CN102918396B - 利用人类白血球抗原(hla)筛检预测药物不良反应的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于自HLA库鉴别出会与化合物特异性结合的HLA复合物的方法。此方法可用于评估化合物是否可能诱发不良药物反应，且若诱发不良药物反应，在哪一人类群体中诱发。

Description

利用人类白血球抗原(HLA)筛检预测药物不良反应的方法
相关申请的交叉引用
本申请主张于2010年4月12日递交的美国临时申请No.61/323,067的优先权。在此通过整体引用该在先申请将其内容结合到本申请中。
发明背景
不良药物反应(ADR)仍为临床上及制药工业的主要问题。在许多ADR类型中，以史蒂生-琼森症候群(Stevens-Johnsonsyndrome，SJS)、中毒性表皮坏死溶解(TEN)及过敏症候群(HSS)最严重且危及生命，其中，SJS及TEN有10-50%的死亡率。参看Roujeau等人，NewEngl.J.Med.333:1600-1607(1995)。尽管SJS/TEN/HSS的发病率低，但这些病状可能会造成个死亡或导致严重残疾。对于制药工业而言，发生严重药物过敏是非常不利的；目前有部分的新药因为会造成严重药物不良反应，而招致药品退市的命运。参看www.fda.gov/safety/recalls/default.htm。
已发现某些I型人类白血球抗原(HLA)对偶基因(例如HLA-A及HLA-B对偶基因)及某些II型HLA对偶基因(例如HLA-DR对偶基因)与ADR有关。参看Hung等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.102:4134-4139(2005)；Daly等人，Nat.Genet.41:816-819(2009)；Hautekeete,Gastroenterology117(5):1181-6(1999)；及DettlingM,PharmacogenomicsJ.7(5):325-32(2007)。所有这些ADR-HLA对偶基因的关联性，是在测定罹患核准上市药物诱发ADR的患者后被发现。目前，尚没有可用于预测开发中的候选药物是否会在人类中产生这些危及生命的病状(诸如SJS/TEN/HSS)的方法。
因为新药物开发可能平均耗费10亿元及10年时间，所以开发适用于在药物开发早期阶段预测候选药物的安全性概况的筛选方法将具有重大价值。
发明内容
本发明涉及自HLA库中鉴别出会与化合物结合的HLA复合物(若存在)的方法。此方法可依用于预测化合物是否将诱发不良药物反应，且若诱发不良药物反应，在哪一人类群体中诱发。
本发明方法包括至少4个步骤：(i)提供HLA库(例如I型或II型HLA库)，其包括位于支撑构件上的多个地址处的多种HLA复合物(例如可溶性HLA复合物)，各HLA复合物指定于一独特地址，(ii)使化合物与HLA复合物接触，(iii)判定该化合物是否会与库中的HLA复合物结合，且，若结合，(iv)则基于HLA复合物的地址鉴别与化合物结合的HLA复合物。本文所用的术语“独特地址"是指支撑构件上一种且仅一种类型的HLA复合物所位于的点。
在一个实例中，HLA库为以微芯片为基础的库，其包括连接于支撑构件的多种HLA复合物。在此情形中，判定步骤可通过表面等离子共振(SPR)来执行。在另一实例中，HLA库为以细胞为基础的库，其包括各自表达特定HLA复合物的多个细胞株。各细胞株可通过表达HLA复合物的亲本细胞来制备，该亲本细胞优选地缺乏至少一种类型的HLA(例如I型HLA)。在此情形下，判定步骤可通过收集自各地址的HLA复合物，且通过质谱法判定HLA复合物是否与化合物结合来执行。或者，化合物可经同位素标记且通过检验各地址处的放射性来执行判定步骤。
以下说明书中阐述本发明一个或多个实施例的细节。本发明的其它特征或优点将自以下附图及实施方式、以及随附权利要求书中显而易知。
附图说明
图1为说明获得能够与HLA-B-β2微球蛋白复合物结合的肽的方法的流程图，其中该复合物是由稳定表达可溶性HLA-B分子的C1R细胞中产生。
