CN102448457B

CN102448457B - 治疗黄病毒科病毒感染的方法和组合物

Info

Publication number: CN102448457B
Application number: CN201080021850.XA
Authority: CN
Inventors: 英格里德·C·钟; 杰弗里·S·格伦; 文锦·杨
Original assignee: Leland Stanford Junior University; Eiger Biopharmaceuticals Inc
Current assignee: Leland Stanford Junior University; Eiger Biopharmaceuticals Inc
Priority date: 2009-03-18
Filing date: 2010-03-16
Publication date: 2015-09-02
Anticipated expiration: 2030-03-16
Also published as: EP2408448A4; WO2010107742A2; WO2010107742A3; EP2408448A2; CN102448457A; JP2012520885A

Abstract

简单地说，本公开内容的实施方案包括化合物、药物组合物、治疗受来自黄病毒科(Flaviviridae)的病毒感染的宿主的方法、抑制宿主中HCV复制的方法、抑制宿主中NS4B多肽与HCV负链RNA的3’UTR结合的方法、治疗宿主中肝纤维化的方法，以及类似实施方案。

Description

治疗黄病毒科病毒感染的方法和组合物

相关中请的交叉引用

本申请要求2010年1月29日提交的具有序列号61/299,886的名为“Methods and Compositions of Treating a Flaviviridae Family Viral Infection(治疗黄病毒科病毒感染的方法和组合物)”的美国临时专利申请的优先权，其通过引用全文并入本文。

此外，本申请要求2009年3月18日提交的具有序列号12/383,030的名为“Methods and Compositions of Treating a Flaviviridae Family ViralInfection(治疗黄病毒科病毒感染的方法和组合物)”的美国专利申请的优先权，其通过引用全文并入本文。

此外，本申请要求2009年3月18日提交的具有序列号12/383,071的名为“Methods and Compositions of Treating a Flaviviridae Family ViralInfection(治疗黄病毒科病毒感染的方法和组合物)”的美国专利申请的优先权，其通过引用全文并入本文。

关于联邦资助研究的声明

本发明根据国立卫生研究院授予的合约DK066793和1RO1HG002644-01A1由政府资助完成。美国政府对本发明具有某些权益。

背景

全世界超过1.5亿人受到丙型肝炎病毒(HCV)的感染。不幸的是，目前由施用干扰素和利巴韦林的组合组成的标准护理常常不能清除许多感染的个体中的HCV感染。此外，这一治疗伴随着显著的副作用，妨碍许多个体的使用。因此，现有的治疗对于患者中的大部分是不充分的，并且对治疗HCV感染的新药物存在迫切需要(参见，Annals Internal Med.132：296-305(2000))。

9.6-kb正单链RNA HCV基因组编码3,000个氨基酸的多蛋白，其被蛋白水解加工成为成熟病毒组分的结构蛋白和参与复制病毒基因组的非结构蛋白(NS)(Curr Top Microbiol Immunol 242，55-84(2000))。如同其它正链RNA病毒一样(B.N.Fields、D.M.Knipe和P.M.Howley(编辑)，Field virology(费氏病毒学)(Lippincott-Raven Publications，Philadelphia，Pa.，1996，在“The viruses and their replication”(病毒及其复制)”中))，HCV复制显示与细胞内膜结构相关。在HCV的情况中，所述结构被称为膜状网(membranous web)(J Virol 76，5974-5984(2002))，并且其形成被认为由NS4B蛋白诱导。NS4B蛋白还被用于在RNA复制的表面位点内装配其它病毒NS蛋白(J Virol 78，11393-11400(2004))。还不知道病毒RNA，尤其是产生后代基因组所需的负链模板，可如何被引入或者维持在这些复制位点上。

本领域中对治疗HCV感染的药物存在持续的需要。

概述

简单地说，本公开内容的实施方案包括化合物、组合物、药物组合物、治疗受到来自黄病毒科(Flaviviridae)病毒的病毒感染的宿主的方法、治疗宿主中HCV复制的方法、抑制宿主中NS4B多肽与HCV负链RNA的3’UTR结合的方法、治疗宿主中肝纤维化的方法以及类似内容。

在一个实施方案中，本发明提供治疗受到来自黄病毒科的病毒感染的受治疗者的方法。所述方法通常包括以有效减少所述受治疗者中所述病毒的病毒载量的量向所述受治疗者施用本发明的化合物，或其药学上可接受的盐、异构体、互变异构体或前药。黄病毒科的病毒可包括黄病毒、鼠疫病毒、丙型肝炎病毒、黄热病病毒、登革热病毒、日本脑炎病毒、墨莱溪谷脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、西尼罗病毒、蜱传脑炎病毒、库京病毒、中欧脑炎病毒、俄罗斯春夏型脑炎病毒、波瓦桑病毒、科萨努尔森林病病毒、鄂木斯克出血热病毒以及它们各自的基因型和基因亚型。

在另一个实施方案中，本发明提供了抑制细胞中NS4B多肽和丙型肝炎病毒(HCV)RNA之间复合物的形成的方法。所述方法包括以有效减少NS4B多肽与HCV RNA的结合的量向细胞施用本发明的化合物，或其药学上可接受的盐、异构体、互变异构体或前药。

在还有另一个实施方案中，本发明提供了治疗受治疗者中的肝纤维化的方法。所述方法包括向受治疗者施用治疗有效量的本发明的化合物，或其药学上可接受的盐、异构体、互变异构体或前药。

在某些方面，本发明的方法中的任一种包括施用具有式II-a的结构的本发明的化合物(或包括所述化合物或主要由所述化合物组成的组合物(例如药物组合物))或其药学上可接受的盐或异构体：

其中R₁选自由下列组成的组：-H和m＝0，1，2，其中V选自烷基、环烃基、杂环、芳基和杂芳基；

R₃是-H、-OH、-O(CH₂)_nX或-(CH₂)_nX，其中n是1、2、3或4，并且X是-NH₂、-NH(烷基)、-N(烷基)₂、-OH、-O-烷基、-O-芳基、-SO₂(烷基)、-SO₂NH₂、-SO₂NH(烷基)、NHSO₂(烷基)、杂芳基、N-连接的杂环或C-连接的杂环；

R₄-R₇中的每一个独立地选自下列组成的组：-H、-Br、-Cl、-F、-I、-CH₃、-CN、-OH、-OCH₃、-NO₂、-NH₂、-OCH₂CH₂O-烷基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、

