CN103063491B - 一种孢子捕捉仪捕捉物样本的制作与显微镜观察方法 - Google Patents

Abstract

一种孢子捕捉仪捕捉物样本的制作与显微镜观察方法，涉及一种样本的制作与观察方法。提供无需采用浮载剂，操作便捷，适宜显微镜镜检，捕捉物样本可长期保存重复观察的一种孢子捕捉仪捕捉物样本的制作与显微镜观察方法。采用以载玻片为收集载体的便携式、固定式或移动式孢子捕捉仪；或采用连续式孢子自动捕捉仪。方便在野外或田间制作捕捉样本，便于捕捉物样本的保存和传递；捕捉物样本不需浮载剂，可直接贴在载玻片上，便于在显微镜下作各种必要的镜检观察、记录，拍照可获取更加清晰的相片，操作十分方便；制作的捕捉物样本可以长久保存，并可重复观察使用。

Description

一种孢子捕捉仪捕捉物样本的制作与显微镜观察方法

技术领域

本发明涉及一种样本的制作与观察方法，尤其是涉及一种孢子捕捉仪（器）捕捉捕捉物样本的制作与显微镜观察方法。

技术背景

采用孢子捕捉仪（器）捕捉空气中的真菌孢子、花粉、飘浮物等，被广泛应用于植保领域中真菌病害的病理研究和防治提供可靠的数据；也广泛应用于农学和园艺领域中各种植物花粉收集，以满足应用单位的育种和科研需要；同时也应用于环保、医学流行病学领域中测试区域空气中的飘浮物（致敏物）。以上这些捕捉工作主要多在野外或田间进行，但这些捕捉工作最终都要回室内对捕捉物样本进行显微镜镜检观察，这是利用各种孢子捕捉仪（器）进行以上这些捕捉工作的最终、最关键的重要环节（1.周益林,黄幼玲,段霞瑜.植物病原菌监测方法和技术.植物保护,2001,33（3）:20-23；2.邱康俊,胡汉峰,胡凝,江晓东,顾松山.作物花粉自动采集传感器的研制与定标.大气科学学报,2011,34（4）:497-503；3.何月琴,王玉良.通化地区空气中花粉调查及其与变态反应疾病的关系.吉林医学情报,1989(6):56-58；4.张军,徐新,张增信,张强,闫少峰.南京市空气中花粉特征及其与气象条件关系.气象与环境学报,2009,25（5）:67-71.）。在目前，利用便携式、固定式或移动式，符合GB/T24689.3-2009标准的孢子捕捉仪（器）（5.国家标准GB/T24689.3:植物保护机械孢子捕捉仪（器）（GB/T24689.3-2009）.），对空气中真菌孢子、花粉和（或）飘浮物等的捕捉及用显微镜镜检观察的样本，主要是采用涂抹有黏性物质（如凡士林等）的载玻片作为捕捉载体，然后带回室内直接镜检观察；而利用连续式孢子自动捕捉仪（器），如天孢子收集器使用专门的捕捉带或透明胶带捕捉后，取回室内需以乳酚油作浮载剂将其粘于载玻片上后作镜检观察（6.Aeroall ergen Monitoring Standard for The As iaPacific Region:A WAO(World Allergy Organization)manual for the useof the Burkardvolumetric spore trap and Burkard personal volumetric air sampler(2007).）。

若在野外或田间采用上述这些方法开展捕捉工作，捕捉物样本在回室内进行显微镜镜检观察的传递过程中，捕捉物样本因直接裸露在捕捉载体上，而可能造成污染；同时捕捉物样本可能会因黏性物质颗粒度、透明度的干扰，影响到镜检观察的清晰度，镜检观察步骤也较为烦琐，捕捉物样本也不适于长久保存和重复观察使用。

发明内容

本发明的目的是提供无需采用浮载剂，操作便捷，适宜显微镜镜检，捕捉物样本可长期保存重复观察的一种孢子捕捉仪捕捉物样本的制作与显微镜观察方法。

本发明技术方案之一为：一种孢子捕捉仪捕捉物样本的制作与显微镜观察方法，采用以载玻片为收集载体的便携式、固定式或移动式孢子捕捉仪，包括以下步骤：

A、取一片干净显微镜载玻片，面向集气口的一面朝上，在该载玻片表面滴无菌水，根据需要取一段透明胶带，所述透明胶带以聚酯薄膜为基材，透明胶带比载玻片长度短、宽度窄，将透明胶带黏性胶面朝上放置在水滴上，并排除气泡和多余的水，使透明胶带紧贴在载玻片上，制成载体玻片，放进孢子捕捉仪的仓室；

