CN102511979A

CN102511979A - 间接包被法制备储存人体基因信息的纪念物品的制备方法

Info

Publication number: CN102511979A
Application number: CN2011104584450A
Authority: CN
Inventors: 肖义军; 张彦定
Original assignee: Fujian Normal University
Current assignee: Fujian Normal University
Priority date: 2011-12-31
Filing date: 2011-12-31
Publication date: 2012-06-27

Abstract

本发明涉及一种间接包被法制备储存人体基因信息的纪念物品的制备方法。其特征在于：其特征在于(1)将取自人体的组织细胞迅速置于固定剂中低温下充分固定;(2)固定后的组织细胞经脱水剂脱水、二甲苯透明、石蜡透蜡，最后全封闭状包埋于石蜡中，石蜡块可做成各种特定形状;(3)在预先制备的模具中采用无氧空腔隔层间接包被法方式将石蜡块全封闭于树脂中。本发明通过将包含有人全部基因组的组织细胞包埋于石蜡和树脂中，使得细胞中的DNA既得到了完整和长期的保存，又便于单独作为纪念物品，极大地增强了该纪念物件的情感载体意义，解决了人类长期以来渴望解决的长期保存自身生命信息的技术难题。

Description

间接包被法制备储存人体基因信息的纪念物品的制备方法

技术领域

本发明涉及一种储存人体基因信息的纪念物品及其制作方法，具体地说，涉及一种内含人体组织细胞的纪念物品，该物品中包含的人体组织细胞中储存了该个体的全部基因信息，该物品可以单独构成一件纪念物品，或以胚件的形式镶嵌、粘接在其他物品上共同组成一件纪念物品。

背景技术

纪念品是一类承载了人类特定情感的物品，其纪念价值大小与特定的人或特定的事件相关。例如现代人通常通过保留自己先人的骨灰、遗物、像片来寄托对先人的怀念，情侣、朋友之间往往通过互赠物品来表达彼此之间的情谊，Fans们也往往希望得到他们崇拜迷恋对象的某种物品来满足自己的心理需求。能够承载人类情感元素的产品往往能够获取高的附加值，各种奢侈品的高价格就是很好的例子。

纪念物品中来自个体身体的物质具有个体的唯一性，因而具备特定的情感意义，是极具情感价值的纪念物品。例如，在欧洲人们有保存爱人、先人或崇拜对象的头发来寄托情感的习惯，古代中国、印度等东方国家有保存供奉僧人舍利子的习惯，非洲人有保存供奉先人头骨的习惯，等等。但这些物品是一些“死”物质，其中并没有储存有代表个体生命特异性的基因信息。

世界上没有完全一样的人，这种唯一性是由其基因组决定的。含有人体基因组的物品具有个体的唯一性，其纪念意义是一般的纪念性物品所不能比拟的。特别是将来科学技术的发展，个体的基因组有可能在新的细胞中重新表达，这意会着该个体将来存在复活的可能性。将自己的生命信息永远地保存下来是人类梦寐以求的愿望，将自己的基因信息完整保存下来就有可能实现这个愿望。

基因信息储存于DNA中，人的DNA存在于细胞的细胞核和线粒体当中，每个正常的细胞中包含了该个体的全部基因组，从基因信息的角度说，来自个体身体中的正常细胞可以代表该个体。要保存个体的完整基因组，必须保存完整的细胞。但组织细胞脱离机体后或机体死亡后会细胞会很快发生自溶，使其中的DNA降解。