或任选地，R₄和R₅、R₅和R₆、或R₆和R₇由键连接在一起形成5、6或7元环；或任选地，R₄和R₅、R₅和R₆、或R₆和R₇连接在一起形成1，2-(亚甲二氧基)苯环系统。在某些实施方案中，X选自由下列组成的组：-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂OH、-OCH₂CH₂OCH₃、其中R₁₂是氢、羟基、烷氧基、烷基、氧代、-(CH₂)_n-OH、-C(O)烷基、-C(O)芳基或-SO₂烷基；R₁₁是氢、-C(O)₂烷基、-C(O)烷基、-C(O)芳基、-C(O)NH₂、-C(O)NH烷基、-C(O)N(烷基)₂、-SO₂烷基、-SO₂芳基、-SO₂NH₂、-SO₂NH烷基或-SO₂N(烷基)₂；环A是5、6或7元环，j是0、1或2；并且h是1、2或3。在其他实施方案中，R₃选自由下列组成的组：-O(CH₂)₂NMe₂、-O(CH₂)₂NEt₂、-O(CH₂)₃NMe₂、-O(CH₂)₃NEt₂和其中k是0、1或2，h是1、2或3并且R₁₂是氢、羟基、烷氧基、烷基、氧代、-(CH₂)_n-OH、-C(O)烷基、-C(O)芳基或-SO₂烷基。需要的时候，在主题方法中使用的吲唑化合物可以具有本文公开的结构中的任一种，R₁是-CH₂V，其中V选自环烃基、杂环、芳基或杂芳基。

本文提供的治疗方法还可包括施用选自下列组成的组的一种或多种另外的治疗剂(或包括这些中的一种或多种或主要由所述化合物和这些中的一种或多种组成的组合物(例如药物组合物))：HCV NS3蛋白酶抑制剂、HCV NS5B RNA依赖性RNA聚合酶抑制剂、thiazolide、持续释放的thiazolide、核苷类似物、干扰素α、聚乙二醇化的干扰素、利巴韦林、左旋韦林(levovirin)、韦拉米啶(viramidine)、TLR7激动剂、TLR9激动剂、亲环蛋白抑制剂、α-葡萄糖苷酶抑制剂、NS5A抑制剂和NS3解螺旋酶抑制剂。

本发明还提供了具有式II-a的结构的化合物(或包括所述化合物或主要由所述化合物组成的组合物(例如药物组合物)或其药学上可接受的盐或异构体：

其中R₁选自由下列组成的组：-H和m＝0，1，2，其中V选自烷基、环烃基、杂环、芳基或杂芳基；

R₄-R₇中的每一个独立地选自下列组成的组：-H、-Br、-Cl、-F、-I、-CH₃、-CN、-OH、-OCH₃、-NO₂、-NH₂、-O-烷基、-OCH₂CH₂O-烷基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、

或任选地，R₄和R₅、R₅和R₆、或R₆和R₇由键连接在一起形成5、6或7元环；或任选地，R₄和R₅、R₅和R₆、或R₆和R₇连接在一起形成1，2-(亚甲二氧基)苯环系统；条件是式II-a的化合物不是

在某些实施方案中，对于式II-a的化合物来说，R₁是m＝0，1，2且V是芳基。在其他实施方案中，对于式II-a的化合物来说，R₃是-H、-OH、-O(CH₂)_nX或-(CH₂)_nX，其中n是1、2、3或4，且X是-NH₂、-NH(烷基)、-N(烷基)₂、-OH或N-连接的杂环。在还有其他实施方案中，式II-a的X选自由下列组成的组：-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂OH、-OCH₂CH₂OCH₃、

在另外的实施方案中，式II-a的R₃选自由下列组成的组：-O(CH₂)₂NMe₂、-O(CH₂)₂NEt₂、-O(CH₂)₃NEt₂、

在还有另外的实施方案中，R₁是-CH₂V，其中V选自环烃基、杂环或杂芳基；和/或R₄和R₇都是氢，并且R₅和R₆都是氢以外的取代基。

在一个实施方案中，本发明提供了式III的化合物(或包括所述化合物或主要由所述化合物组成的组合物(例如药物组合物)：

或其药学上可接受的盐、异构体、互变异构体或前药，其中

m是1或2；

V是未取代的或单取代的苯基、环己基或6元杂环基团，其中所述杂环基团包含1个氮原子；

R₃是-O-L-X；

L是未取代的或单取代的C₁-C₅亚烷基；

X是未取代的或是取代的含有至少1个氮原子的5、6或7元非芳香族杂环，-N(R₂₀)₂或4-取代的苯基；

R₅是氢、烷基、卤代、取代的或未取代的5、6、7元杂环或-NR₂₁R₂₂；

每个R₂₀独立地是取代的或未取代的C₁-C₃烷基；

R₂₁和R₂₂每一个独立地选自氢、取代的或未取代的C₁-C₃烷基、C₃-C₈环烃基、芳基或杂芳基基团、-COR₁₆或-SO₂R₁₆，或者R₂₁和R₂₂与它们所连接的氮原子一起形成5-7元取代的或未取代的杂环基团；

R₁₆是取代的或未取代的C₁-C₃烷基。

在另一个实施方案中，m是1。在另一个实施方案中，m是2。

在另一个实施方案中，本发明提供了式III的化合物(或包括所述化合物或主要由所述化合物组成的组合物(例如药物组合物))，其中X是未取代的或由1-2个-OH、C₁-C₃烷氧基、-CO₂R₁₇、-CON(R₁₈)₂、取代的或未取代的5或6元芳基或杂芳基基团、C₁-C₃烷基或由-OH、C₁-C₃烷氧基、-CO₂R₁₇、-NR₂₃R₂₄、-CO₂H取代的C₁-C₃烷基取代的5、6或7元非芳香族杂环；

R₁₇是取代的或未取代的C₁-C₆烷基；

每个R₁₈独立地选自氢或者取代的或未取代的C₁-C₃烷基；

R₂₃和R₂₄每一个独立地选自氢、取代的或未取代的芳基、杂芳基、C₁-C₃烷基，或R₂₃和R₂₄与它们所连接的氮原子一起形成取代的或未取代的5-7元非芳香族杂环。

在另一个实施方案中，X是未取代的或由1-2个-OH、C₁-C₃烷氧基、取代的或未取代的6元芳基、C₁-C₃烷基或由-OH、C₁-C₃烷氧基或-NR₂₃R₂₄取代的C₁-C₃烷基取代的1-吡咯烷基。在另一个实施方案中，X是取代的或未取代的哌啶基。在另一个实施方案中，X是7元非芳香族杂环基团，其中所述7元非芳香族杂环基团包含1个氮原子。