图2为说明表面等离子共振检定的流程图。
图3为显示在37℃过夜下未脉冲自体性B-LCL细胞(敞开条)或以25μg/mlCBZ、OXC、GAB或媒剂对照脉冲的自体性B-LCL细胞(封闭框)的特异性溶解图表。分析三名患者的资料以获得平均值±SD。*：p<0.05(未脉冲B-LCL细胞相对于经脉冲B-LCL细胞)。**：p<0.001(药物处理组相对于媒剂处理组)。
图4显示在固定(封闭条)及未固定(敞开条)B-LCL存在下自体性T细胞增殖的图表。通过习知[3H]胸苷掺入检定测定T细胞增殖。*：p<0.05(药物处理组相对于媒剂处理组)。
图5为显示各种浓度下的CBZ及其类似物(62.5至1000μM)与涂布于CM5芯片上的可溶性HLA-B*1502结合的图表。通过标准DMSO溶剂校正曲线使用T100评估软件自4至7个独立实验计算相对反应(R.U.)。
图6为显示CBZ及其类似物与各种HLA-B分子结合的图表。图表中显示的数据表示4至11个独立实验的平均值±平均值的标准误差(SEM)。
具体实施方式
本文描述使用HLA库筛选会与化合物(例如小分子药物或药物候选物)特异性相互作用的HLA复合物(若存在)的方法。此方法可用于评估化合物诱发不良药物反应的机率，并可用于鉴别会对测试化合物产生药物过敏的高风险人类群体(亦即，带有此方法中鉴别出的HLA复合物的人类群体)。因此，此在新药物开发中尤其重要，因为其帮助预测药物候选物是否可能引起不良药物反应，且若引起不良药物反应，会在哪一患者群体中引起。
本发明方法中使用的HLA库可为I型库，其包括一个或多个HLA复合物子群(例如HLAB库)。HLA-B对偶基因为最具多形性的基因之一，其具有超过800个变异体。参看Marsh,Marsh,Hum.Immunol.71(4):432-6;2010。必要时，HLA-B库可包括所有已知的800种以上不同HLA-B复合物。HLA库亦可为II型库，其包括一个或多个II型HLA复合物子群(例如HLA-DR库)。或者，HLA库可含有I型及II型HLA复合物两者。必要时，任何上述库均可扩展以包括新HLA复合物。
I型及II型HLA对偶基因是本领域公知的。举例而言，这些对偶基因可自GenBank或由HUGO基因命名委员会(HUGOGeneNomenclatureCommittee)、EMBL茵格斯顿分部(EMBLOutstation-Hinxton)、欧洲生物信息研究所(EuropeanBioinformaticsInstitute)、英国茵格斯顿剑桥WellcomeTrust基因体科学园CB101SD(WellcomeTrustGenomeCampusHinxtonCambridgeCB101SD,UK)(参看http://www.genenames.org/)提供的数据库撷取。
本发明方法可使用以细胞为基础或以微芯片为基础的HLA库执行。
以细胞为基础的HLA库
以细胞为基础的HLA库含有多个细胞株，其各自产生独特的HLA复合物。各细胞株可经由已知的重组技术，将亲本细胞(优选为哺乳动物细胞)进行遗传修饰以表达(a)I型HLAα链及视情况选用的β2-微球蛋白(若亲本细胞不表达内源性β2-微球蛋白)，或(b)II型HLAα链及II型HLAβ链来制备。用于构建库的亲本细胞优选缺乏至少一种类型的HLA对偶基因，例如I型HLA、II型HLA或其子群。此种细胞株包括(但不限于)ATCCCRL-1933(C1R)、ATCCCRL-2309(KerTr)、ATCCCRL-1992(T2)、ATCCCRL-2134(LS513)、ATCCCRL-2158(LS1034)、ATCCCRL-2159(LS411N)、ATCCCRL-2547(Panc10.05)、ATCCCRL-2551(Panc08.13)、ATCCCRL-2553(Panc02.03)、ATCCCRL-2549(Panc03.27)、ATCCCRL-2554(Panc02.13)、ATCCCRL-2555(Panc04.03)及ATCCCRL-2557(Panc05.04)。在此清单中，前两个细胞株缺乏I型HLA而其余细胞株缺乏II型HLA。
