CN102743336A - 姜黄素壳聚糖硬脂酸嫁接物胶束的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种姜黄素壳聚糖-硬脂酸嫁接物胶束的制备方法及其应用。它以姜黄素为原料药，采用壳寡糖、硬脂酸形成的接枝物作为药物载体，制备过程包括两个部分，第一，以碳二亚胺为交联剂，壳寡糖和硬脂酸共价结合形成壳寡糖-硬脂酸接枝物（CSO-SA）载体；第二，CSO-SA载体溶液中加入一定量的姜黄素DMSO溶液，经络合反应形成CSO-SA/curcumin载药纳米胶束。本发明制备的胶束的平均粒径为114.7nm，Zeta电位18.5mV。体内外试验显示CSO-SA/curcumin具有较强的细胞内化能力，可以增强姜黄素在肿瘤细胞内的积聚，对MCF-7、MCF-7/Adr和大肠癌细胞具有较强杀伤作用；体内给药可以选择性抑制肿瘤细胞的生长而对小鼠无明显的毒性作用。
Description
技术领域
本发明涉及高分子前体药物的合成领域，具体涉及一种姜黄素壳聚糖硬脂酸嫁接物胶束的制备方法及其应用。
背景技术
姜黄素（Curcumin，Cur, 1，7-二（4-羟基-5-甲氧基苯基)）-1，6-庚二烯-3，5-二酮），分子式为C21H20O6，分子量368. 37，主链为不饱和脂族及芳香族基团，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯和碱液中，不溶于水，微溶于苯和乙醚，在高温或强酸、强碱环境中稳定性较差，是一种光敏性很强的物质，需避光保存，主要从姜黄属植物姜黄、郁金、莪术等植物的根或者茎中提取分离，在亚洲特别是印度和中国的药用历史悠久，并被作为一种天然的酚类食品添加剂。姜黄素具有多种药理活性, 这包括抗肿瘤、抗突变、抗增生、抗炎、抗氧化、抗人类免疫缺陷病毒、免疫调节、保护肝脏和肾脏及抗纤维化等药理作用, 姜黄素另一个重要特点就是对啮齿类动物和人体的毒副作用很小, 即使在很高的剂量下, 也没有出现任何明显毒副作用。在抗肿瘤治疗方面，姜黄素具有作用机制和化学结构独特、多靶点、多途径、抗肿瘤谱广、交叉发挥抗肿瘤作用、毒副作用轻等优点，对于提高肿瘤患者的治疗成功率及改善肿瘤患者的生存质量、延长生命方面都有显著疗效。Sharma等用姜黄提取物治疗标准化疗方案耐药的晚期结直肠癌患者四个月，发现口服姜黄提取物耐受性好且未发现剂量限制性毒性；Cheng等在姜黄素前瞻性Ⅰ期临床试验中发现，口服液姜黄素达8000mg/d三个月仍对人体无毒性，其中2例新切除的输尿管膀胱癌患者中的1例、7例口腔粘膜白斑病中的2例、6例胃肠化生中的1例、4例宫颈上皮癌中的1例和6例鲍温氏病中的2例可观察到组织学改善；Lal 等用姜黄素（375m/d, 每日3 次, 口服6～22月）治疗8 例眼窝特发性炎性假瘤患者, 在5 例完成疗程患者中4 例完全治愈。