B、捕捉工作结束后，将捕捉载体玻片从孢子捕捉仪的仓室取出，在透明胶带黏性胶面上再覆盖上洁净的、等宽等长的透明聚酯薄膜，将吸附在黏性胶面上的捕捉物封存在两片透明聚酯薄膜之间，制成附着在载体玻片上由两片透明聚酯薄膜及其之间捕捉物组成的捕捉物样本，并在适当的位置记录必要的信息待用；

C、将步骤B所制得的捕捉物样本从载体玻片上取下，带回室内镜检观察，镜检观察时，另取一片干净载玻片，在该载玻片表面滴无菌水，再将捕捉物样本放置在水滴上，排除气泡和多余的水液，使捕捉物样本紧贴在该载玻片上，制成镜检玻片，将镜检玻片放置在显微镜下作各种必要的镜检观察，并记录和拍照，镜检观察完成后，将镜检玻片从显微镜中取出，然后再从载玻片上取下捕捉物样本作长久保存；或将步骤B所制得的附着有捕捉物样本的载体玻片直接带回室内作为镜检玻片，放置在显微镜下作各种必要的镜检观察，并记录和拍照；

D、镜检观察完成后，将镜检玻片从显微镜中取出，然后再从载玻片上取下捕捉物样本作长久保存；若显微镜采用高倍油镜，则先将镜检玻片上的油镜油擦净，然后取下捕捉物样本作长久保存。

本发明技术方案之二为：一种孢子捕捉仪捕捉物样本的制作与显微镜观察方法，采用连续式孢子自动捕捉仪（如天孢子收集器），包括以下步骤：

A、根据需要，取1条长度与仪器匹配的以聚酯薄膜为基材的透明胶带，安放在连续式孢子自动捕捉仪收集圆鼓载体上，用于替代连续式孢子自动捕捉仪的专用孢子收集带；透明胶带的黏性胶面朝外，然后按连续式孢子捕捉仪操作方法将所述收集圆鼓载体放进孢子捕捉仪的仓室内；

B、捕捉工作结束后，将收集圆鼓载体从捕捉仪的仓室取出，在收集圆鼓载体上的透明胶带的黏性胶面上再覆盖上洁净、等宽等长的透明聚酯薄膜带，将吸附在黏性胶面上的捕捉物封存在两透明聚酯薄膜之间，制作成连续捕捉物样本带，在适当的位置记录必要的信息后带回室内；

C、回室内后，用连续式孢子自动捕捉仪配备的标准切割尺，将连续捕捉物样本带按照采样单位时间切割分段，每单位时间1段捕捉物样本，并在适当的位置记录必要的信息待用；

D、对每天的捕捉物样本进行显微镜镜检观察时，取一干净载玻片并在表面滴无菌水，再将捕捉物样本放置在水滴上，排除气泡和多余的水液，让捕捉样本紧贴在该载玻片上，制成镜检玻片，将镜检玻片放置在显微镜下作各种必要的镜检观察，并记录和拍照；

E、镜检观察完成后，将镜检玻片从显微镜中取出，并取下捕捉物样本作长久保存；若显微镜采用高倍油镜，则先将镜检玻片上的油镜油擦净，然后再取下捕捉物样本作长久保存。

与现有方法比较，本发明具有如下突出优点：

1）方便在野外或田间制作捕捉样本，便于捕捉物样本的保存和传递；

2）捕捉物样本不需浮载剂，可直接贴在载玻片上，便于在显微镜下作各种必要的镜检观察、记录，拍照可获取更加清晰的相片，操作十分方便；

3）采用本发明制作的捕捉物样本可以长久保存，并可重复观察使用。

附图说明

图1为本发明实施例1制作的捕捉物样本，在Leica DM6000B显微镜40倍物镜下，以明场方式进行镜检观察的结果照片。在图1中，标尺为20μm。

图2为使用与实施例1同样的仪器和同样的条件，但采用现有常规方法制作的捕捉物样本镜检观察的结果照片（作为图1的对照，比较不同捕捉物样本制作方法在显微镜下镜检观察的结果）。在图2中，标尺为20μm。

