CN102816151B - 左旋美普他酚衍生物、其制备方法和其制药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及通式(I)或(II)的左旋美普他酚衍生物和/或其药学上可接受的盐，式中各基团的定义详见说明书。本发明还涉及所述化合物的制备方法。本发明进一步涉及所述化合物在制备治疗老年痴呆症等疾病的药物中的应用。本发明的化合物同时显示出乙酰胆碱酯酶抑制、抗β淀粉肽(Aβ)聚集和抗氧化活性，它可作为具有多重作用的早老性痴呆治疗药物。
Description
技术领域
本发明涉及制药领域，特别是涉及一类新的左旋美普他酚类双功能团衍生物或其药学上可接受的盐，本发明还涉及所述左旋美普他酚衍生物的制备方法，本发明进一步涉及所述左旋美普他酚衍生物的制药用途。
背景技术
阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease，AD)又称早老性痴呆，是一种慢性进行性中枢神经系统退行性疾病。目前，全世界约有5000多万的老年人患有不同程度的老年痴呆，随着“人口老龄化社会”的到来，AD患者人数还会急剧增加，预计到2050年，全世界痴呆患者人数将超过1亿，AD治疗药物市场需求巨大，其研究成为国际医药界瞩目的热点和前沿领域(Mount，C.；Downton，C.Alzheimer disease：progress or profit.Nat.Med.2006，12(7)，780-784.)。
AD的痴呆症状与中枢神经系统中多种神经递质的代谢紊乱有关，尤以胆碱能神经功能与学习记忆的关系最为密切。基于“胆碱能假说”(Bartus，R.T.；Dean 3rd，R.L.；Beer，B.；Lippa，A.S.The cholinergic hypothesis of geriatricmemory dysfunction.Science 1982，217，408-414.)以提高脑内乙酰胆碱水平和恢复胆碱能神经传导为目的的治疗方法，能够减轻AD痴呆症状，提高学习记忆和认知能力。乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂是最经典的AD治疗药物，在美国FDA批准的五个AD治疗药物中有四个为AChE抑制剂，包括他克林(tacrine，)、多奈培齐(donepezil，)、利斯的明(rivastigmine，)和加兰他敏(galanthamine，)。此外中国药物研究所开发的石杉碱甲(huperzine A，双益平)具有明显的治疗作用，均已临床使用。
他克林是1993年第一个获美国FDA批准用于治疗轻至中度AD的药物，是吖啶类结构的代表，属于可逆性非选择性AChE抑制剂。由于其外周胆碱能刺激和肝脏毒性作用，临床应用受到很大的限制。
多奈哌齐是1997年第二个获美国FDA批准的可逆性AChE抑制剂，全球销售额位居AD药物榜首，具有治疗剂量小、毒副作用低、耐受性好的优点；其主要缺点是药物的生物利用度不高，所以疗效不能充分发挥。
利斯的明是第二代非竞争性氨基甲酸酯类AChE抑制剂，于2000年被FDA批准用于治疗轻至中度AD。利斯的明具有高度的脑选择性、化学稳定性和耐受性，是可靠的AD临床药物，目前销量仅次于多奈哌齐，且上升趋势显著。
加兰他敏是从石蒜科植物中提取的一种生物碱，为竞争性可逆性AChE抑制剂，过去用于治疗重症肌无力，2001年获美国FDA批准用于治疗AD。它具有AChE抑制和烟碱乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor，nAChR)变构调节的双重作用机制，可显著改善轻至中度AD患者的认知障碍，延缓脑细胞功能退化的进程。
石杉碱甲是中国科学院上海药物研究所从石杉属植物千层塔中离得到的一种生物碱，是我国首创的AChE抑制剂类AD治疗药物。石杉碱甲口服易吸收，目前已在国内上市，在美国也以“膳食补充剂”名义上市。
但是，上述的乙酰胆碱酯酶抑制剂只是通过减少乙酰胆碱的破坏来提高其浓度，在治疗过程中“治标不治本”，而且由于能释放乙酰胆碱的神经元会随着病程进展而数目减少，因此改善症状的疗效也会减弱。
20世纪90年代初，Hardy等(Hardy，J.A.；Higgins，G.A.Alzheimer’s disease：the amyloid cascade hypothesis.Science 1992，256，184-185.)提出了淀粉样蛋白级联反应原始假说：β淀粉肽(Aβ)可能是AD的原发性病理因子，它的解离和清除失衡引发了后面一系列复杂的生理病理变化。根据“β淀粉肽假说”，人们提出了以阻止或逆转AD病程中各个环节为目的的治疗方案，包括减少Aβ生成、阻止Aβ沉积、加速Aβ清除、抑制tau蛋白异常磷酸化、抗炎、抗氧化和神经保护等(Wolfe，M.S.Therapeutic strategies for Alzheimer′s disease.Nat.Rev.Drug Discov.2002，1，859-866.)。上述治疗方案如果获得成功，将能控制AD病程的发展，对AD起到疾病修正(disease-modified)作用。