生物医学研究发现，如果将离体组织细胞迅速放入福尔马林等生物固定剂中，可使蛋白质发生变性而避免细胞的自溶，使细胞的结构、成分稳定地保存下来。但有的固定剂会与DNA发生反应而造成DNA的破坏，选择合适的固定剂可以使细胞中的DNA基本不受损伤（Sato Y，1990；Wu，1990），但溶液或空气中的氧在长期保存过程中会对DNA造成损伤，如果能选择合适的保存方法使得固定的细胞隔绝空气，就可以避免长期保存过程中氧对DNA结构的损伤，从而使细胞中的DNA完整保存下来。将固定后的组织细胞包埋在石蜡中可较好地解决这个问题。从石蜡包埋组织中提取DNA目前也不存在技术上的困难（Goelz SE,1985；Dubeau L,1986；刘水平，2009）。通过一定的方法将稳定保存了DNA的组织细胞材料与普通纪念物品组合在一起就可以制造一种含有特定个体基因组信息的纪念物品，具备特定的纪念价值。本发明的目的就是提供一种含有特定个体完整细胞的纪念物品，该纪念物品可以作为胚件通过镶嵌、粘接等方式与其他纪念物品组合在一起，也可以单独作为一件纪念物品，从而构成一件具有含有该个体全部基因信息的纪念物品。如何使完整细胞中的基因组长期稳定地保存在一种适合个人携带、家庭摆设中纪念物品中，并且在需要时还可以方便地将其中保存的细胞取出进行DNA的分析检测，是本发明要解决的技术问题。

包含人体材料的工艺纪念品已有几项公开专利。公开专利ZL 02120544.2公开了一种内含DNA的饰品，将提取于人体细胞的DNA装于某一囊泡中全封闭于饰品中，该方法得到的DNA只是细胞基因组中的部分DNA，并非完整的全部基因组，并且这种状态下的DNA常温下不能长期保存，难以达到作为纪念物长期保存的要求。公开专利CN 1817263A公开了一种内含DNA的饰品，同样得到的DNA只是细胞基因组中的部分DNA，并非完整的全部基因组，并且这种状态下的DNA常温下不能长期保存，难以达到作为纪念物长期保存的要求。公开专利CN 101711619 A公开了一种包含人体脱离物的体物亲情纪念坠，其中所说的人体脱离物未经固定剂处理，不能保存细胞中所含的DNA成分。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种含有特定个体完整细胞团的纪念物品。在纪念物品中的细胞团细胞中储存了该个体的全部基因信息。该纪念物可以作为胚件，通过镶嵌、粘接等方式与其他纪念物品组合在一起，或单独作为纪念物件，从而构成一件含有该个体全部基因信息的纪念物品。

本发明的目的之二是提供一种含有特定个体完整细胞团的纪念物品的制备方法。通过该方法将包含有人体全部基因组的组织细胞用固定剂固定、包埋于石蜡和树脂中，使得细胞中的DNA既得到了完整和长期的保存。

为实现本发明的目的采用的技术方案是：

1. 固定剂固定处理人体组织细胞

将取自人体的组织细胞迅速置于固定剂中低温下充分固定。

所述的的组织细胞是指从单一人体中获得的血液细胞、胎盘组织、脐带组织、脐带血、阑尾组织、毛囊细胞组织块。

所述的固定剂是指中性缓冲福尔马林溶液、乙醇溶液或丙酮。

所述的低温是指5～10℃之间的温度。

2. 石蜡包埋

固定后的组织细胞经脱水剂脱水、二甲苯透明、石蜡透蜡，最后全封闭状包埋于石蜡中，石蜡块可做成各种特定形状。

所述的脱水剂为浓度梯度酒精或丙酮。

所述的透蜡是指将石蜡预先反复煮沸或通过抽真空以去除其中的空气。

3.树脂包埋

在预先制备的模具中采用无氧空腔隔层间接包被法方式将石蜡块全封闭于树脂中。

所述的组织细胞是指从单一人体获得的血液细胞、胎盘组织、脐带组织、脐带血、阑尾组织或毛囊细胞。

所述的两层包被方式是指是在石蜡与树脂之间含有无氧空腔层；无氧空腔层中可同时或分别充有仅带有颜色的液体或带有荧光效果的荧光物质液体，以增加纪念物品的美感。

采用含有无氧空腔层包被时，树脂也可制成一内含空腔的杯状体结构，并预留一通向空腔的小杯口；包埋有组织细胞的石蜡块可制成小颗粒状，悬浮在溶解有染料的溶液中通过杯口注入空腔，然后封闭小杯口即可。