可经由例行程序来选择可稳定表达所欲HLA分子的经转染细胞。可选择产生高含量I型HLA复合物(由I型HLAα链及β2-微球蛋白构成)或II型复合物(由II型HLAα链及II型HLAβ链构成)的稳定细胞株作为以细胞为基础的HLA库的成员。在一个实例中，所选细胞株表达全长HLA分子。在另一实例中，其表达HLA分子的片段，包括其胞外域。该种细胞株产生可溶性HLA复合物。
根据上文所述的程序，可构建表达多种HLA复合物的细胞株，亦即每种细胞株可产生一种类型HLA复合物。多种HLA复合物可包括I型HLA(例如HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E、HLA-F、HLA-G、HLA-K、HLA-L或其组合)、II型HLA(例如HLA-DP、HLA-DQ、HLA-DR、HLA-DM、HLA-DO或其组合)。这些稳定细胞株形成以细胞为基础的HLA库。
各稳定细胞株可安置于支撑构件的孔(亦即独特地址)中。为了执行本文所述的筛选法，将各细胞株与测试化合物一起培养一适合时段。接着洗涤细胞以移除该化合物的游离分子，接着检验并判定细胞所表达的HLA复合物是否与化合物结合。参看图1。在一个实例中，化合物经放射性同位素标记，且基于各孔相对于空白对照的放射性程度判定化合物与HLA复合物间的结合。若孔中的放射性程度大于空白对照，则表示彼孔中细胞产生的HLA复合物能够与化合物结合。
当使用产生可溶性HLA复合物的细胞株时，可以下示方式判定其与测试化合物的结合。在细胞以测试化合物处理之后，收集各孔中的上清液且使用含有HLA特异性试剂(例如能够结合于所有类型的I型或II型HLA的抗体)的亲和力管柱纯化可溶性HLA复合物。含有经纯化HLA复合物的样品在适合温度(例如70℃)下加热10分钟，以解离化合物(可连接于肽)与HLA复合物之间的结合。例如使用离心过滤器(3-kDa截断，AmiconUltra-4,Millipore)收集含有低分子量组分(例如<3-kDa)的部分，且进行液相层析联合质谱分析法以判定其是否含有测试化合物。
已知抗原呈递细胞(APC)对某些药物(例如阿巴卡韦(abacavir)及青霉素(penicillin))的呈递为加工依赖性(processing-dependent)的。亦即，在进入细胞之后，这些化合物共价结合于载体蛋白质，所述蛋白质接着经加工且由APC细胞呈递。参看Schnyder等人，J.Clin.Invest.100:136-141(1997)及Naisbitt等人，J.AllergyClin.Immunol.111:1393-1403(2003)。以细胞为基础的I型HLA库尤其适用于筛选对HLA复合物具特异性的经由加工依赖性路径而由APC呈递的化合物。
以芯片为基础的HLA库
以芯片为基础的HLA库可经由常规的方法将各种HLA复合物(较佳含有HLA分子的胞外域)各自固定于微芯片的独特点上来制备。参看例如NatureReviewsDrugDiscovery.1:515-528(2002)。各种HLA复合物可自上文所述的稳定细胞株获得。
为了筛选能够与测试化合物结合的HLA复合物，可在允许化合物与其同源(cognate)HLA复合物结合的条件下，将连接于微芯片的各种HLA复合物与化合物一起培育适合时段。接着洗涤芯片以移除未结合的化合物分子，接着进行SPR量测以鉴别与化合物结合的HLA复合物。在发现HLA复合物与测试化合物结合之后，可基于其在芯片上的地址确定其身分。
SPR为高产量、无标记相互作用分析系统，且用于诸如药物研发、抗体表征、蛋白质组研究、免疫原性、生物治疗剂开发及制造、及许多生命科学研究应用的领域。表面等离子共振(SPR)检测紧邻传感器芯片的表面层的折射率的变化。共振角的此变化可以共振信号(与质量变化成比例)相对于时间的曲线图形式非侵入性实时监测。参见图2。
使用以芯片为基础的HLA库可鉴别对经由加工独立性路径由APC呈递(亦即直接结合于HLA复合物)的化合物具特异性的HLA复合物(参看Wu等人，J.AllergyClin.Immunol.118:233-241;2006及Marsh,Hum.Immunol.71(4):432-6;2010)。
