CN102634530B - 一种高表达赖氨酸的基因 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种高表达赖氨酸的基因，属于生物工程技术领域。高表达赖氨酸的基因其核苷酸序列如SEQIDNO：1所述，该高表达赖氨酸的基因编码蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO：2所述。转基因小鼠奶中表达赖氨酸含量高的蛋白产物，使奶中赖氨酸含量显著提高。赖氨酸转基因小鼠的研究可以为我们进一步了解乳腺外源蛋白特别是本研究所选高赖氨酸含量外源蛋白的分泌机制，为转赖氨酸基因牛奶的研制奠定基础。

Description

一种高表达赖氨酸的基因

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，特别是涉及转基因-克隆技术领域。用于在鼠奶中高表达赖氨酸重组蛋白，为建立高表达赖氨酸转基因奶牛，生产赖氨酸含量高的牛奶奠定基础。

背景技术

转基因动物是按人类自己的意愿有目的、有计划、有预见的改变动物的遗传组成形成的一类动物。与动物生产有关的转基因研究希望通过转基因技术来赋予动物新的遗传性状。转基因动物的制作方法目前主要有原核期胚胎的显微注射，精子载体法，ES细胞技术，体细胞核移植技术等。

赖氨酸是人体必需的8种氨基酸之一，可以调节人体代谢平衡，提高钙的吸收、加速骨骼生长，同时有促进生长发育、增加食欲、减少疾病和增强体质等作用。但是这样重要的一种氨基酸，人体自身却不能合成，必须从食物中获得。而人类主食中赖氨酸含量普遍较低，是第一限制性氨基酸。因此，寻找高赖氨酸含量外源蛋白，补充赖氨酸摄入量的不足，对于人类健康是非常重要的。牛奶中蛋白质、碳水化合物、钙、铁以及维生素等含量高，是非常优良的天然蛋白，已经作为候选蛋白在多种植物中得到表达，但是牛奶中赖氨酸的含量和比例却不能弥补谷物中赖氨酸之缺乏，满足人体对赖氨酸的需要。因此，增加牛奶蛋白中赖氨酸的含量，成为改善膳食营养的重要途径之一，也一直为科学家所关注与重视。通过转基因技术在乳腺中表达编码赖氨酸含量较高的外源蛋白，可以增加牛奶中赖氨酸的含量，补充人体必须的赖氨酸。目前，利用转基因技术已经有约100种重组蛋白在动物乳腺中得到表达，但是在乳腺中高表达赖氨酸蛋白还未见报道。

发明内容

本发明提供一种高表达赖氨酸的基因，以解决在乳腺中还没有高表达赖氨酸蛋白的问题。

本发明采取的技术方案是：该高表达赖氨酸基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所述。

该高表达赖氨酸的基因编码蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所述。

本发明高赖氨酸基因的获得，包括以下步骤：

利用BioEdit生物学软件对牛奶中α-乳白蛋白、乳铁蛋白、αs-，κ-，β-，γ-酪蛋白及乳转铁蛋白中编码赖氨酸的基因片段进行比对，最终选取牛奶蛋白α-S2酪蛋白、乳转铁蛋白和β-酪蛋白中编码赖氨酸含量高的基因片段，人工合成全长376bp的高表达赖氨酸基因LR；

乳腺特异表达载体的构建：

赖氨酸基因，连入去磷酸化的乳腺特异表达载体PBC1(Invitrogen，U.S.A)的多克隆位点，构建赖氨酸基因乳腺特异表达载体(PBC1-LR)，经测序后，确定连入序列与赖氨酸基因同源性达100％，且方向正确；以真核表达载体pGK-Neo-bpa(Soriano et al.，1991；Invitrogen，U.S.A)为模板(PGK为磷酸甘油酸酯激酶启动子，以PGK启动子来驱动新霉素抗性基因neo的表达，以此来筛选转基因细胞系)，克隆出真核细胞筛选标记新霉素抗性基因(Neo)，并将其插入富含赖氨酸基因乳腺特异表达载体(PBC1-LR)，构建乳腺特异表达载体PBC1-neo-LR。

