CN103045468A - 用于检测幽门螺杆菌感染的试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种检测幽门螺杆菌感染的试剂盒，所述试剂盒包括盒体，所述盒体设置为四个独立的隔室或凹槽，第一隔室或凹槽内放置有幽门螺杆菌检测试剂，第二隔室或凹槽内放置有取样签，第三隔室或凹槽内放置有幽门螺杆菌检测指示试剂，第四隔室或凹槽内放置有检测试管。本发明提供的试剂盒能够快速、准确、经济的检测幽门螺杆菌感染，适用于临床使用。

Description

用于检测幽门螺杆菌感染的试剂盒

技术领域

本发明属于生物检测领域，涉及一种用于快速检测幽门螺杆菌感染的试剂盒。 

背景技术

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，HP)是通过口腔进入消化道的常见病原菌之一，其感染是慢性B型胃炎的主要病因，与非溃疡型消化不良、胃和十二指肠溃疡及胃癌关系密切。流行病学研究表明，国人无症状或健康人群中HP感染率为39.9-49.6％。 

对于慢性胃炎、消化性溃疡的诊断、治疗及预防而言，幽门螺杆菌的检测已成为临床需要。传统的幽门螺杆菌检测方法主要包括：1)直接从胃粘膜检测HP，包括细菌培养、组织涂片和切片染色；2)素酶试验或14C呼吸实验诊断HP感染；3)免疫学方法，如ELISA等，近年来又有血清学检测及PCR等方法。目前诊断HP感染的标准涉及胃粘膜病理组织检查和细菌培养，但是这些方法都耗时耗力，花费较高，不利于临床应用，更不适用于大批量检测，给HP的检测带来不便。 

幽门螺杆菌的生物特性之一是富含脲素酶，这也是其致病因素之一，因此快速脲素酶诊断方法具有很高的敏感性和特异性，已广泛应用于临床，但是需要通过取新鲜活检胃粘膜来进行检测。 

因次，如何快速、准确、经济的测定HP感染是临床面临的课题之一。 

发明内容

因此，本发明的目的是提供一种能够快速检测幽门螺杆菌感染的试剂盒。 

为实现上述目的，本发明提供的技术解决方案如下： 

一种检测幽门螺杆菌感染的试剂盒，所述试剂盒包括盒体和盒盖，所述盒体内设置至少四个独立的隔室或凹槽，第一隔室或凹槽用于放置尿 素，第二隔室或凹槽用于放置取样签，第三隔室或凹槽用于放置苯酚红，第四隔室或凹槽用于放置检测试管。 

优选地，所述试剂盒还包括比色纸，所述比色纸独立的放置于所述第二或者第四隔室或凹槽内，或者固定于盒盖上，或者固定于所述第四隔室或凹槽内放置的各个检测试管上。 

优选地，所述第四隔室或凹槽内放置的检测试管为多个以可拆卸方式固定于该隔室或凹槽内的检测试管；更优选地，所述第四隔室或凹槽内放置的检测试管为多个以可拆卸方式固定于该隔室或凹槽内独立包装的检测试管。进一步优选地，所述第四隔室或凹槽内顺序设置多个卡槽，卡槽内固定多个独立包装的检测试管；或者所述第四隔室或凹槽内放置的独立包装的检测试管顺序粘结于该隔室或凹槽内。 

优选地，所述尿素为多个独立包装的单位使用剂量的尿素。更优选地，第一隔室或凹槽被分割成多个间隔的单位隔室或凹槽，每个单位隔室或凹槽用于放置单位使用剂量的尿素。 

优选地，所述苯酚红为多个独立包装的单位使用剂量的苯酚红。更优选地，第一隔室或凹槽被分割成多个间隔的单位隔室或凹槽，每个单位隔室或凹槽用于放置单位使用剂量的苯酚红。 

优选地，所述第二隔室或凹槽内放置的取样签为多个以可拆卸方式固定于该隔室或凹槽内的取样签；更优选地，所述第二隔室或凹槽内放置的取样签为多个以可拆卸方式固定于该隔室或凹槽内独立包装的取样签。进一步优选地，所述第四隔室或凹槽内放置的独立包装的取样签顺序粘结于该隔室或凹槽内。 

优选地，所述第一、第二、第三、或者第四隔室或凹槽在盒体内按顺序依次设置，或者，所述盒体包括两层，第一、第二、第三隔室或凹槽位于盒体一层且按顺序依次设置，第四隔室或凹槽位于盒体另一层。 

