CN102839122A - 一种微生物发酵过程的实时监测系统 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及电阻抗成像技术领域,具体地说是一种微生物发酵过程的实时监测系统,其特征在于:发酵罐的内壁设有直线移动装置,所述的直线移动装置的上部连接一圈电极,圈电极外层覆设有绝缘层,圈电极的接线端连接数据采集系统的一端,数据采集系统的另一端连接微机的一路信号端,直线移动装置的底端穿过发酵罐的底部后连接电机;电机的控制信号输入端连接微机的另一路信号端,发酵罐的液位传感器的信号端连接微机的又一信号端。本发明同现有技术相比,可对发酵罐内部发酵液进行实时和全方位监控,并能生成直观的二维和三维的发酵罐内图像,图像可分析出发酵罐内发酵过程的多种指标的参数值或变化值,并能及时报警,便于人们及早干预。
Description
技术领域
本发明涉及电阻抗成像技术领域,具体地说是一种微生物发酵过程的实时监测系统。
背景技术
微生物发酵是当前生物制药过程中的一项主要工序,在工业生产过程中微生物发酵是在大型的发酵罐中进行,且通常发酵时间从几天到几个星期不等。在发酵过程中要定期对发酵罐内液体进行检验分析以确保发酵过程正常和及时发现如发酵菌体生长不正常、发酵过程有杂菌污染等问题。现有技术采用在发酵罐内安装传感器来监测温度,溶氧率等参数并结合定期提取发酵液分析等方法对发酵过程进行监控。但是,一旦发现如杂菌污染等异常情况,通常为时已晚,很难采取有效措施补救。究其原因, 主要是对一些重要参数,如:基质浓度、发酵产物的浓度、温度等缺乏合适的有效的在线实时测量方法。
电阻抗断层成像技术是通过附着在物体表面的电极注入和采集电压信号并重建成断层图像从而掌握物体内部的信息。此技术已经初步用于医学成像等领域。此技术的基本原理是根据不同物质表现出不同的电学性质再通过二维或三维图像的形式表现出此不同。
发明内容
本发明的目的是为克服现有技术的不足,通过可移动的圈电极并利用电阻抗断层成像技术通过微机控制来实现对发酵液的实时监测。
为实现上述目的,设计一种微生物发酵过程的实时监测系统,包括发酵罐、圈电极、螺杆、电机、数据采集系统、嵌设有处理软件的微机、直线移动装置,其特征在于:发酵罐的内壁设有直线移动装置,所述的直线移动装置的上部连接一圈电极,圈电极外层覆设有绝缘层,圈电极的接线端连接数据采集系统的一端,数据采集系统的另一端连接微机的一路信号端,直线移动装置的底端穿过发酵罐的底部后连接电机;电机的控制信号输入端连接微机的另一路信号端,发酵罐的液位传感器的信号端连接微机的又一信号端;微机内所嵌设的处理软件执行如下步骤:a、开始;b、是否进行扫描;不扫描,则返回开始;确认扫描,则设定扫描区域;c、设定多频断层扫描的多个频率;d、在设定的扫描区域内圈电极进行逐层多频扫描;e、扫描数据采集和图像重建生成二维和三维图像:采集圈电极上的电压信号,并将电压信号转换成阻抗值后重建成二维和三维图像;f、图像处理:分析二维或三维图像,并获取阻抗值计算生成相关发酵参数;g、参数分析、异常报警:将所获取的发酵参数与正常发酵参数值进行比较,若超出正常范围则进行报警;h、是否生成参数图像,否,则进入 “是否循环监测”步骤;是,则生成相应参数图像后再进入“是否循环监测”步骤;i、如果循环监测,则返回“在设定的扫描区域内圈电极进行逐层多频扫描”步骤;如果不循环监测,则判断“是否变更扫描区域”;j、变更扫描区域,则返回“设定扫描区域”步骤;不变更扫描区域,则结束;所述的发酵参数,包括发酵罐内温度、基质体积、基质浓度、发酵产物的体积、发酵产物的浓度。
所述的多个频率为施加在圈电极上的频率在100 Hz~5 MHz 的10μA~5mA的微电流。