图3为本发明实施例1制作的捕捉物样本，在Leica DM6000B显微镜40倍物镜下，以明场方式进行镜检观察的结果照片（图3中，白色方框表示图4的观察区域）。在图3中，标尺为20μm。

图4为图3中的白色方框区域在Leica DM6000B显微镜100倍（高倍）油镜下，以明场方式进行镜检的观察结果照片。在图4中，标尺为10μm。

图5为本发明实施例1制作的捕捉物样本，在Leica DM6000B显微镜100倍油镜下，以明场方式进行镜检的观察结果照片。在图5中，标尺为10μm。

图6为本发明实施例1制作的捕捉物样本，在Leica DM6000B显微镜100倍油镜下，以DIC（微分干涉差）方式进行镜检的观察结果照片。在图6中，标尺为10μm。

具体实施方式

实施例1

一种孢子捕捉仪捕捉物样本的制作与显微镜观察方法，采用以载玻片为捕捉物载体，型号为BZY-HY-B的便携式孢子捕捉仪，包括以下步骤：

A、取一片干净显微镜载玻片，面向集气口的一面朝上，在该载玻片表面1滴无菌水，取一段以聚酯薄膜为基材的透明胶带，透明胶带比载玻片长度短、宽度窄，将透明胶带黏性胶面朝上放置在水滴上，并排除气泡和多余的水，使透明胶带紧贴在载玻片上，制成载体玻片，放进孢子捕捉仪的仓室；

B、捕捉工作结束后，将捕捉载体玻片从孢子捕捉仪的仓室取出，在透明胶带黏性胶面上再覆盖上洁净的、等宽等长的透明聚酯薄膜，将吸附在黏性胶面上的捕捉物封存在两片透明聚酯薄膜之间，制成附着在载体玻片上由两片透明聚酯薄膜及其之间捕捉物组成的捕捉物样本，并在适当的位置记录必要的信息待用；

C、将步骤B所制得的捕捉物样本从载体玻片上取下，带回室内镜检观察，镜检观察时，另取一片干净载玻片，在该载玻片表面滴无菌水，再将捕捉物样本放置在水滴上，排除气泡和多余的水液，使捕捉物样本紧贴在该载玻片上，制成镜检玻片，将镜检玻片放置在显微镜下作各种必要的镜检观察，并记录和拍照，镜检观察完成后，将镜检玻片从显微镜中取出，然后再从载玻片上取下捕捉物样本作长久保存；或将步骤B所制得的附着有捕捉物样本的载体玻片直接带回室内作为镜检玻片，放置在显微镜下镜检观察，可获得比原方法更加清晰的观察结果（参见图1和2），并便于在不同倍数下观察拍照（参见图3和4），也可作不同方式的细致观察（参见图5和6）；

D、镜检观察完成后，将镜检玻片从显微镜中取出，然后再从载玻片上取下捕捉物样本作长久保存；若显微镜采用高倍油镜，则先将镜检玻片上的油镜油擦净，然后取下捕捉物样本作长久保存。

实施例2

一种孢子捕捉仪捕捉物样本的制作与显微镜观察方法，采用天孢子收集器（连续式孢子自动捕捉仪），包括以下步骤：

A、根据需要，取1条长度与仪器匹配的以聚酯薄膜为基材的透明胶带，安放在连续式孢子自动捕捉仪收集圆鼓载体上，用于替代连续式孢子自动捕捉仪的专用孢子收集带；透明胶带的黏性胶面朝外，然后按连续式孢子捕捉仪操作方法将所述收集圆鼓载体放进孢子捕捉仪的仓室内；

B、捕捉工作结束后，将收集圆鼓载体从捕捉仪的仓室取出，在收集圆鼓载体上的透明胶带的黏性胶面上再覆盖上洁净、等宽等长的透明聚酯薄膜带，将吸附在黏性胶面上的捕捉物封存在两透明聚酯薄膜之间，制作成连续捕捉物样本带，在适当的位置记录必要的信息后带回室内；

C、回室内后，用连续式孢子自动捕捉仪配备的标准切割尺，将连续捕捉物样本带按照7天采样天数，用仪器配备的标准切割尺分为7段，每天1段捕捉物样本，并在适当的位置记录必要的信息待用；