在神经退行性疾病中的活性氧分子(ROS)的危害性类似于感染性疾病中的微生物，许多年来科学家一直在争论氧化应激是神经组织退化的原因还是结果，目前一致观点是细胞内氧异常发生在神经组织退化的早期，因此，它可能是神经组织退化疾病的最主要诱因之一(Hajieva，P；Behl，C.Antioxidants as apotent tetrapy against age-related neurodegenerative diseases：Amyloid betatoxicity and Alzheimer’s disease.Curr Pharm.Des 2006，12，699-704.)。神经元对氧化应激特别敏感，当中枢神经系统内过度氧化破坏了氧平衡，会引发几种潜在毒性的ROS产生，在AD病人尸检中发现，脑组织中脂质发生严重过氧化，造成细胞核和线粒体的DNA损伤。临床研究已证实了抗氧剂治疗包括AD在内的神经退行性疾病的有效性(Wang，J.Y.；Wen，L.L.；Huang，Y.N.；Chen，Y.T.；Ku，M.C.Dual effects of antioxidants in neurodegeneration：direct neuroprotectionagainst oxidative stress and indirect protection via suppression of glia-mediatedinflammation.Curr.Pharm.Des.2006，12，3521-3533.)。
本申请人的中国专利申请CN101037430 A公开了一类以长碳链连接的左旋美普他酚双配基衍生物具有乙酰胆碱酯酶抑制作用。
随着人们对发病机理和致病基因的深入认识，AD药物开发逐渐从早期的以改善认知能力为主的“治标”药物转为控制AD病程发展的“疾病修正”药物。另外，由于AD的多因子发病机制和复杂的病理生化改变，多靶向干预策略在近几年引起人们极大关注。多靶向配体药物治疗AD(即单一分子同时作用于AD的两个或更多个靶点，发挥多重作用的药物)成为该技术领域的努力方向(Cavalli A，BolognesiML，Minarini A，Rosini M，Tumiatti V，Recanatini M，Melchiorre C.Multi-target-directed ligands to combat neurodegenerative diseases.J Med Chem.2008；51：347-72)。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种新颖的左旋美普他酚类双功能团衍生物。
本发明的再一个目的是提供所述左旋美普他酚衍生物的制备方法。
本发明的另一个目的是提供所述左旋美普他酚衍生物的制药用途。
本发明的上述目的是通过下列构思来实现的：
一种具有通式(I)或(II)的化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
m和n独立地选自0～4中的整数；m优选的是1～3中的整数，最好是2或3，n优选地为1；
R1和R2独立地选自氢、羟基、卤素、C1-3烷基、被卤素取代的C1-3烷基或C1-3烷氧基。
在一个实施方案中，R2是氢，R1为氢、甲氧基、三氟甲基、羟基或卤素。
本发明优选的化合物选自：
6-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-N-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-己酰胺；
7-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-N-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-庚酰胺；
8-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-N-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-辛酰胺；
8-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-N-[2-(1H-5-甲氧基吲哚-3-基)乙基]-辛酰胺；
8-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-N-[2-(1H-5-氯代吲哚-3-基)乙基]-辛酰胺；
8-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-N-[2-(1H-5-羟基吲哚-3-基)乙基]-辛酰胺；和