在另一个实施方案中，本发明提供式III的化合物，其中L是-(CH₂)_n-并且n是1、2、3或4。在另一个实施方案中，L是3。在另一个实施方案中，L是2，在另一个实施方案中，L是1。在另一个实施方案中，L是4。

在另一个实施方案中，本发明提供式III的化合物，其中V是4-氯代苯基或4-异丙基苯基。在另一个实施方案中，本发明提供式III的化合物，其中V是4-氯代苯基。

在另一个实施方案中，本发明提供式III的化合物，其中R₅是氢、卤代、取代的或未取代的5、6、7元杂环或-NR₂₁R₂₂。在另一个实施方案中，R₅是氢。在另一个实施方案中，R₅是卤代。在另一个实施方案中，R₅是取代的或未取代的5元杂环。在另一个实施方案中，R₅是取代的或未取代的6元杂环。在另一个实施方案中，R₅是取代的或未取代的7元非芳香族杂环。在另一个实施方案中，R₅是NR₂₁R₂₂。在一个实施方案中，R₂₁和R₂₂都是取代的或未取代的C₁-C₃烷基。在另一个实施方案中，R₂₁是取代的或未取代的C₁-C₃烷基。在另一个实施方案中，R₂₁是氢。在另一个实施方案中，R₂₂是-COR₁₆或-SO2R₁₆。在另一个实施方案中，R₂₂是C₃-C₈环烃基。在另一个实施方案中，R₂₂是芳基或杂芳基。

在另一个实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含或主要由式III的化合物和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂组成。

在另一个实施方案中，本发明提供治疗受到来自黄病毒科的病毒感染的受治疗者的方法，包括以有效减少所述受治疗者中所述病毒的病毒载量的量向所述受治疗者施用式III的化合物或者包含或主要由式III的化合物组成的药物组合物。

在本发明的另一个方面，提供药物组合物，其包含或主要由本发明的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、互变异构体或前药组成。

在本发明的另一个方面，提供药物组合物，其包含或主要由本发明的化合物或其药学上可接受的盐、异构体、互变异构体或前药组成，并且还包含选自下列组成的组的一种或多种另外的抗HCV治疗剂：HCV NS3蛋白酶抑制剂、HCV NS5B RNA依赖性RNA聚合酶抑制剂、thiazolide、持续释放的thiazolide、核苷类似物、干扰素α、聚乙二醇化的干扰素、利巴韦林、左旋韦林、韦拉米啶、TLR7激动剂、TLR9激动剂、亲环蛋白抑制剂、α-葡萄糖苷酶抑制剂、NS5A抑制剂和NS3解螺旋酶抑制剂。

在一个方面，本发明提供治疗受到来自黄病毒科的病毒感染的受治疗者的方法。所述方法包括以有效减少所述受治疗者中所述病毒的病毒载量的量向所述受治疗者施用本发明的化合物(或包括所述化合物或主要由所述化合物组成的组合物)或其药学上可接受的盐、异构体、互变异构体或前药。

在本发明的治疗方法的一些实施方案中，将与克立咪唑具有相似活性的本发明的化合物(“克立咪唑样类似物”，其是指在本文描述的基因型2a侵染克隆测定中具有低于约25μM的EC₅₀、但是在本文描述的基因型1b复制子测定中具有高于约25μM的EC₅₀的类似物)以至少约200mg的每日剂量，即，约100mg BID施用于HCV患者。通常，当与这些剂一起使用时，这一约100mg BID的施用日程将被用于其中至少一种另外的药物也被施用于所述患者的治疗方案，即，其中本发明的化合物与(i)利巴韦林；(ii)干扰素或(iii)利巴韦林(例如使用基于体重的给药或15mg/kg/天的给药)和干扰素(例如α2a或α2b和它们的聚乙二醇化的形式)共施用的治疗方案。

本文提供的本发明的其他化合物具有在本文描述的基因型1b复制子测定和2a侵染克隆测定中都小于约25μM的EC₅₀(“1b活性类似物”)，同样可在单一剂治疗或在之前描述的组合治疗中以这些剂量使用。在这些实施方案中的任一个中以及就本发明的化合物而言，患者可以是之前没有被治疗的(“首次用于实验的”)患者、对之前的治疗例如标准护理(“SOC”)治疗没有响应的患者、移植后患者或共感染另一种病毒的患者。组合治疗(例如并且非限制性的，本发明的化合物与利巴韦林和干扰素α的组合施用)可开始于治疗过程的开始或使用利巴韦林的预治疗之后。

然而，在本发明的其他实施方案中，用于治疗HCV感染的本发明的任一种化合物的每日剂量高于约200mg；示例性的施用方案包括：100mgTID、200mg BID、200mg TID、300mg BID、300mg TID、400mg BID、400mg TID、500mg BID和500mg TID。在其他的实施方案中，示例性的施用方案包括：约100mg TID、约200mg BID、约200mg TID、约300mgBID、约300mg TID、约400mg BID、约400mg TID、约500mg BID和约500mg TID。对于更难治疗的基因型，即基因型1，如果克立咪唑样类似物作为单一剂治疗施用，比约100mg口服BID或约200mg口服BID更频繁的给药或更高的每日剂量是优选的。然而，在所有不同的实施方案中，本发明的化合物可与另一种药物组合施用，包括但不限于(i)利巴韦林(例如使用固定的或基于体重的给药或15mg/kg/天的给药)；(ii)干扰素；(iii)利巴韦林(例如使用固定的或基于体重的给药或15mg/kg/天的给药)和干扰素(例如α2a或α2b和它们的聚乙二醇化的形式以及如本文描述的其他干扰素，并且例如但不限于albuferon)。在这些实施方案的任一个中，患者可以是之前没有被治疗的(“首次用于实验的”)患者、对之前的治疗例如标准护理(“SOC”)治疗没有响应的患者、移植后患者或共感染另一种病毒的患者。组合治疗(例如本发明的化合物与利巴韦林和干扰素α或与其他直接作用的特异性抗病毒剂的组合施用)可开始于治疗过程的开始或使用利巴韦林的预治疗之后。