其作用机制包括抗肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡、抑制血管生成、诱导细胞周期停滞、抑制真核转录因子活化等几个方面，Hartojo 等发现姜黄素通过调控NF-κB （Nuclearfactor-kappa B）通路发挥其作用，单独使用姜黄素能抑制NF-κB活性并诱导Flo-1和OE33 食道腺癌细胞系的凋亡；Hilchie 等发现姜黄素能诱导PC3 前列腺癌细胞时间、剂量依赖性细胞凋亡，这种细胞毒性是由于细胞神经酰胺的聚集和线粒体损伤引起由细胞凋亡诱导因子和其他过氧化氢酶非依赖性进程介导的细胞凋亡；另外临床上姜黄素与阿霉素联合应用可以明显减轻阿霉素引起的心脏和肾脏毒性作用。姜黄素所表现出来的生物化学特性使其成为有史以来最强大的候选化学预防剂和抗癌剂之一，美国国立癌症研究院已将其列为第3 代抗癌化学预防药。
姜黄素发现至今，相关文献报道已经超过上千篇，药效活性非常明确，近年来更是免疫调节、神经系统疾病尤其是肿瘤治疗领域（抗肿瘤、癌症预防）的一个热点化合物，但是为什么没有能够被开发成为临床上一个有效新药？深入研究发现这与其水溶性不好、胃肠道吸收差、生物利用度低及体内代谢迅速等特点有关，研究发现给患者每天口服500～8000 mg 姜黄素, 全身监测不到姜黄素浓度, 只有当口服达10～12 g 才能在少数患者体内测到微量姜黄素；进一步研究发现姜黄素口服绝大部分从粪便排出，仅有三分之一左右维持原型，而所吸收的大部分经肠黏膜及肝脏时被转化或代谢而清除，剩余部分又可能进入肠肝循环而被进一步代谢消除，因此姜黄素在胃肠道中代谢严重、首过效应显著，且存在肠肝循环，所以姜黄素在没有达到病灶（如肿瘤组织）前，绝大部分已经被代谢清除。如何改善姜黄素生物利用度, 制备生物利用度高、用药量低的高效、强效制剂已经成为近年来广大姜黄素研究者亟待解决的课题和热点。
为了提高姜黄素的生物利用度, 各种各样的方法已经被采用。这包括结构修饰的方法即以姜黄素为先导化合物、设计、合成和表征大量姜黄素结构类似物和衍生物, 以保留其药物安全性、增加水溶性和抗肿瘤活性进而解决其临床应用缺陷，以及载体辅助技术方法即采用脂质体、纳米粒、前体药物等新型载体技术，使药物到达病灶部位后再缓慢释放出药物分子发挥作用。通过结构修饰，人们发现酚羟基的个数和化学环境对抗氧化活性有重要的影响、而酯化后的衍生物在抗菌/灭虫和抗肿瘤方面活性有所提高、姜黄素还原产物在清除自由基方面有一定的优势、β-二酮上引入羟胺后抗结核杆菌活性提高、而亚甲基取代对抗癌生物活性产生很大影响，但是由于姜黄素本身结构简单, 可修饰改造基团不多（其修饰主要包括对苯环的修饰、亚甲基的修饰、不饱和羰基的修饰三个方面），迄今只有少数几个类似物报道了体内抑瘤活性，因此有必要在不破坏原药抗肿瘤活性的基础上，利用多学科交叉的优势如纳米材料、化学工程等改造姜黄素，使得载体辅助技术和传统中药单体利用得到深度挖掘。载体辅助技术一般采用乳化技术、利用聚合物包覆药物将其放在脂质体、固体分散剂、纳米粒子和微乳液（环糊精复合物、生物可降解微球及微乳等）中, 形成药物复合物或合成类似结构衍生物；或利用溶剂挥发法以两亲性嵌段共聚物聚氧乙烯-聚EPSILON-己内酯 （PEO-PCL）为载体制成载药胶团可防止生理环境下药物降解、持续缓释药物数天。以上方法尽管在溶解或口服吸收方面有一定改善，但仍有不足，这包括载药量低（如微球、纳米粒、固体分散体、脂质体等需要大量载体辅料致使载药量受限）、潜在毒性（如微乳制剂含有大量表面活性剂）、制备过程有可能引起姜黄素降解（如磷脂复合物需在一定温度下药物与磷脂进行复合反应并除掉溶剂）。因此如何选择合适的药物载体将姜黄素安全、高效、缓释、靶向导入肿瘤组织，由此研制高载药量、少载体辅料、无毒及制备过程不影响药物稳定且简单易行的剂型是目前载体技术改造姜黄素研究的重点和难点。
