CN102783442A - 厚唇裸重唇鱼人工繁殖方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种厚唇裸重唇鱼的人工繁殖方法。本发明的方法是选择卵巢、精巢发育已达Ⅴ期的亲鱼进行人工采卵采精，然后搅匀，使卵子和精液充分接触后，加入等渗液40~80ml，再搅拌均匀后再在容器中加入清水300~1000ml，再继续搅拌均匀，完成受精过程，然后将容器内的受精卵用清水缓缓清洗激活精子，再按5~15粒/cm²密度将受精卵放入孵化网箱内，将孵化网箱放入孵化盘内，最后将孵化盘放入孵化槽进行孵化。

Description

厚唇裸重唇鱼人工繁殖方法

技术领域

本发明涉及一种野生鱼的人工繁殖方法，确切讲是一种厚唇裸重唇鱼的人工繁殖方法。

背景技术

厚唇裸重唇鱼（Gymnodiptychus  pachycheilus  Herzenstein），分类上属鲤形目、鲤科、裂腹鱼亚科、裸重唇鱼属，俗称石花鱼、洮河鱼等，是甘肃的四大名鱼之一，分布在黄河干流上游及其支流洮河中上游。由于其经济价值较高，遭到人们的大肆捕捞，资源量急剧下降。

研究表明，在自然条件下厚唇裸重唇鱼的自然繁殖成活率极低，依靠厚唇裸重唇鱼自然繁殖提高其种群数量可能性极低。为了拯救厚唇裸重唇鱼，提高其种群数量，采用人工进行繁殖是一种有效的办法，但至今为止尚没有任何对厚唇裸重唇鱼进行人工繁殖的报道，也无任何文献表明有人曾经进行过类似的工作。

发明内容

本发明提供一种厚唇裸重唇鱼的人工繁殖方法。

本发明的厚唇裸重唇鱼人工繁殖方法是选择卵巢、精巢发育已达Ⅴ期的亲鱼进行人工采卵采精，做法是：先由操作者用一只手抓住雌鱼的尾柄，另一只手握住鱼的头胸部，斜举鱼体，将鱼生殖孔对准一个干的容器，用握住头胸部的手拇指自鱼的胸部开始向后轻柔缓慢地推挤鱼的腹部，待卵流完后，立即用同样的方法挤入雄鱼的精液，然后搅匀，使卵子和精液充分接触后，加入等渗液40~80ml，再搅拌均匀后再在容器中加入清水300~1000ml，再继续搅拌均匀，完成受精过程，然后将容器内的受精卵用清水缓缓清洗激活精子，再按5~15粒/cm²密度将受精卵放入孵化网箱内，将孵化网箱放入孵化盘内，最后将孵化盘放入孵化槽进行孵化，所用的等渗液由：NaCl 88～92g，KCl 2.2～2.6g，CaCl2 2.4～2.6g溶解在10升水中的比例而成。

本发明的厚唇裸重唇鱼的人工繁殖方法中，使卵子和精液充分接触的搅拌采用羽毛搅拌，由于羽毛较轻而柔软，使用羽毛搅拌不会损伤鱼卵，且操作方便，使精子与卵子混合的效果好。

本发明的厚唇裸重唇鱼的人工繁殖方法中，其孵化水质应当是清洁无污染的水质，其溶解氧大于等于6mg/l、PH值7.5～8.0、水温为12～16℃之间、水流量2～3L/min，最好控制在2～2.5L/min。在孵化期间孵化室的门窗要遮光处理，避免阳光照射到鱼卵上，在孵化期间应避免振动。

本发明的厚唇裸重唇鱼的人工繁殖方法中，流水孵化时，应使水流从孵化盘的底部流入，从鱼卵的上方排出。采用这种方法可避免卵的堆积，可提高孵化率。

本发明的厚唇裸重唇鱼的人工繁殖方法中，在于孵化期间，每4～6天一次用消毒水溶液对孵化槽内和置于其内的孵化网箱与卵子进行消毒处理。本发明实际采取的措施为每4～6天用聚维酮碘或1/2000的甲醛溶液静水浸泡孵化槽和放置于孵化槽内的网箱及鱼卵，10～12min。