上述试剂盒的使用方法包括以下步骤：1)在检测试管中配制检测试剂；2)用标本签取新鲜活检舌苔样本，置于检测试管内，孵育1-10分钟；3)观察检测试剂颜色变化。 

其中，所述步骤1)中检测试剂的配制方法如下：取单位使用剂量的苯酚红配制成0.07-0.1％苯酚红溶液，将2.5-3.0g尿素加入至苯酚红溶液中，加超纯水定容至50ml。 

优选地，所述步骤1)中检测试剂的配制方法如下：取单位使用剂量 的苯酚红配制成0.09％苯酚红溶液，将2.75g尿素加入至苯酚红溶液中，加超纯水定容至50ml。 

此外，本发明还提供了上述试剂盒在检测幽门螺杆菌感染中的应用。 

可见，本发明提供的快速定性检测幽门螺杆菌感染的试剂盒包括盒体，设在盒体内的幽门螺杆菌检测试剂、幽门螺杆菌检测指示剂、检测试管、比色纸、取样签。优选地，试剂盒中包括一包尿素，一瓶苯酚红，以可拆卸方式固定的独立包装的检测试管及比色纸的多联检测试管，一包取样签。使用时随时可取下一个独立包装的检测试管进行检测，方便、快速、准确的检测。 

上述的试剂盒，其中脲酶最低检出溶度为0.3-0.7mg/ml，优选为0.5mg/ml。用1％脲素酶系列稀释后，脲素酶最低含量为0.3-0.7mg/ml，尤其为0.5mg/ml时，反应液颜色刚好由黄色转变为红色，脲素酶含量越高，颜色变化越快且深。在上述的快速定性检测幽门螺杆菌感染的试剂盒中，由于检测试剂中含有尿素，遇到能产生脲素酶的幽门螺杆菌，从而使指示剂苯酚红颜色变为浅红色至紫红色。因此，利用该试剂盒，仅根据溶液的颜色变化，就可以轻松的对HP感染进行定性检测。 

将本发明的尿素酶检测与胶体金免疫渗滤法检测结果比较，对322例标本同时行尿素酶试验和胶体金免疫渗滤法检查HP，结果显示，尿素酶试验HP阳性率63.4％(204/322)；胶体金免疫渗滤法HP阳性率64.9％(209/322)；二者符合率为88.5％(285/322)。将本发明的尿素酶检测与PCR法检测结果进行比较，1)癌灶组织：PCR法检查的Hp阳性率为63.0％(29/46)；尿素酶试验检测HP的阳性率为58.7％(27/46)，以PCR法为标准，尿素酶试验的敏感性93.1％(26/29)，特异性94.1％(16/17)，二者符合率91.3％(42/46)。2)癌旁组织：PCR法检测HP的阳性率为73.9％(34/46)，尿素酶试验Hp阳性率为71.7％(33/46)，以PCR为标准，尿素酶试验的敏感性为94.1％(32/34)，特异性91.7％(11/12)，二者符合率为93.5％(43/46)。虽然快速尿素酶和PCR法检测幽门螺杆菌都具有高敏感性及高特异性，但是PCR假阳性的主要原因是底物的污染；假阴性可能由于HP在胃内不规则分布有关，也可能与所采用PCR体系检测灵敏度有关。PCR敏感性为97.5％，特异性为87.5％。而尿素酶的敏感性为86％～98％，特异性为95％～100％。虽然两种方法对胃HP的检出率差异无显著性，但由于PCR方法技术条件要求高，操作繁杂，价格昂贵，又不能快速得出结 果，因而临床应用受到一定限制；而快速尿素酶试验具有简单、快速、经济等优点，因而值得推广应用，特别是在基层医院。 

总之，本发明提供的试剂盒具有以下优点和效果： 

1)试剂盒根据内置的各种检测工具而设置为独立的隔室或凹槽，各检测工具均为独立包装，有效地防止检测工具之间的相互污染，试剂盒稳定，可长时间保存，保质期为12个月。 

2)制备试剂盒的各种原料来源丰富，价格低廉，成本低，经济实用； 

3)各种检测工具，例如检测试剂及检测指示剂均为单位使用剂量的独立包装，取用方便，检测步骤简单，只需1人即可完成整个操作过程； 

4)检测在人体外进行，取样为人口腔舌苔样本，样本采集方便，随时随地都可以取样，适合用大众使用，避免人体与化学试剂的接触，安全可靠； 

5)检测速度快，一次检测时间仅为1-10分钟，减少了人力资源的浪费。 

6)定性准确，实验证明，准确率为96.4％。 

附图说明

图1是采用本发明试剂盒检测的结果，其中A为阴性检测结果，B为阳性检测结果。 

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。 

实施例1

如图1所示，试剂盒内按顺序依次排列有：第一隔室或凹槽(内置有50个独立包装，每个独立包装内含2.75g尿素)，第二隔室或凹槽(内置有50个独立包装，每个独立包装内含2个取样签)，第三隔室或凹槽(内置有50个独立包装，每个独立包装内含5ml苯酚红，第四隔室或凹槽(内置有50个独立包装，每个独立包装内含2个检测试管)。另外，试剂盒还包括直接印刷于盒体盖上的比色纸。 