通过筛选牛奶蛋白中编码赖氨酸含量较高的基因片段，将选定的编码赖氨酸含量高的基因片段拼接，成为编码富含赖氨酸的目标基因，构建赖氨酸基因乳腺特异表达载体；再通过原核注射技术生产转基因小鼠，转基因小鼠出生后传代，最后利用聚合酶链式反应、Southern、Western印迹技术原位杂交及氨基酸成分分析确定转基因整合及表达情况。

考虑生物安全性并且为了使奶牛乳腺能特异表达外源基因，本发明选取牛奶蛋白中α-S2酪蛋白、乳转铁蛋白和β-酪蛋白三种蛋白里编码赖氨酸含量高的cDNA序列，拼接三个片段形成编码富含赖氨酸的重组目标基因(LR)，构建高效乳腺特异表达载体，为了验证此载体，利用原核注射技术获得赖氨酸转基因小鼠，旨在获得奶中表达赖氨酸含量高的蛋白产物，从而确定通过转基因技术在牛奶中表达高赖氨酸含量外源蛋白，增加提高牛奶中赖氨酸含量的可能性。高表达赖氨酸转基因载体制备可以帮助我们进一步了解哺乳动物乳腺外源蛋白特别是本研究所选赖氨酸外源蛋白的分泌机制，为赖氨酸转基因牛奶的研制奠定基础。有益效果：转基因小鼠奶中表达赖氨酸含量高的蛋白产物，使奶中赖氨酸含量显著提高。赖氨酸转基因小鼠的研究可以为我们进一步了解乳腺外源蛋白特别是本研究所选高赖氨酸含量外源蛋白的分泌机制，为转赖氨酸基因牛奶的研制奠定基础。

附图说明

图1乳腺特异表达载体、赖氨酸基因和赖氨酸蛋白结构图

A.乳腺特异表达载体pBC1-LR-NEO^r。2×β-globin insulator：2×β鸡珠蛋白绝缘原件；β-casein E1-E2：β-酪蛋白外显子1，内含子1和部分外显子2(位于起始密码子之前)；LRgene：赖氨酸基因；casein E7-E9：β-酪蛋白外显子7，内含子7，外显子8，内含子8和外显子9；casein 3′genomic DNA：β-casein 3′基因区域；pGK-Neo^r：由磷酸甘油酸酯激酶启动子驱动的新霉素抗性基因；Sal I，XhoI为酶切位点。

B.赖氨酸基因结构。选择基因序列：Casein beta，β-酪蛋白(Genbank：NM_181008.2，氨基酸111-129，核苷酸391-447)，casein alpha-s2，α-s2酪蛋白(Genbank：NM_174528.2，氨基酸151-215，核苷酸507-701)，lactotransferrin，乳转铁蛋白(Genbank：NM_180998.2，氨基酸282-310，核苷酸984-1043)，三段拼接形成融合基因LR(5’α-s2酪蛋白，乳转铁蛋白，β-酪蛋白3’)，拼接基因5’端加牛β-酪蛋白信号肽，3’端加终止密码子TAATAG，基因两端分别添加两个XhoI酶切位点及两个保护碱基。

C.赖氨酸基因及蛋白序列。基因两端分别我XhoI酶切位点及保护碱基，氨基酸1-15核苷酸9-53为信号肽，氨基酸16-80核苷酸54-248来源于α-s2酪蛋白，氨基酸81-100核苷酸249-308及氨基酸101-118核苷酸309-362分别来源于乳转铁蛋白和β-酪蛋白。

图2利用原核注射的方法制做转赖氨酸基因小鼠

A.原核注射B.初生转基因小鼠

图3转赖氨酸基因小鼠的筛选

A.转赖氨酸基因小鼠PCR筛选M：DNA标准2000；0、4、10：原代转基因小鼠0号、4号及10号；N：非转基因小鼠对照；C：空白对照。

B.转赖氨酸基因小鼠Southern blot分析。5、25、50为阳性对照：拷贝数5、25和50；NC：非转基因鼠对照；1、2、3：0号、4号及10号转基因小鼠基因组。

