3×106个分别预先感染10PFU/细胞腺病毒dl309和dl331的DT6606细胞，观察肿瘤生长状况。腺病毒dl331是VAI（病毒相关Ⅰ型RNA）基因删除的Ad5，VAI RNA能与DAI（双链RNA激活抑制剂）结合阻止其激活，从而完成病毒的翻译和蛋白表达。试验发现，VAIRNA基因删除后能诱导更多感染的肿瘤细胞形成自嗜细胞死亡，引起更强免疫反应，更好地抑制肿瘤生长，参见图13。图13表明5型腺病毒 VAIRNA基因的删除，增强了疫苗效果，比未删除VAI基因的dl309更能显著地抑制肿瘤生长。
实例6：表达IL12治疗基因的腺病毒作为疫苗组分，对大体积肿瘤的治疗效果。
在5-6周龄的金黄地鼠背部右上侧接种1×106的HPD1-nr细胞，当肿瘤生长至较大荷瘤（300 mm3）在肿瘤内分别注射PBS（100微升/次）、Ad-TD-RFP+VVL15（100微升/次）和Ad-TD-hIL12+VVL15（100微升/次），间隔一天一次，共6次，序贯免疫组Ad-TD-RFP和Ad-TD-hIL12为前三次治疗（5×108pt/次），VVL15为后三次治疗（5×107pt/次），然后观察肿瘤大小和肿瘤全部清除率。结果显示，Ad-TD-hIL12+VVL15比PBS和对照病毒Ad-TD-RFP+VVL15显示出更强的抗肿瘤效果，能明显抑制肿瘤生长，肿瘤全部清除率在Ad-TD-hIL12+VVL15组可达71.4%，而Ad-TD-RFP+VVL15组为0%（参见图14、图15）。
图14说明腺病毒加入免疫相关基因白介素12（IL12）后，开展序贯联合疫苗治疗的肿瘤抑制效果较好；图15说明腺病毒加入免疫相关基因IL12后，开展序贯联合疫苗治疗的肿瘤完全清除率较高。
实例7：痘苗病毒删除N1L基因后的肿瘤特异性免疫。
在C57BL/6小鼠右侧皮下接种4×106的DT6606-OVA肿瘤细胞，当肿瘤体积达到160mm3时，分别在第一、三、五天瘤内注射PBS、VVLΔTK或VVLΔTKN 1L (1x108pfu)，PBS、VVLΔTK、VVLΔTKN 1L每次的注射量均为100微升；7天后处死小鼠，取其脾细胞，在RPMI完全培养基中稀释到5x106 cells/ml，每孔100ul铺圆底96孔板，加入OVA刺激48小时后，收集上清，用ELISA检测IFN γ。结果显示（图16），删除N1L基因的痘苗病毒（VVLΔTKN1L），能诱导产生更强的肿瘤特异性免疫。
实例8：溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒体外感染肿瘤细胞诱导肿瘤特异免疫反应的疫苗效果。
该例子中内容和原技术方案中的内容进行了组合，看看是否完整，合理。
利用溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒在体外分别感染HPD1-NR肿瘤细胞系，制备成腺病毒HPD1-NR肿瘤细胞疫苗和痘苗病毒HPD1-NR肿瘤细胞疫苗。具体方法：取同种来源于金黄地鼠的胰腺癌细胞HPD-1NR，先在体外用溶肿瘤腺病毒（MOI =10pfu/cell）感染4小时，或用痘苗病毒（MOI=1pfu/cell）感染2小时，然后收获病毒感染的肿瘤细胞作为疫苗。
首先用5×106 的腺病毒或痘苗病毒感染的HPD1-NR肿瘤疫苗免疫金黄地鼠，同时用5×106的丝裂霉素C处理的HPD1-NR免疫金黄地鼠作为对照；8周后，再用5×106腺病毒或痘苗病毒HPD1-NR肿瘤疫苗免疫，对照组依然免疫5×106的丝裂霉素C（MMC）处理的HPD1-NR；2周后，各组都在免疫对侧的皮下接种2×106 的HDP1-NR肿瘤细胞，观察各组动物的肿瘤生长情况。
发现先用腺病毒预感染的HPD1-NR肿瘤细胞疫苗免疫，再用痘苗病毒预感染-HPD1-NR肿瘤细胞疫苗免疫，这种顺序序贯免疫方法能让80%的动物产生较好的肿瘤特异性免疫，接种后3个月没有观察到肿瘤的生长；而其它免疫方法（如腺病毒-HPD1-NR、腺病毒-HPD1-NR顺序免疫，痘苗腺病毒-HPD1-NR、腺病毒-HPD1-NR顺序免疫，痘苗病毒-HPD1-NR、痘苗病毒-HPD1-NR顺序免疫）都无法和它相媲美。同时，作为肿瘤细胞全蛋白疫苗的丝裂霉素C处理过HPD1-NR免疫组，在多次试验中没有一只动物产生过有效的肿瘤特异性免疫，全部在接种后长出肿瘤，并不再消退。结果见图17。
从图17可看出，用溶肿瘤腺病毒感染的肿瘤细胞疫苗做激发免疫，痘苗病毒感染的肿瘤细胞疫苗做加强免疫，能保护约80％的动物不再生长同样肿瘤；单纯用腺病毒感染的肿瘤细胞疫苗做激发和加强免疫，只能保护约40％的动物不再生长同样肿瘤；单纯用痘苗病毒感染的肿瘤细胞疫苗做激发和加强免疫，或用痘苗病毒感染的肿瘤细胞疫苗做激发、腺病毒感染的肿瘤细胞疫苗做加强免疫，均不能产生很好的保护作用，表明序贯溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒体外感染的肿瘤细胞制备的肿瘤疫苗的免疫效果最好。可见，该疫苗按照特异的序贯联合使用，有预防肿瘤或术后预防肿瘤复发转移的潜能。
Claims (8)
1.一种诱导肿瘤特异性免疫的疫苗，其特征是：所述疫苗包括溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒，两种病毒按先后序贯使用。
2.根据权利要求1所述的疫苗，其特征是：所述溶肿瘤腺病毒为复制性腺病毒，痘苗病毒为用于天花疫苗的痘苗病毒。
3.根据权利要求1所述的疫苗，其特征是：所述溶肿瘤腺病毒为复制性人5型腺病毒，痘苗病毒为用于天花疫苗的李斯特株痘苗病毒。