还提供的是治疗或预防性治疗已经或可能受到黄病毒科的病毒感染的受治疗者的方法，包括与一种或多种另外的治疗剂组合施用本发明的化合物或它们的药学上可接受的盐、异构体、互变异构体或前药，所述另外的治疗剂包括但不限于HCV NS3蛋白酶抑制剂、HCV NS5B RNA依赖性RNA聚合酶抑制剂、thiazolide包括但不限于持续释放的thiazolide、核苷类似物、干扰素α、聚乙二醇化的干扰素、利巴韦林、左旋韦林、韦拉米啶、TLR7激动剂、TLR9激动剂、亲环蛋白抑制剂、α-葡萄糖苷酶抑制剂、NS5A抑制剂和NS3解螺旋酶抑制剂。

详述

在更详细地描述本发明之前，应当理解的是本发明不限于描述的具体实施方案并且当然，像这样本发明的实施方案可以变化。还应当理解的是本文使用的术语仅为了描述具体实施方案的目的而不是意为限制性的，因为本公开内容的范围仅由所附的权利要求书限制。

除非另外定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。

本说明书中引用的所有出版物和专利通过引用并入本文，如同每个单独的出版物或者专利被具体并且单独地指明通过引用并入，并且通过引用并入本文以公开和描述与所引用的出版物相关的方法和/或材料。

阅读本公开内容时对本领域技术人员来说明显的是，本文所描述和示例性说明的每个个别实施方案具有分立的组成和特征，其可以容易地与其他若干实施方案中的任一个的特征分离或组合而不偏离本公开内容的范围或者精神。任何所述方法可以以叙述的事件顺序或者以逻辑上可能的任何其他顺序进行。

除非另外表明，本公开内容的实施方案可以使用属于本领域的技术的合成有机化学、生物化学、生物学、分子生物学、重组DNA技术、药理学以及类似科学的技术。这些技术在文献中充分地说明。

列举本文的实施例以向本领域普通技术人员提供如何进行本文公开和要求的方法和如何使用本文公开和要求的化合物的说明性公开内容和描述。除非另外表明，份数是重量的份数，温度以℃计，并且压力是或者接近大气压。标准温度和压力被定义为20℃和1个大气压。

在详细描述本公开内容的实施方案之前，应当理解的是，除非另外表明，本公开内容不限于具体的材料、试剂、反应材料、制造工艺或者类似方面，因为这些可以改变。还应当理解的是本文使用的术语仅出于描述具体实施方案的日的，而不是意为限制性的。还预期在本公开内容中描述多步骤方法时，那些步骤可以不同的顺序实施，只要这是逻辑上可能的。

如说明书和所附权利要求中所使用的，除非上下文清楚表明，单数形式“一(a)”、“一(an)”和“所述(the)”包括复数指代。因此，例如言及“一种化合物”包括多种化合物。在本说明书和随后的权利要求书中，将提及被定义为具有以下意义的多个术语，除非相反意图是明显的。

A.定义

在描述和要求所公开的主题中，将按照下文列出的定义使用下列的术语。

“黄病毒科病毒”是指黄病毒科的任何病毒，包括感染人类和非人类动物的那些病毒。编码这此病毒的多核苷酸和多肽序列是本领域熟知的，并且可以在NCBI的GenBank数据库中找到，例如Genbank登录号NC_004102、AB031663、D11355、D11168、AJ238800、NC_001809、NC_001437、NC_004355、NC_004119、NC_003996、NC_003690、NC_003687、NC_003675、NC_003676、NC_003218、NC_001563、NC_000943、NC_003679、NC_003678、NC_003677、NC_002657、NC_002032和NC_001461，其数据库条目的内容通过引用全文并入本文。

如本文所使用的，术语“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”和“治疗(treat)”被定义为将剂作用于疾病、病症或者病况以减小或者改善所述疾病、病症或者病况的药理学和/或生理学影响和/或其症状。如本文所使用的，“治疗”包括宿主(例如，哺乳动物，通常是人类或者兽医感兴趣的非人动物)中疾病的任何治疗，并且包括：(a)在确定易感染所述疾病但未确诊为受到所述疾病感染的受治疗者中降低疾病发生的风险；(b)阻止疾病的发展，以及(c)减轻疾病，即，导致疾病的消退和/或减轻一种或多种疾病症状。“治疗”也意指包括递送抑制的剂以提供药理学效应，即使疾病或者病况不存在。例如，“治疗”包括在受治疗者中提供增强的或者期望的效应(例如，病原体载量减少，疾病症状减少以及类似效应)的疾病或者病原体抑制剂的递送。

如本文中所使用的，术语“预防性治疗(prophylactically treat)”和“预防性治疗(prophylactically treating)”是指完全或者部分防止疾病或其症状和/或就部分或完全治愈疾病和/或归因于疾病的副作用而言可以是治疗性的。

如本文中所使用的，术语“宿主”、“受治疗者”、“患者”或者“生物”包括人类和哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、猪、猫、犬和马)。可施用本公开内容的化合物的典型宿主是哺乳动物，尤其是灵长类，特别是人类。对于兽医应用，很多受治疗者是合适的，例如，家畜诸如牛、绵羊、山羊、奶牛、猪以及类似动物；家禽诸如鸡、鸭、鹅、火鸡以及类似动物；以及家养动物，特别是宠物，诸如犬和猫。对于诊断或者研究应用，很多哺乳动物将是合适的受治疗者，包括啮齿类(例如，小鼠、大鼠、仓鼠)，兔，灵长类和猪，诸如近交系猪以及类似动物。术语“活宿主”是指活的上文描述的宿主或者另一种生物。术语“活宿主”是指完整的宿主或者生物而不仅是从活宿主切除的一部分(例如，肝或其他器官)。

术语“分离的化合物”和“纯化的化合物”意指已经基本上从与其一起天然存在的其他化合物中分离的化合物或者相对富集的化合物。分离的化合物的纯度按重量计通常是至少约80％，至少90％纯，至少98％纯或者至少约99％纯。本公开内容意指包括非对映体以及它们的外消旋并且拆分的对映体纯的形式及其药学上可接受的盐。

如本文中所使用的，术语“单位剂量形式”是指物埋上分离的单位，其适合作为用于人类和/或动物受治疗者的单一剂量，每个单位包含与药学上可接受的稀释剂、载体或者媒介物关联的以足以产生期望作用的量计算的预定量的化合物(例如，如本文所述的，抗病毒化合物)。单位剂量形式的规格取决于使用的具体化合物，施用途径和频率，以及达到的效果，以及每种化合物在宿主中的药效动力学。

