CN102526739B - 治疗糖尿病的药物组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药领域，具体涉及一种治疗糖尿病的药物组合物及其应用，特别涉及该药物组合物治疗糖尿病肾病和糖尿病合并高血脂症的用途。为了更好地治疗糖尿病及其并发症，本发明提供了一种药物组合物，药物组合物中含有活性成分羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂、糖胺聚糖和胰岛素增敏剂，尤其含有低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀。

Description

治疗糖尿病的药物组合物及其应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种治疗糖尿病的药物组合物及其新应用，特别涉及该药物组合物治疗糖尿病肾病和糖尿病合并高血脂症的用途。

背景技术

糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一组由环境和遗传因素共同作用引起的综合征，其基本病理特点为胰岛素分泌绝对或相对不足，或外周组织对胰岛素不敏感，引起以糖代谢紊乱为主，包括脂肪、蛋白质代谢紊乱的一种全身性疾病。许多研究证实，肥胖病人早在糖代谢出现异常之前，就存在脂代谢紊乱，多伴有不同程度的高血脂。主要的脂代谢异常表现为血甘油三脂(TG)升高、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)水平降低和低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)的增多。糖尿病合并高脂血症具有以下危害：(1)高血糖合并高血脂可明显加速大、中动脉血管粥样硬化的进展。(2)在糖尿病微细血管病变的基础上再合并大、中动脉粥样硬化，更加重了相关器官的缺血，从而加速了器官功能减退和衰竭。因此，单纯控制血糖不能完全消除糖尿病患者冠心病等大血管并发症，控制血糖的同时，必须进行调脂治疗。

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)已经成为糖尿病最常见的并发症之一，也是导致糖尿病患者致死率及致残率升高的主要原因之一。糖尿病肾病临床发病率高，对患者健康危害严重，并且很快将进入依赖肾脏透析维持生存的痛苦状态，给患者家庭和社会造成极为巨大的经济负担。

瑞舒伐他汀是主要用于治疗高胆固醇和高脂血症的药物。美国FDA早在2003年8月根据临床试验结果，批准上市。临床试验结果显示，该药物可以降低总胆固醇、LDL-甘固醇以及甘油三酯水平，并可以升高HDL-甘固醇(有益甘固醇)水平。该药物最常见的副作用包括肌肉疼痛、胃痛、恶心、便秘以及虚弱等。此前有学者认为长期服用瑞舒伐他汀会造成肾脏损伤。但经过长期的临床试验表明，瑞舒伐他汀在造成肾脏损害方面，作用很小。Sorof J等人在《Long-term rosuvastatin treatment improves renal function in NationalCholesterol Education Program Adult Treatment Panel III high-risk patients》(参见JACC，2007，No.49，327A：1002-131)一文中公开了在糖尿病或高血压等极易引起肾脏损害的疾病中，长期服用瑞舒伐他汀能够轻微改善患者的肾脏功能。

肝素类药物属粘多糖类药物，由己糖醛酸、氨基己糖及它们的硫酸化、乙酰化等衍生物为结构单位构成的一类物质，包括肝素、低分子肝素和超低分子肝素。低分子肝素是体内外均能延长凝血时间的抗凝血药。其抗凝血作用极为复杂，对凝血过程的许多环节都有影响。低分子量肝素的活性/抗凝血活性的比值为1.5～4.0，而普通的低分子肝素为1，保持了低分子肝素的抗血栓作用而降低了出血的危险。具有半衰期长，生物利用度高等优点，正广泛应用于血栓栓塞性疾病的预防及治疗，其有效性和安全性均优于普通低分子肝素，量效关系明确。

他汀类药物联合低分子肝素治疗肾脏疾病已经有所报道，其中已经报道的他汀类药物主要包括阿托伐他汀、辛伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀等，低分子肝素都是采用注射给药的。胡庆等在《低分子肝素与洛伐他汀联合治疗糖尿病肾病的疗效分析》(华西医学，2005年20(4)：第733页)一文提到，低分子肝素联合洛伐他汀治疗糖尿病肾病取得了较好的疗效。然而，该治疗方案中低分子肝素是用来注射给药的，低分子肝素注射制剂在临床上应用最大的缺点是反复注射，皮下注射经常会造成皮下出血，需要长期用药的病人难以接受。

公开号为CN101417130A发明专利申请公开了一种治疗糖尿病及其并发症的口服药物组合物，该口服药物组合物包含活性组分低分子肝素和胰岛素增敏剂吡格列酮或罗格列酮。

发明内容

为了更好地治疗糖尿病及其并发症，包括改善糖尿病肾病的治疗，本发明提供了一种药物组合物，它的活性组分中含有如下成分：

(1)羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂；和

(2)糖胺聚糖；和

(3)胰岛素增敏剂

所述的羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂为洛伐他汀、氟伐他汀、匹伐他汀、瑞舒伐他汀或其可药用盐，所述的胰岛素增敏剂为吡格列酮、罗格列酮、曲格列酮或其可药用盐，所述的糖胺聚糖为肝素、硫酸乙酰低分子肝素、低分子肝素或其可药用盐。

糖尿病是一类全身性系统疾病，尤其是糖尿病并发症的治疗极其复杂。单一药物很难对于糖尿病及其并发症都具有很好的治疗效果。本发明通过筛选大量的候选药物，在常规普通降糖药物胰岛素增敏剂的基础上创造性地引入了糖胺聚糖和羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂，并通过大量的动物实验表明胰岛素增敏剂、糖胺聚糖和羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂三种药物联合使用不仅能够显著改善糖尿病患者的血糖，而且对糖尿病肾病具有很好的治疗效果，并且对糖尿病进展为糖尿病合并高血脂症也具有很好的治疗效果。