图4泌乳期转基因小鼠乳腺LR mRNA表达RT-PCR检测

A.雌性转基因Tg-4-15 1：心；2：肝；3：脾；4：肺；5：肾；6：肌肉；7：卵巢；8：乳腺；9：非转基因鼠乳腺10：阳性对照；11：水对照

B.雄性转基因Tg-4-30 1：心；2：肝；3：脾；4：肺；5：肾；6：肌肉；7：睾丸；8：非转基因鼠睾丸9：阳性对照；10：水对照；

C.雄性转基因Tg-4-35 1：心；2：肝；3：脾；4：肺；5：肾；6：肌肉；7：睾丸；8：非转基因鼠睾丸9：阳性对照；10：水对照；

图5转赖氨酸基因鼠奶中LR蛋白的表达分析

A.转基因奶样SDS-PAGE电泳分析。

M：蛋白质分子量标准；1-3：转基因小鼠Tg-10-16、Tg-4-15、Tg-0-17奶蛋白；NC：非转基因鼠奶阴性对照。

B.转基因奶样Western blotting分析。

M：蛋白质分子量标准；1-3：转基因小鼠Tg-10-16、Tg-4-15、Tg-0-17奶蛋白；NC：非转基因鼠奶阴性对照。

C.F0、F1、F2代转基因小鼠奶样Western blotting分析。

图6不同转基因系转基因奶样赖氨酸含量分析。

A.转基因系(line-0、line-4、line-10)与野生型对照(NC)赖氨酸含量分析，line10、line 4与对照组相比赖氨酸含量差异极显著

B.XN2011135野生型对照L-8800AAA分析系统报告(赖氨酸含量为0.667g/100g)，

所指峰位赖氨酸；

C.XN2011137转基因鼠Tg-10-45奶样中赖氨酸含量(赖氨酸含量为1.057g/100g)，

所指峰位赖氨酸。

图7高赖氨酸奶对哺乳期小鼠体重增长的影响

组1：饮赖氨酸转基因奶的阳性转基因鼠(n＝56)；组2：饮高赖氨酸奶的同窝阴性小鼠(n＝36)；组3：饮普通鼠奶的野生型小鼠(n＝25)。组1、组2与组3相比，差异显著(*，P＜0.05)。

具体实施方式

实施例1拼接赖氨酸基因

选取天然存在的奶蛋白富含赖氨酸序列β-酪蛋白(casein beta，aa111-129，bp 391-447，外显子7，Genbank：NM_181008.2)，α-S2酪蛋(caseinalpha-s2，aa 151-215，bp 507-701，外显子2，Genbank：NM_174528.2)，和乳转铁蛋白(lactotransferrin，aa 282-310，bp 984-1043，外显子8，Genbank：NM_180998.2)，以5’α-S2酪蛋白、乳转铁蛋白和β-酪蛋白3’拼接为赖氨酸基因(图1B).通过BLAST分析三个肽段与任何毒性蛋白都没有同源性。赖氨酸基因LRcDNA序列5’-端再加上牛β-酪蛋白信号肽序列。重组LR基因长度为376bp包括一个牛β-酪蛋白信号肽序列(bp 9-53)，LR基因gene编码区(bp 54-248，bp 249-308和bp 309-362分别来源于α-S2酪蛋，β-酪蛋白和乳铁蛋白)，两个终止密码子(TAATAG)，两个XhoI限制性酶切位点(CTCGAG)和一对保护碱基(CG and CG)(图1C).LR蛋白为14.02Kda(切除信号肽)，赖氨酸含量为25.24％(26/103)，包括118个氨基酸，其中含15个氨基酸的信号肽(aa 1-15)，α-S2酪蛋白肽段(aa 16-80，赖氨酸含量21.54％)，β-酪蛋白肽段(aa 81-100，赖氨酸含量26.31％)，转铁蛋白肽段(aa 101-118，赖氨酸含量为30％)(图1C).

该LR编码蛋白的氨基酸序列SEQ ID NO：2所述。

LR基因片段组成如下：

(1)XhoI限制性内切酶位点(两端)(16bp)：5’-CGCTCGAG-3’和5’-CTCGAGCG-3’

(2)β-酪蛋白信号肽序列(45bp)：5’-ATG AAG TTC TTC ATC TTT ACC TGC CTT TTGGCT GTT GCC CTT GCA-3’

(3)αS2-酪蛋白(来源于casein alpha-s2的aa 151-215，bp 507-701，Genbank：NM_174528.2，位于LR基因的bp 54-248)