本发明的厚唇裸重唇鱼的人工繁殖方法中所用的孵化网箱用18目纱网材料制成敞口式网箱。

本发明的厚唇裸重唇鱼人工繁殖方法中所用的孵化盘用硬质材料制成，这里所述的硬质材料可以用玻璃钢，也可以是硬质塑料，在孵化盘的底部和侧壁上均设置有用于水流通过的小孔。本发明实际使用的孵化盘为带有边缘的40cm×40cm×20cm的用玻璃钢制成的箱状物，其孵化盘壁厚为2mm，盘边缘宽度2.5cm，其上面开口，底部与侧壁上开的小孔密度为4-5个孔/cm²。孵化盘底部与侧壁上的孔要求孔径小于鱼卵的直径即可。

本发明的的厚唇裸重唇鱼的人工繁殖方法中所用的孵化槽为采用刚性材料，如玻璃钢或水泥等，制成260cm×42cm×20cm的池状容器，用水龙头或阀门控制的水管向孵化槽供水，在其底部开有出水孔。

本发明的孵化网箱孵化盘及孵化槽在具体的应用中是：将受精鱼卵放置在网箱内，将网箱放置于孵化盘内，再将孵化盘放置于孵化槽内。从水龙头或阀门控制的水管中注入孵化槽内的水流经孵化盘底部的小孔并流入网箱内，再从网箱内经孵化盘的侧壁孔中流出。

经相应实验表明，本发明的方法具有较高的受精率和高的孵化率，对提高厚唇裸重唇鱼种群数量、恢复厚唇裸重唇鱼的资源有积极作用。

具体实施方式

鱼人工繁殖的前提是对亲鱼作出正确的性别鉴定。在繁殖季节，达到性成熟雄鱼的第二性征十分明显，早期在臀鳍上出现沿鳍条排列、灰白色质地坚硬、如小米粒大小的疣状物（追星）。随着性腺的进一步发育，相继在尾鳍、胸鳍、腹鳍、眼前头部、吻端等部位出现追星。臀鳍、尾鳍、胸鳍、腹鳍从基部开始向外侧渐渐变成暗红色。臀鳍基部靠尾鳍一侧最后的两根鳍条及其间质的末端出现两个弧形钩状物，此时轻压腹部，会有白色的精液流出。

达到性成熟的雌鱼，没有上述体征，没有追星出现，最明显的特征是腹部变大，变软，生殖孔突出，充血发红，变宽变厚。

根据鱼类卵巢发育六期分类法观察分析，厚唇裸重唇鱼卵巢发育的特点是；

Ⅰ期：是一对透明的细带，宽约0.1—0.2厘米，呈淡紫色，结缔组织及血管十分细弱，未成年的幼鱼卵巢停留在这个阶段。

Ⅱ期：为一透明的胶状细条，因有不少血管分布其中，略呈粉红色，卵粒呈细纱状，肉眼难以分辩清楚，卵巢宽0.25—0.4厘米。

Ⅲ期：肉眼可以看清卵粒，血管沿卵巢的隔膜排列发育良好，已有网状分支。卵在隔膜附近较大，卵径0.08—0.12厘米，卵细胞由于卵黄沉淀而呈黄色。

Ⅳ期：卵粒明显增大，颜色金黄如小米粒般大小，卵径0.15—0.2厘米，卵巢上的结缔组织和血管已很发达，两排卵巢充满整个腹腔，卵巢膜富有弹性，卵巢膜破裂后卵粒已能分离，卵黄充满整个卵细胞。

Ⅴ期：卵细胞已经成熟，卵子之间各自分离，开始出现流卵，轻压腹部即有大量卵子排出，卵粒颜色更加金黄灿亮，卵粒直径达到0.18—0.25厘米。

Ⅵ期：是刚产完卵的卵巢，卵巢大大缩小，卵巢膜松弛，外表紫红色，卵巢中仍有未排出已经退化的半透明的红黄色卵。有许多空的排出卵的空卵泡。

精子的发育体征是精细胞大量繁殖，这对保证鱼类在水中发育十分重要。在精巢中，一个精原细胞可形成4个精子。当精子成熟后，可随精巢间质分泌的液体同时排出体外。

厚唇裸重唇鱼性腺发育、成熟与产出过程都有严格的周期性。这种周期性是鱼类在长期进化过程中所固定下来的一种延续种族的适应性。厚唇裸重唇鱼达到性成熟年龄后，性腺每年发育成熟一次，产卵期与水温有关，最早从4月下旬开始，5月中旬达到高峰，5月下旬结束，个别发育迟的可延续到6月初产卵。