若经本发明方法鉴别，无HLA复合物与测试化合物结合的现象，则表明此化合物诱发ADR的机率较低。另一方面，若此方法中鉴别出测试化合物与HLA复合物的结合，则表明测试化合物诱发ADR的机率较高，且在表达该HLA复合物的人类中尤其如此。
此项技术中已知某些HLA对偶基因在特定人类种族中出现的频率比其它种族高。参看www.allelefrequencies.net。基于此知识，本发明方法获得的结果可用于预测哪一种族将对特定药物或药物候选物敏感。这将关于临床试验中患者的选择及销售决策方面引导药物开发。
下表1列出高加索人(Caucasians)、亚洲人(Asians)及非裔美国人(AfricanAmericans)中的主要HLA-B对偶基因。
表1.高加索人、亚洲人及非裔美国人中的主要HLA-B对偶基因
高加索人 北亚洲人 南亚洲人* 非裔美国人
B*0702 B*0702 B*0702 B*0702
B*0801 B*1301 B*0705 B*0801
B*1302 B*1302 B*1301 B*1402
B*1402 B*1501 B*1302 B*1503
B*1404 B*1518 B*1307 B*1510
B*1501 B*2704 B*1501 B*1801
B*1509 B*3501 B*1502 B*3501
B*1801 B*3701 B*1525 B*4201
B*2702 B*3802 B*1532 B*4403
B*2703 B*3901 B*1801 B*45014 -->
B*2705 B*4001 B*1803 B*5301
B*3501 B*4002 B*2704 B*5703
B*3502 B*4006 B*2706 B*5801
B*3503 B*4402 B*3501 B*5802
B*3512 B*4403 B*3505
B*3517 B*4601 B*3701
B*3701 B*4801 B*3802
B*3801 B*5101 B*3901
B*3901 B*5201 B*3909
B*3905 B*5401 B*4001
B*3906 B*5502 B*4002
B*4001 B*5603 B*4003
B*4002 B*5701 B*4006
B*4006 B*5801 B*4014
B*4402 B*4403
B*4403 B*4601
B*4405 B*4801
B*4501 B*5101
B*4901 B*5401
B*5001 B*5501
B*5101 B*5502
B*5201 B*5601
B*5301 B*5701
B*5501 B*5801
B*5701
B*5801
包括西班牙人(Hispanics)及犹太人(Jews)
*不包括印第安人(Indians)
无需进一步详细描述，相信本领域技术人员可基于上文的描述最大程度地利用本发明。以下特定实例说明如何判定化合物(亦即CBZ)与HLA-B复合物(HLA-B*1502)的结合。其应仅解释为剩余揭示内容的说明，而不以任何方式解释对其造成限制。本文引用的所有出版物均以引用的方式并入本文中。
材料与方法
(i)供体特征
血液样品自8名卡马西平(carbamazepine，CBZ)-SJS/TEN及1名CBZ耐受患者获得。由两名皮肤科医生经由回顾照片、病理学载玻片及病历对所有SJS/TEN患者进行评估。耐受患者接收CBZ持续至少3个月而无不良反应迹象。此研究获得医院及中央研究院人体试验委员会(AcademiaSinicaInstitutionalReviewBoard)的批准且自各参与者获得知情同意书。
(ii)化合物