5’-AAGAAGACCGTTGACATGGAATCAACAGAAGTATTCACTAAGAAAACTAAACTGACTGAAGAAGAAAAGAATCGCCTAAATTTTCTGAAAAAAATCAGCCAGCGTTACCAGAAATTCGCCTTGCCCCAGTATCTCAAGACTGTTTATCAGCATCAGAAAGCTATGAAGCCATGGATTCAACCTAAGACAAAGGTT-3’

(4)β-酪蛋白(来源于casein beta的aa 111-129，bp 391-447，Genbank：NM_181008.2，位于LR基因的bp 249-308)：

5’-TCCAAAGTGAAGGAGGCTATGGCTCCTAAGCAAAAAGAAATGCCCTTCCCTAAA-3’

(5)乳转铁蛋白(来源于lactotransferrin的aa 282-310，bp 984-1043，Genbank：NM_180998.2，位于LR基因的bp 309-362)；

5’-AAGGAAGACTTGATCTGGAAGCTTCTCAGCAAGGCGCAGGAGAAATTTGGAAAAAACAAG-3’

(6)终止密码子(6bp)：5’-TAATAG-3’

全长376bp的赖氨酸基因LR序列如SEQ ID NO：1所述。

实施例2赖氨酸基因乳腺特异表达载体的构建

1、实验过程

LR基因以XhoI连入pBC1表达载体(Invitrogen，U.S.A.)，DNA测序证明pBC1-LR的正确性。为获得稳转细胞系，真核筛选标记Neo^r(新霉素抗性基因)，以Not I插入富含赖氨酸基因乳腺特异表达载体(PBC1-LR)，构建乳腺特异表达载体PBC1-neo-LR。

乳腺特异表达载体包括：LR基因编码区；羊β-酪蛋白启动子；β-酪蛋白3′基因组序列外显子1，内含子1，部分外显子2(位于起始密码子之前)，外显子7，外显子7，外显子8，内含子8，和外显子9；两个鸡β-珠蛋白绝缘子；真核筛选标记Neo^r(图1A).

2、实验结果

通过PCR及酶切鉴定得到大小与预期一致片段，最后，测序分析证明序列同源性为100％。

3、结论

得到了目标基因插入方向正确并连入真核细胞筛选标记neo的乳腺特异表达载体PBC1-loxp-neo-loxp-LR。

实施例3表达赖氨酸转基因小鼠模型建立

1、昆明白和ICR小鼠购自吉林大学实验动物中心，动物饲养按照标准光照规律(14h光照/10h黑夜)。

2、实验过程

2.1小鼠原核注射注射

6周龄雌性ICR小鼠腹腔注射10 IU孕马血清(PMSG，Ningbo，China)，隔48小时注射人绒毛膜促性腺激素(hCG，Ningbo，China)进行超数排卵。注射hCG后的超数排卵雌性ICR小鼠与雄性昆明白以1∶1比例合笼，检栓确定合子准备情况；检栓确定后小鼠于0.5天处死收集合子，0.2％透明质酸酶处理。线性化乳腺特异表达载体PBC1-loxp-neo-loxp-LR，稀释至2到3ng/mL，在倒置显微镜下显微注射于受精卵雄原核，显微注射受精卵于5％CO₂，37℃过夜培养于KSOM中，二细胞阶段移入同期发情的假孕ICR鼠输卵管。本发明共注射受精卵823个，成活721移植于25个受体，出生后代19个，其中经PCR鉴定3只为转基因小鼠，两只雌鼠一只雄鼠，转基因整合率为15.3％。原代转基因小鼠与野生型昆明白回交产生F1代转基因小鼠13只，后代转基因传代比例为37.5％，46.5％和48.3％，对转基因小鼠及后代进行检测。赖氨酸转基因小鼠见图2。

2.2 PCR及Southern blot分析转基因小鼠赖氨酸基因整合情况

以载体特异性引物为鉴定引物，β-actin为内参引物，筛选转基因小鼠，PCR反应体系为25μL：10×PCR Buffer(含25mmol/L MgCl₂)2.5μL，dNTP(2.5mmol/L)2μL，上、下游引物(10pmol/L)各1μL，ExTaqDNA聚合酶(5U/μL)0.125μL，基因组(200ng/μL)0.5μL。PCR反应条件：94℃5min，94℃30s、58℃30s、72℃1min，30个循环，最后72℃延伸7min。PCR产物用0.8％琼脂糖凝胶电泳进行鉴定后，回收目的片段。将已纯化的目的基因片段连接到pGEM-T载体，转化至Top10中，挑取单克隆经PCR鉴定后，送北京华大基因有限公司测序。

pBC1载体特异性引物：

上游，5′-GATT GACAAGTAATACGCTGTTTCCTC-3′

下游，5′-CATCAGAAGTTAAACAGCACAGTTAG-3′

β-actin引物：

上游，5′-GATATCGCTTGCGCTGGTCGTC-3′

下游，5′-ACGCAGCTCATTGTAGAAGGTGRGG-3′).