发明内容
本发明的目的是针对姜黄素水溶性低、体内吸收少、生物利用度低的缺点及现有技术的不足，提供一种姜黄素壳聚糖-硬脂酸嫁接物胶束的制备方法及其应用。
姜黄素壳聚糖-硬脂酸嫁接物胶束的制备方法的步骤如下：
（1）低分子量壳聚糖的合成
取市售分子量为450kDa的脱乙酰度为90%的壳聚糖60g，加入到2000mL重量百分比浓度为1.2%的盐酸水溶液中，55℃条件下搅拌2小时，然后加入壳聚糖酶4g，在55℃条件下行酶解反应，用布氏漏斗过滤，80℃下搅拌半小时后，加入0.5g活性炭，稀释，过滤，用0.45μm的微孔滤膜处理滤液，喷雾干燥得到壳聚糖，测得壳聚糖的重均分子量为18kDa；
（2）壳聚糖-硬脂酸接枝物的合成
取0.8g 壳聚糖, 加40mL蒸馏水搅拌溶解后, 加入碳二亚胺0.65g, 搅拌溶解，将0.1g的硬脂酸溶于20 mL乙醇溶液中，将上述两种溶液混合, 在400rpm磁力搅拌条件下, 80℃恒温反应4小时,之后维持常温，继续搅拌8小时至反应液澄清，将终反应液置透析袋, 蒸馏水透析72小时，透析液冷冻干燥,得壳寡糖硬脂酸接枝物；采用三硝基苯磺酸法测定壳寡糖-硬脂酸接枝物的氨基取代度，取1～8mg的壳寡糖分别溶于2mL蒸馏水,加入4%（w/w）的碳酸氢钠2mL和0.1%（w/w）的三硝基苯磺酸2ml, 37℃放置2小时，加人2mol/L盐酸2mL，摇匀，344nm 测定吸光度, 制备壳寡糖标准曲线;取壳寡糖-硬脂酸接枝物, 按上述方法操作,对照标准曲线计算壳寡糖-硬脂酸接枝物氨基取代度；
(3)姜黄素壳聚糖-硬脂酸嫁接物胶束的制备
称取氨基取代度为5～6％的壳寡糖硬脂酸接枝物20mg溶于10mL纯水，以0.1N HCl 调节pH至5.0，然后将溶液在常温超声30次，随后加入以DMSO溶解的2mg/mL姜黄素1mL，再在4℃振荡过夜，将上清液反复透析24小时后离心10min，收集上清，得到姜黄素壳聚糖硬脂酸嫁接物胶束。
(4)姜黄素壳聚糖-硬脂酸接枝物胶束应用于制备抗肿瘤药物。
本发明为克服姜黄素水溶性低、体内吸收少、生物利用度低的缺点，提供一种包裹于壳寡糖硬脂酸接枝物的姜黄素纳米胶束，CSO-SA/curcumin纳米胶束在水溶液中可以自组装形成纳米胶束，该胶束的平均粒径为114.7nm，Zeta电位18.5mV。体内外试验显示CSO-SA/curcumin具有较强的细胞内化能力，可以增强姜黄素在肿瘤细胞内的积聚，对MCF-7、MCF-7/Adr和大肠癌原代细胞具有较强杀伤作用；体内给药可以选择性抑制肿瘤细胞的生长而对小鼠无明显的毒性作用。
附图说明
图1是实施例3制备的CSO-SA/curcumin胶束的粒径（A），CSO-SA/curcumin胶束的透射电镜照片（B）；