5-[(1′，2′-二硫杂环戊烷)-3-基]-N-{3-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-丙基}-戊酰胺。
进一步，本发明提供最优选的化合物：
8-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-N-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-辛酰胺；
8-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-N-[2-(1H-5-甲氧基吲哚-3-基)乙基]-辛酰胺；
5-[(1′，2′-二硫杂环戊烷)-3-基]-N-{3-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-丙基}-戊酰胺。
本发明中，所述的药学上可接受的盐是所述的化合物与无机酸或者有机酸形成的盐，所述无机酸选自，但不限于，盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、氢溴酸、氢碘酸或任意两者的混合酸；所述有机酸选自，但不限于，酒石酸、扁桃酸、柠檬酸、苹果酸、马来酸、富马酸或任意两者的混合酸。
本发明的再一方面涉及一种制备本发明所述的化合物的方法，包括：
a)(i)
化合物(III)与化合物(IV)在缩合剂和溶剂的存在下进行缩合反应，得到化合物(V)；或者
(ii)
使硫辛酸(LA)和化合物(VI)在缩合剂和溶剂存在下进行缩合反应，得到化合物(VII)；
其中，X为Br或Cl；然后
b)(-)-N-去甲基美普他酚在碱性条件下分别与步骤a得到的化合物(V)或(VII)反应，制得通式(I)或(II)化合物。
所述的缩合反应优选地在催化剂：4-二甲氨基吡啶的存在下进行。
在一个实施方案中，所述的缩合剂是1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，所述的溶剂是反应溶剂，选自乙醇、四氢呋喃、乙醚、二氧六环、乙腈、二氯甲烷、氯仿、苯、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)或者上述溶剂的混合物，优选乙腈。
步骤b)中的碱优选地选自吡啶、三乙胺、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、碳酸钾或钠、氢氧化钾或钠等，优选三乙胺。
具体来说，本发明制备上述左旋美普他酚类衍生物的方法由下列步骤组成：
a)通式(V)、(VII)化合物的制备
化合物(III)先溶于适量的溶剂中。合适的溶剂包括四氢呋喃、乙醚、二氧六环、二氯甲烷、氯仿、DMF、DMSO、苯、甲苯或者上述溶剂的混合物，可以根据具体的反应情况，溶剂合适的量可以是在常温下能溶解化合物的最小溶剂量或更多。
在上述溶液中加入缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和化合物(IV)，缩合反应直至反应终点(反应终点的监控可采用本领域技术人员常用的方法，例如TLC)。反应中可加入4-二甲氨基吡啶(DMAP)进行催化。
分离纯化得到通式(V)化合物，分离纯化的方法可采用本领域技术人员常用的分离方法，例如，萃取、柱层析、重结晶等。
通式(V)化合物的结构可通过本领域常用的光谱分析手段确定，例如1HNMR、MS等。
或者，按照制备(V)的类似方法，从硫辛酸(LA)和化合物(VI)制得化合物(VII)。
其中，X为Br或Cl。
b)(-)-N-去甲基美普他酚在碱性条件下分别与化合物(V)、(VII)反应，制得通式(I)或(II)化合物。
所述碱选自吡啶、三乙胺、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钾、氢氧化钠等，优选三乙胺。
反应溶剂可采用乙醇、四氢呋喃、乙醚、二氧六环、乙腈、二氯甲烷、氯仿、苯、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)或者上述溶剂的混合物，优选乙腈。
起始物(-)-N-去甲基美普他酚的制备：
用常规的方法，例如中国专利申请CN1850804 A所述方法，拆分美普他酚消旋体制得左旋美普他酚。
左旋美普他酚与卤甲酸酯在惰性溶剂中，碱存在下反应制得中间体(-)-N-烷氧甲酰基-N-去甲美普他酚，然后再通过水解反应制得(-)-N-去甲基美普他酚(参见中国专利申请CN101037430 A)。所述惰性溶剂选自四氢呋喃、氯仿、二氯甲烷、苯、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺或者上述溶剂的混合物；所述卤甲酸酯选自氯甲酸乙酯、氯甲酸乙烯酯、氯甲酸苯酯或者氯甲酸三氯乙酯；所述碱选自碳酸氢钾或钠；所述水解反应可以在硫酸水溶液或水合肼溶液或四氢呋喃水溶液条件下进行。