一、对比试验-原产地人工授精孵化

（一）亲鱼来源

2003年—2004年用于繁殖的亲鱼，均是在繁殖季节雇人或自己捕自洮河上游青海省河南蒙古族自治县境内和碌曲县的洮河及支流。共约500多尾。

（二）人工繁殖所需亲鱼的选择

在采集的亲鱼中，要选择卵巢、精巢发育已达Ⅴ期，能自行流卵、流精，或轻压腹部即能流卵、流精的亲鱼。符合这样条件的亲鱼很难发现，只占渔获物的1%，一旦发现立即实施人工采卵采精和授精。

（三）人工授精

1、试验地点

本实验在碌曲县李恰如牧场进行，位于洮河支流李恰如河边，水量0.02m³/s。

2、人工授精的准备工作

首先对用具包括毛巾、面盆、羽毛、水桶、手套仔细进行消毒，然后将选好的雌鱼和雄鱼按1：1的比例放入暂养的大盆中备用。

3、实施人工受精

一般由2人完成，一人具体操作，1人充当助手。操作者先用左手抓住雌鱼的尾柄，右手握住鱼的头胸部，斜举鱼体，将鱼生殖孔对准面盆，用右手拇指自鱼的胸部开始向后推挤鱼的腹部，动作要轻柔，切忌太急太快，用力轻而适度。待卵流完后，立即用同样的方法挤入雄鱼的精液，然后用羽毛搅匀，使卵子和精液充分接触，加少量清水搅拌，激活精子，经2—3分钟后用10℃的清水洗去多余的精液，把受精卵放入孵化器中孵化。

（四）人工孵化

1、孵化方法。

（1）在自然水体中孵化。用医用纱布和木条制作成40厘米×40厘米×20厘米的全封闭的孵化箱，将受精卵置于其中，将孵化箱放入河道中，顺着水流方向，经常清洗纱布上的泥土，保持水流畅通。

（2）在玻璃太阳能温室中孵化。把孵化槽（虹鳟孵化专用平列槽）放在玻璃太阳能温室内，用一小型水泵放在孵化槽内抽水循环孵化。

（3）孵化室孵化。在河边修建孵化室，建设河道式水泥槽，把平列槽（虹鳟孵化专用）放入水泥槽内，筑坝引河水为孵化水源。用一个1.5立方米的大塑料罐作为水塔泵入河水，作为备用水源，当夜间水温较低或出现洪水时，用水泵抽取塑料罐中的水循环孵化。

2、以上几种孵化方法的效果比较

第一种方法在自然条件下进行，因为河水太浅，水量小，河水昼夜温差很大，变动幅度为0—18℃，水霉病发生严重，用此方法孵化6—10天后，因鱼卵发育缓慢，死亡严重。第二种方法虽然提高了孵化的温度，但因白天太阳光照强烈，温度过高无法控制，温差仍然很大，水的交换量小，孵化效果不理想。第三种方法是在河道式孵化室中进行，采用内循环水方式为补充，水温能够保持在8—15℃之间，而且流量大，溶解氧充足，是比较理想的孵化方式。

3、孵化水温

通过对七批二十多组亲鱼实施人工授精，人工孵化全过程水温记录分析，孵化水温最低极限为0℃，最高25℃。超过25℃鱼卵全部死亡，在0℃时仍然能够发育，只是发育速度非常缓慢。孵化适宜水温5—18℃，最佳水温7—15℃。

4、积温和孵化时间

从受精卵开始到破膜孵出鱼苗的时间和积温，主要与水温有关（见表1），另外与水的流量、温度变化幅度等因素也有一定的关系。

表1    不同水温的孵化时间和积温

平均水温（℃）	8.4	9.0	9.5	10.5	12.4	13.4	平均
								变化幅度（℃）	4.8—11.3	0--14	6.3-14.3	8.5-14.3	10-15.4	1.3—15.8	10.5
孵化时间（小时）	528	408	384	336	288	240	360
								孵化天数（天）	22	17	16	14	12	10	15
孵化积温（度时）	4435	3672	3648	3528	3571	3216	3640