“药学上可接受的赋形剂”、药学上可接受的稀释剂”、“药学上可接受的载体”和“药学上可接受的佐剂”意指用于制备药物组合物的通常安全、无毒并且不是生物学或者其他方面所不期望的赋形剂、稀释剂、载体和/或佐剂，并且包括兽医用途和/或人类药物用途可接受的赋形剂、稀释剂、载体和佐剂。如说明书和权利要求书中所使用的，“药学上可接受的赋形剂、稀释剂、载体和或佐剂”包括一种或多种这些赋形剂、稀释剂、载体和佐剂。

如本文中所使用的，“药物组合物”和“药物制剂”意指包括适合施用于受治疗者，诸如哺乳动物，尤其是人类的组合物。总的来说，“药物组合物”或“药物制剂”是无菌的，并且优选地没有能够在受治疗者中引起不期望的反应的杂质(例如，药物组合物中的一种或多种化合物是药品级的)。药物组合物可以被设计用于经许多不同的施用途径施用于需要其的受治疗者或者患者，包括口服、静脉内、含服、直肠、肠胃外、腹膜内、皮内、气管内、肌内、皮下、吸入以及类似途径。

术语“治疗有效量”和“有效量”可互换使用并且是指足以实现包括但不限于疾病治疗的预期应用的被施用的剂(其可被称为化合物、抑制剂和/或药物)的量。例如抑制剂的有效量将在某种程度上减轻所治疗疾病即感染的一种或者多种症状，和/或该量将在某种程度上预防所治疗的宿主患有的或者具有发展的风险的疾病即感染的一种或者多种症状。治疗有效量可取决于预期应用(体外或体内)或所治疗的受治疗者和疾病状况例如受治疗者的体重和年龄，所治疗的疾病状况的严重度，施用的方式以及类似方面而变化，其可容易地由本领域普通技术人员确定。该术语还适用于将在靶细胞中诱导特定响应例如在靶细胞中抑制病毒复制和抑制NS4B与病毒RNA结合的剂量。特定的剂量将取决于所选择的特定的化合物、所遵循的给药方案，其是否与其他化合物组合施用，施用的时间安排，其施用的组织以及运输其的物理递送系统而变化。

“药学上可接受的盐”是指保留游离碱的生物学效应和任选地其它性质的那些(有机或无机的)盐。药学上可接受的盐可通过与无机或有机酸反应获得，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、苹果酸、马来酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸，以及类似的酸。

如果公开的剂的实施方案形成盐，这些盐属于本公开内容的范围。除非另外表明，本文对任一式的剂的引用被理解为包括对其盐的引用。如本文所使用的，术语“一种或多种盐”表示由无机酸和/或有机酸和碱形成的酸式盐和/或碱式盐。此外，当药剂同时包含碱性部分和酸性部分时，两性离子(“内盐”)可以形成并且包括在本文使用的术语“一种或多种盐”中。药学上可接受的(例如，无毒的、生理上可接受的)的盐是优选的，尽管其它盐也可用于例如在制备过程中可能使用的分离或纯化步骤中。剂的化合物的盐可通过例如在介质诸如所述盐在其中沉淀的介质中或者在含水介质(然后冷冻干燥)中将所述剂与一定量诸如等量的酸或碱反应来形成。

包含碱性部分的药剂的实施方案可以与多种有机和无机酸形成盐。示例性的酸加成盐包括乙酸盐(诸如与乙酸或者三卤代乙酸例如三氟乙酸形成的盐)、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐(与盐酸形成)、氢溴酸盐(与氢溴酸形成)、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐(与苹果酸形成的盐)、马来酸盐(与马来酸形成)、乙磺酸盐(与乙磺酸形成)、甲磺酸盐(与甲磺酸形成)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐(与磷酸形成)、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐(诸如与硫酸形成的那些盐)、磺酸盐(诸如本文提到的那些盐，包括与对甲苯磺酸形成的那些盐)、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐诸如甲苯磺酸盐(tosylates)、十一酸盐以及类似的盐。

包含酸性部分的剂的实施方案可以与多种有机和无机碱形成盐。示例性碱式盐包括铵盐，碱金属盐诸如钠盐、锂盐和钾盐，碱土金属盐诸如钙盐和镁盐，与有机碱(例如，有机胺)诸如苄星青霉素(benzathine)、二环己胺、哈胺青霉素(hydrabamine)(N，N-二(去氢枞基)乙二胺形成)、N-甲基-D-葡萄糖胺、N-甲基-D-葡萄糖酰胺、叔丁胺的盐，以及与氨基酸诸如精氨酸、赖氨酸的盐以及类似的盐。

可以用剂诸如低级烷基卤化物(例如，甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(例如，硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯)、长链卤化物(例如，癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物)，芳烷基卤化物(例如，苄基和苯乙基溴化物)，以及其他剂将碱性含氮基团季铵化。本公开内容的剂的溶剂化物也包含于本文。

就公开的活性化合物及其盐可以以它们的互变异构体形式存在而言，所有这种互变异构体形式作为本公开内容的一部分包含于本文。

剂的所有立体异构体，诸如由于各种取代基上的不对称碳而存在的立体异构体，包括对映体形式(即使不存在不对称碳时，其也可以存在)和非对映体形式，属于本公开内容的范围内。本公开内容的化合物的单独的立体异构体可，例如，基本上不含其它异构体，或可以被混合成例如外消旋体，或者与所有其它的立体异构体或者其它选择的立体异构体混合。本公开内容的化合物的立体异构中心可以具有由IUPAC 1974推荐标准定义的S或者R构型。