此研究中使用三组化合物。第1组包括卡马西平(CBZ)、10,11-环氧化CBZ(ECBZ，CBZ的主要活性代谢物)、奥卡西平(oxcarbazepine，OXC)、艾司利卡西平(eslicarbazepine，ESL)、10-MHD(MHD；OXC及ELI主要活性代谢物)、及仅具有三环结构的5H-二苯并[b,f]氮呯(5HB)。第2组包括其它芳族AED，诸如苯妥英(phenytoin，PHT)及拉莫三嗪(Lamotrigine，LTG)。第3组包括不与CBZ共有共享结构的非芳族AED，诸如加巴喷丁(gabapentin，GAB)、左乙拉西坦(levetiracetam，LEV)及托吡酯(topiramate，TOP)。
(iii)细胞
根据制造商说明(GEhealthcarecompany,Piscataway,NewJersey,USA)通过密度-梯度Ficoll-Paque法分离PBMC。以25μg/ml的CBZ于活体外刺激来自CBZ-SJS患者的CD8+T细胞11至14天。刺激后，接着以自体性B-淋巴母细胞(B-LCL)及CBZ再刺激扩增的T细胞24小时。再刺激3-4次后，分选出CD8+T细胞以用于其它功能性检定。将T细胞以RPMI-HS培养基(由RPMI1640所组成，并补充了10%热灭活人类AB型血清(LabquidInc,Ontario,CA)及50U/mlIL-2(R&DSystems,Minneapolis,Minnesota,USA))培养。通过来自产生EBV的细胞株B9-85的上清液转化供体PBMC来生产EBV转化的B细胞株(B-LCL)。
(iv)构建及产生表达可溶性HLA-B*1502的稳定C1R纯系
为了鉴别HLA-B*1502药物修饰的肽，通过如Ou-Yang等人，J.AllergyClin.Immunol.120:870-877(2007)中所述，将包括外显子1-4(编码HLA-B*1502的胞外域)的经截短HLA-B*1502cDNA引入C1R细胞中，来建立稳定表达可溶性HLA-B*1502的C1R纯系(C1R-HLA-B*1502)。如此表达的HLA-B*1502蛋白与内源性β2-微球蛋白缔合形成HLA-B*1502复合物。C1R为人类B-淋巴母细胞株Hmy2.ClR(CRL-1993，美国模式培养物保存中心(AmericanTypeCultureCollection),Manassas,VA)，缺乏I型HLA，无可检测的HLA-A，具有低含量HLA-B35，正常表达HLA-Cw4，且具有完整抗原加工及呈递路径。
简言之，通过PCR并使用全长HLA-B*1502cDNA作为模板及以下两个引物获得经截短HLA-B*1502cDNA：
正向引物5PXI：
5'-GGGCAAGCTTGGACTCAGAATCTCCCC-3'(SEQIDNO:1)，及
逆向引物3PEI：
5'-CCGCGAATTCTCATCTCAGGGTGAG-3'(SEQIDNO:2)
该两个引物包括Hindlll及EcoRI限制位点。使用Biorad脉冲系统，在250V及975μF的初始脉冲及30秒后相同条件下的第二脉冲下，经由电穿孔将克隆至表达质粒中的经截短HLA-B*1502cDNA引入至C1R细胞中。选择稳定表达可溶性HLA-B*1502的经转染纯系且遵照常规方法扩增。
(v)分析HLA-B结合药物修饰的肽
将溶解于二甲亚砜中的卡马西平(Novartis,Basel,Switzerland)(50mg/mL)添加至如上文所述的C1R-HLA-B*1502纯系的细胞培养物中至50μg/mL的最终浓度培养48小时。接着收集培养基，离心，通过0.45-μm膜(Durapore;Millipore,Bedford,Mass)以移除细胞碎片，且利用w6/32单株抗体偶合的CNBr活化琼脂糖4B(Amersham,Piscataway,NJ)进行亲和力层析。w6/32单株抗体能够结合于任何I型HLA分子。循环两次之后，管柱以含有10%饱和NaCl及0.5%NonidetP-40的PET缓冲液(20mM磷酸盐缓冲液、150mMNaCl、5mM乙二胺四乙酸及0.1%NaN3，pH7.4)、含有5%饱和NaCl及0.5%NonidetP-40的PET缓冲液、PET缓冲液及磷酸盐缓冲生理食盐水广泛洗涤。将含有可溶性HLA-B*1502及β2-微球蛋白的复合物以0.2N乙酸溶离，透析，且在-80℃下储存。遵照与上文所述相同的程序制备含有可溶性HLA-B*1501或1503与β2-微球蛋白的复合物。HLA-B4001及5101购自PureProteinLLC(Okalahoma,OK,USA)。
