CN102552132B

CN102552132B - 叶酸修饰顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊及其制备方法

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Publication number: CN102552132B
Application number: CN201210025807.1A
Authority: CN
Inventors: 杨红; 黄娟; 邓安平; 吴秀凤; 万智慧; 胡琴; 吴爱冬
Original assignee: Suzhou University
Current assignee: Suzhou University
Priority date: 2012-02-07
Filing date: 2012-02-07
Publication date: 2014-05-07
Anticipated expiration: 2032-02-07
Also published as: CN102552132A

Abstract

本发明涉及叶酸修饰顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊给药系统，是由抗肿瘤药物顺铂与自制叶酸-聚合物修饰物、自制亲水性聚合物-胆固醇、胆固醇等通过自组装方式制备得到的注射液或冻干品。该给药系统的包封率为（61.24±1.28）%，可使体外释药t_1/2由原料药的0.40h增加至5.97h，具有明显的缓释作用。对癌细胞IC₅₀该给药系统为8.66μg/ml，显著低于各阳性对照组IC₅₀14.13~23.05μg/ml，更远低于阴性对照组（空白制剂IC₅₀135.55μg/ml）。充分说明该给药系统改善了药物的功效，同时具有缓释、表面亲水等长循环微粒特性，以及分子水平的高度癌细胞主动靶向性，大大增强了药物的抗癌活性，且有利于减少对叶酸受体低表达的正常细胞的毒性，从而发挥高效低毒治疗癌症的作用。

Description

叶酸修饰顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊及其制备方法

技术领域

本发明涉及叶酸修饰顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊及其制备，并作为注射液或注射用冻干品，利用肿瘤细胞表面过渡表达的叶酸受体介导，将叶酸修饰的顺铂隐形非离子表面活性剂泡囊给药系统特异性导向于肿瘤细胞发挥作用。

背景技术

目前抗癌药治疗普遍剂量大，代谢快，进入癌细胞的药量少，杀伤肿瘤细胞缺乏选择性，对正常细胞的损害导致严重毒副反应。靶向给药系统是指采用新技术、新工艺制备而成的、可使药物浓集于作用部位的给药系统。它能将药物最大限度地输送至靶器官或靶细胞，从而减小对非靶器官、非靶细胞的影响，改善药物功效，达到降低全身毒副作用，提高疗效的目的。可分为物理化学靶向制剂、被动靶向制剂、主动靶向制剂以及双重和多重靶向制剂。被动靶向给药系统是利用不同组织部位、器官自然生理特性的差异，拦截不同粒径范围的载药微粒。若微粒粒径小而表面被链状亲水性聚合物修饰可在血液环境中高度水合，形成表面水化层，既增加了稳定性，又有随时变化的空间构象，难以被血浆中的调理素识别、摄取，可规避机体肝脾组织中分布丰富的网状内皮系统（RES）的清除，而具有隐形作用，实现在血液中的长循环，从而有利于在血管渗漏性强的炎症区、实体瘤等实现更为有效的浓集，这种靶向给药为组织靶向给药。

抗癌药要实现更高一级的靶向作用，应该是细胞和分子水平的，即主动靶向给药，包括利用抗原-抗体间的特异性结合力将载药微粒导向于细胞的特异性受体发挥作用，以及利用细胞特异性配体将载药微粒导向于癌细胞表面的特异性受体而发挥作用。叶酸受体是一种糖蛋白膜受体，在子宫颈癌、卵巢癌、胃癌、乳腺癌、肺癌和鼻咽癌等各类肿瘤细胞过量表达的结合蛋白，但它在正常组织中表达较低。由于叶酸与叶酸受体特异结合的特点，叶酸受体可以介导含有叶酸及其偶联的载体进入肿瘤细胞内，实现分子水平的主动靶向给药。因此，结合隐形作用和主动靶向性的给药系统，是目前抗癌药研究的重要方向。