所述的直线移动装置为沿发酵罐内壁圆周均布螺杆,螺杆为垂直放置,且每根螺杆的底端穿过发酵罐的底部后再连接设于发酵罐外的一个电机,螺杆的顶部由下至上垂直贯穿绝缘层并螺纹连接绝缘层。
所述的根据获取阻抗值计算生成相关发酵参数,包括如下计算公式:
公式(1):R=R0+αT;
公式(2):ΔT=ΔR/α;
公式(3):Rl-Rh=k1ρ1V1;
公式(4):Rh= k2ρ2V2+ k3ρ3V3;
公式(5):V2+V3=V-V1;
公式(6):C2=V2/ V;
公式(7):C3=V3/ V;
公式中R表示从二维图像或三维图像上显示的像素所获取的阻抗值,R0表示在参考温度下发酵液的参考阻抗值,α表示发酵液的温度系数,T表示发酵罐内温度,ΔT表示温度变化值,ΔR表示发酵液阻抗变化值;Rl和Rh分别表示发射1~5kHz低频电流所获得的阻抗值和发射1MHz~5 MHz高频电流所获得的阻抗值,k1为该发酵液中正常菌落电阻系数,ρ1为该发酵液中正常菌落电阻率,V1为菌落体积、V2为基质体积,V3为发酵产物体积;V为发酵罐中发酵液总体积,由发酵罐所附带的液位传感器所获得;k2表示发酵液内正常基质的电阻系数、ρ2表示发酵液内正常基质的电阻率、k3表示发酵液内正常发酵产物的电阻系数、ρ3表示发酵液内正常发酵产物的电阻率、C2 表示发酵液内基质的体积浓度,C3表示发酵液内发酵产物的体积浓度。
圈电极的接线端连接数据采集系统中的前置放大电路的一端,前置放大电路的另一端再依次连接前置滤波电路、数据采集卡的一端、信号处理电路的一端;所述的信号处理电路采用后置放大电路连接后置滤波电路组成。
数据采集系统采用数据采集卡中的数字控制通路与微机的端口进行通讯连接。
所述的处理软件为LabVIEW软件。
数据采集系统中的数据采集卡采用PXI数据采集卡。
本发明同现有技术相比,可对发酵罐内部发酵液进行实时和全方位监控,并能生成直观的二维和三维的发酵罐内图像,图像可分析出发酵罐内发酵过程的多种指标的参数值或变化值,并能及时报警,便于人们及早干预。
附图说明
图1为本发明实施例中的原理连接框图。
图2为本发明中发酵罐的示意图。
图3为本发明中发酵罐的水平剖示图。
图4为本发明中的处理流程框图。
图5为实施例中正常和非正常菌落的阻抗频谱值的曲线示意图,其中曲线中的实线表示正常菌落的阻抗频谱值,在实线上下两侧与实线相似弧度的点划线表示为正常阻抗频谱值的范围,而其中虚线表示非正常阻抗频谱值。
具体实施方式
现结合附图对本发明作进一步地说明。
实施例
本发明应用电阻抗断层成像技术对发酵罐内液体也即发酵液进行实时监测和成像,通过图像可对基质体积/浓度、发酵产物的体积/浓度进行实时观察和测量,从而对发酵过程进行有效控制并及时发现菌污染等问题及早进行干预。
参见图1~图4,在发酵罐3的内壁设有直线移动装置,所述直线移动装置的上部连接一圈电极2,圈电极2外层覆设有绝缘层,以防止发酵罐带电,本例中绝缘层随形于圈电极呈圆环状,圈电极2的接线端连接数据采集系统4的一端,数据采集系统4的另一端连接微机6的一路信号端,直线移动装置的底端穿过发酵罐的底部后连接电机5;电机5的控制信号输入端连接微机6的另一路信号端,发酵罐3的液位传感器的信号端连接微机6的又一信号端;微机内所嵌设的处理软件执行如下步骤:a、开始;b、是否进行扫描;不扫描,则返回开始;确认扫描,则设定扫描区域;c、设定多频断层扫描的多个频率;d、在设定的扫描区域内圈电极进行逐层多频扫描;e、扫描数据采集和图像重建生成二维和三维图像:采集圈电极上的电压信号,并将电压信号转换成阻抗值后重建成二维和三维图像;f、图像处理:分析二维或三维图像,并获取阻抗值计算生成相关发酵参数;g、参数分析、异常报警:将所获取的发酵参数与正常值进行比较,若超出正常范围则进行报警;h、是否生成参数图像,否,则进入 “是否循环监测”步骤;是,则生成相应参数图像后再进入“是否循环监测”步骤;i、如果循环监测,则返回“在设定的扫描区域内圈电极进行逐层多频扫描”步骤;如果不循环监测,则判断“是否变更扫描区域”;j、变更扫描区域,则返回“设定扫描区域”步骤;不变更扫描区域,则结束;所述的发酵参数,包括发酵罐内温度、基质体积、基质浓度、发酵产物的体积、发酵产物的浓度。本例中,处理软件可选用LabVIEW软件,本例中二维和三维图像简称为“阻抗图”。
