CN102961763B - 含天门冬氨酸-葡聚糖的顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了含天门冬氨酸-葡聚糖的顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂及其制备方法。解决现有技术造影剂弛豫率低的问题。该造影剂是以葡聚糖为载体，将天门冬氨酸连接到1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA）上，再与顺磁性金属离子按1:1摩尔比配位获得的配合物。本发明提供的含天门冬氨酸-葡聚糖的顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备方法，通过控制反应原料的用量比、溶液pH值、反应温度及反应时间，制备得到具有较高的弛豫效率的造影剂。该造影剂可以用于磁共振成像，当造影剂成像结束后，所携带的天门冬氨酸对于心脏具有保护作用，是一种双功能的成像造影剂。

Description

含天门冬氨酸-葡聚糖的顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及磁共振成像造影剂，更具体地说，涉及一种含有天门冬氨酸-葡聚糖的顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂及其制备方法。
背景技术
磁共振成像(Magnetic Resonance Imaging, MRI)技术能够在各个角度对生物体进行成像，具有非常高的时间分辨率与空间分辨率，能够呈现完整清晰的解剖图像，在临床诊断中得到了广泛的应用。目前，磁共振成像技术已经成为最有力的医学诊断方法。而磁共振成像造影剂是用于增强造影、提高影像对比度的一类化合物，是一类诊断药物。目前，超过30%的医学诊断需要使用磁共振成像造影剂。已用于临床的磁共振成像造影剂有马根维显Magnevist (Gd-DTPA)、多它灵Dotarem (Gd-DOTA)、钆双铵Omniscan (Gd-DTPA-BMA)、普络显思ProHance (Gd-HPDO3A)等。但是这些磁共振造影剂在体内存留时间短，弛豫效率较低，用药量较大，药物注射频率较高，不具有组织或者器官选择性或靶向性。
近来，糖类由于其特有的性质，如亲水性及其生物相容性，在磁共振成像造影剂的设计、合成中开始引起了人们的关注。据报道(肝靶向性磁共振成像造影剂-含D-半乳糖基的DTPA双酰胺钆配合物的研究,高等学校化学学报,1997,18(7):1072-1079)对配体DTPA的结构进行改造，在该分子两端引入对肝细胞表面去唾液酸糖蛋白受体有靶向识别与结合作用的D-半乳糖基团，得到肝靶向性的磁共振成像造影剂，虽然该造影剂对肝脏具有一定的靶向性，但其弛豫效率较低（为5.3 mmol-1·L·s-1），仍不能满足临床诊断对造影剂增的需求。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术造影剂的弛豫效率低的问题，而提供一种弛豫效率高、双功能的含天门冬氨酸-葡聚糖的顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂及其制备方法。
含天门冬氨酸-葡聚糖的顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂，该造影剂是以葡聚糖为载体，将天门冬氨酸连接到1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA）上，再与顺磁性金属离子按1:1摩尔比配位获得的配合物，其具有如下结构：
m=2或3；Mm+是顺磁性金属离子，是顺磁性金属元素的+2或+3价离子；优选顺磁性金属元素为Sc、Ti、V、Mn、Cu、Mo、Ru、Fe或镧系稀土元素；更优选为镧系稀土元素Gd、Tb、Dy或Nd；
R是   ，i=2；
X1为每个葡聚糖分子上连接的DOTA化合物的数目，X1=31~37；
X2为未参加反应的葡聚糖分子的数目，X2=28~35；
X3为每个葡聚糖分子上连接的天门冬氨酸化合物的数目，X3=25~28。
本发明提供的含天门冬氨酸-葡聚糖的顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备方法，该制备方法包括以下步骤：
（1）将葡聚糖溶解于温度为0~4℃的氢氧化钠溶液中，加入一氯乙酸，搅拌1~3小时后，得到羧甲基化的葡聚糖；
（2）在室温下，将（1）中合成的羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用盐酸调节溶液pH为3.0~4.5，加入2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)，再加入乙二胺，充分反应后，得到胺化的葡聚糖；
（3）将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA）溶解于水中，于0 ~25 ℃分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（S-NHS）与1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），充分反应后，得到DOTA活性酯溶液；
（4）在温度为0~4℃下，将（2）中合成的胺基化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为7.0~8.5，再滴加到（3）中合成的DOTA活性酯溶液中，充分反应后，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（5）在室温下，将（4）中合成的含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为5.0~6.0，之后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），搅拌1~3小时，加入天门冬氨酸，充分反应后，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（6）在室温条件下，将（5）中合成的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶解在水中，再加入顺磁性金属元素的+2或+3价离子溶液，充分反应后，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的顺磁性金属配合物。
其中，步骤（4）中用氢氧化钠溶液调节pH为7.5~8.0；
步骤（5）中用氢氧化钠溶液调节pH为5.5~5.8；
步骤（4）中所述的胺化的葡聚糖与DOTA活性酯的质量比为1:3；
步骤（5）中所述的天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1；
步骤（6）中所述的顺磁性金属优选为Gd。
本发明制备的造影剂可按照常规方法使用：
本发明的造影剂的给药量可因顺磁性金属配合物的种类和作为诊断对象的组织或器官以及诊断设备类型的不同而有很大的变化，一般，注射剂用量为诊断主体的人或其它哺乳动物体的每kg体重0.001到5.0mmol，优选的是0.05到0.5mmol。
本发明中的顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂还可以与重金属离子如铅、铋或金形成重金属配合物，用于制备超声波成像或X-射线CT、PET或与放射性金属离子形成放射性金属配合物用作放射治疗药物或闪烁成像的造影剂。
本发明的含天门冬氨酸-葡聚糖的顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂具有以下的优点：
（1）本发明制备的造影剂因连接了天门冬氨酸这个靶向基团，天门冬氨酸能够参与鸟氨酸循环，促进氧和二氧化碳生成尿素，降低血液中氮和二氧化碳的量，对肝脏产生选择性；当造影剂结束造影后，所携带的天门冬氨酸对于心脏具有保护作用；是一种双功能的造影剂；
（2）本发明制备的造影剂择了具有生物相容性的葡聚糖作为将天门冬氨酸连接到Gd-DOTA上的载体，提高了该类造影剂的安全性；并且，由于葡聚糖基团的亲水性，可以提高造影剂的水溶性，易于配制成所需浓度溶液静脉注射；
（3）本发明制备的造影剂水溶液稳定性好，适合于热压法灭菌消毒；
（4）由本发明的顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备方法，通过严格控制反应原料的用量比、溶液pH值，可以制备得到具有较高弛豫效率，并且造影结束后，能够易于排出体外，不会对人体造成伤害的造影剂；具体的说：
在该造影剂的制备方法的步骤（4）中，胺基化的葡聚糖与DOTA反应时，二者的质量比为1：3，要控制溶液的pH值为7.5~8.0，才能保证连接到葡聚糖上的DOTA的个数多；
在该造影剂的制备方法的步骤（5）中，溶解含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶时，用氢氧化钠溶液调节pH为5.5~5.8，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，才能保证连接到葡聚糖上的天门冬氨酸的个数多；
同时保证在该造影剂的制备方法的步骤（4）中，胺基化的葡聚糖与DOTA反应时，二者的质量比为1：3，要控制溶液的pH值为7.5~8.0，在步骤（5）中溶解含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶时，用氢氧化钠溶液调节pH为5.5~5.8，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，并且步骤（6）中的顺磁性金属离子Gd3+，在上述条件下制备的造影剂的弛豫效率可达到9.1 mmol-1·L·s-1，与广泛应用于临床的多它灵的弛豫效率（4.2 mmol-1·L·s-1）相比，是多它灵的2.2倍左右。
具体实施方式
本发明的发明思想是：本发明基于现有造影剂弛豫效率低的问题而提出，由于天门冬氨酸是生物体内赖氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸等氨基酸及嘌呤、嘧啶碱基的合成前体。它参与鸟氨酸循环，促进氧和二氧化碳生成尿素，降低血液中氮和二氧化碳的量，对肝脏具有选择性。同时天门冬氨酸的化学结构能够负载K+、Mg2+调整心脏功能，改善心肌代谢。因此，将天门冬氨酸连接到Gd-DOTA上，使该造影剂除能够造影成像外，还对心脏具有保护作用。并且，同时我们选择葡聚糖作为载体，将天门冬氨酸连接到Gd-DOTA上，因为葡聚糖具有分子量分布范围宽、溶解性好、无毒、良好的生物相容性和在血液中停留时间长等优点，并且制备简单，相对于其他多糖价格便宜，因此，选择葡聚糖作为连接载体。
