CN102608281A - 一种利用线虫鉴定地沟油的方法 - Google Patents

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王云彪
李铸衡
徐镜波
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Abstract

一种利用线虫鉴定地沟油的方法，它涉及一种鉴定地沟油的方法。它解决了常规的通过胆固醇检测鉴定地沟油的方法，具有操作复杂、仪器依赖度大、成本较高的不足，而且无法针对特异成分痕量低的高精炼地沟油进行检测的问题。方法：一、制备培养基，再倒入培养皿；二、培养皿中的培养基凝固后接入线虫幼虫进行观察，若幼虫生长缓慢，超过36h后才能发育为成虫且成虫体型明显瘦小，活动能力减弱，运动行为衰退，则待检测食用油不是地沟油；若24h内可发育为成虫且生长和活动状况良好，则待检测食用油是地沟油，即完成。本发明对特异成分痕量低的高精炼地沟油可以有效鉴定。本发明实验条件要求低，不需要特殊的高精分析仪器，操作方便，成本低廉。

Description

一种利用线虫鉴定地沟油的方法
技术领域
本发明涉及一种鉴定地沟油的方法。
背景技术
地沟油，泛指在生活中存在的各类劣质油，如回收的食用油、反复使用的炸油，以及通过过滤、加热、沉淀、分离等方法对城市下水道里的垃圾加工而成的“食用油”。“地沟油”是一种质量极差、极不卫生的非食用油。一旦食用“地沟油”，它会破坏人们的白血球和消化道黏膜，引起食物中毒，甚至致癌的严重后果。地沟油回流到餐桌的现象在中国普遍存在并在近年被广泛关注，而鉴定地沟油成为难题。目前国内尚未有检测地沟油的统一标准。单凭人的感官，地沟油的色、香、味与普通食用油几乎没有分别。即便是能探明底细的仪器也常常难以辨别真假。见诸报道的地沟油检测方法都存在一定盲区，准确率也有待提高，尚不足以对地沟油进行充分有效的鉴定。
一般地沟油中含有胆固醇类物质，而植物油中没用这类具有动物油属性的成分；即使地沟油经过数级精炼，胆固醇也会痕量存在。常规的通过胆固醇检测鉴定地沟油的方法，具有操作复杂、仪器依赖度大、成本较高的不足，而且常规胆固醇检测方法5mg/g(10％)检出限较高，无法针对特异成分痕量低的高精炼地沟油进行检测。
发明内容
本发明目的是为了解决常规的通过胆固醇检测鉴定地沟油的方法，具有操作复杂、仪器依赖度大、成本较高的不足，而且无法针对特异成分痕量低的高精炼地沟油进行检测的问题，而提供一种利用线虫鉴定地沟油的方法。
利用线虫鉴定地沟油的方法按以下步骤实现：
一、将17g的琼脂粉、2.5g的蛋白胨、0.11g的CaCl2、0.12g的MgSO4、3g的NaCl和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120℃灭菌20min，再降温至50～60℃，然后在无菌环境下加入1～10ml的待检测食用油，获得培养基，再倒入培养皿；
二、培养皿中的培养基凝固8～12h后接入5～10只线虫幼虫进行观察，若幼虫生长缓慢，超过36h后才能发育为成虫且成虫体型明显瘦小，活动能力减弱，运动行为衰退，则待检测食用油不是地沟油；若24h内可发育为成虫且生长和活动状况良好，则待检测食用油是地沟油，即完成利用线虫鉴定地沟油。
本发明通过对线虫生长观测和行为观察，借助胆固醇这样关键因子对地沟油进行判断。胆固醇是线虫的关键生长因子，在缺乏胆固醇的线虫培养基中，线虫发育明显滞后和不足；地沟油中普遍含有胆固醇，在无胆固醇成分的培养基中添加微量地沟油，线虫生长状况与含有胆固醇成分的培养基中生长的线虫毫无差别。将疑似地沟油添加入无胆固醇成分的线虫培养基中，如果此培养基上生长的线虫生长良好、行为正常，与正常培养基生长的线虫无差别，便可确定此类食用油为地沟油。
本发明与传统的利用分析仪器鉴定地沟油的方法相比，弥补了常规胆固醇检测方法5mg/g(10％)检出限较高的不足，对特异成分痕量低的高精炼地沟油可以有效鉴定。利用线虫生长和行为指标，可以直观高效的甄别食用油的质量优劣。此外，本检测方法对实验条件要求低，不需要特殊的高精分析仪器和检测设备，实验操作方便，灵敏度高，准确度好，成本低廉，易于培训和掌握。
附图说明
图1为实施例中幼虫长至成虫时间，以幼虫生长产卵小时数计的柱状图；图2为实施例中线虫头摆率的柱状图。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式利用线虫鉴定地沟油的方法按以下步骤实现：
一、将17g的琼脂粉、2.5g的蛋白胨、0.11g的CaCl2、0.12g的MgSO4、3g的NaCl和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120℃灭菌20min，再降温至50～60℃，然后在无菌环境下加入1～10ml的待检测食用油，获得培养基，再倒入培养皿；
二、培养皿中的培养基凝固8～12h后接入5～10只线虫幼虫进行观察，若幼虫生长缓慢，超过36h后才能发育为成虫且成虫体型明显瘦小，活动能力减弱，运动行为衰退，则待检测食用油不是地沟油；若24h内可发育为成虫且生长和活动状况良好，则待检测食用油是地沟油，即完成利用线虫鉴定地沟油。
本实施方式步骤一中待检测食用油为疑似地沟油的食用油。
本实施方式中24h内可发育为成虫且生长和活动状况良好，是指幼虫在24h内开始产卵，即发育为健康正常的成虫，以头摆率为指标表征其活动状况良好。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤一中磷酸盐缓冲液的配置：将13.6g的KH2PO4和1.8g的KOH，加蒸馏水定容至100mL，调节pH值为6.0，获得磷酸盐缓冲液。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是步骤一中再降温至55℃，然后在无菌环境下加入2ml的待检测食用油。其它步骤及参数与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是步骤二中培养皿中的培养基凝固8h后接入8只线虫幼虫进行观察。其它步骤及参数与具体实施方式一至三之一相同。
实施例：
利用线虫鉴定地沟油的方法按以下步骤实现：
一、将17g的琼脂粉、2.5g的蛋白胨、0.11g的CaCl2、0.12g的MgSO4、3g的NaCl和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120℃灭菌20min，再降温至55℃，然后在无菌环境下加入1ml的待检测食用油，获得培养基，再倒入培养皿；
二、培养皿中的培养基凝固8h后接入10只线虫幼虫进行观察，若幼虫生长缓慢，超过36h后才能发育为成虫且成虫体型明显瘦小，活动能力减弱，运动行为衰退，则待检测食用油不是地沟油；若24h内可发育为成虫且生长和活动状况良好，则待检测食用油是地沟油，即完成利用线虫鉴定地沟油。
