CN103063835B - 一种免疫层析试条定量检测仪的校准试条及其制作方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种免疫层析试条定量检测仪的校准试条及其制作方法，该校准试条可以用来校准由纳米金颗粒、高分子纳米荧光微粒等长寿命物质作为显色标记物的免疫层析试条定量检测仪。校准试条的显色窗口包含有显色的测试线、质控线及除此之外的硝酸纤维素膜空白区域。测试线颜色由浅至深应至少具有5个梯度；测试线和质控线的颜色由对应颜色的真实试条经过扫描仪、数码相机等图像采集装置转变为数字图像，在计算机上由图像处理软件处理后得到；每个梯度颜色应采集不少于20根同一颜色范围的真实试条图像来确定；测试线和质控线由彩色打印机按照真实免疫层析试条的尺寸和对应图像的颜色打印在硝酸纤维素膜上；用于打印的硝酸纤维素膜固定在塑料基板之上。

Description

一种免疫层析试条定量检测仪的校准试条及其制作方法

技术领域

本发明涉及一种免疫层析试条定量检测仪的校准试条及其制作方法，属于仪器科学、生物医学工程等技术领域，特别涉及免疫层析试条的定量检测技术。 

背景技术

现有的免疫层析定量检测仪专利以阐述定量检测原理为主，大多是基于光反射原理，采用一定波长和强度的光源照射至免疫层析试条测试窗口，以光纤作为光信号传输媒介，通过光电传感器件（如光电二极管、光电三极管、CCD、CIS、CMOS等）将试条测试窗口中测试线、质控线及空白区域三个区域的反射光信号转变为电信号，建立起电信号与被测液浓度之间的关系。 

专利号为ZL 200710037553.4的一种层析试条的检测方法及其检测装置，它是以荧光微粒为标记物，扫描仪产生的激发光逐点扫描层析试条的测试区；检测仪以平行于测试区条带的线状激发光激发，通过时间分辨荧光检测方法检测层析试条测试点的荧光强度，得到测试点的序列测试值，绘制拟合曲线，计算测试值曲线波峰的面积确定荧光信号强度。 

专利号为ZL 03137101.9的一种胶体金免疫层析检测装置和检测方法，它是以胶体金作为标志物，包被有质控带和检测带的试条条固定在试条板上，数据处理装置读取IC卡上参数后控制扫描装置对试条条扫描，并对质控带和检测带光密度值进行识别、浓度计算和技术分析，并将检测结果传输给输出装置。 

专利号为ZL 200710065332.8的一种多参数免疫层析试条定量检测仪，它是采用光纤作为光传输媒介，通过CCD同时检测测试线和质控线的光学信号，分析吸收率，得到样品溶液中待测物浓度，并可对多联免疫层析试条进行定量测量。 

专利号为ZL 200610029498.X的一种金标免疫试纸条的反射式光度计，它设计了一套由多个照明光源和聚焦镜组成的照明光路，以及准直镜、滤光片、聚焦镜和狭缝光栏构成的接收光路。通过光电转换器件和前置放大器件，由计算机数据采集卡动态检测免疫层析的反应过程。 

以上专利技术以光电转换为基础，运用不同手段实现了免疫层析试条的定量检测，说明了技术上的可行性。 

然而，从仪器研制的角度来看，上述专利均未涉及免疫层析试定量检测仪在生产和临床使用中的校准问题。校准环节的缺失将直接影响到定量测试仪器检测结果的一致性和准确性。 

免疫层析试条上的抗原抗体结合是一个动态反应过程。在毛细管原理和虹吸作用下，层析过程没有终止时间。试条测试线的颜色深浅随着时间推移而渐变。不仅如此，待测液粘稠度以及硝酸纤维膜的孔径决定了待测液在试条上的爬行速度，直接影响到抗原抗体的结合程度和硝酸纤维膜的泛白程度，导致免疫层析试条具有一定的批内变异和批间变异。现阶段临床上和科研中使用的免疫层析定量试条的批内变异和批间变异系数一般大于5%。从可重复性和准确性的角度考虑，采用真实反应的免疫层析试条来校准定量检测仪显然不可行。必须发明一种可重复、易于获取和保存、与真实试条颜色接近的校准试条来执行免疫层析试条定量检测仪的校准工作。 

发明内容

本发明为解决免疫层析试条定量检测仪的校准问题，提供一种免疫层试条定量检测仪的校准试条及其制作方法，弥补仪器校准环节的缺失，确保检测结果的一致性和准确性。 

一种免疫层析试条定量检测仪的校准试条及其制作方法，该制作方法按以下步骤进行： 

步骤1：选取一批免疫层析试条，用含有不同浓度抗原的免疫标准品或者用已知抗原浓度的血清依次加样；

步骤2：待免疫层析试条反应时间到后，分别挑选出光密度值（OD值）检测结果为1.5±10%， 3.5±8%， 5.5±5%， 8.5±3%， 12.5±2%的免疫层析试条共5批，编号为1至5号，每批试条不少于20条；