基于对药物疗效、副作用的统筹考虑，本发明对药物组合物中的活性组分进行了优选。优选地，上述的药物组合物中所述的羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂为瑞舒伐他汀或其可药用盐，胰岛素增敏剂为吡格列酮或其可药用盐，糖胺聚糖为低分子肝素或其可药用盐。即优选本发明药物组合物含有如下活性组分：

(1)有效量的低分子肝素或其可药用盐；和

(2)有效量的吡格列酮或其可药用盐；和

(3)有效量的瑞舒伐他汀或其可药用盐。

本发明有效量是指对治疗糖尿病及其并发症具有良好的治疗效果的剂量。所述的并发症尤其包括糖尿病肾病和糖尿病合并高血脂症。药物组合物中低分子肝素的有效剂量为5～1000mg/d，吡格列酮的有效剂量为3～120mg/d，瑞舒伐他汀的有效剂量为1～80mg/d。为了对糖尿病及其并发症产生更有效的治疗，本发明对上述有效量进行了优选。优选地，所述的药物组合物中含有25-250mg低分子肝素，1-40mg瑞舒伐他汀，5-40mg吡格列酮。

本发明还对上述药物组合物的重量比进行了优选。本发明药物组合物中低分子肝素、吡格列酮、瑞舒伐他汀之间的重量比优选为10∶(0.03～240)∶(0.01～160)，低分子肝素、吡格列酮、瑞舒伐他汀之间的重量比进一步优选为10∶(0.2～100)∶(0.2～160)。其中所述的低分子肝素的效价以100IU/mg计。

值得说明的是，如果低分子肝素以其它效价计，那么根据上述组合物中在低分子肝素原效价(100IU/mg)下，本发明药物组合物中低分子肝素、吡格列酮、瑞舒伐他汀之间的重量比例关系，可以换算成在低分子肝素的其它效价(比如低分子肝素的效价为90IU/mg)下的重量比例关系。这对于本领域的普通技术人员是很容易想到的。

通过实施例18的研究发现，本发明药物组合物在改善糖尿病大鼠血糖、尿糖水平方面具有意想不到的技术效果，并且相对于单独给药瑞舒伐他汀、低分子肝素和吡格列酮，取得了协同改善血糖、尿糖水平的作用。

值得说明的是，本发明设置了重量比为1∶0.1和1∶5的吡格列酮和低分子肝素复方药物作为本发明的阳性对照药物，试验结果表明重量比为1∶0.1和1∶5的吡格列酮和低分子肝素复方药物一旦与瑞舒伐他汀三方组合用于治疗糖尿病，其降糖效果分别优于相应的重量比为1∶0.1和重量比为1∶5的吡格列酮和低分子肝素的药物组合物，并具有显著性差异。

实验结果表明，低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物可以用于治疗糖尿病，并且效果显著。尤其是重量比为10∶(1～50)∶(0.2～160)的低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物在降低血糖、尿糖方面取得了意想不到的技术效果。

在改善糖尿病肾病方面，本发明药物组合物对于糖尿病大鼠尿微量白蛋白(MA)、尿β₂-微球蛋白(U-β₂MG)的降低有显著影响。这说明瑞舒伐他汀、低分子肝素与吡格列酮复方对预防和治疗糖尿病引起的肾脏损伤具有很好的作用，并且瑞舒伐他汀、低分子肝素和吡咯列酮对于影响糖尿病大鼠尿微量白蛋白和尿β₂微球蛋白方面具有协同作用。瑞舒伐他汀、低分子肝素和吡格列酮的药物组合物可以作为制备治疗糖尿病肾病的药物使用。据此，本发明还提供了一种治疗糖尿病肾病的方法，口服给予低分子肝素5～1000mg/d，吡格列酮3～120mg/d，瑞舒伐他汀1～80mg/d。为此，本发明提供了本发明的药物组合物在制备治疗糖尿病肾病的药物中的用途，即给予本发明的药物组合物治疗糖尿病肾病，优选本发明的药物组合物中，含有5-1000mg低分子肝素，1-80mg瑞舒伐他汀，3-120mg吡格列酮。进一步优选药物组合物中含有25-250mg低分子肝素，1-40mg瑞舒伐他汀，5-40mg吡格列酮。

在实施例18的基础上，本发明还考察了重量比为10∶(0.03～240)∶(0.01～160)的低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物在治疗糖尿病大鼠及其并发症的药物疗效。结果发现，重量比为10∶(0.03～240)∶(0.01～160)的低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物在降低血糖、尿糖、尿微量白蛋白、尿β₂-微球蛋白水平方面取得了预料不到的治疗效果，并具有协同改善血糖、尿糖、尿微量白蛋白、尿β₂-微球蛋白水平的作用，尤其是重量比为10∶(0.2～100)∶(0.2～160)低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物治疗糖尿病及糖尿病肾病的效果更优、有效率更高。

通过实施例19的研究发现，无论与单独给药低分子肝素组、吡格列酮组、瑞舒伐他汀组相比，还是与含有两个活性组分组如肝吡组、瑞吡组和肝瑞组相比，本发明药物组合物在降低总胆固醇、血清甘油三酯、低密度胆固醇脂蛋白方面以及升高高密度胆固醇脂蛋白方面具有显著性差异，并且具有协同作用。这进一步表明，本发明的药物组合物对于糖尿病合并高血脂大鼠的血脂水平的改善具有显著的治疗效果。据此，本发明还提供了一种治疗糖尿病合并高血脂症的方法，低分子肝素的口服剂量为5～1000mg/d，吡格列酮口服剂量为3～120mg/d，瑞舒伐他汀口服剂量为1～80mg/d。为此，本发明提供了本发明的药物组合物在制备治疗糖尿病合并高血脂症的药物中的用途，即给与本发明的药物组合物治疗糖尿病合并高血脂症。在本发明的药物组合物中，含有5-1000mg低分子肝素，1-80mg瑞舒伐他汀，3-120mg吡格列酮。进一步优选，药物组合物中含有25-250mg低分子肝素，1-40mg瑞舒伐他汀，5-40mg吡格列酮。