叶酸修饰的非离子表面活性剂泡囊，既具有叶酸修饰的主动靶向特点，也具备隐形作用，表面亲水的非离子表面活性剂泡囊的优势主要表现如下：非离子表面活性剂可单独或与其它脂质混合，在溶液中以自组装方式形成、结构类似于生物膜，体内外性质与脂质体相似，但因不含易氧化变质的磷脂，而更加稳定。并且它对亲水药物、疏水性药物、难溶性药物均可包载，可提高药物稳定性，调整药物的体内分布和释放特性，规避RES清除，浓集于实体瘤组织，大大增加药物的生物利用度，降低药物的毒性，提高疗效。

顺铂（CDDP）是一种重金属铂的络合物，为双官能团烷化剂，化学名为：顺式-二氯二氨铂(II)，为黄色粉末状结晶，在水中微溶（水中溶解度为0.253g/100g，25℃），不溶于乙醇等一般有机溶剂，溶于二甲基甲酰胺。其抗癌作用特点有：(1)为高效广谱的抗肿瘤药，可与作用靶点DNA形成CDDP-DNA复合物而发挥作用，属细胞周期非特异性药物。对各类肿瘤抑制率为61%~98%，尤其对实体瘤和对一般化疗药不甚敏感的肿瘤疗效较为显著；(2)不仅能杀伤肿瘤细胞，抑制细胞修复，还具有较强的放疗增敏作用；(3) 与多种抗肿瘤药物有协同作用，其毒性谱也与它们有不同，且无交叉耐药性，因此易与其它抗肿瘤药配伍，既有利于临床的联合用药，还可逆转联合化疗的毒性。因此，长期以来顺铂在抗癌药中地位显著。

但是，目前临床所用顺铂制剂，如中国药典2010版和欧洲药典2001收载的注射用顺铂，英国药典 2000版收载的注射用顺铂和顺铂注射剂，均为对癌组织、癌细胞没有选择性的普通注射剂，药物的生物利用度低，毒副作用大。其存在的问题主要表现为：(1)严重毒副作用：顺铂及其代谢产物主要从肾脏排泄，故肾毒性大。另有胃肠道毒性、耳毒性及神经毒性等也不可忽视；(2)对某些癌细胞活性较低，如乳腺癌、结肠癌等；(3)易产生耐药性；(4)仅微溶于水，性质不稳定，见光分解，其水溶液在室温中放置后会发生水解而失效，并转变为有毒却无抑瘤作用的反铂。

针对近年来癌症发病率仍在继续升高的问题亟待解决，叶酸修饰的非离子表面活性剂泡囊结合隐形作用与主动靶向新型给药系统优势显著，可极大改善药物功效，显著增强药物对癌细胞的选择性作用，增加生物利用度，减少全身不良反应，提高疗效。

发明内容

本发明针对现有顺铂制剂用于癌症治疗的不足，提供一种不同于普通制剂的叶酸修饰顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊给药系统及其制备方法，包括叶酸-聚合物修饰物的制备、亲水性聚合物-胆固醇的制备、自组装为表面有水化层的包载顺铂的叶酸修饰靶向非离子表面活性剂泡囊给药系统，并证实了叶酸修饰顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊的靶向性和抗肿瘤活性。其特点为：同时具有缓释、表面亲水等长循环微粒特性，以及分子水平的高度癌细胞主动靶向性，显著改善了药物的功效，大大增强了药物的抗癌活性，且有利于减少对叶酸受体低表达的正常细胞的毒性，从而发挥高效低毒治疗癌症的作用。

本发明的目的通过以下技术措施实现：

一种顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊，所述泡囊中顺铂是由叶酸及亲水性链状聚合物修饰表面的非离子表面活性剂泡囊给药系统包载。

其中，所述泡囊每毫升混悬液由以下物质组成：

顺铂0.5~10mg，

叶酸-聚合物修饰物0.2~4.0mg，

亲水性聚合物-胆固醇0.2~100mg，

胆固醇0.2~90mg，

表面活性剂0.5~60mg，

缓冲溶液适量。

其中，所述叶酸-聚合物是通过聚乙二醇二胺PEG(NH₂)₂分别与叶酸（FA）的羧基、胆固醇（chol）的羟基相连，即得到叶酸-聚合物修饰物（FA-PEG-chol）。