EcoRI酶切20μg转赖氨酸小鼠肝脏基因DNA(一只非转基因对照)于0.8％琼脂糖凝胶电泳，电泳后转移至Hybond-N膜(Invitrogen，U.S.A.)。利用罗氏PCR DIG探针合成试剂盒(Roche Applied Sciences，Mannheim，Germany)标记277bp LR特异性探针。标记探针PCR参数为：94℃5min，94℃30s、58℃30s、72℃1min，30个循环，最后72℃延伸7min。探针所用引物序列见表2。杂交及免疫分析按照DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit(Roche Applied Sciences，Mannheim，Germany)说明进行。southern探针引物如下：

上游，5′-GAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCA-3′

下游，5′-TGCAGAATTCGAAGCTTGAGC-3′.

通过PCR及southern blot检测证明转基因小鼠携带HL基因，而且完整整合于小鼠基因组中，拷贝数在2到50之间，并且F₀，F₁和F₂各世代之间拷贝数并未发现明显丢失，说明转基因整合在各世代之间能够稳定遗传；(图3)

2.3RT-PCR分析LRmRNA表达

利用RT-PCR检测泌乳期转基因小鼠Tg-4-15(转基因系Tg-4，F1代)乳腺组织中LRmRNA的表达，取乳腺提取RNA，反转录后以GAPDH为内参进行PCR检测，产物大小为376bp。对RT-PCR扩增产物进行测序，产物序列与我们设计的赖氨酸基因序列同源性达到100％。RT-PCR所用引物见表2.

分别对雌性(Tg-4-15)和雄性(Tg-4-30)小鼠的心、肝、脾、肺、肾、肌肉、卵巢(雌性)、乳腺(雌性)和睾丸(雄性)mRNA进行RT-PCR分析。结果表明：

在雌性，检测到所转基因LRmRNA的表达，且严格限制于乳腺组织即乳腺特异表达，并无异位表达现象。但是，在雄性转基因小鼠，睾丸中检测到了低水平的异位表达(图4)。

HL基因：

上游：5′-GCGAGCTCATGAAGTTCTTCATCTTTAC-3′

下游：5′-GCCTCGAGCTATTATTTAGGGAAGGGCATTTC-3′

GAPDH：

上游：5′-CGACTTCAACAGCGACACTCAC-3′

下游：5′-CACCCTGTTGCTGTAGCCAAA-3′)

2.4鼠奶中赖氨酸蛋白表达检测

将奶样稀释10倍后于沸水中煮沸3-5min，冷却后加入上样缓冲液，5％的浓缩胶，12％的分离胶，用于SDS-PAGE电泳，考马斯亮蓝染色、充分脱色。Tg-10、Tg-4出现约14.1kDa的强条带，初步表明LR蛋白在转基因鼠奶中高水平表达。利用LR特异性单克隆抗体，检测奶样中LR蛋白的表达情况。经Western blot分析，非转基因阴性对照奶样没有检测到任何条带，转基因小鼠在14.1kDa处出现了LR蛋白的特异性杂交条带(图5)。转基因小鼠Tg-10，Tg-4和Tg-0出现不同强度的杂交条带，表明不同转基因之间在LR表达量之间存在差异。

2.5奶样中赖氨酸含量分析

通过Western blot分析已经证明鼠奶中表达了高水平的LR蛋白，为了确定高表达的LR蛋白是否导致转基因鼠奶氨基酸含量的变化，尤其是赖氨酸，我们利用L-8800型氨基酸全自动分析仪对不同世代不同转基因系的鼠奶样品进行了氨基酸含量分析。以非转基因鼠奶样为阴性对照(NC)，比较氨基酸含量变化。从泌乳期第5天起开始收集奶样，鼠奶每隔一天采集一次。转基因鼠奶与野生型相比，颜色微黄。转基因系Tg-10和Tg-4鼠奶中赖氨酸水平显著提高，但是转基因系Tg-0与对照相比差异不显著。转基因系Tg-10和Tg-4鼠奶中赖氨酸水平(0.785-1.057g/100g)显著高于野生型对照(0.606-0.732g/100g)(p＜0.05)(图6)。