本实施例步骤一中待检测食用油为疑似地沟油的食用油。
本实施例中24h内可发育为成虫且生长和活动状况良好，是指幼虫在24h内开始产卵(图1)，即发育为健康正常的成虫，以头摆率为指标表征其活动状况良好(图2)。
对照组：
正常培养基上生长的线虫，即幼虫在24h内开始产卵，即发育为健康正常的成虫，以头摆率为指标表征其活动状况良好；正常培养基：将17g的琼脂粉、2.5g的蛋白胨、0.11g的CaCl2、0.12g的MgSO4、3g的NaCl和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120℃灭菌20min，再降温至55℃，然后在无菌环境下加入1ml胆固醇溶液，获得正常培养基；其中胆固醇溶液的浓度为10mg/ml。
可见，实施例中生长的线虫与正常培养基上生长的线虫无差别；实施例中的待检测食用油含有胆固醇成分，可鉴定为劣质地沟油。
实验佐证1：
一、将17g的琼脂粉、2.5g的蛋白胨、0.11g的CaCl2、0.12g的MgSO4、3g的NaCl和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120℃灭菌20min，再降温至55℃，然后在无菌环境下加入1ml胆固醇溶液和10ml动物油，获得培养基，再倒入培养皿；
二、培养皿中的培养基凝固8h后接入10只线虫幼虫进行观察，幼虫在24h内开始产卵，即发育为健康正常的成虫(图1)，以头摆率为指标表征其活动状况良好(图2)。
可见，实验佐证1的培养基上生长的线虫与正常培养基上生长的线虫无差别；表明添加动物油对线虫的生长和活动没有影响。
实验佐证2：
一、将17g的琼脂粉、2.5g的蛋白胨、0.11g的CaCl2、0.12g的MgSO4、3g的NaCl和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120℃灭菌20min，再降温至55℃，然后在无菌环境下加入1ml胆固醇溶液和10ml植物油，获得培养基，再倒入培养皿；
二、培养皿中的培养基凝固8h后接入10只线虫幼虫进行观察，幼虫在24h内开始产卵，即发育为健康正常的成虫(图1)，以头摆率为指标表征其活动状况良好(图2)。
可见，实验佐证2的培养基上生长的线虫与正常培养基上生长的线虫无差别；表明添加植物油对线虫的生长和活动没有影响。
实验佐证3：
一、将17g的琼脂粉、2.5g的蛋白胨、0.11g的CaCl2、0.12g的MgSO4、3g的NaCl和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120℃灭菌20min，再降温至55℃，获得培养基，再倒入培养皿；
二、培养皿中的培养基凝固8h后接入10只线虫幼虫进行观察，线虫在无胆固醇培养基中生长缓慢，36h后开始产卵(图1)，成虫明显体弱瘦小，头摆率显著降低(图2)。
可见，实验佐证3中线虫活动能力减弱，运动行为衰退；不添加胆固醇(或地沟油)，线虫生长缓慢；表明作为线虫关键生长因子的胆固醇缺失，使线虫发育受阻，生长减慢，活动能力降低。
实验佐证4：
一、将17g的琼脂粉、2.5g的蛋白胨、0.11g的CaCl2、0.12g的MgSO4、3g的NaCl和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120℃灭菌20min，再降温至55℃，然后在无菌环境下加入1ml动物油，获得培养基，再倒入培养皿；
二、培养皿中的培养基凝固8h后接入10只线虫幼虫进行观察，幼虫在24h内开始产卵，即发育为健康正常的成虫(图1)，以头摆率为指标表征其活动状况良好(图2)。
可见，实验佐证4的培养基上生长的线虫与正常培养基上生长的线虫无差别；表明在无胆固醇成分的线虫培养基中，添加含有胆固醇成分的动物油，弥补了培养基中胆固醇的缺失，使得线虫的生长和活动得以正常。
实验佐证5：
一、将17g的琼脂粉、2.5g的蛋白胨、0.11g的CaCl2、0.12g的MgSO4、3g的NaCl和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120℃灭菌20min，再降温至55℃，然后在无菌环境下加入5ml动物油，获得培养基，再倒入培养皿；
二、培养皿中的培养基凝固8h后接入10只线虫幼虫进行观察，幼虫在24h内开始产卵，即发育为健康正常的成虫(图1)，以头摆率为指标表征其活动状况良好(图2)。
可见，实验佐证5的培养基上生长的线虫与正常培养基上生长的线虫无差别；表明在无胆固醇成分的线虫培养基中，添加含有胆固醇成分的动物油，弥补了培养基中胆固醇的缺失，使得线虫的生长和活动得以正常。
实验佐证6：
一、将17g的琼脂粉、2.5g的蛋白胨、0.11g的CaCl2、0.12g的MgSO4、3g的NaCl和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120℃灭菌20min，再降温至55℃，然后在无菌环境下加入10ml动物油，获得培养基，再倒入培养皿；
二、培养皿中的培养基凝固8h后接入10只线虫幼虫进行观察，幼虫在24h内开始产卵，即发育为健康正常的成虫(图1)，以头摆率为指标表征其活动状况良好(图2)。
可见，实验佐证6的培养基上生长的线虫与正常培养基上生长的线虫无差别；表明在无胆固醇成分的线虫培养基中，添加含有胆固醇成分的动物油，弥补了培养基中胆固醇的缺失，使得线虫的生长和活动得以正常。
实验佐证7：
一、将17g的琼脂粉、2.5g的蛋白胨、0.11g的CaCl2、0.12g的MgSO4、3g的NaCl和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120℃灭菌20min，再降温至55℃，然后在无菌环境下加入10ml植物油，获得培养基，再倒入培养皿；
二、培养皿中的培养基凝固12h后接入5只线虫幼虫进行观察，线虫在无胆固醇培养基中生长缓慢，36h后开始产卵(图1)，成虫明显体弱瘦小，头摆率显著降低(图2)。
可见，实验佐证7中线虫活动能力减弱，运动行为衰退；表明仅添加植物油，此培养基中无胆固醇成为，线虫生长缓慢，活动能力降低。
实验佐证8：
一、将17g的琼脂粉、2.5g的蛋白胨、0.11g的CaCl2、0.12g的MgSO4、3g的NaCl和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120℃灭菌20min，再降温至55℃，然后在无菌环境下加入1ml植物油，获得培养基，再倒入培养皿；
二、培养皿中的培养基凝固12h后接入5只线虫幼虫进行观察，线虫在无胆固醇培养基中生长缓慢，36h后开始产卵(图1)，成虫明显体弱瘦小，头摆率显著降低(图2)。
可见，实验佐证8中线虫活动能力减弱，运动行为衰退；表明仅添加植物油，此培养基中无胆固醇成为，线虫生长缓慢，活动能力降低。