其中，所述亲水性聚合物-胆固醇是由末端含有羟基的亲水性大分子PluronicF68首先生成缩醛衍生物聚合物-醛，再与胆固醇反应，即得到亲水性聚合物-胆固醇(Plu-chol)。

其中，所述表面活性剂选自脂肪酸山梨坦（Span）、聚山梨酯（Tween）中一种或两种。

其中，所述缓冲溶液选自pH3.6~9.5硼酸盐、磷酸盐或碳酸盐中一种或多种。

其中，所述泡囊是注射剂或是以甘露醇为冻干剂所制得的注射用冻干品，保存于4℃备用。

一种顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊的制备方法，处方量的脂溶性膜材和叶酸-聚合物修饰物，用适量有机溶剂溶解完全后，与处方量顺铂混合超声，再采用注入法与缓冲溶液混合，在20-40^oC下混合搅拌并超声，脂溶性部分因疏水作用自动聚集，同时亲水性部分自动向外舒张而自组装成为包载顺铂的双分子层微粒，有机溶剂挥发后得到表面亲水的叶酸修饰顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊混悬液。

其中，所述泡囊注射剂或者加入冻干保护剂制成冻干品，临用前加注射用水分散后使用。

其中，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷中一种或多种。

本发明所采用自制叶酸-聚合物修饰物、自制亲水性聚合物-胆固醇及其它辅料，以自组装方式制备所得叶酸修饰顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊给药系统的混悬液，可直接静脉注射使用，也可制成冻干粉针使用。其平均粒径为501.9±22.88nm，Zeta电位为-61.83 mv，包封率为（61.24±1.28）%，药脂比为8.07%，释放规律符合Weibull distribution模型，拟合方程为：lnln100/(100-Q)=0.4638lnt-1.1952（R²=0.9877），t_1/2 = 5.97 h；游离药物的释放规律符合Weibull distribution模型，拟合方程为：lnln100/(100-Q)=0.5737lnt+0.1408（R²=0.9782），t_1/2 = 0.4 h，药物经该给药系统包载后t1/2较原药增加14.925倍，具有缓释性。由于癌细胞表面普遍过渡表达叶酸受体，采用无叶酸培养基进行的宫颈癌Hela细胞试验证实，该给药系统的细胞毒性与对照组相比显示，各组均呈现药物浓度依赖关系和时间依赖关系，其中该给药系统对叶酸受体过渡表达的Hela细胞的毒性作用最为显著，说明药物功效改善明显；一旦该给药系统中加入游离叶酸后毒性受到抑制，降低为与没有用叶酸修饰的隐形顺铂非离子表面活性剂泡囊相似，说明游离叶酸可以与该给药系统，竞争癌细胞表面过度表达的叶酸受体，该给药系统可通过受体-配体的主动靶向原理进入细胞，特异性地抑制肿瘤细胞生长，且仅需1/2~1/4药量即可达到各阳性对照组同样的癌细胞存活率，而空白制剂的毒性并不显著。对癌细胞IC₅₀该给药系统为8.66μg/ml，显著低于各阳性对照组的IC₅₀：顺铂隐形非离子表面活性剂泡囊14.13μg/ml，加入游离叶酸的叶酸修饰顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊16.01μg/ml，顺铂溶液23.05μg/ml。更远低于阴性对照组：叶酸修饰的空白非离子表面活性剂泡囊的IC₅₀（135.55μg/ml）。充分说明该给药系统具备肿瘤主动靶向的突出优势，大大增强了药物的抗癌活性，有效抑制肿瘤生长，从而降低对叶酸受体低表达的正常细胞的毒性，充分发挥高效低毒治疗癌症的作用。

附图说明

图1 叶酸修饰顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊的电镜图；

图2 体外累积释放曲线/%（n=3）；

图3 对Hela细胞的6h抑制率（n=3）；

图4 对Hela细胞的12h抑制率（n=3）；

图5 对Hela细胞的24h抑制率（n=3）；

图6 Hela细胞24h存活率（n=3）。

具体实施方式

本发明的制备过程，不仅可以将含有FA-PEG-chol与含处方量的顺铂和脂溶性膜材的有机相混合，通过自组装过程制得叶酸修饰顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊。还可通过处方调整，不加FA-PEG-chol，采用同样的工艺过程，制备得到顺铂隐形非离子表面活性剂泡囊。可将其保存于4℃，用于有关性质研究。