本发明的造影剂是以含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸为配体，再与顺磁性金属配位获得的，该造影剂分子量远远大于临床广泛应用的多它灵的分子量，所以在体内旋转速率明显低于多它灵，从而弛豫效率明显提高，并且，同时对心脏具有保护作用，是一种双功能的造影剂。
本发明的含天门冬氨酸-葡聚糖的顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备方法，该制备方法具体包括以下步骤：
（1）将葡聚糖溶解于温度为0~4℃的氢氧化钠溶液中，然后加入一氯乙酸，一氯乙酸与葡聚糖的质量比为1.5:1，搅拌1~3小时后，得到羧甲基化的葡聚糖；
（2）在室温下，将（1）中合成的羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用盐酸调节溶液pH为3.0~4.5，加入2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)，EEDQ与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为1.1:2，加入乙二胺，乙二胺与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为5:1，充分反应后，得到胺化的葡聚糖；
（3）将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA）溶解于水中，于0 ~25 ℃分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（S-NHS）与1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），DOTA，S-NHS，EDC·HCl的质量比为2:1:1，充分反应后，得到DOTA的活性酯溶液；
（4）在温度为0~4℃下，将（2）中合成的胺基化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为7.0~8.5，将得到的溶液滴加到（3）中合成的DOTA的活性酯溶液中，胺化的葡聚糖与DOTA活性酯质量比为1:3，充分反应后，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（5）在室温下，将（4）中合成的含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为5.0~6.0，之后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），1-（3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与羧甲基化的葡聚糖的质量比为1.1:1，搅拌1~3小时，加入天门冬氨酸，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，充分反应后，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（6）在室温条件下，将（5）中合成的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体与顺磁性金属元素的+2或+3价离子溶解在水中，含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸配体中DOTA的物质的量与顺磁性金属元素的+2或+3价离子的物质的量比为1:1.2，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的顺磁性金属配合物。
实施例1
含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钆顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备
（1）将葡聚糖溶解于温度为0 °C的6mol/L氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后逐滴加入异丙醇，搅拌30分钟后加入一氯乙酸，一氯乙酸与葡聚糖的质量比为1.5:1，升高温度到60℃搅拌1小时，甲醇沉淀，过滤，透析，冻干，得到羧甲基化的葡聚糖；
（2） 在室温下，将（1）中所合成的羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用1mol/L盐酸调节溶液pH为3.0，逐滴加入EEDQ溶液，EEDQ与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为1.1:2，搅拌均匀后加入乙二胺，乙二胺与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为5:1，反应4小时，产物用甲醇沉淀，透析，冻干，得到胺化的葡聚糖；
（3）将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA）溶解于水中，于0 °C分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（S-NHS）与1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），DOTA，S-NHS，EDC·HCl的质量比为2:1:1，用NaOH调节pH为6.0，将混合物活化50分钟，得到DOTA的活性酯溶液；
（4）在温度为4℃下，将（2）中的胺化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为7.5，得到的溶液滴加到（3）中的DOTA的活性酯溶液中，胺化的葡聚糖与DOTA活性酯质量比为1:3，搅拌24小时，保持pH为7.5，浓缩，透析，冻干，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（5）在室温下，将（4）中所合成的含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调溶液的pH为5.5，之后加入1-（3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl)，1-（3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量比为1.1:1，搅拌1.5小时，加入天门冬氨酸，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，用氢氧化钠溶液调节的pH为7.5，反应24小时，透析，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（6）在室温条件下将（5）中得到的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体与0.2mol/L GdCl3溶液分别溶解在水中，含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体中DOTA的物质的量与上述GdCl3中金属Gd离子的物质的量比为1:1.2，用1mol/LNaOH调pH值为5.5，于室温搅拌过夜，透析，交换透析袋外水溶液直至其纵向弛豫时间T1大于3000ms，浓缩，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钆顺磁性金属配合物。用反转恢复法于核磁共振仪上测定其弛豫时间T1，可求出含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钆顺磁性金属配合物的弛豫效率r1为9.1 mmol-1·L·s-1。
实施例2
含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钆顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备
（1）将葡聚糖溶解于温度为4°C的6mol/L氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后逐滴加入异丙醇，搅拌30分钟后加入一氯乙酸，一氯乙酸与葡聚糖的质量比为1.5:1，升高温度到搅拌2小时，甲醇沉淀，过滤，透析，冻干，得到羧甲基化的葡聚糖；
（2） 在室温下，将（1）中所合成的羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用1mol/L盐酸调节溶液pH为4.5，逐滴加入EEDQ溶液，EEDQ与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为1.1:2，搅拌均匀后加入乙二胺，乙二胺与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为5:1，反应4小时，产物用甲醇沉淀，透析，冻干，得到胺化的葡聚糖；
（3）将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA）溶解于水中，于25°C分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（S-NHS）与1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），DOTA，S-NHS，EDC·HCl的质量比为2:1:1，用NaOH调节pH为6.0，将混合物活化50分钟，得到DOTA的活性酯溶液；