术语“前药”是指在体内转化成生物活性形式的药剂的无活性前体。前药通常是有用的，因为某些情形中，它们比母体化合物更容易施用。例如，它们可以通过口服施用被生物利用而母体化合物则不行。在药物组合物中前药可具有超过母体化合物的提高的溶解度。前药可以通过各种机制转化成母体药物，包括酶过程和代谢水解。Harper，N.J.(1962).Jucker编辑的Progress in Drug Research(药物研究进展)中的Drug Latentiation(药物潜效化)，4：221-294；Morozowich等人(1977).E.B.Roche编辑的Design ofBiopharmaceutical Properties through Prodrugs and Analogs(经前药和类似物的生物制药性质的设计)中的Application of Physical Organic Principles toProdrug Design(物理有机原理对前药设计的应用)，APhA；Acad.Pharm.Sci.；E.B.Roche编辑(1977).Bioreversible Carriers in Drug in Drug Design，Theory and Application(药物设计、理论和应用中的药物的生物可逆载体)，APhA；H.Bundgaard，编辑(1985)Design of Prodrugs(前药设计)，Elsevier；Wang等人(1999)Prodrug approaches to the improved delivery of peptide drug(提高肽药物递送的前药途径)，Curr.Pharm.Design.5(4)：265-287；Pauletti等人(1997).Improvement in peptide bioavailability：Peptidomimetics andProdrug Strategies(肽生物利用度的改进：模拟肽学和前药策略)Adv.Drug.Delivery Rev.27：235-256；Mizen等人(1998).The Use of Esters as Prodrugsfor Oral Delivery of β-Lactam antibiotics(使用酯作为前药用于β-内酰胺抗生素的口服递送)，Pharm.Biotech.11，：345-365；Gaignault等人(1996).Designing Prodrugs and Bioprecursors I.Carrier Prodrugs(设计前药和生物前体I.载体前药)，Pract.Med.Chem.671-696；M.Asgharnejad(2000)在G.L.Amidon，P.I.Lee和E.M.Topp编辑的Transport Processes in PharmaceuticalSystems(药物系统中的输送方法)中的Improving Oral Drug Transport ViaProdrugs(通过前药提高口服药物输送)，Marcell Dekker，第185-218页；Balant等人.(1990)Prodrugs for the improvement of drug absorption viadifferent routes of administration(提高药物经不同施用途径的吸收的前药)，Eur.J.Drug Metab.Pharmacokinet，15(2)：143-53；Balimane和Sinko(1999).Involvement of multiple transporters in the oral absorption of nucleosideanalogues(核苷类似物的口服吸收中多种转运蛋白的参与)，Adv.DrugDelivery Rev.，39(1-3)：183-209；Browne(1997).Fosphenytoin(Cerebyx)(磷苯妥英(Cerebyx))，Clin.Neuropharmacol.20(1)：1-12；Bundgaard(1979).Bioreversible derivatization of drugs--principle and applicability to improve thetherapeutic effects of drugs(药物的生物可逆的衍生物-改进药物的治疗效果的原理和适用性)，Arch.Pharm.Chemi.86(1)：1-39；H.Bundgaard编著(1985)Design of Prodrugs(前药设计)，New York：Elsevier；Fleisher等人(1996).Improved oral drug delivery：solubility limitations overcome by the use ofprodrugs(改进的口服药物递送：通过使用前药克服溶解度限制)，Adv.DrugDelivery Rev.19(2)：115-130；Fleisher等人(1985).Design of prodrugs forimproved gastrointestinal absorption by intestinal enzyme targeting(通过肠酶靶向改进胃肠内吸收的前药设计)，Methods Enzymol.112：360-81；FarquharD，等人(1983).Biologically Reversible Phosphate-Protective Groups(生物学上可逆的磷酸酯保护基团)，J.Pharm.Sci.，72(3)：324-325；Han，H.K.等人(2000).Targeted prodrug design to optimize drug delivery(最优化药物递送的靶向前药设计)，AAPS PharmSci.，2(1)：E6；Sadzuka Y.(2000).Effectiveprodrug liposome and conversion to active metabolite(有效的前药脂质体和向活性代谢物的转化)，Curr.Drug Metab，1(1)：31-48；D.M.Lambert(2000)Rationale and applications of lipids as Prodrug carriers(脂类作为前药载体的原理和应用)，Eur.J.Pharm.Sci.，11增刊2：S15-27；Wang，W.等人(1999).Prodrug approaches to the improved delivery of peptide drugs(改进肽药物递送的前药方法)Curr.Pharm.Des.，5(4)：265-87。

术语“施用”是指将本公开内容的剂引入宿主内。所述剂的一个优选的施用途径是口服施用。另一个优选的途径是静脉内施用。然而，可以使用任何施用途径，诸如局部、皮下、腹膜内、动脉内、吸入、阴道内、直肠内、鼻内、引入脑脊液，或者滴注至身体房室中。

术语“脂肪族基团”是指饱和的和不饱和的直链或者支链烃基，并且包含例如烷基、烯基和炔基基团。

术语“烷(alk)”或者“烷基(alkyl)”是指具有1至12个碳原子，优选地1至8个碳原子的直链或者支链烃基，诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、正辛基、十二烷基、十八烷基、戊烷基、2-乙基己基以及类似基团。除非另外说明，烷基基团任选地被选自下列的一个或多个基团取代：芳基(任选取代的)、杂环(任选取代的)、碳环(任选取代的)、卤代、羟基、被保护的羟基、烷氧基(例如，C₁至C₇)(任选取代的)、酰基(例如，C₁至C₇)、芳氧基(例如，C₁至C₇)(任选取代的)、烷基酯(任选取代的)、芳基酯(任选取代的)、烷酰基(任选取代的)、芳酰基(任选取代的)、羧基、被保护的羧基、氰基、硝基、氨基、取代的氨基、(单取代的)氨基、(双取代的)氨基、被保护的氨基、酰氨基、内酰胺、脲、氨基甲酸乙酯、磺酰基以及类似基团。

术语“烯基”是指具有2至12个碳原子，优选地2至4个碳原子，和至少一个碳碳双键(顺式或者反式)的直链或者支链烃基，诸如乙烯基。除非另外说明，烯基基团任选地被选自下列的一个或多个基团取代：芳基(包括取代的芳基)、杂环(包括取代的杂环)、碳环(包括取代的碳环)、卤代、羟基、烷氧基(任选取代的)、芳氧基(任选取代的)、烷基酯(任选取代的)、芳基酯(任选取代的)、烷酰基(任选取代的)、芳酰基(任选取代的)、氰基、硝基、氨基、取代的氨基、酰氨基、内酰胺、脲、氨基甲酸乙酯、磺酰基以及类似基团。

术语“亚烷基”是指具有1至12个碳原子以及某些实施方案中1至6个碳原子的二价饱和脂肪族烃基基团。亚烷基包括支链和直链烃基基团。例如，“C₁-C₆亚烷基”意指包括亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、2-甲基亚丙基、亚戊基、亚己基以及类似基团。“取代的亚烷基”是指具有1至5个并且在某些实施方案中1至3个或者1至2个选自下列取代基的亚烷基基团，并且包括其中成对的氢由＝O部分取代的亚烷基：芳基(任选取代的)、杂芳基、杂环(任选取代的)、碳环(任选取代的)、卤代、羟基、被保护的羟基、烷氧基(例如，C₁至C₇)(任选取代的)、酰基(例如，C₁至C₇)、芳氧基(例如，C₁至C₇)(任选取代的)、烷基酯(任选取代的)、芳基酯(任选取代的)、烷酰基(任选取代的)、芳酰基(任选取代的)、羧基、被保护的羧基、氰基、硝基、氨基、取代的氨基、(单取代的)氨基、(双取代的)氨基、被保护的氨基、酰氨基、内酰胺、脲、氨基甲酸乙酯、磺酰基以及类似基团。

