CN102630561A - 一种花生组培苗移栽的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种花生组培苗移栽的方法，其包括组培苗生根壮苗、配制移栽后的营养液培养基质、移栽、驯化出苗等步骤。通过本发明的方法，能够提高花生组培苗移栽成活率的方法，成活率在90％以上。

Description

一种花生组培苗移栽的方法
技术领域：
本发明涉及农业生物技术领域，特别涉及一种花生组培苗移栽的方法，更特别的涉及一种提高花生组培苗移栽成活率的方法。
背景技术：
花生(Arachis bypogaea L.)是世界四大油料作物之一，是我国主要的油料作物和经济作物，在国家油脂安全和农产品国际贸易中占有举足轻重的地位。我国花生种植面积占世界种植总面积的19％，居世界第二位，出口贸易占世界总量的50％，居世界主要花生出口国之首，年均总产占世界总产的41％。在国内油料作物中，花生单产、总产和出口量均居首位。随着我国油脂需求量迅猛增长，花生在农业生产中的地位显得尤为重要。但花生遗传基础狭窄，抗逆性差，易感多种病虫害。利用转基因技术可以将外源有益基因资源引入花生，以及利用离体诱变可创造花生新种质，拓宽花生遗传基础，提高栽培种花生的抗逆性及获得其他优良性状。遗传转化及离体诱变的成功与否依赖于花生组织培养高效植株再生体系的建立。研究者们利用花生不同基因型、不同外植体，通过器官发生和胚胎发生途径得到了再生植株。建立了花生高效植株再生体系，但花生再生苗的生根后，移栽成活率低，尤其是通过转基因和突变体筛选等技术得到的具有优良性状的花生再生苗，不能保证以高成活率移栽，这就严重影响了这些工作的顺利进行。目前鲜见提高花生移栽成活率的相关报道，本试验在移栽过程的各个环节，包括组培苗生根壮苗，培养基质的配制，移栽操作以及移栽后的驯化出苗，都进行了系统试验，旨在为花生转基因苗及抗性突变体植株的高成活率移栽提供有效方法。
发明内容：
本发明一方面涉及一种花生组培苗移栽方法，本发明另外一方面涉及提高花生移栽的成活率的组培苗移栽方法，为了实现本发明的目的，本发明采用如下的技术方案：
一种花生组培苗移栽方法，其特征在于包括如下步骤：
1、组培苗生根壮苗
先配制固体生根培养基：1/2MS0(MS0是不加激素的基本培养基)+130-160mg/L NAA(α-萘乙酸)+蔗糖15-25g/L+琼脂粉6-10g/L，pH5.6-6，高温高压灭菌，将生芽培养基中培养的花生组培苗在超净工作台上转移至生根培养基中，用透气塑料封口膜封口，放回人工气候室，光照强度1000-2000LX，每天光照培养12-16h，培养6-8天，在超净工作台上将组培瓶的封口膜换成羊皮纸封口，放回人工气候室培养6-8天，然后去掉羊皮纸，敞开瓶口，培养2.5-3.5天，准备移栽；
2、配制移栽后的营养液培养基质
选用细腻的沙子，用高压灭菌袋分装后经高温高压灭菌，或者用搪瓷盘分装后经烘箱高温灭菌，采用灭菌的沙子作为基质，配制Hoagland’s营养液，营养液中加多菌灵，加入量为0.4-0.6g/L，配制的营养液用于混合润湿沙子和沙土地中的土；
3、移栽
将培养好的组培苗从MS培养基上取出，用无菌自来水洗净花生苗根部的培养基，任选的用软毛刷轻刷一下，将根部的MS培养基洗净，将花生苗移栽至沙子培养基质中，统一喷施营养液至叶面微湿，放在人工气候室，室温，光照强度1000-2000LX，每天光照培养12-16h；
4、驯化出苗
花生苗每隔两天喷施一次营养液，保湿，20-40天后将花生苗转移入装有沙土的盆，喷施自来水，保湿，壮苗之后转入大田，常规管理。
在本发明的一个优选实施方式中，所述的固体生根培养基通过如下步骤配制：
大量元素浓缩液：KNO3 35-4 0g/L，NH4NO3 30-36g/L，KH2PO4 3.0-3.8g/L，MgSO4·7H2O 7-8g/L，CaCl2 8.5-9.5g/L；