HLA-B-β2-微球蛋白复合物接着在70℃下加热10分钟，且以3-kDa截断进行离心过滤(AmiconUltra-4;Millipore)以使HLA-B分子及β2-微球蛋白与其所结合的任何肽分离。参看图1。接着通过液相层析联合质谱分析法分析怀疑含有肽的部分。
(vi)[3H]掺入检定
将经照射的APC(103)及T细胞(104)与测试化合物一起培养48小时，且通过掺入[3H]胸苷测量T细胞的增殖。对于固定检定，自体性B-LCL以0.05%三聚甲醛预处理30秒。对于脉冲实验，药物与B-LCL一起预培养过夜。重复洗涤B-LCL以移除未共价结合的药物，接着与T细胞一起培育。
(vii)51Cr释放检定
将与IFN-γ(R&DSystems,Minneapolis,Minnesota,USA)一起预培养过夜的B-LCL首先与51Cr(PerkinElmer,Waltham,Massachusetts,USA)一起在37℃下培养1小时。洗涤经处理的细胞且再悬浮于RPMI-FBS中直至1×105/mL的浓度，且在有或无测试化合物存在下，向96孔V型底板的各孔中添加50μl细胞。1%triton-X100(Sigma-Aldrich,St.Louis,Missouri,USA)用作阳性对照。将经由于活体外扩增患者的外周血液单核细胞(PBMC)制备的细胞毒性T细胞与B-LCL细胞一起加入培养4小时。通过Topcount(PackardBiosciences,Meriden,Connecticut,USA)测量各孔上清液的放射性。如下计算特异性溶解的百分比：(测试孔中的51Cr释放-自发51Cr释放)/(最大51Cr释放-自发51Cr释放)。
(viii)表面等离子共振(SPR)测量及分析
根据制造商手册将BiacoreT100SPR生物传感器用于低分子量化合物筛选(GEhealthcarecompany,Piscataway,NewJersey,USA)。简言之，使用GE固定精灵(GEimmobilizationwizard)用GE固定试剂盒将于NaAc(pH5.0)中的200ng/ml经纯化HLA-B分子涂布于CM5芯片上。PBS用作操作缓冲液且流动速率为10μg/min。以不同浓度溶解于含5%DMSO的PBS中的药物用作分析样品，其中含5%DMSO的PBS用作操作缓冲液。DMSO作用校正化合物的反应。使用BIAevaluationVersion3.1进行数据分析。
结果
(i)未检测到由卡马西平共价修饰的肽
自液相层析溶离的肽的一般型态皆类似，但经卡马西平处理的样品中在83分钟处出现峰，而无卡马西平的样品中未出现。此峰经证实为卡马西平，因为其与同一联合质谱检定中产生的纯卡马西平的峰匹配。此研究获得的结果表明卡马西平未共价结合于肽。
(ii)HLA-B*1502的CBZ识别无需共价相互作用
如图3中所示，无CBZ特异性CD8+T细胞对以CBZ脉冲过夜且在细胞毒性检定之前洗脱的自体性B-LCL起反应。此结果表明HLA-B1502无需代谢作用即可识别CBZ。
(iii)由HLA-B*1502呈递CBZ与加工无关
为了检验HLA-B*1502呈递CBZ是否需要细胞加工，固定自体性B-LCL，随后与CBZ一起培育，且通过CBZ特异性CD8+T细胞的增殖监测其活化。CBZ能够由固定及未固定的自体性B-LCL呈递且活化CBZ特异性CD8+T细胞。参看图4。相比之下，在以媒剂对照或GAB处理的细胞中观测到阴性结果。
(iv)CBZ及其结构类似物直接结合于HLA-B*1502