图2是姜黄素原药与胶束的颜色（A）, CSO-SA/curcumin胶束释放曲线（B）；
图3是实施例3制备的CSO-SA/curcumin对MCF-7（A）、MCF-7/Adr（B）、细胞大肠癌原代细胞（C）及空载体（D）的毒性作用；
图4是实施例3制备的CSO-SA/curcumin体内抗肿瘤活性（A）、瘤鼠体重变化（B）及姜黄素瘤内分布（C）。
具体实施方式
姜黄素壳聚糖硬脂酸嫁接物胶束的制备方法的步骤如下：
（1）低分子量壳聚糖的合成
取市售分子量为450kDa的脱乙酰度为90%的壳聚糖60g，加入到2000mL 重量百分比浓度为1.2%的盐酸水溶液中，55℃条件下搅拌2小时，然后加入壳聚糖酶4g，在55℃条件下行酶解反应，用布氏漏斗过滤， 80℃下搅拌半小时后，加入0.5 g活性炭，稀释，过滤，用0.45μm的微孔滤膜处理滤液，喷雾干燥得到壳聚糖，测得壳聚糖的重均分子量为18kDa；
（2）壳聚糖-硬脂酸接枝物的合成
取0.8g 壳聚糖, 加40mL蒸馏水搅拌溶解后, 加入碳二亚胺0.65g, 搅拌溶解，将0.1g的硬脂酸溶于20mL 乙醇溶液中，将上述两种溶液混合, 在400rpm磁力搅拌条件下, 80℃恒温反应4小时, 之后维持常温，继续搅拌8小时至反应液澄清，将终反应液置透析袋, 蒸馏水透析72小时，透析液冷冻干燥, 得壳寡糖-硬脂酸接枝物；采用三硝基苯磺酸法测定壳寡糖-硬脂酸接枝物的氨基取代度，取1～8mg的壳寡糖分别溶于2mL 蒸馏水,加入4% （w/w）的碳酸氢钠2mL和0.1% （w/w）的三硝基苯磺酸2mL, 37℃放置2hr，加人2mol/L盐酸2mL，摇匀，344nm 测定吸光度, 制备壳寡糖标准曲线;取壳寡糖-硬脂酸接枝物, 按上述方法操作,对照标准曲线计算壳寡糖-硬脂酸接枝物氨基取代度；
(3)姜黄素-壳聚糖硬脂酸嫁接物胶束的制备
称取氨基取代度为5～6％的壳寡糖-硬脂酸接枝物20mg溶于10mL纯水，以0.1N HCl 调节pH至5.0，然后将溶液在常温超声30次，随后加入以DMSO溶解的2mg/mL姜黄素1ml，再在4℃振荡过夜，将上清液反复透析24小时后离心10min，收集上清，得到姜黄素-壳聚糖硬脂酸嫁接物胶束。
(4)姜黄素壳聚糖-硬脂酸接枝物胶束应用于制备抗肿瘤药物。
本发明通过实施例和附图作进一步的说明。
实施例1
（1）低分子量壳聚糖（CSO）的合成
取市售分子量为450kDa的脱乙酰度为90%的壳聚糖60g，加入到2000mL 重量百分比浓度为1.2%的盐酸水溶液中，55℃条件下搅拌2小时，然后加入壳聚糖酶4g，在55℃条件下行酶解反应，用布氏漏斗过滤， 80℃下搅拌半小时后，加入0.5g活性炭，稀释，过滤，用0.45μm的微孔滤膜处理滤液，喷雾干燥得到壳聚糖，测得壳聚糖的重均分子量为18kDa；
（2）壳聚糖-硬脂酸接枝物（CSO-SA）的合成