在实施例19的基础上，本发明还考察了重量比为10∶(0.03～240)∶(0.01～160)的低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物在治疗糖尿病合并高血脂大鼠的药物疗效。结果发现，重量比为10∶(0.03～240)∶(0.01～160)的低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物在降低总胆固醇、血清甘油三酯、低密度胆固醇脂蛋白方面以及升高高密度胆固醇脂蛋白方面取得了预料不到的治疗效果，并具有协同改善总胆固醇、血清甘油三酯、低密度胆固醇脂蛋白以及高密度胆固醇脂蛋白水平的作用，尤其是重量比为10∶(0.2～100)∶(0.2～160)的低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物治疗糖尿病合并高血脂症的效果更优、有效率更高。

总之，本发明与现有技术相比具有如下的显著进步：

(1)吡格列酮、瑞舒伐他汀联合低分子肝素口服给药摒弃传统的低分子肝素注射给药方式，极大地减轻患者痛苦，尤其对于需要长期给药的患者来说，适用于患者的长期治疗。

(2)在改善血糖、血脂水平和改善糖尿病肾病方面具有协同作用。与单独给药和复方给药相比，本发明的低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀三方药物组合物在改善血糖、尿糖、糖化血清蛋白、总胆固醇、甘油三酯、低密度胆固醇脂蛋白、高密度胆固醇脂蛋白水平、尿微量白蛋白(MA)、尿β₂-微球蛋白(U-β₂MG)方面具有显著差异，并产生了协同作用。

(3)尤其与低分子肝素和瑞舒伐他汀复方药物相比，本发明的药物组合物在改善血糖、尿糖、糖化血清蛋白、总胆固醇、甘油三酯、低密度胆固醇脂蛋白、高密度胆固醇脂蛋白水平、尿微量白蛋白(MA)、尿β₂-微球蛋白(U-β₂MG)方面具有显著差异。

具体实施方式

以下通过具体实施例进一步描述本发明，但本发明不仅仅限于以下实施例。

实施例1片剂

处方  瑞舒伐他汀钙      1g(以瑞舒伐他汀计，下同)

      低分子肝素钠      5g(以低分子肝素计，下同)

      盐酸吡格列酮      120g(以吡格列酮计，下同)

      微晶纤维素        1000g

2％羟丙基甲基纤维素溶液      适量

低取代羟丙基纤维素           80g

硬脂酸镁                     50g

制备工艺：瑞舒伐他汀钙、低分子肝素钠和盐酸吡格列酮过100目筛，微晶纤维素和低取代羟丙基纤维素过80目筛，称取处方量的瑞舒伐他汀钙、低分子肝素钠和盐酸吡格列酮与低取代羟丙基纤维素、微晶纤维素混合均匀，加入2％羟丙基甲基纤维素溶液适量制粒，40℃干燥，16目筛整粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁混匀，压片即得。