微量元素浓缩液：MnSO4·4H2O 2000-2400mg/L，ZnSO4·7H2O 800-1000mg/L，H3BO3 250-400mg/L，KI 70-90mg/L，NaMoO4·2H2O 3-7mg/L，CuSO4·5H2O 2-3mg/L，CoCl2·6H2O 2-3mg/L；
维生素浓缩液：甘氨酸150-250mg/L，盐酸硫胺素B1 35-45mg/L，盐酸吡哆素B6 45-55mg/L，烟酸45-55mg/L，肌醇8-12g/L；
铁盐浓缩液：FeSO4·7H2O 2.6-2.9g/L，Na-EDTA 3.5-4g/L；
取大量元素浓缩液40-60mL/L，微量元素浓缩液4-6mL/L，维生素浓缩液4-6mL/L，铁盐浓缩液4-+mL/L，NAA 120-180mg/L，蔗糖15-25g/L，琼脂粉6-10g/L混合，然后调pH值。
本发明另外一方面还涉及所配制的固体生根培养基，以及该培养基在提高花生移栽的成活率方面的应用。
在本发明的方法中，还可以包括任意在实施例中所提到的步骤。
具体实施方式：
实施例1：组培苗生根壮苗
实验花生品种材料代表：花育22号，丰花3号，海花1号
MS母液的配制：20倍的大量元素：KNO3 38g/L，NH4NO3 33g/L，KH2PO43.4g/L，MgSO4·7H2O 7.4g/L，CaCl2 8.8g/L
100倍的微量元素：MnSO4·4H2O 2230mg/L，ZnSO4·7H2O 860mg/L，H3BO3310mg/L，KI 83mg/L，NaMoO4·2H2O 5mg/L，CuSO4·5H2O 2.5mg/L，CoCl2·6H2O 2.5mg/L；
100倍的维生素：甘氨酸200mg/L，盐酸硫胺素B1 40mg/L，盐酸吡哆素B6 50mg/L，烟酸50mg/L，肌醇10g/L；
100倍的铁盐：FeSO4·7H2O 2.78g/L，Na-EDTA 3.74g/L；
固体生根培养基的配制：大量元素50mL/L，微量元素5mL/L，维生素5mL/L，铁盐5mL/L，NAA 150mg/L，蔗糖20g/L，琼脂粉8g/L，调PH 5.80，混匀后分装至150mL的三角瓶16个/L，用透气塑料封口膜封口后，高温高压灭菌。
同时用密封灭菌袋包装羊皮纸封口膜数量不少于分装培养基三角瓶的数量，高温高压灭菌。
将生芽培养基中培养的花生组培苗在超净工作台上转移至生根培养基中，用透气塑料封口膜封口，放回人工气候室25℃，光照强度1500LX，每天光照培养14h，培养7d。在超净工作台上将组培瓶的封口膜换成羊皮纸封口，放回人工气候室培养7d，然后去掉羊皮纸，敞开瓶口，培养3d，准备移栽。
实施例2：配制移栽后的营养液培养基质
选用细腻的沙子，用高压灭菌袋分装后经高温高压灭菌，或者用搪瓷盘分装后经200℃烘箱高温灭菌，作为基质。
Hoagland’s(霍格兰氏)营养液的配制：Ca(NO3)2 472.3mg/L，K2SO4130.695mg/L，MgSO4 160.2055mg/L，KCl 7.455mg/L KH2PO4 34.0225mg/L；H3BO3 0.06183mg/L，MnSO4 0.16901mg/L，CuSO4 0.024968mg/L，ZnSO4 0.28754mg/L，(NH4)6Mo7O24 0.0061793mg/L，Fe-EDTA 36.71mg/L，pH＝5.8。
配制花生移栽营养液：Hoagland’s营养液，加多菌灵0.5g/L。
准备200mL纸杯若干个，底部打一个口径1cm的孔。
营养液混合沙子润湿后，分装至纸杯，备用。
选择沙土地中的土，用营养液润湿后分装至盆，备用。
实施例3：移栽