本发明的再一方面是提供上述左旋美普他酚衍生物或其药学上可接受的盐在制备治疗神经退行性疾病药物中的用途。
在一个实施方案中，所述的神经退行性疾病是痴呆症。
在另一个实施方案中，所述的神经退行性疾病选自帕金森病和亨廷顿氏病。
本发明的化合物同时具有乙酰胆碱酯酶抑制活性、抗氧化活性和抗Aβ聚集活性，这种多重作用是现有的美普他酚衍生物所不具备的。因此，本发明所提供的新颖化合物可被开发成为治疗AD的多靶向配体药物。另外，本发明化合物也可用于制备预防或治疗因自由基氧化损伤所致的其它神经退行性疾病的药物，这些神经退行性疾病选自帕金森病和亨廷顿氏病等。本发明的化合物具有治疗指数高、毒副作用小等的优点。
附图说明
图1显示了不同浓度的实施例10化合物对t-BuOOH诱导的SH-SY5Y细胞内ROS产生量的影响。
具体实施方式
以下结合具体的实施例来进一步说明本发明，但下述实施例仅是示例性的，并非用来限制本发明的保护范围。
实施例1 N-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-8-溴辛酰胺
0.22g(1.0mmo1)8-溴辛酸溶解在20mL无水CH2C12中，加入EDC0.19g(1.0mmo1)、DMAP0.12g(1.0mmo1)，搅拌均匀后，加入色胺0.16g(1.0mmol)，室温下搅拌反应2小时，有白色固体析出，过滤，滤液加入1N盐酸10mL洗涤，再用水10mL洗涤，用无水Na2SO4干燥。过滤，浓缩，硅胶柱层析(CH2C12～5％EtOH/CH2C12)得到棕色油状物0.25g，收率68.4％。
1HNMR(CDCl3)：8.30(s，1H，NH，重水交换消失)，7.61(d，J＝8Hz，1H，ArH)，7.39(d，J＝8Hz，1H，ArH)，7.21(t，J＝7Hz，1H，ArH)，7.13(t，J＝7Hz，1H，ArH)，7.03(s，1H，ArH)，5.56(s，1H，NHCO，重水交换消失)，3.61(dd，J＝6.1Hz，2H，N-CH2)，3.39(t，J＝6.7Hz，2H，BrCH2)，2.98(t，J＝6.5Hz，2H，indoL-CH2)，2.09(t，J＝7Hz，2H，CH2CO)，1.85-1.80(m，2H，CH2)，1.58(m，2H，CH2)，1.39(m，2H，CH2)，1.27(m，4H，CH2)；
MS(ESI)：366.1[M+H]+，367.1[M+2H]+
采用相应的反应试剂，按照类似的方法制备下述化合物：
表1
实施例7 5-[(1′，2′-二硫杂环戊烷)-3-基]-N-(3-氯丙基)-戊酰胺
将3-氯丙胺盐酸盐0.65g(5.00mmo1)溶解在30mL无水CH2C12中，加入EDC 1.2g(6.26mmo1)、DMAP 2.0g(16.3mmo1)，搅拌均匀后，加入硫辛酸1.05g(5.09mmo1)，抽真空，充氮气三次，氮气保护下，室温搅拌反应12-24小时，用1N盐酸10mL进行洗涤，再用10mL水洗涤2次，用无水Na2SO4干燥。过滤，浓缩，得到草绿色油状物0.99g。硅胶柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯)得到浅黄色油状物360.51g，收率36.2％。
1HNMR(CDCl3)：6.01(s，1H，NHCO，重水交换消失)，3.55(t，J＝6.3Hz，2H，CL-CH2)，3.54-3.52(m，1H，S-CH2)，3.37(dd，J1＝12.7Hz，J2＝6.3Hz，2H，N-CH2)，3.18-3.05(m，2H，S-CH2)，2.47-2.39(m，1H，SCH2CH2)，2.16(t，J＝7.4Hz，2H，CH2CO)，2.00-1.93(m，2H，CL-CH2CH2)，1.92-1.83(m，1H，SCH2CH2)，1.71-1.57(m，4H，CH2)，1.47-1.40(m，2H，CH2)；
MS(ESI)：282.0[M]+
实施例8 6-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-N-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-己酰胺
(3S)-N-去甲基美普他酚0.35g(1.60mmol)微热溶解在10mL乙腈中，加入三乙胺0.3mL(2.15mmol)。搅拌下加入实施例2化合物0.61g(1.81mmol)，回流反应4小时，冷却到室温，浓缩至干，加入10mL饱和碳酸钠溶液，用氯仿15mL×4提取。合并有机层，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩到干，得0.78g黄色油状物，经硅胶柱层析(8％、20％EtOH/CHCl3)得到近无色油状物，加入少量EA，析出白色固体0.49g，收率64.5％，mp.82-85℃。
