CN102914523A - 一种简捷测定鱼鳃中芘的同步荧光法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种简捷测定鱼鳃中芘的同步荧光法，该方法先将鱼鳃样品进行冷干、研磨、萃取、净化前处理后，旋蒸浓缩至近干，接着用正己烷定容备测。以正己烷为溶剂，配制浓度范围为1～1000μg/l的芘标准溶液，测定/同步波长为EX334.5nm/Δλ50nm，对芘标准系列及定容好的待测样品进行同步荧光法测定，制定标准曲线方程，根据标准曲线方程等对待测样品进行定量计算；本发明具有下述优点：(1)采用同步荧光法进行测定，仪器设备相对简单，易操作，测定成本降低。(2)采用同步荧光法对鱼鳃中芘进行测定，回收率高；(3)EX、Δλ选用优化测定参数，提高了测定选择性，标准曲线方程线性高，检出限低。
Description
技术领域
本发明涉及环境样品中多环芳烃的分析检测方法，具体是测定鱼鳃中芘的同步荧光法。
背景技术
水环境中普遍存在多环芳烃(PAHs)。芘由于具有中等分子量和共致癌性而被作为代表性PAHs化合物。也因为环境介质中芘含量常常与PAHs总量有良好的相关性特征，芘成为相关研究中经常使用的模式化合物之一。在江河中，由于鱼是生态环境中重要的食物链，又是人类的主要食物源之一，因此，研究有机污染物在鱼体内的富集与释放行为，可为生态风险性评价提供重要依据。而鱼鳃是有效反映水体污染、鱼吸收富集情况的组织器官。鳃是较复杂的有机体，萃取分离后仍可存在大量影响PAHs测定的干扰物质，进一步净化的过程是必不可少的。
我国国家标准方法GB13198-91为水质中6种PAHs测定方法，其前处理是传统的液-液萃取法。样品前处理是一重要技术环节，包括富集及纯化、除干扰技术等。对于固体样品(包括生物样品)常采用的富集、提取技术是索氏法萃取、超声萃取、快速溶剂萃取法(ASE)，以提取样品中有机组分。即对样品进行低温干燥、研磨后，选择不同有机溶剂如正己烷/二氯甲烷、正己烷/丙酮进行萃取。上述提取液须进行净化，即经硅胶、氧化铝、凝胶色谱法、弗罗里硅土(Florisil)和C18等净化以除干扰。
多环芳烃(如芘)的测定方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法、色谱-质谱联用法、薄层色谱-荧光光度法等。气相色谱-质谱联用(GC-MS)方法是分析复杂混合物的有效方法之一。生物组织样品中PAHs测定方法除了有固定波长荧光方法外，还有GC-MS等方法。采用经典、传统的GC-MS等方法对鱼鳃组织中芘进行测定时，实验环节多、仪器复杂、耗时、成本高。
发明内容
本发明的目的就是提供一种快速、简便、有效测定鱼鳃中芘的同步荧光法。本方法选择彩鲤(Cyprinus carpio var.color)鱼鳃作为吸收载体，以芘作为代表性PAHs污染物(被吸收物)，采用鱼鳃冷干-研磨-快速溶剂萃取-萃取液净化、旋蒸、正己烷定容-同步荧光法测定(EX334.5nm/Δλ50nm)分析步骤，快速有效、灵敏度、回收率高、仪器相对简单、分析成本低。特别适宜于环境分析与监测。这一分析方法的拓展了同步荧光方法在生物组织中多环芳烃的测定应用范围，推广了同步荧光法的应用，填补相关研究空白。属技术应用推广性方面的创新性、实用性研究，具有较重要的环境科学理论和环境保护实践意义。
本发明的方法包括下述步骤：
1.待分析鱼鳃样品经过冷干、研磨、萃取、净化前处理后，再旋蒸浓缩至近干，接着用正己烷定容6ml备测。
2.同步荧光法分析测定
(1)制定标准曲线
以正己烷为溶剂，配制浓度范围为1～1000μg/L(≥8个浓度点)的芘标准溶液，此浓度范围内线性关系很高。制定标准曲线方程。选择优化的同步荧光法测定参数(Δλ＝50nm，EX＝334.5nm)对芘标准系列进行同步荧光法测定。相关光谱图可参见图1、图2。
