CN102553355A

CN102553355A - 陶土材料、陶瓷材料以及玻璃材料在制备牛、猪或其他哺乳动物肺表面活性提取物中的用途

Info

Publication number: CN102553355A
Application number: CN2011102614409A
Authority: CN
Inventors: 寇同欣; 杨小杉; 张宇; 于顺廷; 周宜遂
Original assignee: SHUANGHE PHARMACEUTICAL CO Ltd BEIJING
Current assignee: China Resources Double Crane Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2011-09-06
Filing date: 2011-09-06
Publication date: 2012-07-11
Anticipated expiration: 2031-09-06
Also published as: CN102553355B

Abstract

本发明涉及陶土材料、陶瓷材料以及玻璃材料在制备牛、猪或其他哺乳动物肺表面活性提取物中的用途。

Description

陶土材料、陶瓷材料以及玻璃材料在制备牛、猪或其他哺乳动物肺表面活性提取物中的用途

技术领域

本发明涉及无机材料，包括陶土材料、陶瓷材料以及玻璃材料在制备牛、猪或其他哺乳动物肺表面活性提取物中的用途。

背景技术

牛、猪或其他哺乳动物肺表面活性提取物(PS)是指牛、猪或其他哺乳动物的肺灌洗液或全肺匀浆提取液，经分离、提取、纯化得到的产物，所述产物包含多组分磷脂和表面活性物质蛋白，是预防与治疗早产儿呼吸窘迫综合征(NRDS)的重要急救药，已在全球大多数国家和地区应用，目前应用较多的是意大利Chiesi制药的猪肺磷脂注射液

美国雅培公司的子公司Ross生产的全牛肺提取制剂

(Survanta因有效成分卵磷脂含量低，添加了合成的磷脂组分)以及美国ONY公司的

前两种制剂都是从全肺匀浆提取液中分离得到的，后一种是从小牛肺的灌洗液中提取得到的。

从动物肺提取的肺表面活性提取物，无论其原材料是全肺匀浆提取液，还是肺灌洗液，均需要处理大量的、含有多组分磷脂和表面活性物质蛋白的混悬液或乳浊液。在现有技术中，主要是通过离心如多级离心、差速离心或梯度离心，然后再通过有机溶剂提取、层析纯化或超临界提纯等步骤制备肺表面活性提取物。其中多级离心、差速离心或梯度离心步骤用时长，能耗大，收率低，生产成本高。现有技术中也有不使用离心技术，而采用有机膜或复合有机材料作为用于过滤原材料(肺灌洗液或全肺匀浆提取液)的过滤材料，但是有机膜或复合有机材料会与磷脂、蛋白成分相互吸附，活性产物的收率较低。因此，需要寻找一种不影响收率，同时降低能耗和生产成本的工业化PS制剂的方法。

发明内容

本发明人在研究中发现，采用无机材料作为分离提取肺表面活性提取物的过滤材料，可在提高活性产物收率的同时，分别降低能耗和生产周期。为此本发明采用与现有技术不同、能更有效地分离提取肺表面活性提取物的无机材料，解决了PS制剂生产周期长、能耗高、收率低的问题，更利于肺表面活性物质提取的产业化。

在本发明中，选择无机材料作为过滤材料，将哺乳动物的肺灌洗液或全肺匀浆提取液进行浓缩后，得到截留液仅为肺灌洗液或全肺匀浆提取液的1/5～1/100，截留液的活性成分与肺灌洗液(或全肺匀浆提取液)一致，总磷脂收率大于90％，卵磷脂收率大于90％，表面活性物质蛋白收率大于85％(以重量计)。截留液经提纯步骤制得肺表面活性提取物，在最终制备的肺表面活性提取物中，总磷脂含量大于90％，卵磷脂约占总磷脂的70-80％，表面活性物质蛋白含量为1-2％(以重量计)。采用本发明制备的肺表面活性提取物，其活性组分、各组分的比例与原工艺一致，各项质量指标包括表面活性也与现有技术制备的PS产品一致。其中，以最终制备的肺表面活性提取物中的总磷脂和过滤前的哺乳动物的肺灌洗液或全肺匀浆提取液为基础计算最终总磷脂收率。所得最终总磷脂收率比现有技术提高10-15％。本发明所使用的哺乳动物的肺灌洗液或全肺匀浆提取液可以采用本领域公知技术(例如，《Surfactant ReplacementTherapy》，Donald L.Shapiro and Robert H.Notter et al，Alan R.LissInc.New York，1989年)从哺乳动物的肺制备。所述哺乳动物包括牛、猪或其他哺乳动物。