本发明所述的树脂是指本领域技术人员公知的用于制造工艺品的环氧树脂、聚甲基丙烯酸甲酯树脂或不饱和聚酯树脂。

本发明产生了以下有益效果：

1、本发明通过将包含有人全基因组的组织细胞选用合适的固定剂固定、包埋于石蜡和树脂中，使得细胞中的DNA既得到了完整和长期的保存，又便于单独作为纪念物品或以胚件的形式与其他物件通过镶嵌、粘接等方式组合在一起，使得该物件上保存了细胞提供者的完整细胞并因此而保存了细胞提供者的全部基因信息，极大地增强了该纪念物件的情感载体意义，因而大大增加了该纪念物件的纪念价值。长期永久保存自身生命是人类的根本愿望，本发明解决了将包含人全部基因信息的组织细胞长期稳定保存在一种合适物品中的技术问题，解决了人类长期以来渴望解决的长期保存自身生命信息的技术难题。

2、本发明对于人类遗传资源的保护也有重大价值。一般情况下，人们只是在医院进行病理检查中才对身体病变部位组织细胞进行取材检验，目的是检查该部位组织细胞是否出现某种病变，取下的组织细胞在检测后大都丢弃或短暂保存后丢弃。本发明将人的组织细胞经固定处理后保存于纪念物件中，使得人们可以乐意和方便地长期保存自身或他人的基因资源，这些保存下来的人类遗传资源可以为将来的科学研究提供材料。特别是在现代社会越来越多的人不愿生育的情况下，一些珍贵的人类遗传资源有可能通过这种方式得以保存下来。

附图说明

图1是组织细胞逐层包被于石蜡和树脂中的纪念物币状正面结构示意图。

图2是实施例5的组织细胞逐层包被于石蜡、树脂中的纪念物挂件状的结构示意图。结构示意图中，组织细胞包埋于石蜡中，含组织细胞的石蜡块切成小颗粒状，再包埋于树脂中，石蜡与树脂之间有带颜色的液体。

具体实施方式

以下结合附图以实施例方式对本发明作进一步阐述，但并不因此而限制本发明的范围。

图1中，1是树脂；2是组织细胞；3是石蜡；4是同时或分别充有带颜色的液体和有荧光效果的荧光物质液体。

图2中，1是树脂；2是组织细胞；3是石蜡；4是同时或分别充有带颜色的液体和有荧光效果的荧光物质液体。

实施例1

步骤1. 取材固定：抽取人静脉血1~10 mL于肝素处理过的离心管中，1000 rpm离心5min，去掉上层上清液，留下细胞沉淀，将5 mL预冷缓冲福尔马林固定液（4 ℃）加入到细胞沉淀中固定细胞10 min，期间轻轻振荡使沉淀分散；

步骤2. 脱水、透明和石蜡包埋：固定完成后加入梯度浓度酒精脱水，酒精浓度梯度为75%→85%→95%→100%→100%，每次脱水10 min，然后1000rpm离心5 min使细胞沉淀下来；然后使用二甲苯进行透明处理，程序为1/2纯酒精+1/2二甲苯→二甲苯→二甲苯，每次5 min，然后1000rpm离心5 min使细胞沉淀；透蜡的程序为：1/2二甲苯+石蜡→石蜡→石蜡，每次10 min，50~60 ℃下进行，每次用胶头吸管从离心管底部吸取细胞进入下一道程序；包埋：先将反复煮沸去除空气的石蜡置于60 ℃熔化，倒入模具中置于室温下，待石蜡呈半凝固状态时，吸取透蜡好的血细胞滴入，呈半凝固状态时再次加入60 ℃熔化的石蜡是充满整个模具，置于室温中下凝固后即完成石蜡包埋过程，石蜡块可雕刻成特定形状，也可事先制备特定形态的模具；