1HNMR(CDCl3)：8.85(s，1H，NH，重水交换消失)，7.55(d，J＝7.8Hz，1H，ArH)，7.31(d，J＝8.2Hz，1H，ArH)，7.17-7.05(m，3H，ArH)，6.90(d，J＝14.1Hz，2H，ArH)，6.80(d，J＝7.4Hz，1H，ArH)，6.70(d，J＝7.8Hz，1H，ArH)，6.01(s，1H，NHCO，重水交换消失)，3.55(d，J＝6Hz，2H，N-CH2)，2.92(t，J＝6.3Hz，2H，indol-CH2)，2.79(d，J＝13.7Hz，1H，N-CH2)，2.61-2.50(m，3H，N-CH2)，2.39(s，2H，N-CH2)，2.03(t，J＝7.0Hz，2H，CH2CO)，1.62(m，6H，CH2)，1.49(t，J＝7Hz，2H，CH2)，1.34-1.22(m，4H，CH2)，1.12(d，J＝7Hz，2H，CH2)，0.56(t，J＝7Hz，3H，CH3)；
MS(ESI)：476.4[M+H]+
实施例98-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-N-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-辛酰胺
(3S)-N-去甲基美普他酚0.15g(0.68mmol)微热溶解在10mL乙腈中，加入三乙胺0.2mL(1.44mmol)。搅拌下加入实施例1化合物0.25g(0.68mmol)，回流反应2小时，冷却到室温，浓缩至干，加入10mL饱和碳酸钠溶液，用氯仿15mL×3提取。合并有机层，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱层析(8％、20％EtOH/CHCl3)得到近无色油状物0.10g，收率29.4％。
1HNMR(CDCl3)：8.56(s，1H，NH，重水交换消失)，7.59(d，J＝7.6Hz，1H，ArH)，7.37(d，J＝8.0Hz，1H，ArH)，7.21-7.09(m，3H，ArH)，6.94(d，J＝15.7Hz，2H，ArH)，6.81(d，J＝8Hz，1H，ArH)，6.72(d，J＝8Hz，1H，ArH)，5.68(s，1H，NHCO，重水交换消失)，3.67-3.61(m，2H，N-CH2)，2.98(t，J＝6.3Hz，2H，indoL-CH2)，2.91(d，J＝13.3Hz，1H，N-CH2)，2.69(d，J＝14.5Hz，1H，N-CH2)，2.62(s，2H，N-CH2)，2.47(s，2H，N-CH2)，2.10(t，J＝7Hz，2H，CH2CO)，1.70-1.61(m，6H，CH2)，1.52(m，2H，CH2)，1.35-1.25(m，4H，CH2)，1.15-1.06(m，6H，CH2)，0.56(t，J＝7Hz，3H，CH3)；
MS(ESI)：504.4[M+H]+
实施例10 5-[(1′，2′-二硫杂环戊烷)-3-基]-N-{3-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-丙基}-戊酰胺
(3S)-N-去甲基美普他酚0.35g(1.60mmol)微热溶解在15mL乙腈中，加入三乙胺0.3mL(2.16mmol)。搅拌下加入实施例7化合物0.55g(1.95mmol)，回流反应5-7小时，冷却到室温，浓缩至干，加入10mL饱和碳酸钠溶液，用氯仿15mL×3提取。合并有机层，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经硅胶柱层析(6％MeOH/CHCl3)得到近无色油状物0.29g，收率39.0％。
1HNMR(CDCl3)：7.14(t，J＝7.8Hz，1H，ArH)，6.90(s，1H，ArH)，6.83(brs，1H，NHCO)，6，79(d，J＝7.9Hz，1H，ArH)，6.68(d，J＝7.9Hz，1H，ArH)，3.55-3.52(m，1H，S-CH2)，3.20-3.03(m，4H，N-CH2 & S-CH2)，2.66(m，4H，N-CH2)，2.47-2.40(m，2H，N-CH2 & SCH2CH2)，2.20(t，J＝7Hz，1H，N-CH2)1.98-1.94(t，J＝7Hz，2H，CH2CO)，1.93-1.84(m，1H，SCH2CH2)，1.65-1.54(m，14H，CH2)，1.38(q，J＝7.2，2H，CH2)，0.56(t，J＝7.4，3H，CH3)；
MS(ESI)：465.2[M]+
采用相应的反应试剂，按照类似的方法制备下述化合物：
表2