在本发明中，所述无机材料通常与磷脂、蛋白组分不产生相互吸附，可以使得到的截留液仅为肺灌洗液或全肺匀浆提取液的1/5～1/100，总磷脂收率大于90％，卵磷脂收率大于90％，表面活性物质蛋白收率大于85％(以重量计)。所述无机材料的实例包括，但不限于陶土材料，陶土材料经过各种物理、化学方法处理制成的无机材料，如陶瓷材料，以及玻璃材料等。在本发明中，无机材料孔径为：10-1000nm，优选10-350nm。在本发明中，无机材料优选微孔陶瓷材料或微孔玻璃材料，其可以采用微孔陶瓷滤管或微孔玻璃滤管的形式。

因此，本发明涉及选自陶土材料、陶瓷材料或玻璃材料的无机材料在制备牛、猪或其他哺乳动物肺表面活性提取物中的用途。

采用下述两种方法检测本法制备的肺表面活性提取物，与原工艺相比，其相关指标达到国际同类PS制剂标准：

(1)体外活性检测-最低表面张力：使用经国家药典会技术鉴定的，专门用于检测PS制剂表面活性的可控闭泡式表面张力仪(CB-1型，具体参见可控闭泡式表面张力测定仪专利说明书，CN 94200787.5)，检测本发明所制备样品的表面张力(可控闭泡式表面张力测定仪的研制；中国医疗器械杂志，1994年第2期)。结果表明，当本发明的肺表面活性提取物在1-5mg/ml浓度范围内时，其表面张力可在1分钟内迅速降低到1mN/m以下，说明其可在气液界面迅速扩散，具有优良的生理活性；

(2)体内活性试验：将豚鼠经生理盐水灌洗肺部制成肺表面活性物质缺乏模型，然后经气管插管给予本发明所制备的肺表面活性提取物，观察给药前后豚鼠血氧分压和肺顺应性变化(具体参见刘传合，董声焕等，两种肺表面活性剂药效的实验比较。中国新药杂志，1997年第6卷第2期)，以评价PS制剂的药效。试验结果表明本发明所制备的肺表面活性提取物，可在5-10分钟内迅速改善豚鼠的血氧饱和度，在30-60分钟内将豚鼠的肺顺应性恢复到正常水平的70-80％左右，改善迅速，疗效显著。

本发明方法与现有技术相比，处理量大，总磷脂收率高，生产周期缩短约40-50％，能耗下降60％左右，工业化程度大大提高。

具体实施方式

实施例1：

参照Donald L.Shapiro和Robert H.Notter等的文献(《SurfactantReplacement Therapy》，Alan R.Liss Inc.New York，1989年)中记载的方法，采用自制牛肺灌洗液1000L制备牛肺表面活性提取物，不同之处在于使用江苏久吾公司的微孔陶瓷滤管(孔径350nm)过滤步骤代替离心步骤。对牛肺灌洗液进行浓缩过滤后，得到截留液50L。截留液经提取纯化处理制得牛肺表面活性提取物185g。

总磷脂测定采用钼兰法，先将样品用硫酸或高氯酸消化，再用钼酸铵显色；卵磷脂测定采用HPLC法(蒸发光散射检测器)；蛋白测定使用BCA试剂盒(美国Sigma公司)，用前将试剂BCA试剂与Cu试剂按体积比50∶1混合，检测波长560nm左右。