4.根据权利要求1所述的疫苗，其特征是：所述溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒是经过如下改造得到的：将溶肿瘤腺病毒中的E1ACR2、E1B19k、E3gp19K基因中的一个或多个删除，或将VAI RNA病毒基因删除；或将痘苗病毒中的TK基因和/或N1L基因删除。
5.根据权利要求1所述的疫苗，其特征是：所述溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒通过表达肿瘤相关抗原、免疫调节基因和/或免疫调节蛋白的抗体，以增强疫苗效果。
6.根据权利要求5所述的疫苗，其特征是：所述免疫调节基因为GM-CSF、Flt3L、IL7、IL12、41BBL、CCL21、IL24、IL2、IL15、IL15受体、IL21和IL23中的一种。
7.一种诱导肿瘤特异性免疫的细胞疫苗，其特征是：所述细胞疫苗包括A组分溶肿瘤腺病毒和B组分痘苗病毒，将A组分在体外感染自身肿瘤细胞、异体肿瘤细胞或表达肿瘤相关抗原的细胞，制成感染A组分的细胞疫苗A’，将B组分按同样方法制成感染B组分的细胞疫苗B’，然后将细胞疫苗A’、B’按先后顺序序贯使用。
8.权利要求1-7任一项所述的疫苗或细胞疫苗在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2012104065538A CN103110939A (zh) | 2012-10-23 | 2012-10-23 | 诱导肿瘤特异性免疫的疫苗及其应用 |
| PCT/CN2013/085626 WO2014063601A1 (zh) | 2012-10-23 | 2013-10-22 | 诱导肿瘤特异性免疫的疫苗及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2012104065538A CN103110939A (zh) | 2012-10-23 | 2012-10-23 | 诱导肿瘤特异性免疫的疫苗及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103110939A true CN103110939A (zh) | 2013-05-22 |
Family
ID=48409349
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2012104065538A Pending CN103110939A (zh) | 2012-10-23 | 2012-10-23 | 诱导肿瘤特异性免疫的疫苗及其应用 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103110939A (zh) |
| WO (1) | WO2014063601A1 (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103357001A (zh) * | 2013-07-24 | 2013-10-23 | 顾宇春 | 一种肿瘤抗原的制备方法 |
| WO2014063601A1 (zh) * | 2012-10-23 | 2014-05-01 | 郑州大学 | 诱导肿瘤特异性免疫的疫苗及其应用 |
| WO2015150809A1 (en) * | 2014-04-01 | 2015-10-08 | Queen Mary University Of London | Oncolytic vaccinia virus |
| CN106591368A (zh) * | 2016-10-12 | 2017-04-26 | 郑州大学 | 携带il‑15r/il‑15融合基因的b亚群腺病毒11载体及其构建和用途 |
| WO2021163874A1 (zh) * | 2020-02-18 | 2021-08-26 | 苏州工业园区唯可达生物科技有限公司 | 一种重组病毒载体、包含其的免疫组合物以及用途 |
| WO2021249035A1 (zh) * | 2020-06-10 | 2021-12-16 | 广州恩宝生物医药科技有限公司 | 一种复制型人腺病毒及其应用 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109219450A (zh) | 2016-01-11 | 2019-01-15 | 玛丽女王伦敦大学 | 在癌症治疗中用于递送病毒的PI3K P-δ110抑制剂 |
| WO2022170919A1 (zh) * | 2021-02-09 | 2022-08-18 | 南京惟亚德生物医药有限公司 | 一种重组溶瘤腺病毒及其应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7094408B2 (en) * | 2000-04-28 | 2006-08-22 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Immunogenicity using a combination of DNA and vaccinia virus vector vaccines |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103110939A (zh) * | 2012-10-23 | 2013-05-22 | 郑州大学 | 诱导肿瘤特异性免疫的疫苗及其应用 |
-
2012
- 2012-10-23 CN CN2012104065538A patent/CN103110939A/zh active Pending