实施例16 8-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-N-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-辛酰胺盐酸盐
实施例9化合物0.10g溶解在10mL无水CH2Cl2中，过滤，滤液滴加无水HCl-乙醚溶液调节pH至4，析出白色粉末0.05g，收率46.7％。
实施例17 5-[(1′，2′-二硫杂环戊烷)-3-基]-N-{3-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-丙基}-戊酰胺盐酸盐
实施例10化合物0.29g，溶解在10mL无水乙醇中，过滤，滤液滴加无水HCl-乙醚溶液调节pH至4，无固体析出，浓缩至干，真空干燥后，得淡黄色粉末0.12g，收率38.3％。熔点：122-127℃。
试验实施例1：AChE抑制活性的测试
酶抑制活性采用Ellman比色法测定，根据乙酰胆碱酯酶水解乙酰胆碱，生成胆碱及乙酸，胆碱与巯基显色剂反应生成黄色化合物，比色法检测胆碱数量，从而以水解产物胆碱的数量反映乙酰胆碱酯酶活力的实验原理，按AChE试剂盒说明书测定胆碱酯酶活性。对照药选择上市药物利斯的明(Rivastigmine)。
AChE酶源：取250g左右的大鼠颅内大脑，分离出前额叶皮质，称取重量后加9倍生理盐水制成10％组织匀浆，3500转/分钟离心10分钟，取上清待测。
反应液内含200μL酶液(0.415U/mL，0.1M磷酸钠缓冲液，pH 8.0)，300μLEllman显色剂5，5′-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)3.3mM(0.1M磷酸钠缓冲液，pH 7.0，含NaHCO3 6mM)和30μL酶抑制剂溶液。于37℃保温20分种后，加入碘化硫代乙酰胆碱(0.05mM水溶液300μL)作为底物。用紫外分光光度计在25℃时412nm波长下测定化合物的光密度，与不加待测化合物的空白管比较计算得出的降低百分率即为酶抑制率。每个化合物均测双管。
胆碱酯酶活力(U/mg蛋白)＝(OD测定管-OD对照管)/(OD标准管-OD空白管)*1μmol/mL
胆碱酯酶活性抑制率(％)＝(ChE活力对照-ChE活力加药)/ChE活力对照*100％
按照上述公式计算被试验化合物的胆碱酯酶活性抑制率。每个化合物均配成10-6mol/L浓度进行初筛；对照药物为石杉碱甲。按照初筛结果选择化合物的七至九个浓度测定其酶抑制率，并以该化合物摩尔浓度的负对数与酶抑制率进行线性回归，求得50％抑制时的摩尔浓度即为该化合物的IC50值。其中，实施例8-11中的化合物及对照药物的结果见表3。
表3
试验实施例2：对AChE诱导的Aβ聚集抑制活性测试
Aβ1-40肽(Biosource)2μL于六氟异丙醇(HFIP)中冻干后溶解在DMSO中，加0.215M磷酸钠缓冲液(pH 8.0)配制成230μM的Aβ试液；Aβ试液中加入16μL人重组AChE(Sigma-Aldrich)配制成AChE终浓度为2.30μM的AChE-Aβ试液；AChE-Aβ试液中加入2μL供试抑制剂配制成抑制剂-AChE-Aβ试液。上述试液室温孵育48小时，重复测试两次。Aβ沉积纤维的形成用硫磺素T荧光法检测。
孵育结束，加入含1.5μM硫磺素T(Sigma-Aldrich)的50mM甘氨酸-NaOH缓冲液(pH8.5)稀释成2.0mL。荧光检测，激发波长和发射波长分别为446nm和490nm。计算抑制剂在不同浓度下对AChE诱导Aβ聚集的抑制百分率，计算公式：100-(IFi/IFo×100)，IFi和IF0分别表示抑制剂-AChE-Aβ试液和AChE-Aβ试液的荧光强度。对照药选择上市药物利斯的明和已知的特异性AChE诱导的Aβ聚集抑制剂碘化丙啶(Propidium iodide，备注：碘化丙啶具有季胺结构而不能通过血脑屏障，不能成为AD治疗的药效分子)。其中，实施例9和实施例10及对照药物对AChE诱导的Aβ聚集抑制活性测试结果见表4。
表4
试验实施例3：抗氧活性测试
将稀释的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞悬液接种于96孔培养板中，37℃，5％CO2条件下培养24小时后，换去原培养液，加入不同浓度(0，0.1，1，5，10，50μM)的待测化合物，培养24小时后，用PBS离心洗涤，加入5μM的2’，7’-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)，37℃，5％CO2条件下培养30分钟，弃去DCFH-DA，洗涤，加入0.1mM t-BuOOH培养30分钟后，上流式细胞仪检测(激发波长：485nm；发射波长：525nm)。测定细胞内活性氧(ROS)水平。实验结果表明当浓度提高到5μM时，实施例10化合物对ROS的产生有抑制作用，且与对照药硫辛酸(LA)活性相当(见图1)。