取0.8g 壳聚糖, 加40mL蒸馏水搅拌溶解后, 加入碳二亚胺0.65g, 搅拌溶解，将0.1g的硬脂酸溶于20mL乙醇溶液中，将上述两种溶液混合, 在400rpm磁力搅拌条件下, 80℃恒温反应4小时, 之后维持常温，继续搅拌8小时至反应液澄清，将终反应液置透析袋, 蒸馏水透析72小时，透析液冷冻干燥, 得壳寡糖硬脂酸接枝物；采用三硝基苯磺酸法测定壳寡糖-硬脂酸接枝物的氨基取代度，取1mg的壳寡糖分别溶于2mL蒸馏水,加入4%（w/w）的碳酸氢钠2mL和重量百分比浓度为0.1% 的三硝基苯磺酸2mL, 37℃放置2小时，加入2mol/L盐酸2mL，摇匀，344nm 测定吸光度, 制备壳寡糖标准曲线;取壳寡糖-硬脂酸接枝物, 按上述方法操作,对照标准曲线计算壳寡糖-硬脂酸接枝物氨基取代度；
(3)姜黄素壳聚糖-硬脂酸嫁接物胶束（CSO-SA/curcumin）的制备
称取氨基取代度为5％的壳寡糖-硬脂酸接枝物20mg溶于10mL纯水，以0.1N HCl 调节pH至5.0，然后将溶液在常温超声30次，随后加入以DMSO溶解的2mg/mL姜黄素1mL，再在4℃振荡过夜，将上清液反复透析24小时后离心10min，收集上清，得到姜黄素壳聚糖-硬脂酸嫁接物胶束。
实施例2
（1）低分子量壳聚糖的合成
取市售分子量为450kDa的脱乙酰度为90%的壳聚糖60g，加入到2000mL重量百分比浓度为1.2%的盐酸水溶液中，55℃条件下搅拌2小时，然后加入壳聚糖酶4g，在55℃条件下行酶解反应，用布氏漏斗过滤，80℃下搅拌半小时后，加入0.5g活性炭，稀释，过滤，用0.45μm的微孔滤膜处理滤液，喷雾干燥得到壳聚糖，测得壳聚糖的重均分子量为18kDa；
（2）壳聚糖-硬脂酸接枝物的合成
取0.8g 壳聚糖, 加40mL蒸馏水搅拌溶解后, 加入碳二亚胺0.65g, 搅拌溶解，将0.1g的硬脂酸溶于20 mL乙醇溶液中，将上述两种溶液混合, 在400rpm磁力搅拌条件下, 80℃恒温反应4小时, 之后维持常温，继续搅拌8小时至反应液澄清，将终反应液置透析袋, 蒸馏水透析72小时，透析液冷冻干燥, 得壳寡糖-硬脂酸接枝物；采用三硝基苯磺酸法测定壳寡糖-硬脂酸接枝物的氨基取代度，取8mg的壳寡糖分别溶于2mL蒸馏水,加入4%（w/w）的碳酸氢钠2mL和0.1% （w/w）的三硝基苯磺酸2mL, 37℃放置2小时，加人2mol/L盐酸2mL，摇匀，344nm 测定吸光度, 制备壳寡糖标准曲线;取壳寡糖-硬脂酸接枝物, 按上述方法操作,对照标准曲线计算壳寡糖-硬脂酸接枝物氨基取代度；
(3)姜黄素壳聚糖-硬脂酸嫁接物胶束的制备
称取氨基取代度为6％的壳寡糖-硬脂酸接枝物20mg溶于10mL纯水，以0.1N HCl 调节pH至5.0，然后将溶液在常温超声30次，随后加入以DMSO溶解的2mg/mL姜黄素1mL，再在4℃振荡过夜，将上清液反复透析24小时后离心10min，收集上清，得到姜黄素壳聚糖-硬脂酸嫁接物胶束。
实施例3
（1）低分子量壳聚糖的合成
取市售分子量为450kDa的脱乙酰度为90%的壳聚糖60g，加入到2000mL重量百分比浓度为1.2%的盐酸水溶液中，55℃条件下搅拌2小时，然后加入壳聚糖酶4g，在55℃条件下行酶解反应，以凝胶渗透色谱法控制壳聚糖的降解程度，以布氏漏斗过滤后，80℃下搅拌半小时，加入0.5g的活性炭，将反应稀释后过滤，用0.45μm的微孔滤膜处理滤液，喷雾干燥得到壳聚糖，测得壳聚糖的重均分子量为18kDa；
（2）壳聚糖-硬脂酸接枝物的合成