步骤3. 在预先制备的模具中，树脂先制成一内含空腔的杯状体结构，并预留一通向空腔的小杯口；包埋有组织细胞的石蜡块可制成小颗粒状，悬浮在溶解有染料的溶液中，通过杯口注入空腔，然后封闭小杯口即可。溶液可为液体石蜡、有荧光效果的荧光物质液体或水性储存液，依染料的极性来选择。

实施例2

将实施例1中步骤1的固定剂改为95%酒精，步骤2中梯度酒精脱水直接从100%开始。其它同实施例1。

实施例3

步骤1. 取材固定：抽取人静脉血1~10 mL于肝素处理过的离心管中，1000rpm离心5 min，去掉上层上清液，留下细胞沉淀，加入4℃丙酮固定10 min，离心，去上清液；

步骤2. 脱水、透明和石蜡包埋：将细胞沉淀用丙酮分别在4℃和室温脱水各15 min，再分别用苯甲酸甲酯和二甲苯透明，每次15min，透蜡、石蜡包埋程序同实施例1；

步骤3. 树脂包埋：同实施例1步骤3。

实施例4

步骤1. 取材固定：抽取人静脉血1~10 mL于肝素处理过的离心管中，1000rpm离心5min，去掉上层上清液，留下细胞沉淀，将5 mL预冷缓冲福尔马林固定液（4 ℃）加入到细胞沉淀中固定细胞10 min，期间轻轻振荡使沉淀分散，1000rpm离心5min，去掉上层上清液；5％质量浓度的琼脂加热溶解，冷却至50 ℃左右时滴加到固定后的细胞上，轻轻摇动离心管使细胞悬浮于琼脂中，琼脂块凝固后适当修剪，去除多余琼脂；

步骤2. 脱水、透明和石蜡包埋：固定完成后加入梯度浓度酒精脱水，酒精浓度梯度为75%→85%→95%→100%→100%，每次脱水15 min；然后使用二甲苯进行透明处理，程序为1/2纯酒精+1/2二甲苯→二甲苯→二甲苯，每次15 min；透蜡的程序为：1/2二甲苯+石蜡→石蜡→石蜡，每次10 min，50~60 ℃下进行，每次用镊子夹取琼脂块进入下一道程序；包埋：将通过反复煮沸去除空气的石蜡置于60 ℃熔化，倒入模具置于室温下，待石蜡呈半凝固状态时，将透蜡好的琼脂块放入，呈半凝固状态时再次加入60 ℃熔化的石蜡至充满整个模具，置于室温中下凝固后即完成石蜡包埋过程，石蜡块可雕刻成特定形状，也可事先制备特定形态的模具；

步骤3. 同实施例1步骤3。

实施例5

步骤1. 选用上述实施例1~4中任一方法制备的石蜡块，修切成小颗粒状；

步骤2. 在预先制备的模具中，树脂先制成一内含空腔的杯状体结构，并预留一通向空腔的小杯口；包埋有组织细胞的石蜡块可制成小颗粒状，悬浮在溶解有染料的溶液中，通过杯口注入空腔，然后封闭小杯口即可。溶液可为液体石蜡、有荧光效果的荧光物质液体或水性储存液，依染料的极性来选择。结构示意见图2。

实施例6

步骤2. 预先使用一特定的模具制备一个留有导入小孔的带空腔的树脂工艺品；将一定量的水溶性染料溶解于水溶液中，抽真空去除溶液中的空气，然后将溶液和包埋有细胞的石蜡颗粒经小孔注入到树脂工艺品的空腔中，封闭小孔即可。