D、对每天的捕捉样本进行显微镜镜检观察时，取一干净载玻片并在表面滴无菌水，再将捕捉物样本放置在水滴上，排除气泡和多余的水液，让捕捉样本紧贴在该载玻片上，制成镜检玻片，将镜检玻片放置在显微镜下作各种必要的镜检观察，并记录和拍照；

E、镜检观察完成后，将镜检玻片从显微镜中取出，并取下捕捉物样本作长久保存；若显微镜采用高倍油镜，则先将镜检玻片上的油镜油擦净，然后再取下捕捉物样本作长久保存。

Claims (2)

1.一种孢子捕捉仪捕捉物样本的制作与显微镜观察方法，采用以载玻片为收集载体的便携式、固定式或移动式孢子捕捉仪，其特征在于包括以下步骤：

A、取一片干净显微镜载玻片，面向集气口的一面朝上，在该载玻片表面滴无菌水，取一段透明胶带，所述透明胶带以聚酯薄膜为基材，透明胶带比载玻片长度短、宽度窄，将透明胶带黏性胶面朝上放置在水滴上，并排除气泡和多余的水，使透明胶带紧贴在载玻片上，制成载体玻片，放进孢子捕捉仪的仓室；

B、捕捉工作结束后，将捕捉载体玻片从孢子捕捉仪的仓室取出，在透明胶带黏性胶面上再覆盖上洁净的、等宽等长的透明聚酯薄膜，将吸附在黏性胶面上的捕捉物封存在两片透明聚酯薄膜之间，制成附着在载体玻片上由两片透明聚酯薄膜及其之间捕捉物组成的捕捉物样本，并在适当的位置记录必要的信息待用；

C、将步骤B所制得的捕捉物样本从载体玻片上取下，带回室内镜检观察，镜检观察时，另取一片干净载玻片，在该载玻片表面滴无菌水，再将捕捉物样本放置在水滴上，排除气泡和多余的水液，使捕捉物样本紧贴在该载玻片上，制成镜检玻片，将镜检玻片放置在显微镜下作各种必要的镜检观察，并记录和拍照，镜检观察完成后，将镜检玻片从显微镜中取出，然后再从载玻片上取下捕捉物样本作长久保存；或

将步骤B所制得的附着有捕捉物样本的载体玻片直接带回室内作为镜检玻片，放置在显微镜下作各种必要的镜检观察，并记录和拍照；镜检观察完成后，将镜检玻片从显微镜中取出，然后再从载玻片上取下捕捉物样本作长久保存；若显微镜采用高倍油镜，则先将镜检玻片上的油镜油擦净，然后取下捕捉物样本作长久保存。

2.一种孢子捕捉仪捕捉物样本的制作与显微镜观察方法，采用连续式孢子自动捕捉仪，其特征在于包括以下步骤：

A、根据需要，取1条长度与仪器匹配的以聚酯薄膜为基材的透明胶带，安放在连续式孢子自动捕捉仪收集圆鼓载体上，用于替代连续式孢子自动捕捉仪的专用孢子收集带；透明胶带的黏性胶面朝外，然后按连续式孢子捕捉仪操作方法将所述收集圆鼓载体放进孢子捕捉仪的仓室内；

B、捕捉工作结束后，将收集圆鼓载体从捕捉仪的仓室取出，在收集圆鼓载体上的透明胶带的黏性胶面上再覆盖上洁净、等宽等长的透明聚酯薄膜带，将吸附在黏性胶面上的捕捉物封存在两透明聚酯薄膜之间，制作成连续捕捉物样本带，在适当的位置记录必要的信息后带回室内；

C、回室内后，用连续式孢子自动捕捉仪配备的标准切割尺，将连续捕捉物样本带按照采样天数切割分段，每天1段捕捉样本，并在适当的位置记录必要的信息待用；

D、对每天的捕捉物样本进行显微镜镜检观察时，取一干净载玻片并在表面滴无菌水，再将捕捉物样本放置在水滴上，排除气泡和多余的水液，让捕捉物样本紧贴在该载玻片上，制成镜检玻片，将镜检玻片放置在显微镜下作各种必要的镜检观察，并记录和拍照；

E、镜检观察完成后，将镜检玻片从显微镜中取出，并取下捕捉物样本作长久保存；若显微镜采用高倍油镜，则先将镜检玻片上的油镜油擦净，然后再取下捕捉物样本作长久保存。