实施例：

1 ． FA-PEG-chol （ A ）的制备：

将33mg叶酸（FA）溶解于适量的0.66ml二甲亚砜（DMSO）中，加入17.25mg N-羟基琥珀酸亚胺( NHS)、15.6mg二环己基碳二亚胺（DCC）和16.5μl三乙胺, 避光搅拌过夜，取上清液，弃去容器底部的不溶性副产物，即得FA-NHS黄色溶液。将上述黄色溶液逐滴加入溶有等摩尔(300mg)聚乙二醇二胺（PEG(NH₂)₂）的2ml DMSO溶液中，搅拌过夜，即得FA-PEG溶液。将等摩尔(25mg)胆固醇（Chol）溶于250μl二氯甲烷中，在27.5mg 4－二甲氨吡啶（DMAP）的催化下，将其与3倍摩尔比的(36.5mg)N,N-羧基二咪唑（CDI）混合室温下搅拌过夜，直至液体由无色变为黄色，即得活化的胆固醇。将活化的胆固醇缓慢滴入FA-PEG溶液里，室温搅拌24h，纯水中透析48h（1000ml×2），冷冻干燥，得产物FA-PEG-Chol（A），避光放入冰箱-20℃里储存，备用。总收率为87.03%。

2 亲水性聚合物 - 胆固醇（ B ）的合成：

根据末端含有羟基的亲水性或两亲性大分子聚合物，如：聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)、PluronicF68（Plu）等亲水性或两亲性大分子物质，可采用合成路线：PEG-OH+(CH₃CO)₂O+CH₃SOCH₃®PEGOCH₂CHO 得到聚合物缩醛（称聚合物-醛）。即： Plu 3.72g，以15ml DMSO为溶剂，在室温下与乙酸酐0.4g反应30h，得到相应的白色疏松状聚合物-醛2.37g。再与胆固醇1g在无水乙醇0.5ml和浓盐酸0.1ml中回流反应2.5 h，冷却，抽滤，用水洗固体至洗出液近中性，再转至50ml 0.1mol/L氢氧化钠溶液中，浸泡2.5h后，抽滤，干燥，即得相应亲水性聚合物-Chol（B）。总收率为9.32%。

3. 叶酸修饰顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊给药系统的制备

将处方量的脂溶性膜材叶酸-聚合物修饰物(A)、亲水性聚合物-胆固醇(B)、胆固醇(C)、表面活性剂(D)用有机溶剂溶解完全后，与处方量顺铂混合超声，再采用注入法与缓冲溶液混合，在20-40^oC搅拌并超声，有机溶剂挥发后得到叶酸修饰顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊混悬液。其中，A和B为自制品，其余为市售产品。

4 、形态观察

扫描电镜下观察，见附图1，结果微粒均匀度好，基本为圆形。

5 、平均粒径及表面 Zeta 电位测定

鉴于微粒表面带有一定电荷，在溶液中因同性电荷相斥，微粒不易聚集而有利于维持稳定。癌细胞表面带负电性，为使叶酸修饰顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊的肿瘤靶向药效试验所检验的主动靶向作用更为可靠，将对非离子表面活性剂泡囊表面连接叶酸后，排除正电荷对癌细胞的趋向作用。本发明制备的非离子表面活性剂泡囊均带负电性，以便更好地考察配体-受体特异性结合的主动靶向作用。

测得平均粒径：叶酸修饰顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊（F-C-N）为501.9±22.88 nm、对照用顺铂隐形非离子表面活性剂泡囊（C-N）为597.7±9.48 nm；Zeta电位：F-C-N为-65.37±0.99mV、C-N为-61.73±1.35mV。即，当隐形非离子表面活性剂泡囊的表面连接叶酸时，其平均粒径略小于未连叶酸的隐形非离子表面活性剂泡囊，两者电位无显著差异。