一般孵化所需的积温在3216—4435度时，温度在13.4—8.4℃需10—22天，平均15天。在自然界中孵化所需的时间约在20天左右。从破膜到出膜完毕需要1—2天。

由上表可以看出，孵化水温越高，发育速度越快，所需的积温越少，这与四大家鱼发育积温基本为恒定数有所区别。经过回归分析，积温（Q）和孵化水温（T）之间，存在近似的回归关系：

lgQ=4.9611-1.3924lgT，表明了积温和孵化水温的负相关性。

5、 胚后发育情况

刚孵出的鱼苗，腹部带有卵黄囊，伏于水底，进入胚后发育阶段。在水温10℃左右情况下，经过9天左右，卵黄囊吸收完毕，可以平游，胚后发育积温约为2160度时。若木、王鸿泰等2001年对齐口裂腹鱼的鱼苗观察结果，在10—13℃时，8天卵黄囊吸收完毕可以平游，胚后发育积温约为2200度时，二者基本相等。说明裂腹鱼类的繁殖发育存在着共性。

表2    厚唇裸重唇鱼鱼苗胚后发育情况

全长（mm）	水温7—15℃
		10	卵黄开始缩小，鳍褶发达，胸、眼点黑色明显，口裂明显，体色浅灰色，卵黄囊金黄色，静止时侧卧水底，偶尔平行游动。
12	卵黄显著缩小，呈条状，长轴与鱼体平行，腹部出现红色小点，背部出现黑色小点，尾鳍清晰可见，眼点突出，可平行游动。
		15	卵黄萎缩呈球形，形状随体位而变化，基本吸收完毕，尾部可连续摆动，鳃盖明显。

6、孵化效果

本试验共做人工授精20多组，得到受精卵5万粒，孵化出鱼苗3000多尾。受精率虽然高达90%，但孵化率很低，只有6%。

孵化率很低原因，以上采取的几种孵化方法，采用的是一条支流中的水作为孵化水源，由于水量太小，昼夜水温变化大，水温剧变可能是导致受精卵孵化率低的根本原因，而紫外线照射是影响孵化率的重要原因。

二、本发明的人工孵化方法-迁地驯养后人工授精和孵化

（一）试验地点：位于甘肃省临夏县的甘肃省鲑鳟鱼引种育种中心。

（二）亲鱼来源：将野外捕获的厚唇裸重唇鱼，放入试验地模拟自然河道的砂石底质的鱼池，鱼池宽1.5—2米，深0.7米，长150米，有12处转弯，深水潭2处。驯养地海拔2000米，水温3—15℃。由于是虹鳟鱼池尾排水再次利用，水中含有大量的残饵和有机质，底质为鹅卵石和泥沙，底栖动物十分丰富，肉眼可见大量的水蚯蚓、红线虫、摇蚊幼虫和虾类，充分保证了天然饵料的供应，驯养期间辅以一定的人工颗粒饲料。在引种育种中心共驯养厚唇重唇鱼500多尾，生长良好。

经过2—3年的培育驯化，厚唇重唇鱼性腺发育良好，随机抽样检查发现，雄鱼精巢均已发育到Ⅳ期的水平，臀鳍、尾鳍均已出现明显的追星，个别能够挤出精液。雌鱼发育的稍晚一些，卵巢发育到Ⅲ--Ⅳ期，解剖一尾体长45厘米、体重3800克的雌鱼，其卵巢饱满充满整个腹腔，卵巢长27厘米，重250克，卵粒分离，怀卵量4.2万粒，已达Ⅳ期末，即将产卵。

（三）人工授精：2011年5月初在试验地定期检查驯养的厚唇裸重唇鱼，性成熟的雌鱼腹部膨大、柔软，臀鳍增厚，沿鳍条骨方向有追星分布；成熟的雄鱼臀鳍鳍条骨上有追星分布，比雌鱼的更加粗糙，臀鳍靠近肛门的2根鳍条特化，末端带有倒钩。用于人工繁殖的亲鱼卵巢、精巢发育已达Ⅴ期，挤压鱼腹部可以挤出游离的卵子和精液，立即进行人工授精。