（4）在温度为0℃下，将（2）中的胺化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为8.0，得到的溶液滴加到（3）中的DOTA的活性酯溶液中，胺化的葡聚糖与DOTA活性酯质量比为1:3，搅拌24小时，保持pH为8.0，浓缩，透析，冻干，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（5）在室温下，将（4）中所合成的含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调溶液的pH为5.8，之后加入1-（3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量比为1.1:1，搅拌1.5小时，加入天门冬氨酸，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，用氢氧化钠溶液调节的pH为7.5，反应24小时，透析，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（6）在室温条件下，将（5）中得到的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体与0.2mol/L GdCl3溶液分别溶解在水中，含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体中DOTA的物质的量与上述GdCl3中金属Gd离子的物质的量比为1:1.2，用1mol/L NaOH调pH值为5.5，于室温搅拌过夜，透析，交换透析袋外水溶液直至其纵向弛豫时间T1大于3000ms，浓缩，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钆顺磁性金属配合物。用反转恢复法于核磁共振仪上测定其弛豫时间T1，可求出含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钆顺磁性金属配合物的弛豫效率r1为9.1mmol-1·L·s-1。
实施例3
含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钆顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备
（1）将葡聚糖溶解于温度为4°C的6mol/L氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后逐滴加入异丙醇，搅拌30分钟后加入一氯乙酸，一氯乙酸与葡聚糖的质量比为1.5:1，升高温度到搅拌3小时，甲醇沉淀，过滤，透析，冻干，得到羧甲基化的葡聚糖；
（2） 在室温下，将（1）中所合成的羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用1mol/L盐酸调节溶液pH为4.0，逐滴加入EEDQ溶液，EEDQ与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为1.1:2，搅拌均匀后加入乙二胺，乙二胺与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为5:1，反应4小时，产物用甲醇沉淀，透析，冻干，得到胺化的葡聚糖；
（3）将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA）溶解于水中，于12 °C分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（S-NHS）与1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），DOTA，S-NHS，EDC·HCl的质量比为2:1:1，用NaOH调节pH为6.0，将混合物活化50分钟，得到DOTA的活性酯溶液；
（4）在温度为4℃下，将（2）中的胺化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为7.8，得到的溶液滴加到（3）中的DOTA的活性酯溶液中，胺化的葡聚糖与DOTA活性酯质量比为1:3，搅拌24小时，保持pH为7.5，浓缩，透析，冻干，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（5）在室温下，将（4）中所合成的含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调溶液的pH为5.7，之后加入1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），1-（3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量比为1.1:1，搅拌1.5小时，加入天门冬氨酸，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，用氢氧化钠溶液调节的pH为7.5，反应24小时，透析，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（6）在室温条件下将（5）中得到的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体与0.2mol/L GdCl3溶液分别溶解在水中，含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体中DOTA的物质的量与上述GdCl3中金属Gd离子的物质的量比为1:1.2，用1mol/L NaOH调pH值为5.5，于室温搅拌过夜，透析，交换透析袋外水溶液直至其纵向弛豫时间T1大于3000ms，浓缩，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钆顺磁性金属配合物。用反转恢复法于核磁共振仪上测定其弛豫时间T1，可求出含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钆顺磁性金属配合物的弛豫效率r1为9.0mmol-1·L·s-1。
实施例4
含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钆顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备
（1）将葡聚糖溶解于温度为0 °C的6mol/L氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后逐滴加入异丙醇，搅拌30分钟后加入一氯乙酸，一氯乙酸与葡聚糖的质量比为1.5:1，升高温度到60℃搅拌1小时，甲醇沉淀，过滤，透析，冻干，得到羧甲基化的葡聚糖；
（2）在室温下，将羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用1mol/L盐酸调节溶液pH为4.0，加入2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)，EEDQ与天门冬氨酸连接的葡聚糖的质量之比为1.1:2，加入乙二胺，乙二胺与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为5:1，反应4小时，得到胺化的葡聚糖；
（3）将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA)溶解于水中，于4 °C分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（S-NHS)与1-（3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl)，DOTA，S-NHS，EDC·HCl的质量比为2:1:1，用NaOH调节pH为6.0，将混合物活化50 分钟，得到DOTA的活性酯溶液；
（4）在温度为4℃下，将（2）中的胺化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为7.0，得到的溶液滴加到（3)中的DOTA的活性酯溶液中，胺化的葡聚糖与DOTA活性酯质量比为1:3，搅拌24小时，保持pH为7.5，浓缩，透析，冻干，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（5）在室温下，将（4）中所合成的含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调溶液的pH为5.0，之后加入1-（3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），1-（3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量比为1.1:1，搅拌1.5小时，加入天门冬氨酸，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，用氢氧化钠溶液调节的pH为7.5，反应24小时，透析，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（6）在室温条件下将（5）中得到的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体与0.2mol/L GdCl3溶液分别溶解在水中，含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体中DOTA的物质的量与上述GdCl3中金属Gd离子的物质的量比为1:1.2，用1mol/L NaOH调pH值为5.5，于室温搅拌过夜，透析，交换透析袋外水溶液直至其纵向弛豫时间T1大于3000ms，浓缩，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钆顺磁性金属配合物。用反转恢复法于核磁共振仪上测定其弛豫时间T1，可求出含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钆顺磁性金属配合物的弛豫效率r1为8.5mmol-1·L·s-1。
实施例5
含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钆顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备
（1）将葡聚糖溶解于温度为4°C的6mol/L氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后逐滴加入异丙醇，搅拌30分钟后加入一氯乙酸，一氯乙酸与葡聚糖的质量比为1.5:1，升高温度到搅拌3小时，甲醇沉淀，过滤，透析，冻干，得到羧甲基化的葡聚糖；