实施例7

步骤1. 取材固定：取离体后的胎盘组织或脐带组织，切成1~3 mm³左右的小块，迅速投入预冷缓冲福尔马林固定液（4 ℃）中固定10 min；

步骤2. 脱水、透明和石蜡包埋：固定完成后加入梯度浓度酒精脱水，酒精浓度梯度为75%→85%→95%→100%→100%，每次脱水15 min；然后使用二甲苯进行透明处理，程序为1/2纯酒精+1/2二甲苯→二甲苯→二甲苯，每次15 min；透蜡的程序为：1/2二甲苯+石蜡→石蜡→石蜡，每次10 min，50~60 ℃下进行，每次用镊子夹取组织块进入下一道程序；包埋：将通过反复煮沸去除空气的石蜡置于60 ℃熔化，倒入模具置于室温下，待石蜡呈半凝固状态时，将透蜡好的组织块放入，呈半凝固状态时再次加入60 ℃熔化的石蜡是充满整个模具，置于室温中下凝固后即完成石蜡包埋过程，石蜡块可雕刻成特定形状，也可事先制备特定形态的模具；

步骤3. 同实施例1步骤3。

实施例8

将实施例7中步骤1的固定剂改为95%酒精，步骤2梯度酒精脱水直接从100%开始。其它同实施例7。

实施例9

步骤1. 取材固定：取离体后的胎盘组织或脐带组织，切成1~3 mm³左右的小块，迅速投入4℃丙酮固定10 min，离心，去上清液；

步骤2. 脱水、透明和石蜡包埋：将细胞沉淀用丙酮分别在4℃和室温脱水各15min，再分别用苯甲酸甲酯和二甲苯透明，每次15min。透蜡、石蜡包埋程序同实施例1；

步骤3. 树脂包埋：同实施例1步骤3。

Claims

1. 一种间接包被法制备储存人体基因信息的纪念物品的制备方法，其特征在于

(1) 固定剂固定处理人体组织细胞

将取自人体的组织细胞迅速置于固定剂中低温下充分固定;

(2) 石蜡包埋

固定后的组织细胞经脱水剂脱水、二甲苯透明、石蜡透蜡，最后全封闭状包埋于石蜡中，石蜡块可做成各种特定形状;

3.树脂包埋

2. 根据权利要求1所述的一种间接包被法制备储存人体基因信息的纪念物品的制备方法，其特征在于所述的组织细胞是指从单一人体中获得的血液细胞、胎盘组织、脐带组织、脐带血、阑尾组织、毛囊细胞组织块。

3. 根据权利要求1所述的一种间接包被法制备储存人体基因信息的纪念物品的制备方法，其特征在于所述的固定剂是指中性缓冲福尔马林溶液、乙醇溶液或丙酮。

4. 根据权利要求1所述的一种间接包被法制备储存人体基因信息的纪念物品的制备方法，其特征在于所述的低温是指5～10℃之间的温度。

5. 根据权利要求1所述的一种间接包被法制备储存人体基因信息的纪念物品的制备方法，其特征在于所述的脱水剂为浓度梯度酒精或丙酮。

6. 根据权利要求1所述的一种间接包被法制备储存人体基因信息的纪念物品的制备方法，其特征在于所述的透蜡是指将石蜡预先反复煮沸或通过抽真空以去除其中的空气。

7. 根据权利要求1所述的一种间接包被法制备储存人体基因信息的纪念物品的制备方法，其特征在于所述的无氧空腔隔层间接包被法是指是在石蜡与树脂之间含有无氧空腔层，无氧空腔层中可同时或分别充有仅带有颜色的液体或带有荧光效果的荧光物质液体。

8. 根据权利要求7所述的一种间接包被法制备储存人体基因信息的纪念物品的制备方法，其特征在于所述的无氧空腔层包被，树脂先制成一内含空腔的杯状体结构，并预留一通向空腔的小杯口；包埋有组织细胞的石蜡块可制成小颗粒状，悬浮在溶解有染料的溶液中通过杯口注入空腔，然后封闭小杯口即可。

9. 根据权利要求1所述的一种间接包被法制备储存人体基因信息的纪念物品的制备方法，其特征在于所述的树脂是指本领域技术人员公知的用于制造工艺品的环氧树脂、聚甲基丙烯酸甲酯树脂或不饱和聚酯树脂。