步骤3：分别剪去或揭去试条上的吸水纸，终止免疫层析试条的层析反应，放置于阴凉处晾干；

步骤4：晾干后，用图像采集装置依次获取每批免疫层析试条测试窗口中的图像，包括测试线、质控线和硝酸纤维素膜（nitrocellulose filter membrane，简称NC膜）空白区域这三部分。

步骤5：在电脑中采用图像处理软件对测试窗口中的测试线、质控线和硝酸纤维素膜图像分别取色，获取各显色区域的尺寸和颜色数据，并采用图像处理方法进行处理，依据各自尺寸大小，在图像处理软件中绘制出每批试条测试窗口中相应的图像； 

步骤6：采用彩色打印机在附有硝酸纤维素膜的塑料基板上按对应尺寸和颜色分别打印出1至5号免疫层析试条所对应的校准图像，并按对应位置将打印出有校准图像的塑料基板放置于免疫层析试条的外壳中，制作成校准试条。

这里需要说明的是：所述图像采集装置为彩色扫描仪或数码相机。所述图像采集装置的光学分辨率不低于2400×4800dpi。所述图像处理方法包括渐变和锐化。所述彩色打印机的打印分辨率不小于9600×2400dpi。 

当然，为了提高校准试条的产品质量，该制作方法还包括校准试条的检验步骤，所述检验步骤为用免疫层析试条测试仪测试1至5号原始免疫层析试条对应的校准试条，其校准试条与原始免疫层析试条的光密度值检测结果的偏差分别不大于10%，8%，5%，3%，2%；每个颜色梯度的校准试条按同样方法制作10条，其变异系数分别不大于5%，4%，2%，1%，1%。 

采用上述制作方法所制作出来的免疫层析试条定量检测仪的校准试条，包括试条外壳，所述试条外壳具有测试窗口，所述试条外壳内腔设置有校准试条样板，所述校准试条样板包括设置有硝酸纤维素膜的塑料基板，所述塑料基板的显色窗口中设置有测试线和质控线，所述测试线和质控线由彩色打印机按照真实免疫层析试条采集到的尺寸和颜色打印在硝酸纤维素膜上。 

本发明的有益效果在于：本发明为免疫层析定量检测仪提供一种通用的校准方法，以解决免疫层析试条批内、批间差异较大，缺少仪器校准方法的问题。本发明的实施可以提高免疫层析试条定量检测仪实际使用中的一致性和准确性。同时，本发明具有可重复性好、易于获取、准确性高、成本低廉等优点。 

附图说明

图1为免疫层析试条定量检测仪的校准试条的结构视图。 

图2为免疫层析试条定量检测仪的校准试条的俯视图。 

标号说明：1－加样孔   2－样品垫   3－玻璃纤维膜   4－塑料基板   5－测试线   6－硝酸纤维膜   7－测试窗口   8－质控线    9－吸水纸   10－试条外壳。 

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、构造特征、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图详予说明。 

一种免疫层析试条定量检测仪的校准试条，可以用来校准由纳米金颗粒、高分子纳米荧光微粒等长寿命物质作为显色标记物的免疫层析试条定量检测仪。它包括试条外壳10，所述试条外壳10具有测试窗口7，所述试条外壳10内腔设置有校准试条样板，所述校准试条样板包括设置有硝酸纤维素膜6的塑料基板4，所述塑料基板4的显色窗口中设置有测试线5和质控线8，所述测试线5和质控线8由彩色打印机按照真实免疫层析试条采集到的尺寸和颜色打印在硝酸纤维素膜6上。 

该校准试条的测试线颜色由浅至深应至少具有5个梯度，即校准试条至少由5块组成；测试线和质控线的颜色（RGB、HSV等）由对应颜色的真实试条经过扫描仪、数码相机等图像采集装置转变为数字图像，在计算机上由图像处理软件处理后得到；每个梯度颜色应采集不少于20根同一颜色范围的试条图像来确定；测试线和质控线由彩色打印机按照真实免疫层析试条的尺寸打印在硝酸纤维素膜上；用于打印的硝酸纤维素膜固定在塑料基板（4）之上；校准试条的外壳和与之对应的免疫层析试条外壳一致。 