将培养好的组培苗从MS培养基上取出，用无菌自来水洗净花生苗根部的培养基，必要的时候需用软毛刷轻刷一下，将根部的MS培养基彻底洗净，又不能伤害根。将花生苗移栽至沙子培养基质中，每个纸杯移栽1株，提前准备好若干个网孔塑料筐，每20株放在一个网孔塑料筐中，用喷壶统一喷施营养液至叶面微湿，然后用塑料薄膜将整个塑料筐封起来，薄膜上打三四个1cm的孔透气，放在人工气候室培养，室温20℃，光照强度1500LX，每天光照培养14h。
实施例4：驯化出苗
花生苗每隔2d喷施一次营养液，保湿，以后每隔3d把塑料薄膜多打几个孔，30d后把塑料薄膜敞开。
用剪刀把栽有花生苗的纸杯子侧面剪开两条缝，转移入装有沙土的盆(5kg)，喷施自来水，保湿。
壮苗之后转入大田，常规管理。
本发明移栽成活率比普通方法有很大的提高，例表1所示。
表1普通移栽和发明内容移栽不同花生成活率对比试验结果
Figure BSA00000688254500051
当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (4)

1.一种花生组培苗移栽方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)、组培苗生根壮苗
先配制固体生根培养基：1/2MS0+130-160mg/L NAA+蔗糖15-25g/L+琼脂粉6-10g/L，pH5.6-6，高温高压灭菌，将生芽培养基中培养的花生组培苗在超净工作台上转移至生根培养基中，用透气塑料封口膜封口，放回人工气候室，光照强度1000-2000LX，每天光照培养12-16h，培养6-8天，在超净工作台上将组培瓶的封口膜换成羊皮纸封口，放回人工气候室培养6-8天，然后去掉羊皮纸，敞开瓶口，培养2.5-3.5天，准备移栽；
(2)、配制移栽后的营养液培养基质
选用细腻的沙子，用高压灭菌袋分装后经高温高压灭菌，或者用搪瓷盘分装后经烘箱高温灭菌，采用灭菌的沙子作为基质，配制Hoagland’s营养液，营养液中加多菌灵，加入量为0.4-0.6g/L，配制的营养液用于混合润湿沙子和沙土地中的土；
(3)、移栽
将培养好的组培苗从MS培养基上取出，用无菌自来水洗净花生苗根部的培养基，任选的用软毛刷轻刷一下，将根部的MS培养基洗净，将花生苗移栽至沙子培养基质中，统一喷施营养液至叶面微湿，放在人工气候室，室温，光照强度1000-2000LX，每天光照培养12-16h；
(4)、驯化出苗
花生苗每隔两天喷施一次营养液，保湿，20-40天后将花生苗转移入装有沙土的盆，喷施自来水，保湿，壮苗之后转入大田，常规管理。
2.根据权利要求1所述的花生组培苗移栽方法，所述的固体生根培养基通过如下步骤配制：
大量元素浓缩液：KNO3 35-40g/L，NH4NO3 30-36g/L，KH2PO4 3.0-3.8g/L， MgSO4·7H2O 7-8g/L，CaCl2 8.5-9.5g/L；
微量元素浓缩液：MnSO4·4H2O 2000-2400mg/L，ZnSO4·7H2O 800-1000mg/L，H3BO3 250-400mg/L，KI 70-90mg/L，NaMoO4·2H2O 3-7mg/L，CuSO4·5H2O 2-3mg/L，CoCl2·6H2O 2-3mg/L；
维生素浓缩液：甘氨酸150-250mg/L，盐酸硫胺素B1 35-45mg/L，盐酸吡哆素B6 45-55mg/L，烟酸45-55mg/L，肌醇8-12g/L；
铁盐浓缩液：FeSO4·7H2O 2.6-2.9g/L，Na-EDTA 3.5-4g/L；
取大量元素浓缩液40-60mL/L，微量元素浓缩液4-6mL/L，维生素浓缩液4-6mL/L，铁盐浓缩液4-+mL/L，NAA 120-180mg/L，蔗糖15-25g/L，琼脂粉6-10g/L混合，然后调pH值。
3.权利要求2所配制的固体生根培养基。
4.权利要求2所配制的培养基在提高花生移栽的成活率方面的应用。 
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