本发明中直线移动装置可采用沿发酵罐内壁圆周均布螺杆1,螺杆为垂直放置,且每根螺杆的底端穿过发酵罐的底部后再连接设于发酵罐外的一个电机5,螺杆1的顶部由下至上垂直贯穿绝缘层并螺纹连接绝缘层。本例中,在发酵罐内壁共设了三根螺杆1,三根螺杆1分别位于等边三角形的三个顶点上,然后圈电极2外侧所连接的绝缘层的环壁上对应三根螺杆处垂直设有三个螺纹孔,三根螺杆1分别穿入三个螺纹孔内,每根螺杆1的底部穿过发酵罐的底部后再连接设于发酵罐外的电机5,贯穿发酵罐处的螺杆的外表面设为光滑面并且设有密封圈,当微机控制电机5正、反旋转时,三个电机会同步驱动三根螺杆进行正反旋转,从而使绝缘层带动圈电极沿三根螺杆进行上下升降运动。
本发明中圈电极2中每个电极的接线端分别一一对应连接数据采集系统中的前置放大电路的一端所设置的多路接线端,前置放大电路的另一端再依次连接前置滤波电路、数据采集卡的一端、信号处理电路的一端;数据采集卡中的数字控制通路与微机的端口进行通讯连接。所述的信号处理电路采用后置放大电路连接后置滤波电路组成。
本例中数据采集系统中的数据采集卡可采用National Instruments 的PXI数据采集卡,这种数据采集卡上除设有数-模转换器和模-数转换器外,还包含一组数字模拟开关,这组数字模拟开关由一路数字控制通路经通信端口与微机进行通讯连接,此数字模拟开关的目的是用来选择在圈电极中哪些电极作为激励电极哪些电极作为测量电极的,并且此数字模拟开关是由微机控制。
当要对微生物发酵罐内的某一高度区域进行实施监测时,通过处理软件预先设定所需监测的微生物发酵罐内的一段高度位置区域,然后再设定进行断层扫描的多个频率,施加10μA~5mA微电流的频率可选均匀分布的10~30个从100 Hz~5 MHz 的频率,例如取100 Hz,200 Hz,500 Hz,1 kHz,2 kHz,5 kHz,10 kHz,20 kHz,50 kHz,100 kHz,200 kHz,500 kHz,1 MHz,2 MHz,5 MHz;然后处理软件会对电机5发出信号,控制电机5带动螺杆进行旋转,带有螺纹的旋转螺杆使圈电极沿螺杆进行上、下升降运动,本发明中可先控制圈电极2到达预先设定的需要断层扫描区域的最底层,依次采用设定的多个频率进行断层扫描,断层扫描时微机6的处理软件会控制数据采集卡上所设的数字模拟开关来控制选择圈电极上的若干电极作为激励电极,然后对这些选定作为激励电极的电极依次施加事先设定好频率的电流信号进行多频断层扫描,并由数字模拟开关所选择的作为测量电极的电极采集反馈的电压信号,这样完成一层的多频断层扫描后,微机6会控制圈电极向上移动一层再进行第二层的多频断层扫描,直至圈电极完成所设定高度区域的最高层的多频断层扫描;所有反馈的电压信号被微机存储在临时存储介质中;然后微机再控制采集临时存储介质中所反馈的电压信号,并将电压信号转换成阻抗值,重建成二维和三维图像;这些二维和三维图像上的某一像素即表示扫描部位空间上的某一区域,分析这些二维和三维图像获取阻抗值,并计算生成相关发酵参数;具体为用阻抗值表示温度T和温度变化值ΔT可通过以下公式表示:
公式(1):R=R0+αT;
公式(2):ΔT=ΔR/α;