一种免疫层析试条定量检测仪的校准试条的制作方法，该制作方法按以下步骤进行： 

步骤1：配置具有一定浓度梯度的免疫标准品溶液共5组，或者选用已知抗原浓度的血清5份，按免疫层析试条说明书中的规定剂量向加样孔1中加样；

步骤2：待免疫层析试条反应时间到后，分别挑选OD值检测结果为低（1.5±10%）, 中低（3.5±8%）, 中（5.5±5%）, 中高（8.5±3%）, 高（12.5±2%）的免疫层析试条5批，每批至少20条；

步骤3：分别剪去或揭去免疫层析试条右侧吸水纸9，终止免疫层析试条上的层析反应，放置于阴凉处晾干。

步骤4：用彩色扫描仪或数码相机（光学分辨率不低于2400×4800dpi）分别获取免疫层析试条的测试窗口7图像，包含：测试线5、硝酸纤维膜6和质控线8。 

步骤5：在电脑中采用PhotoShop、绘图板等图像编辑软件对测试窗口7中的测试线5、硝酸纤维膜6和质控线8分别取色，获取各显色区域的颜色数据（RGB或HSV）。 

步骤6：对每批试条测试窗口中的测试线5、硝酸纤维膜6和质控线8图像采用渐变、锐化等图像处理方法处理，依据各自尺寸大小，在绘图软件中绘制出每批试条测试窗口中相应的图像。 

步骤7：用彩色打印机（打印分辨率不小于：9600×2400dpi）在附有硝酸纤维膜6上分别打印出1至5号试条对应的试条图像，并按对应位置将打印出的试条图像放置于试条外壳7中。 

步骤8：用免疫层析试条测试仪测试与1至5号试条对应的校准试条，其OD值检测结果与原始试条OD值的偏差不大于表1中的对应数值。 

步骤9：每个颜色梯度的校准试条按同样方法制作10条，其变异系数不大于表1对应数值。 

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均包括在本发明的专利保护范围内。 

Claims (5)

1.一种免疫层析试条定量检测仪的校准试条制作方法，其特征在于，按以下步骤进行：

步骤1：选取一批免疫层析试条，用含有不同浓度抗原的免疫标准品或者用已知抗原浓度的血清依次加样；

步骤2：待免疫层析试条反应时间到后，分别挑选出光密度值检测结果为1.5±10%， 3.5±8%， 5.5±5%， 8.5±3%， 12.5±2%的免疫层析试条共5批，编号为1至5号，每批试条不少于20条；

步骤3：分别剪去或揭去试条上的吸水纸，终止免疫层析试条的层析反应，放置于阴凉处晾干；

步骤4：晾干后，用图像采集装置依次获取每批免疫层析试条测试窗口中的图像，包括测试线、质控线和硝酸纤维素膜空白区域这三部分，所述图像采集装置的光学分辨率不低于2400×4800dpi；

步骤5：在电脑中采用图像处理软件对测试窗口中的测试线、质控线和硝酸纤维素膜图像分别取色，获取各显色区域的尺寸和颜色数据，并采用图像处理方法进行处理，依据各自尺寸大小，在图像处理软件中绘制出每批试条测试窗口中相应的图像；

步骤6：采用彩色打印机在附有硝酸纤维素膜的塑料基板上按对应尺寸和颜色分别打印出1至5号免疫层析试条所对应的校准图像，并按对应位置将打印出有校准图像的塑料基板放置于免疫层析试条的外壳中，制作成校准试条，所述彩色打印机的打印分辨率不小于9600×2400dpi；

步骤7：校准试条的检验，所述检验步骤为用免疫层析试条测试仪测试1至5号原始免疫层析试条对应的校准试条，其校准试条与原始免疫层析试条的光密度值检测结果的偏差分别不大于10%，8%，5%，3%，2%；每个颜色梯度的校准试条按同样方法制作10条，其变异系数分别不大于5%，4%，2%，1%，1%。

2.根据权利要求1所述的免疫层析试条定量检测仪的校准试条制作方法，其特征在于：所述图像采集装置为彩色扫描仪或数码相机。

3.根据权利要求1所述的免疫层析试条定量检测仪的校准试条制作方法，其特征在于：所述图像处理方法包括渐变和锐化。

4.一种采用权利要求1-3中任意一种制作方法所制作出来的免疫层析试条定量检测仪的校准试条，包括试条外壳，所述试条外壳具有测试窗口，其特征在于：所述试条外壳内腔设置有校准试条样板，所述校准试条样板包括设置有硝酸纤维素膜的塑料基板，所述塑料基板的显色窗口中设置有测试线和质控线，所述测试线和质控线由彩色打印机按照真实免疫层析试条采集到的尺寸和颜色打印在硝酸纤维素膜上。

5.根据权利要求4所述的免疫层析试条定量检测仪的校准试条，其特征在于：测试线颜色由浅至深应至少具有5个梯度。