（2）室温下将羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用1mol/L盐酸调节溶液pH为4.5，加入2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)，EEDQ与天门冬氨酸连接的葡聚糖的质量之比为1.1:2，加入乙二胺，乙二胺与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为5:1，反应4小时，得到胺化的葡聚糖；
（3）将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA）溶解于水中，于4 °C分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（S-NHS）与1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），DOTA，S-NHS，EDC·HCl的质量比为2:1:1，用NaOH调节pH为6.0，将混合物活化50分钟，得到DOTA的活性酯溶液；
（4）在温度为4℃下，将（2）中的胺化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为8.5，得到的溶液滴加到（3）中的DOTA的活性酯溶液中，胺化的葡聚糖与DOTA活性酯质量比为1:3，搅拌24小时，保持pH为7.5，浓缩，透析，冻干，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（5）在室温下，将（4）中所合成的含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调溶液的pH为6.0，之后加入1-（3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量比为1.1:1，搅拌1.5小时，加入天门冬氨酸，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，用氢氧化钠溶液调节的pH为7.5，反应24小时，透析，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（6）在室温条件下将（5）中得到的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体与0.2mol/L GdCl3溶液分别溶解在水中，含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体中DOTA的物质的量与上述GdCl3中金属Gd离子的物质的量比为1:1.2，用1mol/L NaOH调pH值为5.5，于室温搅拌过夜，透析，交换透析袋外水溶液直至其纵向弛豫时间T1大于3000ms，浓缩，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钆顺磁性金属配合物。用反转恢复法于核磁共振仪上测定其弛豫时间T1，可求出含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钆顺磁性金属配合物的弛豫效率r1为8.6mmol-1·L·s-1。
实施例6
含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子锰顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备
（1）将葡聚糖溶解于温度为0 °C的6mol/L氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后逐滴加入异丙醇，搅拌30分钟后加入一氯乙酸，一氯乙酸与葡聚糖的质量比为1.5:1，升高温度到60℃搅拌1小时，甲醇沉淀，过滤，透析，冻干，得到羧甲基化的葡聚糖；
（2） 在室温下，将（1）中所合成的羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用1mol/L盐酸调节溶液pH为3.0，逐滴加入EEDQ溶液，EEDQ与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为1.1:2，搅拌均匀后加入乙二胺，乙二胺与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为5:1，反应4小时，产物用甲醇沉淀，透析，冻干，得到胺化的葡聚糖；
（3）将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA）溶解于水中，于4 °C分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（S-NHS）与1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），DOTA，S-NHS，EDC·HCl的质量比为2:1:1，用NaOH调节pH为6.0，将混合物活化50分钟，得到DOTA的活性酯溶液；
（4）于4℃温度下，将（2）中的胺化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为8.5，得到的溶液滴加到（3）中的DOTA的活性酯溶液中，胺化的葡聚糖与DOTA活性酯质量比为1:3，搅拌24小时，保持pH为7.5，浓缩，透析，冻干，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（5）在室温下，将（4）中所合成含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调溶液的pH为5.5，之后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量比为1.1:1，搅拌1.5小时，加入天门冬氨酸，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，用氢氧化钠溶液调节的pH为7.5，反应24小时，透析，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（6）在室温条件下，将（5）中得到的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体与0.2mol/L MnCl2溶液分别溶解在水中，含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体中DOTA的物质的量与上述MnCl2中金属Mn离子的物质的量比为1:1.2，用1mol/L NaOH调pH值为5.5，于室温搅拌过夜，透析，交换透析袋外水溶液直至其纵向弛豫时间T1大于3000ms，浓缩，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子锰顺磁性金属配合物，测得其弛豫效率r1为8.2 mmol-1·L·s-1。
实施例7
含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子铜顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备
（1）将葡聚糖溶解于温度为0 °C的6mol/L氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后逐滴加入异丙醇，搅拌30分钟后加入一氯乙酸，一氯乙酸与葡聚糖的质量比为1.5:1，升高温度到60℃搅拌1小时，甲醇沉淀，过滤，透析，冻干，得到羧甲基化的葡聚糖；
（2） 在室温下，将（1）中所合成的羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用1mol/L盐酸调节溶液pH为3.0，逐滴加入EEDQ溶液，EEDQ与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为1.1:2，搅拌均匀后加入乙二胺，乙二胺与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为5:1，反应4小时，产物用甲醇沉淀，透析，冻干，得到胺化的葡聚糖；
（3）将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA)溶解于水中，于4 °C分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（S-NHS)与1-（3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl)，DOTA，S-NHS，EDC·HCl的质量比为2:1:1，用NaOH调节pH为6.0，将混合物活化50 分钟，得到DOTA的活性酯溶液；
（4）在温度为4℃下，将（2）中的胺化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为7.5，得到的溶液滴加到（3）中的DOTA的活性酯溶液中，胺化的葡聚糖与DOTA活性酯质量比为1:3，搅拌24小时，保持pH为7.5，浓缩，透析，冻干，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（5）在室温下，将（4）中所合成的含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调溶液的pH为5.5，之后加入1-（3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量比为1.1:1，搅拌1.5小时，加入天门冬氨酸，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，用氢氧化钠溶液调节的pH为7.5，反应24小时，透析，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（6）在室温条件下，将（5）中得到的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体与0.2mol/L CuCl2溶液分别溶解在水中，含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体中DOTA的物质的量与上述CuCl2中金属Cu离子的物质的量比为1:1.2，用1mol/L NaOH调pH值为5.5，于室温搅拌过夜，透析，交换透析袋外水溶液直至其纵向弛豫时间T1大于3000ms，浓缩，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子铜顺磁性金属配合物，测得其弛豫效率r1为8.3 mmol-1·L·s-1。