术语“炔基”是指具有2至12个碳原子，优选地2至4个碳原子，和至少一个碳碳三键的直链或者支链烃基，诸如乙炔基。除非另外说明，炔基基团任选地被选自下列的一个或多个基团取代：芳基(包括取代的芳基)、杂环(包括取代的杂环)、碳环(包括取代的碳环)、卤代、羟基、烷氧基(任选取代的)、芳氧基(任选取代的)、烷基酯(任选取代的)、芳基酯(任选取代的)、烷酰基(任选取代的)、芳酰基(任选取代的)、氰基、硝基、氨基、取代的氨基、酰氨基、内酰胺、脲、氨基甲酸乙酯、磺酰基以及类似基团。

术语“烷氧基”是指与氧如此连接的烷基基团：R-O-。在这个官能团中，R表示烷基基团。一个实例是甲氧基CH₃O-。

“有机基团”可以被官能化或者另外包含与有机基团相关的另外的官能团，诸如羧基、氨基、羟基以及类似基团，其可以是被保护的或者未被保护的。例如，短语“烷基基团”预期不仅包括纯的开链饱和的烃烷基取代基，诸如甲基、乙基、丙基、叔丁基以及类似基团，还包括带有本领域已知的另外的取代基诸如羟基、烷氧基、烷基磺酰基、卤素原子、氰基、硝基、氨基、羧基以及类似基团的烷基取代基。因此，“烷基基团”包括醚、酯、卤代烷基、硝基烷基、羧基烷基、羟基烷基、磺基烷基以及类似物。“氰基”是指-CN取代基。

术语“卤代”和“卤素”是指氟代、氯代、溴代或碘代基团。可以有一个或者多个卤素基团，其可以是相同的或者不同的。在一个实施方案中，每个卤素可被其他卤素之一取代。

术语“卤代烷基”是指由一个或者多个卤素原子取代的如上文定义的烷基基团。卤索原子可以是相同的或者不同的。术语“二卤代烷基”是指由两个卤代基团取代的如上文描述的烷基基团，所述卤代基团可以是相同或不同的。术语“三卤代烷基”是指由三个卤代基团取代的上文描述的烷基基团，所述卤代基团可以是相同或者不同的。术语“全卤代烷基(perhaloalkyl)”是指其中烷基基团的每个氢原子己经被卤素原子取代的上文定义的卤代烷基基团。术语“全氟烷基”是指其中烷基基团中每个氢原子已经被氟基团取代的上文定义的卤代烷基基团。

术语“环烃基(cycloalkyl)”是指单环、双环或者三环的饱和环，其是完全饱和的或者部分不饱和的。这种基团的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、金刚烷基、环辛基、顺式或者反式萘烷、双环[2.2.1]庚-2-烯基、环己-1-烯基、环戊-1-烯基、1，4-环辛烯基以及类似基团。除非另外说明，环烃基基团任选地被选自下列的一个或多个基团取代：芳基(包括取代的芳基)、杂环(包括取代的杂环)、碳环(包括取代的碳环)、卤代、羟基、被保护的羟基、烷氧基(例如，C₁至C₇)(任选取代的)、酰基(例如，C₁至C₇)、芳氧基(例如，C₁至C₇)(任选取代的)、烷基酯(任选取代的)、芳基酯(任选取代的)、烷酰基(任选取代的)、芳酰基(任选取代的)、羧基、被保护的羧基、氰基、硝基、氨基、取代的氨基、(单取代的)氨基、(双取代的)氨基、被保护的氨基、酰氨基、内酰胺、脲、氨基甲酸乙酯、磺酰基以及类似基团。术语“(环烃基)烷基”是指由上文定义的烷基基团取代的上文定义的环烃基基团。这种基团的实例包括(环己基)甲基、3-(环丙基)-正丙基、5-(环戊基)己基、6-(金刚烷基)己基以及类似基团。除非另外说明，(环烃基)烷基基团任选地被选自下列的一个或多个基团取代：烷基(包括取代的烷基)、芳基(包括取代的芳基)、杂环(包括取代的杂环)、碳环(包括取代的碳环)、卤代、羟基、被保护的羟基、烷氧基(例如，C₁至C₇)(任选取代的)、酰基(例如，C₁至C₇)、芳氧基(例如，C₁至C₇)(任选取代的)、烷基酯(任选取代的)、芳基酯(任选取代的)、烷酰基(任选取代的)、芳酰基(任选取代的)、羧基、被保护的羧基、氰基、硝基、氨基、取代的氨基、(单取代的)氨基、(双取代的)氨基、被保护的氨基、酰氨基、内酰胺、脲、氨基甲酸乙酯、磺酰基以及类似基团。术语“取代的苯基”是指由一个或者多个部分，并且在某些实例中由一个、两个或者三个部分取代的苯基基团，所述部分选自由下列组成的组：卤素、羟基、被保护的羟基、氰基、硝基、三氟甲基、C₁至C₇烷基、C₁至C₇烷氧基、C₁至C₇酰基、C₁至C₇酰氧基、羧基、氧代羧基、被保护的羧基、羧甲基、被保护的羧甲基、羟基甲基、被保护的羟基甲基、氨基、被保护的氨基、(单取代的)氨基、被保护的(单取代的)氨基、(双取代的)氨基、氨甲酰、被保护的氨甲酰、N-(C₁至C₆烷基)氨甲酰、被保护的N-(C₁至C₆烷基)氨甲酰、N，N-二(C₁至C₆烷基)氨甲酰、三氟甲基、N-((C₁至C₆烷基)磺酰基)氨基、N-(苯基磺酰基)氨基或苯基，它们是取代的或者未取代的以致例如产生联苯基或者萘基基团。