(2)分析测定样品。采用同步荧光法(SFS)测定待测样品，根据标准曲线方程、样品同步荧光强度定量计算样品芘含量。
本发明与现有技术相比具有下述优点：
a.采用同步荧光法，与现有方法(如GC-MS方法)相比，仪器设备相对简单，易操作，分析测定成本降低。
b.根据优化的同步荧光法对鱼鳃中芘进行测定，相对现有传统、经典技术方法GC-MS方法，本发明的方法回收率高。
c.选用经过优化同步荧光测定参数：Δλ50nm、EX334.5nm，采用同步荧光光谱法测定正己烷中芘，本方法标准曲线方程线性提高，线性相关系数达到0.9992。与普通荧光法相比，本方法散射光干扰少，提高了选择性、检出限低。
附图说明
图1是正己烷溶液中0.6mg/L芘激发/发射荧光光谱
图2是正己烷溶液中芘的同步荧光光谱
图3是芘标准曲线(正己烷溶液中)
具体实施方式
1.鱼鳃样品前处理(冷干、研磨、萃取、净化)
从20-100ppb芘暴露水池中取出6尾鱼，头部击昏，放血后迅速解剖取鱼鳃，逐片取鳃，两侧鳃合并，所取鱼鳃经24小时冷干后，在玛瑙研钵中与3克无水硫酸钠混合研磨至粉状。将上述粉状样品置入ASE柱中，采用快速溶剂萃取仪(ASE)提取鱼鳃中芘。ASE提取条件：温度：125℃(加热5min)；压力：1500psi；静态提取时间：10min；循环次数：2次；萃取用溶剂为正己烷∶二氯甲烷(1∶1)。正己烷、二氯甲烷均为分析试剂，重蒸后用。ASE萃取后，旋转蒸发上述萃取液。得到的浓缩液经过硅胶层析柱，先后用正己烷、正己烷∶二氯甲烷(3∶2)洗脱层析柱，收集正己烷∶二氯甲烷(3∶2)洗脱液，再旋蒸浓缩至近干，接着用正己烷定容至6ml备测。
2.同步荧光法分析测定
(1)制定标准曲线
以正己烷为溶剂，配制各种浓度(1，2，4，6，8，10，20，40，60，80，100，200，400，600，800，1000μg/L)的芘标准溶液，制定标准曲线方程(见表1)。芘的同步荧光法测定参数，Δλ：50nm，EX：334.5nm，slit：2.5nm，speed：300nm/min。
表1芘标准曲线方程
(2)样品测定分析。采用同步荧光法(SFS)根据标准曲线方程对样品进行定量分析测定。同时用GC-MS方法对样品进行测定，以比较分析结果，SFS测定值与GC-MS测定值一致性很好。采用双因素方差分析检验，P＞0.05，表明两种方法测定值无差异(详见表2)。
表2鳃组织中芘同步荧光方法测定值与GC-MS测定值的比较
同时对样品进行加标，加收率达到96.91％。；同时对20个空白样进行分析，SFS最低检测限DLSFS＝0.176ng(芘)/mL(三倍标准差)。
Claims (5)
1.一种简捷测定鱼鳃中芘的同步荧光法，其特征在于包括下述步骤：
a.鱼鳃样品经过冷干、研磨、萃取，提取液净化后，再经旋蒸浓缩至近干，接着用重蒸的正己烷定容浓缩液以备测。
b.采用同步荧光法对芘标准系列及备测样品进行测定。以正己烷为溶剂，制定芘标准曲线，根据标准曲线方程及样品同步荧光强度进行定量计算。
2.根据权利要求1所述的一种快速测定鱼鳃中芘的同步荧光法，其特征在于：所述的用于待测的样品用重蒸的正己烷定容至6毫升。
3.根据权利要求1所述的一种快速测定鱼鳃中芘的同步荧光法，其特征在于选择测定峰波长为EX334.5nm。
4.根据权利要求1所述的一种快速测定鱼鳃中芘的同步荧光法，其特征在于选Δλ＝50nm。
5.根据权利要求1所述的一种快速测定鱼鳃中芘的同步荧光法，其特征在于同步荧光法芘测定浓度范围为1～1000微克/升。
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