实施例8
含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子铁顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备
（1）将葡聚糖溶解于温度为0°C的6mol/L氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后逐滴加入异丙醇，搅拌30分钟后加入一氯乙酸，一氯乙酸与葡聚糖的质量比为1.5:1，升高温度到搅拌1.5小时，甲醇沉淀，过滤，透析，冻干，得到羧甲基化的葡聚糖；
（2） 在室温下，将（1）中所合成的羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用1mol/L盐酸调节溶液pH为4.0，逐滴加入EEDQ溶液，EEDQ与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为1.1:2，搅拌均匀后加入乙二胺，乙二胺与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为5:1，反应4小时，产物用甲醇沉淀，透析，冻干，得到胺化的葡聚糖；
（3）将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA）溶解于水中，于4 °C分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（S-NHS）与1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl)，DOTA，S-NHS，EDC·HCl的质量比为2:1:1，用NaOH调节pH为6.0，将混合物活化50 分钟，得到DOTA的活性酯溶液；
（4）在温度为4℃下，将（2）中的胺化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为7.5，得到的溶液滴加到（3）中的DOTA的活性酯溶液中，胺化的葡聚糖与DOTA活性酯质量比为1:3，搅拌24小时，保持pH为7.5，浓缩，透析，冻干，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（5）在室温下，将（4）中所合成的含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调溶液的pH为5.8，之后加入1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl)，1-（3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量比为1.1:1，搅拌1.5小时，加入天门冬氨酸，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，用氢氧化钠溶液调节的pH为7.5，反应24小时，透析，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（6）在室温条件下，将（5）中得到的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体与0.2mol/L FeCl3溶液分别溶解在水中，含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体中DOTA的物质的量与上述FeCl3中金属Fe离子的物质的量比为1:1.2，用1mol/L NaOH调pH值为5.5，于室温搅拌过夜，透析，交换透析袋外水溶液直至其纵向弛豫时间T1大于3000ms，浓缩，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子铁顺磁性金属配合物，测得其弛豫效率r1为8.1 mmol-1·L·s-1。
实施例9
含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子铽顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备
（1）将葡聚糖溶解于温度为0 °C的6mol/L氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后逐滴加入异丙醇，搅拌30分钟后加入一氯乙酸，一氯乙酸与葡聚糖的质量比为1.5:1，升高温度到60℃搅拌1小时，甲醇沉淀，过滤，透析，冻干，得到羧甲基化的葡聚糖；
（2） 在室温下，将（1）中所合成的羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用1mol/L盐酸调节溶液pH为3.0，逐滴加入EEDQ溶液，EEDQ与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为1.1:2，搅拌均匀后加入乙二胺，乙二胺与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为5:1，反应4小时，产物用甲醇沉淀，透析，冻干，得到胺化的葡聚糖；
（3）将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA）溶解于水中，于0°C分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（S-NHS）与1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl)，DOTA，S-NHS，EDC·HCl的质量比为2:1:1，用NaOH调节pH为6.0，将混合物活化50 分钟，得到DOTA的活性酯溶液；
（4）在温度为4℃下，将（2）中的胺化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为7.5，得到的溶液滴加到（3）中的DOTA的活性酯溶液中，胺化的葡聚糖与DOTA活性酯质量比为1:3，搅拌24小时，保持pH为7.5，浓缩，透析，冻干，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（5）在室温下，将（4）中所合成的含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调溶液的pH为5.5，之后加入1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl)，1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量比为1.1:1，搅拌1.5小时，加入天门冬氨酸，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，用氢氧化钠溶液调节的pH为7.5，反应24小时，透析，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（6）在室温条件下，将（5）中得到的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体与0.2mol/L TbCl3溶液分别溶解在水中，含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体中DOTA的物质的量与上述TbCl3中金属Tb离子的物质的量比为1:1.2，用1mol/L NaOH调pH值为5.5，于室温搅拌过夜，透析，交换透析袋外水溶液直至其纵向弛豫时间T1大于3000ms，浓缩，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子铽顺磁性金属配合物，测得其弛豫效率r1为8.1 mmol-1·L·s-1。
实施例10
含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子镝顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备
（1）将葡聚糖溶解于温度为4°C的6mol/L氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后逐滴加入异丙醇，搅拌30分钟后加入一氯乙酸，一氯乙酸与葡聚糖的质量比为1.5:1，升高温度到搅拌2小时，甲醇沉淀，过滤，透析，冻干，得到羧甲基化的葡聚糖；
（2） 在室温下，将（1）中所合成的羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用1mol/L盐酸调节溶液pH为4.5，逐滴加入EEDQ溶液，EEDQ与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为1.1:2，搅拌均匀后加入乙二胺，乙二胺与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为5:1，反应4小时，产物用甲醇沉淀，透析，冻干，得到胺化的葡聚糖；
（3）将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA)溶解于水中，于25°C分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（S-NHS）与1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），DOTA，S-NHS，EDC·HCl的质量比为2:1:1，用NaOH调节pH为6.0，将混合物活化50 分钟，得到DOTA的活性酯溶液；