6 、表面固有水化层厚度测定

根据古依-查普曼扩散双电层模型，带电粒子表面Zeta电位的对数值与粒子表面固有水化层厚度（L）呈线性关系，㏑(ζ)=㏑A-κL，其中A为常数，κ为Debye–Hückel参数，等于 / 0.3，C为电解质的摩尔浓度。分别将泡囊用不同浓度的NaCl溶液（0、5、10、20mmol/l）稀释分散后，分别测定其在不同浓度NaCl溶液的Zeta电位，带入上述方程得到表面水化层厚度（FALT）(n=3)，结果：F-C-N为0.985nm，C-N为1.003nm。

7 、包封率测定

将处方量非离子表面活性剂泡囊混悬液全部转入预先处理好的透析袋中，室温下悬于透析介质(pH6.4的0.9%NaCl溶液)中，120 rpm搅拌，每隔0.5 h更换透析液，1.5 h后停止（此时空白非离子表面活性剂泡囊加处方比例顺铂的透析率为93%以上），测定透析液中顺铂量之和，即为游离药物的量；将透析袋内非离子表面活性剂泡囊全部转入容量瓶中，用0.1 mol·L^-1盐酸-异丙醇破坏泡囊，测定袋内药物量。计算，得到F-C-N包封率(61.24±1.28)%，回收率(101.44± 1.63) %（n=3）；C-N包封率(73.86±1.28) %，回收率(101.98±2.05 )%（n=3）。

8 、体外试验研究

1）体外释放规律考察

在预试的基础上，以0.9%氯化钠溶液作透析介质，以等量游离药物溶液（CDDP）和C-N作对照，考察F-C-N的释放特性。于37℃100ml氯化钠溶液中透析F-C-N、C-N和CDDP，搅拌速度为100rpm，于0.5，1.0，2.5， 4.5 ，8.5， 14.5， 22.5， 32.5， 44.5 ，80.5 h各时间点取透析外液1ml，同时补加1ml透析介质，维持漏槽条件继续透析至终点。样品经测定计算药物累积释放百分率（Q%)，并以药物累积释放百分率对取样时间百分率做（Q%-t)图，得到累计释放曲线，结果见附图2。

由图2可知，CDDP释放较快，而C-N及F-C-N释放明显缓慢。将F-C-N、C-N、CDDP的释放曲线分别按照零级、一级、Higuchi、Weibull distribution药物动力模型进行拟合，发现3条曲线均对Weibull distribution拟合度较高。拟合方程如表1所示。

表1 体外释放曲线拟合方程

样品	方程	R²	t_1/2（h）
				F-C-N	lnln100/(100-Q)=0.4638lnt-1.1952	0.9877	5.97
C-N	lnln100/(100-Q)=0.457lnt-1.1756	0.9903	5.87
				CDDP	lnln100/(100-Q)=0.5737lnt+0.1408	0.9782	0.40

说明药物制成泡囊后，体外释放t_1/2显著延长，具有明显的缓释作用，且F-C-N更好(P<0.01)。

2）对宫颈癌Hela细胞毒性试验

为考察叶酸修饰以后泡囊对细胞的作用，以及F-C-N是通过叶酸受体介导作用而进入肿瘤细胞的，需排除基质中叶酸的影响，故选用无叶酸的培养基进行试验。对照组采用：a.C-N, b.F-C-N加入0.5mM游离叶酸（F），c.CDDP等进行比较，考察F-C-N对癌细胞的作用特性。