-
2013
- 2013-10-22 WO PCT/CN2013/085626 patent/WO2014063601A1/zh active Application Filing
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7094408B2 (en) * | 2000-04-28 | 2006-08-22 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Immunogenicity using a combination of DNA and vaccinia virus vector vaccines |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| JAMES R.TYSOME ET AL: "A novel therapeutic regime to eradicate established solid tumors with an effective induction of tumor-specific immunity", 《CLINICAL CANCER RESEARCH》, 22 October 2012 (2012-10-22), pages 11 - 15 * |
| OBERG D ET AL: "Improved potency and selectivity of an oncolytic E1ACR2 and E1B19k deleted adenoviral mutant in prostate and pancreatic cancer", 《CLIN CANCER RES》, vol. 16, no. 2, 12 January 2010 (2010-01-12), XP055103589, DOI: doi:10.1158/1078-0432.CCR-09-1960 * |
| WANG Y ET AL: "Virus-associated RNAI-deleted adenovirus, a potential oncolytic agent targeting EBV-associated tumors", 《CANCER RES》, vol. 65, no. 4, 15 February 2005 (2005-02-15) * |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014063601A1 (zh) * | 2012-10-23 | 2014-05-01 | 郑州大学 | 诱导肿瘤特异性免疫的疫苗及其应用 |
| CN103357001A (zh) * | 2013-07-24 | 2013-10-23 | 顾宇春 | 一种肿瘤抗原的制备方法 |
| WO2015150809A1 (en) * | 2014-04-01 | 2015-10-08 | Queen Mary University Of London | Oncolytic vaccinia virus |
| JP2017511136A (ja) * | 2014-04-01 | 2017-04-20 | クイーン マリー ユニバーシティ オブ ロンドン | 腫瘍崩壊ワクシニアウィルス |
| CN106795527A (zh) * | 2014-04-01 | 2017-05-31 | 玛丽女王伦敦大学 | 溶瘤病毒 |
| EP3659614A1 (en) * | 2014-04-01 | 2020-06-03 | Queen Mary University of London | Oncolytic vaccinia virus |
| CN106795527B (zh) * | 2014-04-01 | 2020-10-30 | 玛丽女王伦敦大学 | 溶瘤病毒 |
| CN106591368A (zh) * | 2016-10-12 | 2017-04-26 | 郑州大学 | 携带il‑15r/il‑15融合基因的b亚群腺病毒11载体及其构建和用途 |
| WO2021163874A1 (zh) * | 2020-02-18 | 2021-08-26 | 苏州工业园区唯可达生物科技有限公司 | 一种重组病毒载体、包含其的免疫组合物以及用途 |
| CN115103681A (zh) * | 2020-02-18 | 2022-09-23 | 苏州工业园区唯可达生物科技有限公司 | 一种重组病毒载体、包含其的免疫组合物以及用途 |
| CN115103681B (zh) * | 2020-02-18 | 2023-10-31 | 苏州工业园区唯可达生物科技有限公司 | 一种重组病毒载体、包含其的免疫组合物以及用途 |
| WO2021249035A1 (zh) * | 2020-06-10 | 2021-12-16 | 广州恩宝生物医药科技有限公司 | 一种复制型人腺病毒及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2014063601A1 (zh) | 2014-05-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103110939A (zh) | 诱导肿瘤特异性免疫的疫苗及其应用 | |
| Maroun et al. | Designing and building oncolytic viruses | |