取0.8g CSO, 加40ml 蒸馏水搅拌溶解后, 加入碳二亚胺0.65g, 搅拌溶解，将0.1g的硬脂酸溶于20 mL乙醇溶液中，将上述两种溶液混合, 在400rpm磁力搅拌条件下, 80℃恒温反应4小时, 之后维持常温，继续搅拌8小时至反应液澄清，将终反应液置透析袋, 蒸馏水透析72小时，透析液冷冻干燥, 得壳寡糖-硬脂酸接枝物；采用三硝基苯磺酸法测定壳寡糖-硬脂酸接枝物的氨基取代度，取1～8mg的壳寡糖分别溶于2mL蒸馏水,加入4% （w/w）碳酸氢钠2mL和0.1% 三硝基苯磺酸2mL, 37℃放置2小时，加人2mol/L盐酸2mL，摇匀，344nm 测定吸光度, 制备壳寡糖标准曲线;取壳寡糖-硬脂酸接枝物, 按上述方法操作,对照标准曲线计算壳寡糖-硬脂酸接枝物氨基取代度为5～6%；
(3) 姜黄素壳聚糖-硬脂酸嫁接物胶束的制备
称取氨基取代度为5～6％的壳寡糖硬脂酸接枝物20mg溶于10mL纯水，以0.1N HCl 调节pH至5.0，然后将溶液在常温超声30次，随后加入以DMSO溶解的2mg/mL姜黄素1mL，当立即出现轻微的浑浊时表示壳聚糖-硬脂酸接枝物与姜黄素发生络合反应，再在4℃振荡过夜，将上清液反复透析24小时（透析袋分子量：7 KDa）后离心10min，得到姜黄素壳聚糖-硬脂酸嫁接物胶束。
(4) 姜黄素壳聚糖-硬脂酸嫁接物胶束理化特征：CSO-SA/curcumin的粒径其分布特征测定采用动态光散射测量法（ZETASIZER 3000, Malvern, UK）；同时 ZETASIZER 3000测定胶束ζ电位；透射电镜测定胶束的外观及形状（JEOL JEM-1230, Japan），其样本以醋酸铀溶液（1%, w/v）负染，并置于覆有火棉胶膜电镜铜网上观察；荧光分光光度计（F-2500, Hitachi Co., Japan）测定包封率（EE），其操作如下：即将胶束以DMSO稀释10倍，在荧光分光光度计下按照激发波长480nm，发射波长566nm，电压700V检测，通过标准曲线计算，包封率计算公式：EE%=（包入胶束的姜黄素量/加入的总量）×100%。
粒度分析表明，所得纳米胶束以平均粒径114.7nm为有效直径且呈正态分布（图1）， Zeta 电位18.5 ±0.4mV。透射电镜下观察该纳米胶束具有规整的球形外观，在溶液中分散良好。测量结果：姜黄素包封率为29.9 ±2.9％。
(5) 姜黄素壳聚糖-硬脂酸嫁接物胶束的体外释放
CSO-SA/curcumin的体外释放采用透析法测定，即将1mL终浓度为50μg/ml的CSO-SA/curcumin 加入到透析袋内（MWCO 7.0 kDa），将透析袋内置于10 ml PBS（pH 6.0）并间隔一定时间换液，收集不同时间点的PBS溶液，以分光光度法测定姜黄素释放量。
测量结果表明： 在48小时内，超过40％的姜黄素是从CSO-SA/curcumin胶束中释放（图2）。释放曲线显示，药物能较平缓释放。
(6) 细胞毒性试验
以MTS法测定，即大肠癌原代细胞、MCF-7、 MCF-7/Adr胞分别按照每孔2×104～5×104密度接种，培养48小时后加入MTS测定。