其中,公式中R为从二维和三维图像上显示的像素所获取的阻抗值,R0为在参考温度下的已知的发酵液的参考阻抗值,α为已知的发酵液的温度系数,此温度系数可根据不同的发酵液进行提前测量计算并录入微机的处理软件中。因此公式(1)中的温度T和 公式(2)中的温度变化值ΔT可计算。这些计算都可在处理软件中的“图像处理”步骤中进行处理。上述公式(1)和公式(2)所表示的温度和阻抗值对应关系适用在100 Hz阻抗图中。
发酵罐中菌落浓度/体积,基质浓度/体积和发酵产物浓度/体积可通过不同频率的阻抗图计算,例如:利用1 kHz~5 kHz的低频和1 MHz~5 MHz的高频的阻抗差值计算菌落体积,可采用公式(3):Rl-Rh=k1ρ1V1,其中,Rl和Rh分别表示发射低频电流所获得的像素所代表的低频阻抗值和发射高频电流所获得的像素所代表的高频阻抗值,这样Rl和Rh均为可测量值;k1为该发酵液内正常菌落已知的电阻系数,ρ1为该发酵液内正常菌落已知的电阻率,V1为菌落体积。由于k1和ρ1均为已知值,因此V1可计算。而基质的体积和发酵产物的体积则可采用高频阻抗值通过下列公式计算:
公式(4):Rh= k2ρ2V2+ k3ρ3V3 ;
公式(5):V2+V3=V-V1 ;
公式(5)中V为发酵罐中发酵液总体积,此参数值是发酵过程中实时监测的基本参数,是通过发酵罐自身所附带的液位传感器所测量反馈到微机所获得的已知值。Rh为上述公式(3)中所表述过的发射高频电流所获得的像素所代表的高频阻抗值,那么这个Rh作为测量所获得的值也是一个已知值,V1已由公式(3)计算而得,k2为发酵液内正常基质的电阻系数、ρ2为发酵液内正常基质的电阻率、k3为发酵液内正常发酵产物的电阻系数、ρ3为发酵液内正常发酵产物的电阻率均为已知值,因此,通过公式(4)和公式(5)可计算得到基质体积V2、发酵产物体积V3。既然基质体积V2、发酵产物体积V3、发酵罐中发酵液总体积V都为已知了,那么发酵液内基质的浓度C2,发酵液内发酵产物的浓度C3都可通过如下公式计算而得:
公式(6):C2=V2/ V;
公式(7):C3=V3/ V;
这样便获得了发酵参数,可与微机的处理软件内所存储的正常发酵参数进行比较,如果超出范围值,则可进行报警。再接下去用户可自行根据需要生成相应的参数图像,比如可生成只指示发酵罐内温度分布的温度图像,或菌落的阻抗频谱值曲线图,参见图5,这样一旦菌落发生污染,所获得的菌落阻抗频谱值会发生变化,通过在同一曲线图上表述正常和污染后的非正常菌落阻抗频谱值就可进行直观地比对。因此,此阻抗频谱值可作为反映菌落生长状况的指示,如果发生菌落污染,此阻抗频谱值会发生变化。因为是实时监测,也可以设定循环监测的时间后进行循环断层扫描监测。
本发明中,断层扫描的成像速度可大于20帧/秒,以实现实时成像。电阻抗断层成像技术采用对被测物注入微安或毫安级的微弱电流,范围从10微安培到5毫安培,从而观测被测物的电特性,此微弱电流对菌落生长无影响。本发明中采用100Hz 到5 MHz的多频率阻抗扫描,以提取更多的被测物体的电特性。本发明中所产生的二维或三维图像通过图像重建和测量手段可反映出被测区域内相关参数的变化,如,温度变化,基质浓度变化、发酵产物的浓度变化等,并可通过直接观察实时的三维图像来观察整体发酵液在发酵罐内的动态变化。
Claims (8)