1. 亲鱼挑选

雄鱼挑选：挑选追星较多、臀鳍最后两根鳍条分叉明显的雄鱼，操作者一只手抓住鱼体，另一只手虎口由头部向下轻轻挤压腹部，能够挤出精液的雄鱼可用于人工授精。

雌鱼挑选：挑选腹部柔软膨大、生殖口突出发红的雌鱼，操作者一只手抓住鱼体，另一只手虎口由头部向下轻轻挤压腹部，能够挤出卵子的雌鱼可用于人工授精。

2. 人工授精

本发明所用的人工授精方法与前述的方法基本上是相同的。

先将挑选出的厚唇裸重唇鱼雌鱼和雄鱼（按1：1挑选），放入室内的水泥池中待用。

人工授精时，由操作者先用左手抓住雌鱼的尾柄，右手握住鱼的头胸部，斜举鱼体，将鱼生殖孔对准面盆，用右手拇指自鱼的胸部开始向后轻柔缓慢地推挤鱼的腹部，待卵流完后，立即用同样的方法挤入雄鱼的精液，然后用羽毛搅匀，使卵子和精液充分接触后，加入等渗液50ml，继续搅拌1min后再加入清水500ml，再继续搅拌1min，完成受精过程。将面盆放到水龙头下，接满清水后再缓缓倒出，漂洗鱼卵，洗去精液、粪便等杂物，反复多次，直到将精液、粪便等漂洗干净为止。然后在盆内静置1小时，待受精卵充分吸水膨胀失去粘性，按7-9粒/cm2的密度将受精卵放入孵化网箱内，将孵化网箱放入孵化盘内，最后将孵化盘放入孵化槽进行孵化。

前述等渗液及配置方法：NaCl 90.4g，KCl 2.4g，CaCl2 2.6g，依次溶解在10升水中溶化而成。

3. 人工孵化

3.1 孵化网箱制备

本发明所用的孵化网箱制作方法：先用直径5mm的钢筋焊制1个长40cm×宽40cm×深20cm的框架，然后用18目尼龙筛绢将框架四周和底面包裹住，正面敞口。

3.2 孵化盘制备

本发明的孵化盘用玻璃钢材质，内径规格40cm×40cm×20cm，厚度2mm，盘边缘宽度2.5cm。底部和下水口打眼，孔径2mm，孔间距4～5mm。

3.3 孵化槽制备

孵化槽直接采用了虹鳟孵化专用槽，用玻璃钢或直接用水泥制成规格为260cm×42cm×20cm的池状容器，当用玻璃钢制做孵化槽时，其材料的厚度为5mm，用水龙头或阀门控制的水管向孵化槽内供水，孵化槽的一端的底部设有出水口。孵化槽放置在孵化室内，可以避免阳光照射，一般一个孵化槽放置5-6个孵化盘，一个孵化室内可放置100个孵化槽。孵化室面积为350平方米。

3.4 孵化管理

孵化网箱为40cm×40cm×20cm，放卵密度为每箱1万粒。

孵化用水为泉水，水温周年变化5～18℃，水质为碳酸钙型，水体溶解氧12mg/l，清澈无污染。

采用流水孵化。厚唇裸重唇鱼受精卵为沉性卵，密度大于水，孵化过程中水流控制到不使卵子移动为宜，一般为2L/min。如果水流过大，将卵子冲击到下水流堆积窒息死亡，如果水流过小，不能提供充足的氧气，孵化率低。本发明的流水孵化采用水从孵化盘的下底的孔洞中进入盘内，从孵化盘的侧壁流出，可有效避免鱼卵的堆积。

孵化期间，避免光照和震动，每隔4天用消毒液消毒一次，预防水霉。本发明实际所用的消毒采用聚维酮碘或1/2000的甲醛水溶液浸泡孵化槽内和置于其内的孵化网箱与卵子。鱼卵孵化出膜后，带水作业挑出死卵。注水量仍然控制在原先孵化受精率的水平，一直到仔鱼卵黄囊吸收完毕上浮为止。