为了进一步理解HLA-B*1502如何在无抗原加工机制存在下识别及呈递CBZ类似物，通过表面等离子共振(SPR)分析检验HLA-B*1502蛋白与药物的直接相互作用。使用HLA-B分子的5种可溶性形式(sHLA-B*1501、1502、1503、4001及5101)及11种不同化学品(CBZ、ECBZ、OXC、ELI、MHD、5HB、PHT、LTG、LEV、TOP及GAB)进行此生物分子相互作用分析。SPR筛选数据显示HLA-B*1502能够与除5HB以外的所有CBZ类似物直接相互作用。参看图5。与其类似物比较，CBZ对HLA-B*1502的结合能力较强；OXC、ECBZ及ELI的结合能力中等且MHD的相互作用最弱。类似于功能及遗传研究，PHT与LTG皆显示中等HLA-B*1502结合能力。LEV、TOP及GAB，罕知该三种药物会引起SJS/TEN，该三种药物在治疗浓度下不会与HLA-B*1502或其它HLA-B分子结合。
(v)直接CBZ相互作用为HLA-B*1502特异性
遵照上文所述的方法检验CBZ或其类似物与HLA-B*1502或与其相关的HLA分子的结合。结果显示CBZ或其7种类似物(参看上文的化合物部分)皆未与HLA-B*1501及HLA-B*1503结合，此为与HLA-B*1502密切相关的两种HLA分子。汉族人口中的两种其它常见HLA-B分子(亦即HLA-B*4001与HLA-B*5101)亦未与CBZ及其类似物结合。参看图6。这些结果表示CBZ及其类似物会与HLA-B*1502特异性(HLA-B*1502-specific)特异性结合。此与遗传数据一致，带有HLA-*1502对偶基因的个体在接收这些抗惊厥药时有产生SJS/TEN的风险。参看Chung等人，Nature428:486(2004)及美国专利7,470,513。
其它实施例
本说明书中揭示的所有特征可以任何组合形式组合。本说明书中揭示的各特征可换为用于相同、等效或类似目的的替代特征。因此，除非另外明确说明，否则所揭示的各特征仅为一般等效或类似特征系列的实例。
本领域技术人员自上述描述可容易确认本发明的基本特征，且在不悖离其精神及范畴下，可对本发明作出各种更改及修改以使其适应各种用途及情况。因此，其它实施例亦在权利要求书的范畴内。

Claims (14)

1.一种鉴别会与小分子药物或药物候选物结合的HLA-肽复合物的方法，其包括：
提供HLA-肽库，其包括位于支撑构件上的多个地址处的多种HLA-肽复合物，所述HLA-肽复合物各自指定于一独特地址；
使小分子药物或药物候选物与所述HLA-肽复合物接触；
判定该小分子药物或药物候选物是否与所述HLA-肽复合物之一结合；及
当该小分子药物或药物候选物与一个HLA-肽复合物结合时，基于该一个HLA-肽复合物的地址鉴别与该小分子药物或药物候选物结合的该一个HLA-肽复合物。
2.根据权利要求1的方法，其中所述HLA-肽复合物为I型HLA-肽复合物。
3.根据权利要求2的方法，其中所述I型HLA-肽复合物为HLA-B-肽复合物。
4.根据权利要求1的方法，其中所述HLA-肽复合物为II型HLA-肽复合物。
5.根据权利要求4的方法，其中所述II型HLA-肽复合物为HLA-DR-肽复合物。
6.根据权利要求1的方法，其中该HLA-肽库为以微芯片为基础的库，其中多种HLA-B-肽复合物连接于该支撑构件。
7.根据权利要求6的方法，其中所述HLA-B-肽复合物为其天然存在的对应物的胞外域。
8.根据权利要求7的方法，其中该判定步骤是通过表面等离子共振来执行。
9.根据权利要求1的方法，其中该HLA-肽库为以细胞为基础的库，该库包括多个表达该多种HLA-肽复合物的细胞。
10.根据权利要求9的方法，其中所述HLA-肽复合物为其天然存在的对应物的胞外域。
11.根据权利要求9的方法，其中该多个细胞各自通过在缺乏I型HLA的亲本细胞中表达I型HLA-肽复合物来制备。
12.根据权利要求9的方法，其中该多个细胞各自通过在缺乏II型HLA的亲本细胞中表达II型HLA-肽复合物来制备。
13.根据权利要求9的方法，其中该判定步骤通过自各地址收集该HLA-肽复合物且通过质谱法判定该HLA-肽复合物是否结合于该小分子药物或药物候选物来执行。
14.根据权利要求9的方法，其中该小分子药物或药物候选物具放射性且该判定步骤通过检验各地址处的放射性来执行。
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