实施例2片剂

处方  瑞舒伐他汀钙            1g

      低分子肝素钠            1000g

      盐酸吡格列酮            3g

      微晶纤维素              2000g

      2％羟丙基甲基纤维素溶液 适量

      低取代羟丙基纤维素      700g

      硬脂酸镁                60g

制备工艺同实施例1。

实施例3片剂

处方  瑞舒伐他汀钙            1g

      低分子肝素钠            1000g

      盐酸吡格列酮            120g

      微晶纤维素              2000g

      2％羟丙基甲基纤维素溶液 适量

      低取代羟丙基纤维素      900g

      硬脂酸镁                80g

制备工艺同实施例1。

实施例4片剂

处方  瑞舒伐他汀钙            80g

低分子肝素钠                    5g

盐酸吡格列酮                    3g

微晶纤维素                      100g

2％羟丙基甲基纤维素溶液         适量

低取代羟丙基纤维素              90g

硬脂酸镁                        5g

制备工艺同实施例1。

实施例5片剂

处方  瑞舒伐他汀钙             80g

      低分子肝素钠             1000g

      盐酸吡格列酮             3g

      微晶纤维素               2500g

      2％羟丙基甲基纤维素溶液  适量

      低取代羟丙基纤维素       190g

      硬脂酸镁                 50g

制备工艺同实施例1。

实施例6片剂

处方  瑞舒伐他汀钙            80g

      低分子肝素钠            5g

      盐酸吡格列酮            120g

      微晶纤维素              250g

      2％羟丙基甲基纤维素溶液 适量

      低取代羟丙基纤维素      120g

      硬脂酸镁                20g

制备工艺同实施例1。

实施例7片剂

处方  瑞舒伐他汀钙            8g

低分子肝素钠                 100g

盐酸吡格列酮                 12g

微晶纤维素                   350g

2％羟丙基甲基纤维素溶液      适量

低取代羟丙基纤维素           140g

硬脂酸镁                     25g

制备工艺同实施例1。

实施例8片剂

处方  瑞舒伐他汀钙            10g

      低分子肝素钠            50g

      盐酸吡格列酮            30g

      微晶纤维素              350g

      2％羟丙基甲基纤维素溶液 适量

      低取代羟丙基纤维素      140g

      硬脂酸镁                15g

制备工艺同实施例1。

实施例9片剂

处方  瑞舒伐他汀钙            0.2g

      低分子肝素钠            50g

      盐酸吡格列酮            10g

      微晶纤维素              350g

      2％羟丙基甲基纤维素溶液 适量

      低取代羟丙基纤维素      140g

      硬脂酸镁                10g

制备工艺同实施例1。

实施例10片剂

处方  瑞舒伐他汀钙            16g

低分子肝素钠                 50g

盐酸吡格列酮                 10g

微晶纤维素                   350g

2％羟丙基甲基纤维素溶液      适量

低取代羟丙基纤维素           140g

硬脂酸镁                     5g

制备工艺同实施例1。

实施例11片剂

处方  瑞舒伐他汀钙              40g

      低分子肝素钠              10g

      盐酸吡格列酮              100g

      微晶纤维素                350g

      2％羟丙基甲基纤维素溶液   适量

      低取代羟丙基纤维素        140g

      硬脂酸镁                  10g

制备工艺同实施例1。

实施例12双层片

A、盐酸吡格列酮              30g

   羧甲基纤维素钠            15g

   处理琼脂                  10g

   微晶纤维素                65g

   6％PVP的无水乙醇溶液      适量

   硬脂酸镁                  1g

制备工艺：盐酸吡格列酮过100目筛，羧甲基纤维素钠、微晶纤维素、处理琼脂过80目筛，称取处方量的吡格列酮和羧甲基纤维素钠、微晶纤维素、处理琼脂混合均匀，加入6％PVP无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。

B、瑞舒伐他汀钙            20g

低分子肝素钠             100g

微晶纤维素               350g

2％羟丙基甲基纤维素溶液  适量

山榆酸甘油脂             140g

制备工艺：瑞舒伐他汀钙和低分子肝素钠过100目筛，微晶纤维素过80目筛，称取处方量的瑞舒伐他汀钙、低分子肝素钠、微晶纤维素混合均匀，加入2％羟丙基甲基纤维素溶液适量制粒，40℃干燥，16目筛整粒，干颗粒中加入处方量的山榆酸甘油脂。

C、将上述两种组分采用双层压片机冲压片即得双层片。

实施例13分散片

处方  瑞舒伐他汀钙            20g

      低分子肝素钠            50g

      盐酸吡格列酮            15g

      交联聚乙烯吡咯烷酮      7g

      5％PVP _K30无水乙醇溶液  适量

      微晶纤维素              110g

      硬脂酸镁                2g

制备工艺：瑞舒伐他汀钙、低分子肝素钠和盐酸吡格列酮过100目筛，交联聚乙烯吡咯烷酮过80目筛，称取处方量的瑞舒伐他汀钙、低分子肝素钠、盐酸吡格列酮和交联聚乙烯吡咯烷酮混合均匀，加入5％PVP _K30无水乙醇溶液适量制粒，干燥后加入处方量微晶纤维素、硬脂酸镁混匀，压片即得。

实施例14胶囊

处方  瑞舒伐他汀钙            4g

      低分子肝素钠            20g

      盐酸吡格列酮            4g

      预胶化淀粉              60g

      微晶纤维素              100g

      6％PVP的95％乙醇溶液    适量

      硬脂酸镁                3g

制备工艺：将处方中的瑞舒伐他汀钙、低分子肝素钠、盐酸吡格列酮、预胶化淀粉、微晶纤维素和硬脂酸镁分别过100目筛，混匀，加6％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，40℃烘干，18目筛整粒，胶囊充填即可。

实施例15胶囊

处方  瑞舒伐他汀钙          1600g

      低分子肝素钠          100g

      盐酸吡格列酮          0.3g

      预胶化淀粉            6000g

      微晶纤维素            1000g

      6％PVP的95％乙醇溶液  适量

      硬脂酸镁              50g

制备工艺：将处方中的瑞舒伐他汀钙、低分子肝素钠、盐酸吡格列酮、预胶化淀粉、微晶纤维素和硬脂酸镁分别过100目筛，混匀，加6％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，40℃烘干，18目筛整粒，胶囊充填即可。

实施例16胶囊

处方  瑞舒伐他汀钙          0.01g

      低分子肝素钠          10g

      盐酸吡格列酮          240g

      预胶化淀粉            6000g

      微晶纤维素            1000g

      6％PVP的95％乙醇溶液  适量

      硬脂酸镁              50g

制备工艺：将处方中的瑞舒伐他汀钙、低分子肝素钠、盐酸吡格列酮、预胶化淀粉、微晶纤维素和硬脂酸镁分别过100目筛，混匀，加6％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，40℃烘干，18目筛整粒，胶囊充填即可。

实施例17缓释片

处方  瑞舒伐他汀钙          10g

低分子肝素钠          100g

盐酸吡格列酮          10

羟丙基甲基纤维素钠    40g

微晶纤维素            100g

硬脂酸镁              2g

制备工艺：将处方量的瑞舒伐他汀钙、低分子肝素钠、盐酸吡格列酮、羟丙基甲基纤维素钠、微晶纤维素混匀，按照常规工艺制粒，干燥，整粒，加硬脂酸镁混匀，压片即得。

实施例18本发明药物组合物对糖尿病大鼠的影响

1.实验材料

1.1实验动物

体重180-200g的Wistar雄性大鼠，北京维通利华实验动物技术有限公司提供。

1.2试剂

血糖测定试剂盒、尿糖测定试纸；链脲佐菌素(STZ)，胰岛素放免试剂盒(北京华英生物技术研究所)。

2.实验方法

2.1糖尿病大鼠模型的建立：

选择Wistar雄性大鼠300只，体重180-200g，正常喂养一周后，按照体重随机区组法分为正常对照组和模型组，其中正常对照组10只，模型组290只。建立模型前，正常对照组和模型组均禁食(不禁水)24h，模型组以60mg/kg剂量一次性腹腔注射2％链脲佐菌素溶液(临用前用PH4.2的0.1M柠檬酸缓冲液配制成2％溶液)，正常对照组腹腔注射同剂量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，72h后于眼眶取血，静置后离心，分离血清，按照葡萄糖测定试剂盒说明书操作，在半自动生化仪上测定检测FBG，剔除血糖过高或过低者，选取空腹血糖＞11mmol/l的大鼠作为实验模型。