实施例2

试剂盒内分为两层，试剂盒第一层按顺序依次排列有：第一隔室或凹槽(内置有100个独立包装，每个独立包装内含3.0g尿素)，第二隔室或凹槽(内置有100个独立包装，每个独立包装内含2个取样签)，第三隔室或凹槽(内置有100个独立包装，每个独立包装内含5ml苯酚红。第一隔室或凹槽(内置有100个独立包装，每个独立包装内含2个检测试管)。试剂盒第二层为第四隔室或凹槽(内置有100个独立包装，每个独立包装内含2个检测试管)。另外，试剂盒还包括直接印刷于所述各个检测试管上的比色纸。 

实施例3

本实施例提供了本发明的试剂盒检测幽门螺杆菌感染的方法，具体操作如下： 

1)从试剂盒第一隔室或凹槽内，取一份独立包装的尿素(2.75g)； 

2)从试剂盒第三隔室或凹槽内，取一份独立包装的0.09％苯酚红(5ml)，其中0.09％苯酚红溶液的配制方法如下：a)按0.9g/L的比例称取若干苯酚红，小心倒入研钵中；b)按2ml/L的比例，往研钵中加入1mol/LNaOH溶液，再往里加入30～50ml蒸馏水，研磨15～20min；c)把研磨均匀的苯酚红倒入烧杯中，加入蒸馏水定容到所需量，玻棒搅拌混匀，放置约10min。 

3)从试剂盒第四隔室或凹槽内取出检测试管，在检测试管内加入5ml苯酚红溶液，再加入2.75g尿素，最后加入超纯水定容至50ml，配制成检测试剂； 

4)从试剂盒第二隔室或凹槽内取出标本签，用标本签取新鲜活检舌苔样本，置于检测试管内； 

5)室温5分钟后，观察结果。 

对两份活检舌苔样本进行检测前后的检测试剂颜色变化结果，阴性结果(无脲酶)，检测试剂(黄色)——保持黄色；阳性结果(有脲酶)，检测试剂(黄色)——变为浅红色至紫红色。 

实施例4

本实施例提供了对本发明的试剂盒进行分析灵敏度评估。 

1)实验要求 

实验人员应熟悉检测方法与仪器操作；采用合适的质控品并保持仪器处于正常状态；用于实验的试剂应为同一批号，且在有效期内。 

2)实验材料和方法 

该试剂盒为定性检测试剂盒，以经测试管内液体颜色由黄色转变为红色判断为阳性。因此，设计一系列浓度的脲素酶溶液，研究该试剂的最低检出量(检测试剂在1分钟内正好变色的最低浓度)。 

用甘油和灭菌水以4∶6比例配制成的脲酶稀释液作为空白样品，并用稀释液作系列稀释配成0、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70mg/ml的脲酶系列样品，每个浓度配制3份。用在有效期内的三批次的幽门螺杆菌检测试剂对样品重复测定3次。观察其颜色的变化；若1分钟内反应液体颜色由黄色变为红色判断为阳性，标记为“+”，若不变色，则为阴性，标记为“-”记录每次检测到的颜色变化，8个“+”认定为合格。 

表1 幽门螺杆菌检测试剂对不同浓度脲素酶的检测结果 

从表1的结果可以得出，当脲素酶为0.5mg/ml时，三批试剂盒的9次检测结果有8次为阳性，因此，确定0.5mg/ml的脲素酶溶液为试剂盒的最低检出量。 

实施例5

本实施例提供了对本发明的试剂盒进行灵敏度和特异度的评估实验。 

1)实验要求 

(1)操作者必须熟悉方法和/或仪器工作原理，了解并掌握仪器的操作步骤和各项注意事项，能在评估阶段维持仪器的可靠和稳定。 

(2)用于评估试验的样品一般常采用临床实验室收集的稳定和冷冻贮存样本；当实验室收集的样品不稳定或不易得到时，也可考虑使用稳定的、以蛋白质为基质的商品物质，如校准品或质控品。 

2)实验材料和方法 

2010年1月1日至2011年1月1日对因上消化症状接受胃镜检查的患者，排除4周内服用过抗生素、铋剂和质子泵抑制剂等对HP检查有影响的药物者。224例患者进入本研究，男134例，女90例，平均年龄48.4岁(14～83岁)；慢性胃炎176例，消化性溃疡病45例，胃癌3例。分别采取以上对象的牙苔。 