将叶酸受体阳性的宫颈癌Hela细胞在37℃、5%CO2孵箱内培养。取对数生长期的细胞，用含10%胎牛血清无叶酸的1640培养液稀释成每孔5×10³个细胞加在96孔培养板各孔中，每孔100μL，培养24h后；分别加入10μL F-C-N及10μL以下同样顺铂浓度的阳性对照液：C-N、F-C-N+F、CDDP，以及10μL不含顺铂的阴性对照液：空白非离子表面活性剂泡囊（F-N），PBS为基准，每组设6个浓度，分别为1.25，2.5，5，10，20，40μg/ml，培养2h，换为1640培养基100μL，分别继续培养6、12、24h后，每孔加入MTT溶液（5mg/ml）10uL，孵箱内孵育4h，置酶标仪上检测，检测波长为492nm，根据“抑制率=（1-A药物/A对照）×100%”计算抑制率。分别在6h、12h、24h，以浓度为横坐标，抑制率为纵坐标，考察在不同时间、不同浓度的顺铂制剂对Hela细胞的细胞毒性，结果见图3、图4、图5，以及在24h不同浓度的顺铂制剂对Hela细胞存活率，结果见图6。通过计算得到在24h对Hela细胞的半数致死量（IC₅₀，μg/ml）为：F-C-N（8.66），C-N（14.13），F-C-N+F（16.01），CDDP（23.05），F-N（135.55）(P<0.01)。24h对Hela细胞生长抑制率：与原料药CDDP相比，F-C-N提高6.08倍，高于各阳性对照组的C-N（提高5.24倍）和F-C-N+F（提高5.66倍）(P<0.01)。

由细胞抑制率曲线图（图3、图4、图5）说明，药物浓度、作用时间均与癌细胞生长抑制率呈现显著的相关性。结合IC₅₀、存活率图（图6）来看，F-C-N对叶酸受体阳性的Hela细胞的抗癌作用显著增强，并具有经叶酸受体介导而发挥作用的主动靶向作用。这是因为：A. 叶酸-叶酸受体高度亲和性，因叶酸受体介导使细胞内药物浓度增加而效果显著，F-C-N显示出比C-N和CDDP更强的细胞毒性，所以抑制率更高。B. 当F-C-N与游离叶酸F同时存在时，Hela细胞膜表面有限的叶酸受体大量被F阻断，F-C-N经叶酸受体介导进入细胞的途径受到严重干扰，只能与C-N一样通过其他途径进入肿瘤细胞，故F-C-N+F的细胞毒性大大低于F-C-N，而与C-N结果比较相似，证明了F-C-N是通过受体-配体的主动靶向原理进入细胞。

并且，图6显示：药物在同浓度下，F-C-N组的细胞存活率明显低于其它各组，当药物浓度为10μg/ml时，Hela细胞对其敏感性最为显著，仅有40%左右的存活率。而其它各阳性对照组要达到同样的存活率，药物浓度至少需要20-40μg/ml(P<0.01)。因此说明F-C-N显著提高了药物作用效率。此外，由图6和IC₅₀可以看出，来自空白制剂的毒性并不显著。充分显示了顺铂经叶酸修饰靶向非离子表面活性剂泡囊包载后，改善了药物功效，在抑制叶酸受体阳性的Hela细胞生长方面显示出，具备肿瘤主动靶向的突出优势，大大增强了药物的抗癌活性，有利于减少对叶酸受体低表达的正常细胞的毒性，从而发挥高效低毒治疗癌症的作用。

Claims

1.一种顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊，其特征在于：所述泡囊中顺铂是由叶酸及亲水性链状聚合物修饰表面的非离子表面活性剂泡囊给药系统包载，所述泡囊每毫升混悬液由以下物质组成：

顺铂0.5～10mg，

叶酸-聚合物修饰物0.2～4.0mg，

亲水性聚合物-胆固醇0.2～100mg，

胆固醇0.2～90mg，

表面活性剂0.5～60mg，

缓冲溶液适量；

其中，所述叶酸-聚合物修饰物是通过PEG(NH₂)₂分别与叶酸的羧基、胆固醇的羟基相连，即得到叶酸-聚合物修饰物；

其中，所述亲水性聚合物-胆固醇是由末端含有羟基的亲水性大分子PluronicF68首先生成缩醛衍生物聚合物-醛，再与胆固醇反应，即得到亲水性聚合物-胆固醇。

2.根据权利要求1所述的顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊，其中，所述表面活性剂选自脂肪酸山梨坦、聚山梨酯中一种或两种。

3.根据权利要求1所述的顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊，其中，所述缓冲溶液选自pH3.6～9.5硼酸盐、磷酸盐或碳酸盐中一种或多种。

4.根据权利要求1、2或3中任一所述的顺铂靶向非离子表面活性剂泡囊，其中，所述泡囊是注射剂或是以甘露醇为冻干剂所制得的注射用冻干品。