| Cook et al. | Clinical application of oncolytic viruses: a systematic review | |
| Keller et al. | Oncolytic viruses—immunotherapeutics on the rise | |
| Liu et al. | CXCL11-Armed oncolytic poxvirus elicits potent antitumor immunity and shows enhanced therapeutic efficacy | |
| Kim et al. | Systemic armed oncolytic and immunologic therapy for cancer with JX-594, a targeted poxvirus expressing GM-CSF | |
| Jiang et al. | Inhibition of tumor growth and metastasis by a combination of Escherichia coli–mediated cytolytic therapy and radiotherapy | |
| Kimata et al. | Pilot study of oncolytic viral therapy using mutant herpes simplex virus (HF10) against recurrent metastatic breast cancer | |
| Guse et al. | Oncolytic vaccinia virus for the treatment of cancer | |
| Thorne | Immunotherapeutic potential of oncolytic vaccinia virus | |
| WO2018137643A1 (zh) | 溶瘤病毒作为用于治疗肿瘤和/或癌症的免疫刺激剂的应用 | |
| Oh et al. | Combination immunotherapy using oncolytic virus for the treatment of advanced solid tumors | |
| CN106795527A (zh) | 溶瘤病毒 | |
| CN110520438A (zh) | 溶瘤病毒疗法 | |
| Barnard et al. | Expression of FMS-like tyrosine kinase 3 ligand by oncolytic herpes simplex virus type I prolongs survival in mice bearing established syngeneic intracranial malignant glioma | |
| Schmitz et al. | Gene therapy for liver diseases: recent strategies for treatment of viral hepatitis and liver malignancies | |
| Ries et al. | Oncolytic viruses for the treatment of cancer: current strategies and clinical trials | |
| CN108261426B (zh) | 药物组合物及其在治疗肿瘤和/或癌症的药物中的应用 | |
| AU2018244221A1 (en) | ANK and IL-12 compositions and methods | |
| Hughes et al. | Critical analysis of an oncolytic herpesvirus encoding granulocyte-macrophage colony stimulating factor for the treatment of malignant melanoma | |
| Alkayyal et al. | Interleukin-12-expressing oncolytic virus: A promising strategy for cancer immunotherapy | |
| Yin et al. | Antitumor effects of oncolytic herpes simplex virus type 2 against colorectal cancer in vitro and in vivo | |
| Ma et al. | High-dose VitC plus oncolytic adenoviruses enhance immunogenic tumor cell death and reprogram tumor immune microenvironment | |
| Speranza et al. | Preclinical mouse models for analysis of the therapeutic potential of engineered oncolytic herpes viruses | |
| Sangro et al. | Gene therapy of hepatocellular carcinoma and gastrointestinal tumors |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20130522 |