3.5 孵化过程中对孵化水的要求

（1）孵化水质要求。溶解氧6mg/l以上，PH值7.5-8.0，水质清洁，无污染、杂物、泥沙等。

（2）孵化水温。孵化水温要求在12-16℃之间（昼夜变化范围），避免水温急剧变化。

（3）水流控制。孵化水流量控制在2-2.5L/min为宜，不宜超过3L/min，否则会导致卵子飘动而死亡，低于1.5L/min则溶氧不足，也会导致卵子死亡。

（4）孵化期间，孵化室的门窗要遮光，避免阳光照射鱼卵，避免震动。

（5）孵化期间的消毒处理是每4天用1/2000的甲醛溶液静水浸泡10-12min，预防水霉病。

（6）当受精出现眼点后，带水捡出死卵，其余卵仍在孵化网箱中孵化，直到出膜上浮为止。

3.6 孵化结果

2011年5月24日，采集2尾厚唇裸重唇鱼亲鱼卵子进行人工授精，获得受精卵10000粒，受精率80%左右；孵化水温平均12.5℃，6月4日开始出膜，共孵化出鱼苗8285尾，孵化率达到82.6%。受精卵从受精到出膜的积温为3456度时，这个结果与野外现场孵化的基本吻合。

出膜鱼苗7-8天后，经过2100度时积温的胚后发育，卵黄囊吸收完毕，上浮平游。

Claims (9)

1.厚唇裸重唇鱼人工繁殖方法，其特征在于：选择卵巢、精巢发育已达Ⅴ期的亲鱼进行人工采卵采精，做法是：先由操作者用一只手抓住雌鱼的尾柄，另一只手握住鱼的头胸部，斜举鱼体，将鱼生殖孔对准一个干的容器，用握住头胸部的手拇指自鱼的胸部开始向后轻柔缓慢地推挤鱼的腹部，待卵流完后，立即用同样的方法挤入雄鱼的精液，然后搅匀，使卵子和精液充分接触后，加入等渗液40~80ml，再搅拌均匀后再在容器中加入清水300~1000ml，再继续搅拌均匀，完成受精过程，然后将容器内的受精卵用清水缓缓清洗激活精子，再按5~15粒/cm²密度将受精卵放入孵化网箱内，将孵化网箱放入孵化盘内，最后将孵化盘放入孵化槽进行孵化，所用的等渗液由：NaCl 88～92g，KCl 2.2～2.6g，CaCl2 2.4～2.6g溶解在10升水中的比例而成。

2.根据权利要求1所述的厚唇裸重唇鱼的人工繁殖方法，其特征在于：使卵子和精液充分接触的搅拌采用羽毛搅拌。

3.根据权利要求2所述的厚唇裸重唇鱼的人工繁殖方法，其特征在于孵化水质应当是清洁无污染的水质，其溶解氧大于等于6mg/l、PH值7.5～8.0、水温为12～16℃之间、水流量2～3L/min，在孵化期间，孵化室的门窗要遮光处理，避免阳光照射到鱼卵上，并避免振动。

4.根据权利要求3所述的厚唇裸重唇鱼的人工繁殖方法，其特征在于的孵化时水流量为2～2.5L/min。

5.根据权利要求1或2或3或4所述的厚唇裸重唇鱼的人工繁殖方法，其特征在于流水孵化时，应使水流从孵化盘的底部流入，从鱼卵的上方排出。

6.根据权利要求5所述的厚唇裸重唇鱼的人工繁殖方法，其特征在于孵化期间，每4～6天一次用消毒水溶液对孵化槽内和置于其内的孵化网箱与卵子进行消毒处理。

7.权利要求1至6所述的任一厚唇裸重唇鱼的人工繁殖方法中所用的孵化网箱，其特征在于孵化网箱用18目纱网材料制成敞口式网箱。

8.权利要求1至6所述的任一厚唇裸重唇鱼的人工繁殖方法中所用的孵化盘，其特征在于孵化盘用刚性材料制成，其底部与侧壁均开有小孔。

9.权利要求1至6所述的任一厚唇裸重唇鱼的人工繁殖方法中所用的孵化槽，其特征在于孵化槽为刚性材料制成容器，其上面开口，其底部开有出水孔。