Claims (4)

1.一种利用线虫鉴定地沟油的方法，其特征在于：利用线虫鉴定地沟油的方法按以下步骤实现：
一、将17g的琼脂粉、2.5g的蛋白胨、0.11g的CaCl2、0.12g的MgSO4、3g的NaCl和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120℃灭菌20min，再降温至50～60℃，然后在无菌环境下加入1～10ml的待检测食用油，获得培养基，再倒入培养皿；
二、培养皿中的培养基凝固8～12h后接入5～10只线虫幼虫进行观察，若幼虫生长缓慢，超过36h后才能发育为成虫且成虫体型明显瘦小，活动能力减弱，运动行为衰退，则待检测食用油不是地沟油；若24h内可发育为成虫且生长和活动状况良好，则待检测食用油是地沟油，即完成利用线虫鉴定地沟油。
2.根据权利要求1所述的一种利用线虫鉴定地沟油的方法，其特征在于：步骤一中磷酸盐缓冲液的配置：将13.6g的KH2PO4和1.8g的KOH，加蒸馏水定容至100mL，调节pH值为6.0，获得磷酸盐缓冲液。
3.根据权利要求1或2所述的一种利用线虫鉴定地沟油的方法，其特征在于：步骤一中再降温至55℃，然后在无菌环境下加入2ml的待检测食用油。
4.根据权利要求3所述的一种利用线虫鉴定地沟油的方法，其特征在于：步骤二中培养皿中的培养基凝固8h后接入8只线虫幼虫进行观察。
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