本研究采用舌苔样本进行幽门螺杆菌(HP)培养和寡核苷酸探针杂交和聚合酶链反应(PCR)技术作为“金标准”，以评价本试剂盒的敏感度和特异度。 

舌苔标本Hp检测：用无菌棉签收集舌苔组织3块，分别作尿素酶试验、寡核苷酸探针杂交和聚合酶链反应(PCR)技术和HP培养，3项检测中2项试验阳性作为诊断HP阳性的“金标准”，3项检测均阴性诊断Hp阴性。 

3)评价方法： 

尿素酶试验检测与“金标准”比较。 

4)统计学处理： 

通过计算试验的敏感度及特异度评价试剂盒的可靠性及准确性。 

5)结果与分析 

本发明提供的试剂盒检测舌苔样本的结果与“金标准”的结果相比较(结果见表2)，共入选病例224例，全部患者均做尿素酶试验检测和“金标准”检测，根据“金标准”诊断Hp感染，阳性137例，阴性87例；根据尿素酶实验检验，阳性143例。阴性81例，其中假阳性11例，假阴性5例，敏感度96.4％(132/137)。特异度87.6％(76/87)。 

表2 224例患者HP的脲素酶实验的检测结果 

其中，敏感度＝132/(132+5)×100％＝96.4％； 

特异度＝76/(11+76)×100％＝87.4％； 

总符合率＝(132+76)/(132+11+5+76)×100％＝92.9％。 

可见，本发明提供试剂盒的分析灵敏度，准确度，精密度等各项指标的实验结果均达到了设计的要求，能够满足临床应用的需要。 

Claims (10)

1.一种用于检测幽门螺杆菌感染的试剂盒，所述试剂盒包括盒体和盒盖，其特征在于，所述盒体内设置至少四个独立的隔室或凹槽，第一隔室或凹槽用于放置尿素，第二隔室或凹槽用于放置取样签，第三隔室或凹槽用于放置苯酚红，第四隔室或凹槽用于放置检测试管。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括比色纸，所述比色纸独立的放置于所述第二或者第四隔室或凹槽内，或者固定于盒盖上，或者固定于所述第四隔室或凹槽内放置的各个检测试管上。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述第四隔室或凹槽内放置的检测试管为多个以可拆卸方式固定于该隔室或凹槽内的检测试管；

优选地，所述第四隔室或凹槽内放置的检测试管为多个以可拆卸方式固定于该隔室或凹槽内独立包装的检测试管；

更优选地，所述第四隔室或凹槽内顺序设置多个卡槽，卡槽内固定多个独立包装的检测试管；或者所述第四隔室或凹槽内放置的独立包装的检测试管顺序粘结于该隔室或凹槽内。

4.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述尿素为多个独立包装的单位使用剂量的尿素；

优选地，所述第一隔室或凹槽被分割成多个间隔的单位隔室或凹槽，每个单位隔室或凹槽用于放置单位使用剂量的尿素。

5.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述苯酚红为多个独立包装的单位使用剂量的苯酚红；

优选地，所述第三隔室或凹槽被分割成多个间隔的单位隔室或凹槽，每个单位隔室或凹槽用于放置单位使用剂量的苯酚红。

6.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述第二隔室或凹槽内放置的取样签为多个以可拆卸方式固定于该隔室或凹槽内的取样签；

优选地，所述第二隔室或凹槽内放置的取样签为多个以可拆卸方式固定于该隔室或凹槽内独立包装的取样签；

更优选地，所述第四隔室或凹槽内放置的独立包装的取样签顺序粘结于该隔室或凹槽内。

7.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述第一、第二、第三、或者第四隔室或凹槽在盒体内按顺序依次设置；或者，

所述盒体包括两层，第一、第二、第三隔室或凹槽位于盒体一层且按顺序依次设置，第四隔室或凹槽位于盒体另一层。

8.权利要求1至7中任一项所述的试剂盒的使用方法，包括以下步骤：

1)在检测试管中配制检测试剂；

2)用标本签取新鲜活检舌苔样本，置于检测试管内，孵育1-10分钟；

3)观察检测试剂颜色变化。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中检测试剂的配制方法如下：取单位使用剂量的苯酚红配制成0.07-0.1％苯酚红溶液，将2.5-3.0g尿素加入至苯酚红溶液中，加超纯水定容至50ml。

10.权利要求1至7中任一项所述的试剂盒在检测幽门螺杆菌感染中的应用。

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