（4）在温度为0℃下，将（2）中的胺化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为8.0，得到的溶液滴加到（3）中的DOTA的活性酯溶液中，胺化的葡聚糖与DOTA活性酯质量比为1:3，搅拌24小时，保持pH为7.5，浓缩，透析，冻干，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（5）在室温下，将（4）中所合成的含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调溶液的pH为5.8，之后加入1-（3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl)，1-（3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量比为1.1:1，搅拌1.5小时，加入天门冬氨酸，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，用氢氧化钠溶液调节的pH为7.5，反应24小时，透析，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（6） 在室温条件下，将（5）中得到的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体与0.2mol/L DyCl3溶液分别溶解在水中，含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体中DOTA的物质的量与上述DyCl3中金属Dy离子的物质的量比为1:1.2，用1mol/L NaOH调pH值为5.5，于室温搅拌过夜，透析，交换透析袋外水溶液直至其纵向弛豫时间T1大于3000ms，浓缩，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子镝顺磁性金属配合物，测得其弛豫效率r1为8.3 mmol-1·L·s-1。
实施例11
含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钕顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备
（1）将葡聚糖溶解于温度为0 °C的6mol/L氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后逐滴加入异丙醇，搅拌30分钟后加入一氯乙酸，一氯乙酸与葡聚糖的质量比为1.5:1，升高温度到60℃搅拌1小时，甲醇沉淀，过滤，透析，冻干，得到羧甲基化的葡聚糖；
（2） 在室温下，将（1）中所合成的羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用1mol/L盐酸调节溶液pH为3.0，逐滴加入EEDQ溶液，EEDQ与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为1.1:2，搅拌均匀后加入乙二胺，乙二胺与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为5:1，反应4小时，产物用甲醇沉淀，透析，冻干，得到胺化的葡聚糖；
（3）将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA)溶解于水中，于4 °C分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（S-NHS）与1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl)，DOTA，S-NHS，EDC·HCl的质量比为2:1:1，用NaOH调节pH为6.0，将混合物活化50 分钟，得到DOTA的活性酯溶液；
（4）在温度为4℃下，将（2）中的胺化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为7.5，得到的溶液滴加到（3）中的DOTA的活性酯溶液中，胺化的葡聚糖与DOTA活性酯质量比为1:3，搅拌24小时，保持pH为7.5，浓缩，透析，冻干，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（5）在室温下，将（4）中所合成的含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调溶液的pH为5.5，之后加入1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量比为1.1:1，搅拌1.5小时，加入天门冬氨酸，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，用氢氧化钠溶液调节的pH为7.5，反应24小时，透析，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（6）在室温条件下，将（5）中得到的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体与0.2mol/L NdCl3溶液分别溶解在水中，含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体中DOTA的物质的量与上述NdCl3中金属Nd离子的物质的量比为1:1.2，用1mol/L NaOH调pH值为5.5，于室温搅拌过夜，透析，交换透析袋外水溶液直至其纵向弛豫时间T1大于3000ms，浓缩，冻干，得到含天含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钕顺磁性金属配合物，测得其弛豫效率r1为8.0 mmol-1·L·s-1。
实施例12
含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钪顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备
（1）将葡聚糖溶解于温度为0°C的6mol/L氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后逐滴加入异丙醇，搅拌30分钟后加入一氯乙酸，一氯乙酸与葡聚糖的质量比为1.5:1，升高温度到搅拌1.5小时，甲醇沉淀，过滤，透析，冻干，得到羧甲基化的葡聚糖；
（2） 在室温下，将（1）中所合成的羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用1mol/L盐酸调节溶液pH为3.0，逐滴加入EEDQ溶液，EEDQ与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为1.1:2，搅拌均匀后加入乙二胺，乙二胺与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为5:1，反应4小时，产物用甲醇沉淀，透析，冻干，得到胺化的葡聚糖；
（3）将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA）溶解于水中，于4 °C分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（S-NHS）与1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），DOTA，S-NHS，EDC·HCl的质量比为2:1:1，用NaOH调节pH为6.0，将混合物活化50 分钟，得到DOTA的活性酯溶液；
（4）在温度为4℃下，将（2）中的胺化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为7.5，得到的溶液滴加到（3）中的DOTA的活性酯溶液中，胺化的葡聚糖与DOTA活性酯质量比为1:3，搅拌24小时，保持pH为7.5，浓缩，透析，冻干，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（5）在室温下，将（4）中所合成的含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调溶液的pH为5.5，之后加入1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl)，1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量比为1.1:1，搅拌1.5小时，加入天门冬氨酸，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，用氢氧化钠溶液调节的pH为7.5，反应24小时，透析，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（6）在室温条件下，将（5）中得到的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体与0.2mol/L ScCl3溶液分别溶解在水中，含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体中DOTA的物质的量与上述ScCl3中金属Sc离子的物质的量比为1:1.2，用1mol/L NaOH调pH值为5.5，于室温搅拌过夜，透析，交换透析袋外水溶液直至其纵向弛豫时间T1大于3000ms，浓缩，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钪顺磁性金属配合物，测得其弛豫效率r1为8.2 mmol-1·L·s-1。
实施例13
含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钛顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备
（1）将葡聚糖溶解于温度为0 °C的6mol/L氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后逐滴加入异丙醇，搅拌30分钟后加入一氯乙酸，一氯乙酸与葡聚糖的质量比为1.5:1，升高温度到60℃搅拌1小时，甲醇沉淀，过滤，透析，冻干，得到羧甲基化的葡聚糖；
（2） 在室温下，将（1）中所合成的羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用1mol/L盐酸调节溶液pH为3.0，逐滴加入EEDQ溶液，EEDQ与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为1.1:2，搅拌均匀后加入乙二胺，乙二胺与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为5:1，反应4小时，产物用甲醇沉淀，透析，冻干，得到胺化的葡聚糖；