2.2分组与给药

2.2.1正常对照组：灌胃同体积生理盐水；

2.2.2模型对照组：灌胃同体积生理盐水；

2.2.3瑞舒伐一组：灌胃给药瑞舒伐他汀0.2mg/kg；

2.2.4肝吡一组：灌胃给药制备工艺同CN1596896A实施例1的复方片剂(低分子肝素50mg/kg+吡格列酮10mg/kg)；

2.2.5肝吡瑞一组：灌胃给药如本发明实施例9制备的片剂(低分子肝素50mg/kg+吡格列酮10mg/kg+瑞舒伐他汀0.2mg/kg)；

2.2.6瑞舒伐二组：灌胃给药瑞舒伐他汀1.6mg/kg；

2.2.7肝吡二组：灌胃给药制备工艺同CN1596896A实施例1制备工艺制备的复方片剂(低分子肝素5mg/kg+吡格列酮1mg/kg)；

2.2.8肝吡瑞二组：灌胃给药本发明实施例10制备的片剂(低分子肝素5mg/kg+吡格列酮1mg/kg+瑞舒伐他汀1.6mg/kg)；

2.2.9瑞舒伐三组：灌胃给药瑞舒伐他汀4mg/kg；

2.2.10肝吡三组：灌胃给药制备工艺同CN1596896A实施例1制备工艺制备的复方片剂(低分子肝素1mg/kg+吡格列酮10mg/kg)；

2.2.11肝组：灌胃给药低分子肝素1mg/kg；

2.2.12吡瑞三组：灌胃给药吡格列酮10mg/kg+瑞舒伐他汀4mg/kg；

2.2.13肝吡瑞三组：灌胃给药本发明实施例11制备的片剂(低分子肝素1mg/kg+吡格列酮10mg/kg+瑞舒伐他汀4mg/kg)。

2.2.14瑞舒伐四组：灌胃给药瑞舒伐他汀0.1mg/kg；

2.2.15肝吡四组：灌胃给药制备工艺同CN1596896A实施例1的复方片剂(低分子肝素100mg/kg+吡格列酮0.3mg/kg)；

2.2.16肝吡瑞四组：灌胃给药如本发明实施例2制备的片剂(低分子肝素100mg/kg+吡格列酮0.3mg/kg+瑞舒伐他汀0.1mg/kg)；

2.2.17瑞舒伐五组：灌胃给药瑞舒伐他汀16mg/kg；

2.2.18肝吡五组：灌胃给药制备工艺同CN1596896A实施例1的复方片剂(低分子肝素1mg/kg+吡格列酮24mg/kg)；

2.2.19肝吡瑞五组：灌胃给药如本发明实施例6制备的片剂(低分子肝素1mg/kg+吡格列酮24mg/kg+瑞舒伐他汀16mg/kg)；

2.2.20瑞舒伐六组：灌胃给药瑞舒伐他汀0.1mg/kg；

2.2.21肝吡六组：灌胃给药制备工艺同CN1596896A实施例1的复方片剂(低分子肝素1mg/kg+吡格列酮24mg/kg)；

2.2.22肝吡瑞六组：灌胃给药如本发明实施例16制备的片剂(低分子肝素1mg/kg+吡格列酮24mg/kg+瑞舒伐他汀0.1mg/kg)；

2.2.23瑞舒伐七组：灌胃给药瑞舒伐他汀16mg/kg；

2.2.24肝吡七组：灌胃给药制备工艺同CN1596896A实施例1的复方片剂(低分子肝素1mg/kg+吡格列酮0.3mg/kg)；

2.2.25肝吡瑞七组：灌胃给药如本发明实施例16制备的片剂(低分子肝素1mg/kg+吡格列酮0.3mg/kg+瑞舒伐他汀16mg/kg)。

其中，正常对照组大鼠10只，其它各组实验大鼠均为10只。

2.3样本的制备及检测

于用药治疗期间，每周一次眼眶静脉采血，监测空腹血糖值变化。用药治疗第28天，禁食12h，末次给药1h后，腹主动脉取血，注入一洁净试管中静置，分离血清，立即检测FBG，其余血清样品分装于1.5ml冻存管中，-20℃冰箱保存等待相关生化、放免指标测定。

动物治疗4周后，收集大鼠24h尿液，取5ml尿液采用美国核电ACE全自动生化分析仪检测尿微量白蛋白(MA)和尿β₂-微球蛋白(U-β₂MG)，方法为颗粒增强透析免疫比浊分析法。尿β₂-微球蛋白试剂盒购自美国COX公司，尿微量白蛋白试剂盒购自英国Randox公司。

空腹血糖(FBG)的测定采用葡萄糖氧化酶法，糖化血清蛋白(GSP)含量测定采用果糖胺法，尿糖的测定采用尿糖试纸。

2.4数据统计处理

将以上所得实验数据按照以下方法进行统计学处理：

采用SPSS10.0统计软件，计算数据以均数±标准差表示，多组资料比较采用方差分析，组内比较采用t检验。以p＜0.05为有统计学意义。

3.实验结果

3.1本发明药物组合物对糖尿病大鼠的血糖、尿糖的影响

由表1可知：

(1)本发明药物组合物对糖尿病大鼠血糖、尿糖的影响与模型组相比，都具有显著或极显著性差异。这表明本发明药物组合物在改善糖尿病血糖、尿糖水平方面具有很好的作用。

(2)与瑞舒伐三组、肝吡三组、肝三组、吡瑞三组相比，肝吡瑞三组在改善糖尿病血糖、尿糖水平方面取得了很好的协同作用，这表明本发明药物组合物分别与单独给药瑞舒伐他汀、单独给药低分子肝素、给药低分子肝素和吡格列酮复方、给药吡格列酮和瑞舒伐他汀复方相比，在治疗糖尿病方面具有显著降低血糖和尿糖的突出优势。