1.一种微生物发酵过程的实时监测系统,包括发酵罐、圈电极、螺杆、电机、数据采集系统、嵌设有处理软件的微机、直线移动装置,其特征在于:发酵罐(3)的内壁设有直线移动装置,所述的直线移动装置的上部连接一圈电极(2),圈电极(2)外层覆设有绝缘层,圈电极(2)的接线端连接数据采集系统(4)的一端,数据采集系统(4)的另一端连接微机(6)的一路信号端,直线移动装置的底端穿过发酵罐的底部后连接电机(5);电机(5)的控制信号输入端连接微机(6)的另一路信号端,发酵罐的液位传感器的信号端连接微机(6)的又一信号端;微机内所嵌设的处理软件执行如下步骤:a、开始;b、是否进行扫描;不扫描,则返回开始;确认扫描,则设定扫描区域;c、设定多频断层扫描的多个频率;d、在设定的扫描区域内圈电极进行逐层多频扫描;e、扫描数据采集和图像重建生成二维和三维图像:采集圈电极上的电压信号,并将电压信号转换成阻抗值后重建成二维和三维图像;f、图像处理:分析二维或三维图像,并获取阻抗值计算生成相关发酵参数;g、参数分析、异常报警:将所获取的发酵参数与正常发酵参数值进行比较,若超出正常范围则进行报警;h、是否生成参数图像,否,则进入 “是否循环监测”步骤;是,则生成相应参数图像后再进入“是否循环监测”步骤;i、如果循环监测,则返回“在设定的扫描区域内圈电极进行逐层多频扫描”步骤;如果不循环监测,则判断“是否变更扫描区域”;j、变更扫描区域,则返回“设定扫描区域”步骤;不变更扫描区域,则结束;所述的发酵参数,包括发酵罐内温度、基质体积、基质浓度、发酵产物的体积、发酵产物的浓度。
2.如权利要求1所述的一种微生物发酵过程的实时监测系统,其特征在于:所述的多个频率为施加在圈电极(2)上的频率在100 Hz~5 MHz 的10μA~5mA的微电流。
3.如权利要求1所述的一种微生物发酵过程的实时监测系统,其特征在于:所述的直线移动装置为沿发酵罐内壁圆周均布螺杆(1),螺杆为垂直放置,且每根螺杆的底端穿过发酵罐的底部后再连接设于发酵罐外的一个电机(5),螺杆(1)的顶部由下至上垂直贯穿绝缘层并螺纹连接绝缘层。
4.如权利要求1所述的一种微生物发酵过程的实时监测系统,其特征在于:所述的根据获取阻抗值计算生成相关发酵参数,包括如下计算公式:
公式(1):R=R0+αT;
公式(2):ΔT=ΔR/α;
公式(3):Rl-Rh=k1ρ1V1;
公式(4):Rh= k2ρ2V2+ k3ρ3V3;
公式(5):V2+V3=V-V1;
公式(6):C2=V2/ V;
公式(7):C3=V3/ V;
公式中R表示从二维图像或三维图像上显示的像素所获取的阻抗值,R0表示在参考温度下发酵液的参考阻抗值,α表示发酵液的温度系数,T表示发酵罐内温度,ΔT表示温度变化值,ΔR表示发酵液阻抗变化值;Rl和Rh分别表示发射1~5kHz低频电流所获得的阻抗值和发射1MHz~5 MHz高频电流所获得的阻抗值,k1为该发酵液中正常菌落电阻系数,ρ1为该发酵液中正常菌落电阻率,V1为菌落体积、V2为基质体积,V3为发酵产物体积;V为发酵罐中发酵液总体积,由发酵罐所附带的液位传感器所获得;k2表示发酵液内正常基质的电阻系数、ρ2表示发酵液内正常基质的电阻率、k3表示发酵液内正常发酵产物的电阻系数、ρ3表示发酵液内正常发酵产物的电阻率、C2 表示发酵液内基质的体积浓度,C3表示发酵液内发酵产物的体积浓度。
5.如权利要求1所述的一种微生物发酵过程的实时监测系统,其特征在于:圈电极(2)的接线端连接数据采集系统中的前置放大电路的一端,前置放大电路的另一端再依次连接前置滤波电路、数据采集卡的一端、信号处理电路的一端;所述的信号处理电路采用后置放大电路连接后置滤波电路组成。
6.如权利要求5所述的一种微生物发酵过程的实时监测系统,其特征在于:数据采集系统采用数据采集卡中的数字控制通路与微机的端口进行通讯连接。
7.如权利要求1所述的一种微生物发酵过程的实时监测系统,其特征在于:所述的处理软件为LabVIEW软件。
8.如权利要求5或6所述的一种微生物发酵过程的实时监测系统,其特征在于:数据采集系统中的数据采集卡采用PXI数据采集卡。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20121226 |