2.6高表达赖氨酸转基因鼠奶对哺乳期小鼠体重增长的影响

转基因鼠后代出生后，每天测量其体重变化，确定高表达赖氨酸鼠奶是否能够促进哺乳期小鼠的生长。共测转基因小鼠后代共10窝(Tg-10转基因系后代)(n＝92，饮转基因奶)，其中阳性转基因小鼠为56只(group 1)，剩余的36只为同窝阴性小鼠(group 2)，3窝非转基因小鼠作为对照(n＝25，饮普通鼠奶，group 3)。结果表明：来源于转基因系Tg-10的后代转基因小鼠(group 1)与来源于Tg-10的同窝后代非转基因小鼠(group 2)与饮普通鼠奶的野生型小鼠(group 3)相比，体重显著增加11.2％和10.8％(p＜0.05)(图7)。group1和group2之间没有观察的明显差异，说明导致小鼠体重增长差异的主要因素是饮用高赖氨酸奶，而不是转基因本身。

3、实验结果

目前该转基因鼠已经传至第5代，转基因表达水平并无下降。通过实验证明赖氨酸基因已经稳定整合到小鼠基因组中并稳定遗传，赖氨酸蛋白能够在奶中高效表达，并显著提高了奶中赖氨酸含量，并对小鼠泌乳期体重增加具有显著促进作用。

4、结论

成功构建高表达赖氨酸转基因小鼠模型。

SEQUENCE LISTING

 

<110>  吉林大学

 

<120>  一种高表达赖氨酸的基因

 

<130>  jluzhaoziyi2012-1

 

<160>  2    

 

<170>  PatentIn version 3.5

 

<210>  1

<211>  376

<212>  DNA

<213>  人工合成

 

<400>  1

cgctcgagat gaagttcttc atctttacct gccttttggc tgttgccctt gcaaagaaga       60

 

ccgttgacat ggaatcaaca gaagtattca ctaagaaaac taaactgact gaagaagaaa      120

 

agaatcgcct aaattttctg aaaaaaatca gccagcgtta ccagaaattc gccttgcccc      180

 

agtatctcaa gactgtttat cagcatcaga aagctatgaa gccatggatt caacctaaga      240

 

caaaggttaa ggaagacttg atctggaagc ttctcagcaa ggcgcaggag aaatttggaa      300

 

aaaacaagtc caaagtgaag gaggctatgg ctcctaagca aaaagaaatg cccttcccta      360

 

aataatagct cgagcg                                                      376

 

 

<210>  2

<211>  118

<212>  PRT

<213>  人工合成

 

<400>  2

 

Met Lys Phe Phe Ile Phe Thr Cys Leu Leu Ala Val Ala Leu Ala Lys

1               5                   10                  15     

 

 

Lys Thr Val Asp Met Glu Ser Thr Glu Val Phe Thr Lys Lys Thr Lys

            20                  25                  30         

 

 

Leu Thr Glu Glu Glu Lys Asn Arg Leu Asn Phe Leu Lys Lys Ile Ser

        35                  40                  45             

 

 

Gln Arg Tyr Gln Lys Phe Ala Leu Pro Gln Tyr Leu Lys Thr Val Tyr

    50                  55                  60                 

 

 

Gln His Gln Lys Ala Met Lys Pro Trp Ile Gln Pro Lys Thr Lys Val

65                  70                  75                  80 

 

 

Lys Glu Asp Leu Ile Trp Lys Leu Leu Ser Lys Ala Gln Glu Lys Phe

                85                  90                  95     

 

 

Gly Lys Asn Lys Ser Lys Val Lys Glu Ala Met Ala Pro Lys Gln Lys

            100                 105                 110        

 

 

Glu Met Pro Phe Pro Lys

        115            

 

 

Claims (2)

1.一种高表达赖氨酸的基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所述。

2.如权利要求1所述的该高表达赖氨酸的基因编码蛋白，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所述。

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