(3)由瑞舒伐一～七组、肝吡一～七组、肝吡瑞一～七组的试验结果可知，本发明含有低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物，相对于单独给药瑞舒伐他汀、给药低分子肝素和吡格列酮的复方，本发明药物组合物具有显著改善糖尿病大鼠血糖和尿糖水平的优势。

由此可见，本发明含有低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物在改善糖尿病大鼠血糖、尿糖水平方面具有意想不到的技术效果，并且相对于单独给药瑞舒伐他汀、给药低分子肝素和吡格列酮，取得了协同改善血糖、尿糖水平的作用。

值得说明的是，本发明设置了重量比为1∶0.1和1∶5的吡格列酮和低分子肝素复方药物作为本发明的阳性对照药物，试验结果表明重量比为1∶0.1和1∶5的吡格列酮和低分子肝素复方药物中一旦与瑞舒伐他汀组合用于治疗糖尿病，其降糖效果分别优于相应的重量比为1∶0.1和重量比为1∶5的吡格列酮和低分子肝素复方药物，并具有显著性差异。

实验结果表明，低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物可以用于治疗糖尿病，并且效果显著。尤其是重量比为10∶(1～50)∶(0.2～160)的低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物在降低血糖、尿糖方面取得了意想不到的技术效果。该优选的重量比是基于低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀药物疗效的实验证实。

表1本发明药物组合物对糖尿病大鼠血糖、尿糖的影响

注：^▲与模型组比较，P＜0.05；^▲▲与模型组比较，P＜0.01；

^△与瑞舒伐一组比较，P＜0.05；^△△与瑞舒伐一组比较，P＜0.01；

^#与肝吡一组比较，P＜0.05；^★★与瑞舒伐二组比较，P＜0.01；

^☆与肝吡二组比较，P＜0.05；^&&与瑞舒伐三组比较，P＜0.01；

与肝吡三组比较，P＜0.05；^◇◇与瑞舒伐四组比较，P＜0.01；

^◆与肝吡四组比较，P＜0.05；^■■与瑞舒伐五组比较，P＜0.01；

^□与肝吡五组比较，P＜0.05；^⊙⊙与瑞舒伐六组比较，P＜0.01；

^◎与肝吡七组比较，P＜0.05；^※与瑞舒伐七组比较，P＜0.05。

3.2本发明药物组合物对糖尿病大鼠糖化血清蛋白(GSP)的影响

糖化血清蛋白(GSP)是血浆中的蛋白质与葡萄糖非酶糖化过程中形成的一种高分子酮胺结构类似果糖胺的物质，它的浓度与血糖水平成正相关，并相对保持稳定，日间变异小。它的测定不受进食、运动、机体状况、即时血糖的影响。由于血浆蛋白的半衰期为17～20天，故GSP可以反映糖尿病患者检测前1～3周内的平均血糖水平。糖化血清蛋白水平的高低直接影响糖尿病病人将来各种慢性并发症的发生和发展。糖化血清蛋白处于较高水平时，说明患者存在着持续性高血糖，可能出现糖尿病肾病、动脉硬化、急性心肌梗死、脑血管意外、白内障等并发症。因此，临床常通过糖化血清蛋白指标来了解患者近阶段的血糖情况，评估糖尿病慢性并发症的发生与发展情况。

由表2可知：

(1)本发明药物组合物对糖尿病降低糖化血清蛋白方面与模型组相比，都具有显著或极显著性差异。

(2)与瑞舒伐一组、肝吡一组相比，肝吡瑞一组在降低糖化血清蛋白方面具有显著性差异，并取得了协同的治疗效果。肝吡瑞二组、肝吡瑞三组也取得了相似的试验结果。

总之，与重量比为1∶0.1和1∶5的吡格列酮和低分子肝素复方阳性对照药物相比，低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物在降低糖化血清蛋白水平方面具有显著性差异，并取得了协同的治疗效果。这表明本发明的药物组合物在延缓糖尿病并发症方面也取得了显著的进步。

表2本发明药物组合物对糖尿病大鼠糖化血清蛋白(GSP)的影响

注：^▲与模型组比较，P＜0.05；^▲▲与模型组比较，P＜0.01；

^△与瑞舒伐一组比较，P＜0.05；^△△与瑞舒伐一组比较，P＜0.01；

^#与肝吡一组比较，P＜0.05；^★★与瑞舒伐二组比较，P＜0.01；

^☆与肝吡二组比较，P＜0.05；^&&与瑞舒伐三组比较，P＜0.01；

与肝吡三组比较，P＜0.05。

3.3本发明药物组合物对糖尿病大鼠尿微量白蛋白(MA)和尿β₂微球蛋白(U-β₂MG)的影响

(1)与模型组比较，本发明药物组合物对于糖尿病大鼠尿微量白蛋白(MA)、尿β₂-微球蛋白(U-β₂MG)的降低有显著性差异。这说明瑞舒伐他汀、低分子肝素与吡格列酮复方对预防和治疗糖尿病引起的肾脏损伤具有很好的作用，并且瑞舒伐他汀、低分子肝素和吡咯列酮对于影响糖尿病大鼠尿微量白蛋白和尿β₂微球蛋白方面具有协同作用。