（3）将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA)溶解于水中，于4 °C分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（S-NHS)与1-（3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl)，DOTA，S-NHS，EDC·HCl的质量比为2:1:1，用NaOH调节pH为6.0，将混合物活化50 分钟，得到DOTA的活性酯溶液；
（4）在温度为4℃下，将（2）中的胺化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为7.5，得到的溶液滴加到（3）中的DOTA的活性酯溶液中，胺化的葡聚糖与DOTA活性酯质量比为1:3，搅拌24小时，保持pH为7.5，浓缩，透析，冻干，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（5）在室温下，将（4）中所合成的含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调溶液的pH为5.5，之后加入1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl)，1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量比为1.1:1，搅拌1.5小时，加入天门冬氨酸，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，用氢氧化钠溶液调节的pH为7.5，反应24小时，透析，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（6）在室温条件下，将（5）中得到的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体与0.2mol/L TiCl3溶液分别溶解在水中，含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体中DOTA的物质的量与上述TiCl3中金属Ti离子的物质的量比为1:1.2，用1mol/L NaOH调pH值为5.5，于室温搅拌过夜，透析，交换透析袋外水溶液直至其纵向弛豫时间T1大于3000ms，浓缩，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钛顺磁性金属配合物，测得其弛豫效率r1为8.1 mmol-1·L·s-1。
实施例14
含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钒顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备
（1）将葡聚糖溶解于温度为0°C的6mol/L氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后逐滴加入异丙醇，搅拌30分钟后加入一氯乙酸，一氯乙酸与葡聚糖的质量比为1.5:1，升高温度到搅拌1.5小时，甲醇沉淀，过滤，透析，冻干，得到羧甲基化的葡聚糖；
（2） 在室温下，将（1）中所合成的羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用1mol/L盐酸调节溶液pH为3.0，逐滴加入EEDQ溶液，EEDQ与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为1.1:2，搅拌均匀后加入乙二胺，乙二胺与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为5:1，反应4小时，产物用甲醇沉淀，透析，冻干，得到胺化的葡聚糖；
（3）将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA）溶解于水中，于4 °C分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（S-NHS）与1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），DOTA，S-NHS，EDC·HCl的质量比为2:1:1，用NaOH调节pH为6.0，将混合物活化50分钟，得到DOTA的活性酯溶液；
（4）在温度为4℃下，将（2）中的胺化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为7.5，得到的溶液滴加到（3）中的DOTA的活性酯溶液中，胺化的葡聚糖与DOTA活性酯质量比为1:3，搅拌24小时，保持pH为7.5，浓缩，透析，冻干，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（5）在室温下，将（4）中所合成的含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调溶液的pH为5.5，之后加入1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl)，1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量比为1.1:1，搅拌1.5小时，加入天门冬氨酸，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，用氢氧化钠溶液调节的pH为7.5，反应24小时，透析，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（6）在室温条件下，将（5）中得到的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体与0.2mol/L VCl3溶液分别溶解在水中，含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体中DOTA的物质的量与上述VCl3中金属V离子的物质的量比为1:1.2，用1mol/L NaOH调pH值为5.5，于室温搅拌过夜，透析，交换透析袋外水溶液直至其纵向弛豫时间T1大于3000ms，浓缩，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钒顺磁性金属配合物，测得其弛豫效率r1为8.2 mmol-1·L·s-1。
实施例15
含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钼顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备
（1）将葡聚糖溶解于温度为0 °C的6mol/L氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后逐滴加入异丙醇，搅拌30分钟后加入一氯乙酸，一氯乙酸与葡聚糖的质量比为1.5:1，升高温度到60℃搅拌1小时，甲醇沉淀，过滤，透析，冻干，得到羧甲基化的葡聚糖；
（2） 在室温下，将（1）中所合成的羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用1mol/L盐酸调节溶液pH为3.0，逐滴加入EEDQ溶液，EEDQ与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为1.1:2，搅拌均匀后加入乙二胺，乙二胺与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为5:1，反应4小时，产物用甲醇沉淀，透析，冻干，得到胺化的葡聚糖；
（3）将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA）溶解于水中，于4 °C分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（S-NHS）与1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），DOTA，S-NHS，EDC·HCl的质量比为2:1:1，用NaOH调节pH为6.0，将混合物活化50分钟，得到DOTA的活性酯溶液；
（4）在温度为4℃下，将（2）中的胺化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为7.5，得到的溶液滴加到（3）中的DOTA的活性酯溶液中，胺化的葡聚糖与DOTA活性酯质量比为1:3，搅拌24小时，保持pH为7.5，浓缩，透析，冻干，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（5）在室温下，将（4）中所合成的含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调溶液的pH为5.5，之后加入1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），1-（3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量比为1.1:1，搅拌1.5小时，加入天门冬氨酸，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，用氢氧化钠溶液调节的pH为7.5，反应24小时，透析，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（6）在室温条件下，将（5）中得到的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体与0.2mol/L MoCl3溶液分别溶解在水中，含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体中DOTA的物质的量与上述MoCl3中金属Mo离子的物质的量比为1:1.2，用1mol/L NaOH调pH值为5.5，于室温搅拌过夜，透析，交换透析袋外水溶液直至其纵向弛豫时间T1大于3000ms，浓缩，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钼顺磁性金属配合物，测得其弛豫效率r1为8.3 mmol-1·L·s-1。