截留液检测结果：肺灌洗液或全肺匀浆提取液经浓缩过滤后，总磷脂收率92％，卵磷脂收率95％，表面活性物质蛋白收率为90％。

牛肺表面活性提取物检测结果：总磷脂含量为93％，卵磷脂占总磷脂的比例为80％，表面活性物质蛋白含量为1.5％。

表面活性检测结果：牛肺表面活性提取物采用CB-1型可控闭泡式表面张力测定仪进行检测，样品在最低浓度(1mg/ml)条件下，表面张力可在30秒内降到0.8mN/m。

豚鼠试验结果显示，本法所制牛肺表面活性提取物可在30分钟内明显提高豚鼠的肺顺应性，根据剂量(40到70mg/kg体重)不同可使肺顺应性恢复到正常水平的75-85％。

最终产物的总磷脂收率为50％，全部生产周期为3工作日，总能耗约400千瓦时。

实施例2：

使用实施例1所述方法，采用自制猪全肺匀浆提取液1000L制备猪肺表面活性提取物，不同之处仅在于使用Pall公司微孔玻璃滤管(孔径10nm)代替微孔陶瓷滤管。猪全肺匀浆提取液进行浓缩过滤后，得到截留液40L。制得猪肺表面活性提取物184g。

使用实施例1所述方法进行检测，截留液总磷脂收率90％，卵磷脂收率92％，表面活性物质蛋白收率88％；猪肺表面活性提取物总磷脂含量90％，卵磷脂占总磷脂的比例为75％，表面活性物质蛋白含量1.2％。

表面活性检测结果：猪肺表面活性提取物采用CB-1型可控闭泡式表面张力测定仪进行检测，样品在1.5mg/ml浓度条件下，表面张力可在60秒内降到0.95mN/m；

豚鼠试验结果显示，本实施例方法所制猪肺表面活性提取物(70到100mg/kg体重)可在30分钟内将豚鼠的肺顺应性恢复到正常水平的70％-80％。

最终产物的总磷脂收率为46.2％，全部生产周期为2.7工作日，总能耗约370千瓦时。

实施例3：

自制牛肺灌洗液1000L，使用现有梯度离心方法(Donald L.Shapiro和Robert H.Notter等的《Surfactant Replacement Therapy》，Alan R.Liss Inc.New York，1989年)进行处理得到粗品，该粗品经提取纯化制得牛肺表面活性提取物130g，终产物总磷脂收率为35％，全部生产周期为8工作日，总能耗约1000千瓦时。

表面活性检测结果：牛肺表面活性提取物采用CB-1型可控闭泡式表面张力测定仪进行检测，样品在最低浓度条件(1mg/ml)下，表面张力可在30秒内降到1.0mN/m。

豚鼠试验结果显示，本法所制牛肺表面活性提取物(70到100mg/kg体重)可明显提高豚鼠的肺顺应性，在30分钟内肺顺应性恢复到正常水平的70-80％左右。

实施例4：

自制猪肺匀浆液1000L，使用实施例3的方法进行处理得到粗品，该粗品经提取纯化制得猪肺表面活性提取物107g，终产物总磷脂收率为27％，全部生产周期为7.2工作日，总能耗约925千瓦时。

表面活性检测结果：猪肺表面活性提取物采用CB-1型可控闭泡式表面张力测定仪进行检测，样品在最低浓度条件(1mg/ml)下，表面张力可在30秒内降到1.19mN/m。

豚鼠试验结果显示，本法所制猪肺表面活性提取物(70到100mg/kg体重)可明显提高豚鼠的肺顺应性，在30分钟内肺顺应性恢复到正常水平的65％-75％左右。

对比实施例1、2、3和4，可以发现，本发明实施例1和2的方法与现有技术实施例3和4的离心方法相比，最终总磷脂收率提高15-20％，生产周期缩短约40-60％，能耗下降60％左右，工业化程度大大提高。

Claims

1.选自陶土材料、陶瓷材料或玻璃材料的无机材料在制备牛、猪或其他哺乳动物肺表面活性提取物中的用途。

2.权利要求1的用途，其中所述无机材料孔径为10-1000nm。

3.权利要求1的用途，其中所述无机材料孔径为10-350nm。

4.权利要求1至3任一项的用途，其中所述无机材料是微孔陶瓷滤管或微孔玻璃滤管。