(2)与重量比为1∶0.1和1∶5的吡格列酮和低分子肝素复方阳性对照药物相比，低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物在影响糖尿病大鼠尿微量白蛋白和尿β₂微球蛋白方面，具有显著性差异并取得了协同的治疗效果。

因此，瑞舒伐他汀、低分子肝素和吡格列酮的药物组合物可以作为制备治疗糖尿病肾病的药物使用。实验结果具体见表3。

表3本发明药物组合物对糖尿病大鼠尿微量白蛋白和尿β₂微球蛋白的影响

注：^▲与模型组比较，P＜0.05；^▲▲与模型组比较，P＜0.01；

^△与瑞舒伐一组比较，P＜0.05；^△△与瑞舒伐一组比较，P＜0.01；

^#与肝吡一组比较，P＜0.05；^★★与瑞舒伐二组比较，P＜0.01；

^☆与肝吡二组比较，P＜0.05；^&&与瑞舒伐三组比较，P＜0.01；

与肝吡三组比较，P＜0.05。

对于本领域的技术人员来说，根据实施例18的实验步骤，将其它重量比低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物替换上述实验用药的药物组合物进一步考察其它重量比低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物治疗糖尿病大鼠及其并发症的药物疗效是很容易想得到的，本发明还重点考察了重量比为10∶0.03∶0.01和10∶240∶160的低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物药物疗效，结果发现，重量比为10∶0.03∶0.01和10∶240∶160的低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物在降低血糖、尿糖、尿微量白蛋白、尿β₂-微球蛋白水平方面取得了预料不到的治疗效果。结合以上实验结果，低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物在降低血糖、尿糖、尿微量白蛋白、尿β₂-微球蛋白水平方面取得了预料不到的治疗效果，并具有协同改善血糖、尿糖、尿微量白蛋白、尿β₂-微球蛋白水平的作用，尤其是重量比为10∶(0.03～240)∶(0.01～160)的低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物在降低血糖、尿糖、尿微量白蛋白、尿β₂-微球蛋白水平方面取得了预料不到的治疗效果，并具有协同改善血糖、尿糖、尿微量白蛋白、尿β₂-微球蛋白水平的作用，更尤其是重量比为10∶(0.2～100)∶(0.2～160)低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物治疗糖尿病及其糖尿病肾病的效果更优、有效率更高。

实施例19本发明药物组合物对糖尿病合并高血脂大鼠的影响

1.实验材料

1.1实验动物

体重180-200g Wistar雄性大鼠120只，由山东新时代药业新药安全评价中心提供。

1.2试剂

血糖测定试剂盒、TG测定试剂盒、TC测定试剂盒、LDL-C测定试剂盒、HDL-C测定试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司)；链脲佐菌素(STZ)，胰岛素放免试剂盒(北京华英生物技术研究所)。

2.实验方法

2.1糖尿病合并高血脂症动物模型的建立：

选择Wistar雄性大鼠120只，体重300-350g，正常喂养一周后，按照体重随机区组法分为正常对照组和模型组，其中正常对照组10只，模型组110只。正常对照组喂饲普通饲料，模型组喂饲高糖高脂饲料，连续8周。8周后，禁食12小时，模型组以30mg/kg剂量一次性腹腔注射2％链脲佐菌素溶液(临用前用PH4.2的0.1M柠檬酸缓冲液配制成2％溶液)，正常对照组腹腔注射同剂量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，72h后于眼眶取血，静置后离心，分离血清，按照葡萄糖测定试剂盒说明书操作，在半自动生化仪上测定检测FBG，剔除血糖过高或过低者，选取空腹血糖＞11mmol/l为主，兼见胆固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)含量升高与正常对照组存在显著差异的大鼠为成功模型纳入试验。

2.2分组与给药

2.2.1正常对照组：灌胃同体积生理盐水；

2.2.2模型对照组：灌胃同体积生理盐水；

2.2.3瑞舒伐组：灌胃给药瑞舒伐他汀4mg/kg；

2.2.4低分子肝素组：灌胃给药低分子肝素20mg/kg；

2.2.5吡格列酮组：灌胃给药吡格列酮4mg/kg；

2.2.6肝吡组：灌胃给药低分子肝素20mg/kg+吡格列酮4mg/kg；

2.2.7瑞吡组：灌胃给药瑞舒伐他汀4mg/kg+吡格列酮4mg/kg；

2.2.8肝瑞组：灌胃给药低分子肝素20mg/kg+瑞舒伐他汀4mg/kg；

2.2.9肝吡瑞组：灌胃给药本发明实施例14制备的胶囊(低分子肝素20mg/kg+吡格列酮4mg/kg+瑞舒伐他汀4mg/kg)；

其中，正常对照组大鼠10只，其它各组实验大鼠均为10只。

2.3样本的制备及检测

于用药治疗期间，每周一次眼眶静脉采血，监测空腹血糖值变化。用药治疗第28天，禁食12h，末次给药1h后，腹主动脉取血，注入一洁净试管中静置，分离血清，立即检测FBG，其余血清样品分装于1.5ml冻存管中，-20℃冰箱保存等待相关生化、放免指标测定。试验结束，处死动物，同时称取肝脏，计算肝指数。肝指数＝肝重(g)/体重(g)×100。

空腹血糖(FBG)的测定采用葡萄糖氧化酶法，尿糖的测定采用尿糖试纸，总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量测定采用酶比色法，低密度胆固醇脂蛋白(LDL-C)含量测定采用聚乙烯硫酸沉淀法、高密度胆固醇脂蛋白(HDL-C)含量测定采用磷钨酸-镁沉淀法。