实施例16
含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钌顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备
（1）将葡聚糖溶解于温度为0°C的6mol/L氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后逐滴加入异丙醇，搅拌30分钟后加入一氯乙酸，一氯乙酸与葡聚糖的质量比为1.5:1，升高温度到搅拌1.5小时，甲醇沉淀，过滤，透析，冻干，得到羧甲基化的葡聚糖；
（2） 在室温下，将（1）中所合成的羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用1mol/L盐酸调节溶液pH为3.0，逐滴加入EEDQ溶液，EEDQ与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为1.1:2，搅拌均匀后加入乙二胺，乙二胺与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为5:1，反应4小时，产物用甲醇沉淀，透析，冻干，得到胺化的葡聚糖；
（3）将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA）溶解于水中，于4 °C分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺（S-NHS）与1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），DOTA，S-NHS，EDC·HCl的质量比为2:1:1，用NaOH调节pH为6.0，将混合物活化50分钟，得到DOTA的活性酯溶液；
（4）在温度为4℃下，将（2）中的胺化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为7.5，得到的溶液滴加到（3）中的DOTA的活性酯溶液中，胺化的葡聚糖与DOTA活性酯质量比为1:3，搅拌24小时，保持pH为7.5，浓缩，透析，冻干，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（5）在室温下，将（4）中所合成的含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调溶液的pH为5.5，之后加入1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量比为1.1:1，搅拌1.5小时，加入天门冬氨酸，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，用氢氧化钠溶液调节的pH为7.5，反应24小时，透析，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
（6）在室温条件下，将（5）中得到的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体与0.2mol/L RuCl3溶液分别溶解在水中，含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体中DOTA的物质的量与上述RuCl3中金属Ru离子的物质的量比为1:1.2，用1mol/L NaOH调pH值为5.5，于室温搅拌过夜，透析，交换透析袋外水溶液直至其纵向弛豫时间T1大于3000ms，浓缩，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钌顺磁性金属配合物，测得其弛豫效率r1为8.1 mmol-1·L·s-1。
天门冬氨酸-葡聚糖的顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的用法如下：
实施例17
称取0.2 g的实施例1的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钆顺磁性金属配合物，溶于常规的葡萄糖注射液中，用缓血胺调节pH值为6.5，配成浓度为100 mmol/L的磁共振成像造影剂。
实施例18
称取0.2 g的实施例2的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子锰顺磁性金属配合物，溶于常规的氯化钠注射液中，用缓血胺调节pH值为6.5，配成浓度为100 mmol/L的磁共振成像造影剂。
实施例19
称取0.2 g的实施例3的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子铜顺磁性金属配合物，溶于常规的氯化钠-葡萄糖注射液中，用缓血胺调节pH值为6.5，配成浓度为100 mmol/L的磁共振成像造影剂。
实施例20
称取0.2 g的实施例4的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子铁顺磁性金属配合物，溶于蒸馏水中，用缓血胺调节pH值为6.5，配成浓度为100 mmol/L的磁共振成像造影剂。
实施例21
称取0.2 g的实施例5的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子铽顺磁性金属配合物，溶于常规的氯化钠注射液中，用缓血胺调节pH值为6.5，配成浓度为100 mmol/L的磁共振成像造影剂。
实施例22
称取0.2 g的实施例6的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子镝顺磁性金属配合物，溶于常规的葡萄糖注射液中，用缓血胺调节pH值为6.5，配成浓度为100 mmol/L的磁共振成像造影剂。
实施例23
称取0.2 g的实施例7的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子钕顺磁性金属配合物，溶于常规的氯化钠-葡糖糖注射液中，用缓血胺调节pH值为6.5，配成浓度为100 mmol/L的磁共振成像造影剂。

Claims (3)

1.含天门冬氨酸-葡聚糖的顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：
(1)将葡聚糖溶解于温度为0～4℃的6mol/L氢氧化钠溶液中，搅拌均匀后逐滴加入异丙醇，搅拌30分钟后加入一氯乙酸，一氯乙酸与葡聚糖的质量比为1.5:1，升高温度到60℃搅拌1～3小时后，甲醇沉淀，过滤，透析，冻干，得到羧甲基化的葡聚糖；
(2)在室温下，将(1)中合成的羧甲基化的葡聚糖溶于水中，用1mol/L盐酸调节溶液pH为3.0～4.5，加入2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2-二氢喹啉(EEDQ)，EEDQ与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为1.1:2，搅拌均匀后加入乙二胺，乙二胺与羧甲基化的葡聚糖的质量之比为5:1，反应4小时，产物用甲醇沉淀，透析，冻干，得到胺化的葡聚糖；
(3)将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(DOTA)溶解于水中，于0～25℃分别加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺(S-NHS)与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)，DOTA、S-NHS和EDC·HCl的质量比为2:1:1，用NaOH调节pH为6.0，将混合物活化50分钟，得到DOTA活性酯溶液；
(4)在温度为0～4℃下，将(2)中合成的胺化的葡聚糖溶解于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为7.0～8.5，再滴加到(3)中合成的DOTA活性酯溶液中，胺化的葡聚糖与DOTA活性酯质量比为1:3，搅拌24小时，保持pH为7.5～8.0，浓缩，透析，冻干，得到含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
(5)在室温下，将(4)中合成的含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶于水中，用氢氧化钠溶液调节pH为5.0～6.0，之后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量比为1.1:1，搅拌1～3小时，加入天门冬氨酸，天门冬氨酸与含葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体的质量之比为3:1，用氢氧化钠溶液调节的pH为7.5，反应24小时，透析，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体；
(6)在室温条件下，将(5)中合成的含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸大分子配体溶解在水中，再加入顺磁性金属元素离子溶液，含天门冬氨酸-葡聚糖的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸配体中DOTA的物质的量与顺磁性金属元素离子的物质的量比为1:1.2，用1mol/LNaOH调pH值为5.5，于室温搅拌过夜，透析，更换透析袋外水溶液直至其纵向弛豫时间T1大于3000ms，浓缩，冻干，得到含天门冬氨酸-葡聚糖的顺磁性金属配合物；
所述的顺磁性金属元素离子为Gd3+、Mn2+、Cu2+、Fe3+、Tb3+、Dy3+、Nd3+、Sc3+、Ti3+、V3+、Mo3+或Ru3+。
2.根据权利要求1所述的含天门冬氨酸-葡聚糖的顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备方法，其特征在于，步骤(4)中用氢氧化钠溶液调节pH为7.5～8.0。
3.根据权利要求1或2所述的含天门冬氨酸-葡聚糖的顺磁性金属配合物磁共振成像造影剂的制备方法，其特征在于，步骤(5)中用氢氧化钠溶液调节pH为5.5～5.8。
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