Claims (12)
1.一种具有通式(I)或（II）的化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
m和n独立地选自0～4中的整数；
R1和R2独立地选自氢、羟基、卤素、C1-3烷基、被卤素取代的C1-3烷基或C1-3烷氧基。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R2为氢。
3.根据权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R1为氢、甲氧基、三氟甲基、羟基或卤素。
4.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，m为选自1～3中的整数，n为1。
5.根据权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，m为2或3，n为1。
6.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述的化合物选自：
6-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-N-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-己酰胺；
7-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-N-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-庚酰胺；
8-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-N-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-辛酰胺；
8-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-N-[2-(1H-5-甲氧基吲哚-3-基)乙基]-辛酰胺；
8-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-N-[2-(1H-5-氯代吲哚-3-基)乙基]-辛酰胺；
8-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-N-[2-(1H-5-羟基吲哚-3-基)乙基]-辛酰胺；和
5-[(1',2'-二硫杂环戊烷)-3-基]-N-{3-[(S)-3-乙基-3-(3′-羟基苯基)-氮杂环庚烷-1-基]-丙基}-戊酰胺。
7.根据权利要求1－6任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述的药学上可接受的盐是所述的化合物与无机酸或者有机酸形成的盐，所述无机酸是盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、氢溴酸、氢碘酸或任意两者的混合酸；所述有机酸是酒石酸、扁桃酸、柠檬酸、苹果酸、马来酸、富马酸或任意两者的混合酸。
8.一种制备如权利要求1所述的化合物的方法，包括：
a）(i)
化合物（III）与化合物（IV）在缩合剂和溶剂的存在下进行缩合反应，得到化合物（V）；或者
使硫辛酸（LA）和化合物（VI）在缩合剂和溶剂存在下进行缩合反应，得到化合物（VII）；
其中，X为Br或Cl;然后
b）(-)-N-去甲基美普他酚在碱存在下分别与步骤a）得到的化合物（V）或（VII）反应，制得通式(I)或（II）化合物。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的缩合剂是1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，所述的溶剂选自乙醇、四氢呋喃、乙醚、二氧六环、乙腈、二氯甲烷、氯仿、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺或者上述溶剂的混合物；所述的缩合反应在催化剂：4-二甲氨基吡啶的存在下进行；步骤b)中的碱选自吡啶、三乙胺、4-二甲氨基吡啶、碳酸钾或钠、氢氧化钾或钠。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的溶剂是乙腈；所述的步骤b)中的碱是三乙胺。
11.如权利要求1～7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗神经退行性疾病药物中的用途。
12.如权利要求11所述的用途，其中所述的神经退行性疾病选自痴呆症、帕金森病和亨廷顿氏病。
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