测量结果表明：CSO-SA/curcumin胶束能有效的对肿瘤细胞起到抑制作用，在同等的姜黄素浓度下，比游离药物药效提高4～6倍（图3）。而空载体对细胞的毒性影响较小。
(7) CSO-SA/curcumin体内抗肿瘤活性
试验对象为5周龄的雌性裸鼠，将大肠癌细胞皮下接种于其腹侧，当肿瘤平均直径达到7～9mm时，，将裸鼠分成3组：单用PBS、空载体、CSO-SA/curcumin（2mg Curcumin/kg/d）；每组一天一次连续2周按照上述方法干预，以数显卡尺测量肿瘤大小，肿瘤体积计算公式：V= a2 ×b/2,，在治疗结束后，摘除移植瘤用于肿瘤组织的药物生物分布分析。
测量结果表明：CSO-SA/curcumin胶束治疗组移植瘤较对照组明显缩小 （图4），荧光共聚焦显微镜显示肿瘤组织内有较强的绿色荧光姜黄素分布。
Claims (2)
1.一种姜黄素壳聚糖-硬脂酸嫁接物胶束的制备方法，其特征在于它的步骤如下：
（1）低分子量壳聚糖的合成
取市售分子量为450kDa的脱乙酰度为90%的壳聚糖60g，加入到2000mL 重量百分比浓度为1.2%的盐酸水溶液中，55℃条件下搅拌2小时，然后加入壳聚糖酶4g，在55℃条件下行酶解反应，用布氏漏斗过滤，80℃下搅拌半小时后，加入0.5g活性炭，稀释，过滤，用0.45μm的微孔滤膜处理滤液，喷雾干燥得到壳聚糖，测得壳聚糖的重均分子量为18kDa；
（2）壳聚糖硬脂酸接枝物的合成
取0.8g 壳聚糖, 加40mL蒸馏水搅拌溶解后, 加入碳二亚胺0.65g, 搅拌溶解，将0.1g的硬脂酸溶于20 mL乙醇溶液中，将上述两种溶液混合, 在400rpm磁力搅拌条件下, 80℃恒温反应4小时, 之后维持常温，继续搅拌8小时至反应液澄清，将终反应液置透析袋, 蒸馏水透析72小时，透析液冷冻干燥, 得壳寡糖-硬脂酸接枝物；采用三硝基苯磺酸法测定壳寡糖-硬脂酸接枝物的氨基取代度，取1～8mg的壳寡糖分别溶于2mL蒸馏水,加入重量百分比浓度为4% 的碳酸氢钠2ml和重量百分比浓度为0.1%的三硝基苯磺酸2ml, 37℃放置2小时，加人2mol/L盐酸2ml，摇匀，344nm 测定吸光度, 制备壳寡糖标准曲线;取壳寡糖-硬脂酸接枝物, 按上述方法操作,对照标准曲线计算壳寡糖-硬脂酸接枝物氨基取代度；
(3)姜黄素壳聚糖硬脂酸嫁接物胶束的制备
称取氨基取代度为5～6％的壳寡糖硬脂酸接枝物20mg溶于10mL纯水，以0.1N HCl 调节pH至5.0，然后将溶液在常温超声30次，随后加入以DMSO溶解的2mg/mL姜黄素1mL，再在4°C振荡过夜，将上清液反复透析24小时后离心10min，收集上清，得到姜黄素壳聚糖-硬脂酸嫁接物胶束。
2.一种根据权利要求1所述方法制备的姜黄素壳聚糖-硬脂酸接枝物胶束的应用，其特征在于姜黄素壳聚糖-硬脂酸接枝物胶束应用于制备抗肿瘤药物。
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| CN (1) | CN102743336A (zh) |
Cited By (4)
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