2.4数据的统计方法

将以上所得实验数据按照以下方法进行统计学处理：采用SPSS 10.0统计软件，计算数据以均数±标准差表示，多组资料比较采用方差分析，组内比较采用t检验。以p＜0.05为有统计学意义。

3.试验结果

3.1本发明药物组合物对糖尿病合并高血脂大鼠血糖和尿糖的影响

本发明在实验中不仅设立了单独给药组，而且相应地设立了两个活性组分药物组、三个活性组分药物组，通过实验结果(具体见表4)我们发现，无论与单独给药组低分子肝素组、吡格列酮组、瑞舒伐他汀组相比，还是与含有两个活性组分组如肝吡组、瑞吡组和肝瑞组相比，本发明药物组合物在降低血糖和尿糖方面取得了协同的作用，并且与各治疗组相比都具有显著或极显著性差异。

这进一步表明，本发明的药物组合物对于糖尿病合并高血脂大鼠的血糖水平的改善具有突出的治疗效果。

表4本发明药物组合物对糖尿病大鼠血糖、尿糖的影响

注：^▲与模型组比较，P＜0.05；^▲▲与模型组比较，P＜0.01；

^△与瑞舒伐组比较，P＜0.05；^△△与瑞舒伐组比较，P＜0.01；

^※与吡格列酮组比较，P＜0.05；^■与低分子肝素组比较，P＜0.05；

^#与肝吡组比较，P＜0.05；^★与瑞吡组比较，P＜0.01；

^&&与肝瑞组比较，P＜0.01。

3.2本发明药物组合物对糖尿病合并高血脂大鼠血脂的影响

通过实验结果(具体见表5)我们发现，无论与单独给药组低分子肝素组、吡格列酮组、瑞舒伐他汀组相比，还是与含有两个活性组分组如肝吡组、瑞吡组和肝瑞组相比，本发明药物组合物在降低总胆固醇、血清甘油三酯、低密度胆固醇脂蛋白方面以及升高高密度胆固醇脂蛋白方面具有显著性差异，并且具有协同作用。

这进一步表明，本发明的药物组合物对于糖尿病合并高血脂大鼠的血脂水平的改善具有显著的治疗效果。

表5本发明药物组合物对糖尿病合并高血脂大鼠血脂的影响

注：^▲与模型组比较，P＜0.05；^▲▲与模型组比较，P＜0.01；

^△与瑞舒伐组比较，P＜0.05；^△△与瑞舒伐组比较，P＜0.01；

^※与吡格列酮组比较，P＜0.05；^■与低分子肝素组比较，P＜0.05；

^#与肝吡组比较，P＜0.05；^★与瑞吡组比较，P＜0.01；

^&&与肝瑞组比较，P＜0.01。

对于本领域的技术人员来说，根据实施例19的实验步骤，将其它重量比的低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物替换上述实验用药的药物组合物进一步考察其它重量比的低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物治疗糖尿病合并高血脂大鼠是很容易想得到的，本发明还重点考察了重量比为10∶0.03∶0.01和10∶240∶160的低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物药物疗效，结果发现，重量比为10∶0.03∶0.01和10∶240∶160的低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物在降低总胆固醇、血清甘油三酯、低密度胆固醇脂蛋白方面以及升高高密度胆固醇脂蛋白方面取得了预料不到的治疗效果，并具有协同改善总胆固醇、血清甘油三酯、低密度胆固醇脂蛋白以及高密度胆固醇脂蛋白水平的作用。结合以上实验结果，重量比为10∶(0.03～240)∶(0.01～160)的低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物在降低总胆固醇、血清甘油三酯、低密度胆固醇脂蛋白方面以及升高高密度胆固醇脂蛋白方面取得了预料不到的治疗效果，并具有协同改善总胆固醇、血清甘油三酯、低密度胆固醇脂蛋白以及高密度胆固醇脂蛋白水平的作用，尤其是重量比为10∶(0.2～100)∶(0.2～160)低分子肝素、吡格列酮和瑞舒伐他汀的药物组合物治疗糖尿病合并高血脂症的效果更优、有效率更高。

Claims (1)

1.一种治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于它含有如下活性组分：

1)瑞舒伐他汀或其可药用盐；和

2) 低分子肝素或其可药用盐；和

3) 吡格列酮或其可药用盐；

其中低分子肝素、吡格列酮、瑞舒伐他汀之间的重量比为10 ∶ (0.03 ～ 240) ∶ (0.01 ～ 160)。

2. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述的低分子肝素、吡格列酮、瑞舒伐他汀之间的重量比为10 ∶ (0.2 ～ 100) ∶ (0.2 ～ 160)。

3. 如权利要求2 所述的药物组合物，其特征在于所述的低分子肝素、吡格列酮、瑞舒伐他汀之间的重量比为10 ∶ (1 ～ 50) ∶ (0.2 ～ 160)。

4. 如权利要求1 所述的药物组合物，其特征在于所述瑞舒伐他汀的可药用盐为钙盐或钠盐。

5. 如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述吡格列酮的可药用盐为盐酸盐或硫酸盐。

6. 如权利要求1 所述的药物组合物，其特征在于所述的药物组合物为片剂、胶囊或颗粒剂。

7. 如权利要求1 所述的药物组合物在制备治疗糖尿病肾病的药物中的用途。

8. 如权利要求1 所述的药物组合物在制备治疗糖尿病合并高血脂症的药物中的用途。

9. 如权利要求7或8 所述的用途，其特征在于所述的药物组合物中含有5-1000mg低分子肝素，1-80mg 瑞舒伐他汀，3-120mg 吡格列酮。

10. 如权利要求9 所述的用途，其特征在于所述的药物组合物中含有25-250mg 低分子肝素，1-40mg 瑞舒伐他汀，5-40mg 吡格列酮。