术语“取代的苯基”的实例包括单(卤代)苯基基团或者二(卤代)苯基基团，诸如2、3或4-氯苯基、2，6-二氯苯基、2，5-二氯苯基、3，4-二氯苯基、2、3或4-溴苯基、3，4-二溴苯基、3-氯-4-氟苯基、2、3或4-氟苯基以及类似物；单(羟基)苯基基团或者二(羟基)苯基基团，诸如2、3或4-羟基苯基、2，4-二羟基苯基、其被保护羟基的衍生物以及类似基团；硝基苯基基团，诸如2、3或4-硝基苯基；氰基苯基基团，例如，2、3或4-氰基苯基；单(烷基)苯基基团或二(烷基)苯基基团，诸如2、3或4-甲基苯基、2，4-二甲基苯基、2、3或4-(异丙基)苯基，2、3或4-乙基苯基、2、3或4-(正丙基)苯基以及类似基团；单(烷氧基)苯基基团或者二(烷氧基)苯基基团，例如，2，6-二甲氧基苯基，2、3或4-(异丙氧基)苯基、2、3或4-(叔丁氧基)苯基、3-乙氧基-4-甲氧基苯基以及类似基团；2、3或4-三氟甲基苯基；单或二羧基苯基或(被保护羧基)苯基基团，诸如2、3或4-羧基苯基或2，4-二(被保护羧基)苯基；单或二(羟基甲基)苯基或(被保护羟基甲基)苯基诸如2、3或4-(被保护羟基甲基)苯基或者3，4-二(羟基甲基)苯基；单或二(氨基甲基)苯基或者(被保护氨基甲基)苯基，诸如2、3或4-(氨基甲基)苯基或者2，4-(被保护氨基甲基)苯基；或者单或二(N-(甲基磺酰基氨基)苯基，诸如2、3或4-(N-(甲基磺酰基氨基))苯基。同样，术语“取代的苯基”代表二取代的苯基基团，其中取代基是不同的，例如，3-甲基-4-羟基苯基、3-氯代-4-羟基苯基、2-甲氧基-4-溴代苯基、4-乙基-2-羟基苯基、3-羟基-4-硝基苯基、2-羟基-4-氯苯基以及类似基团。

术语“(取代苯基)烷基”是指连接到上文描述的烷基基团之一的上文的取代苯基基团之一。(取代苯基)烷基基团的实例包括这些基团例如2-苯基-1-氯乙基、2-(4’-甲氧基苯基)乙基、4-(2’，6’-二羟基苯基)正己基、2-(5’-氰基-3’-甲氧基苯基)正戊基、3-(2’，6’-二甲基苯基)正丙基、4-氯-3-氨基苄基、6-(4’-甲氧基苯基)-3-羧基(正己基)、5-(4’-氨基甲基苯基)-3-(氨基甲基)正戊基、5-苯基-3-氧代-正戊-1-基、(4-羟基萘-2-基)甲基以及类似基团。

术语“芳”或者“芳基”是指优选地具有6至12个成员的含有芳香族同素环(即烃)的单环、双环或者三环的基团，诸如苯基、萘基和联苯基。除非另外说明，芳基基团任选地被选自下列的一个或多个基团取代：烷基(任选取代的)、烯基(任选取代的)、芳基(任选取代的)、杂环(人选取代的)、卤代、羟基、烷氧基(任选取代的)、芳氧基(任选取代的)、烷酰基(任选取代的)、芳酰基(任选取代的)、烷基酯(任选取代的)、芳基酯(任选取代的)、氰基、硝基、氨基、取代的氨基、酰氨基、内酰胺、脲、氨基甲酸乙酯、磺酰基以及类似基团。任选地，邻近的取代基与它们所结合的原子一起形成3至7元环。

术语“杂芳基”是指具有单独的或者与另外的氮、硫或者氧环原子连接的1-4个杂原子诸如氧、硫和/或氮原子的任选地取代的五元或六元环。此外，上文的任选地取代的五元或六元环可以任选地与芳香族五元或六元环系统例如苯、嘧啶或三唑系统稠合。例如，该环可以被任选地稠合到芳族五元或六元环系统，诸如苯、吡啶或者三唑系统。

下列环系统是术语“杂芳基”表示的杂环(取代的或者未取代的)基团的非限制性实例：噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、三唑基、噻二唑基、噁二唑基、四唑基、噻三唑基、噁三唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、噁嗪基、三嗪基、噻二嗪基四唑并、1，5-[b]哒嗪基和嘌呤基，以及苯并-稠合衍生物，例如，苯丙噁唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基和吲哚基。

除非另外说明，杂芳基基团任选地被选自下列的一个或多个基团取代：一至三个卤代、三卤代甲基、氨基、被保护的氨基、氨基盐、单取代的氨基、双取代的氨基、羧基、被保护的羧基、羧酸盐、羟基、被保护的羟基、羟基基团的盐、低级烷氧基、低级烷硫基、烷基(任选取代的)、环烃基(任选取代的)、(环烃基)烷基(任选取代的)、苯基(任选取代的)、苯基烷基(任选取代的苯基烷基)。杂芳基基团的取代基团如上文定义的，或者在三卤代甲基的情况下可以是三氟代甲基、三氯代甲基、三溴代甲基、或三碘代甲基。当结合上文用于杂芳基环的取代基使用时，“低级烷氧基”意指C₁至C₄烷氧基基团，相似地，“低级烷基硫”意指C₁至C₄烷基硫基团。

术语“杂环(heterocycle)”、“杂环的(heterocyclic)”、“杂环基团(heterocyclic group)”或者“杂环(heterocyclo)”是指完全饱和或者部分不饱和的或者完全不饱和的，包括在至少一个含碳原子的环中具有至少一个杂原子的芳香族(“杂芳基”)或非芳香族环状基团(例如3至13元单环、7至17元双环或10至20元三环系统，优选地包含总共3至10个环原子)。含有杂原子的杂环基团的每个环可以具有选自氮原子、氧原子和/或硫原子的1、2、3或者4个杂原子，其中氮和硫杂原子可以任选地被氧化，并且氮杂原子可任选地被季铵化。杂环基团可以在环或者环系统的任何杂原子或者碳原子处连接。N-连接的杂环是其中杂环部分通过形成所述杂环环部分的氮原子与化合物例如式I的化合物连接的杂环部分。N-连接的杂环的非限制性实例包括但不限于

C-连接的杂环是其中杂环部分通过形成所述杂环环部分的碳原子与化合物例如式II-a、b或c的化合物连接的杂环部分。非限制性实例包括多环杂环的环可以是稠合的、桥连的和/或通过一个或多个螺旋单位连接的。

示例性单环杂环基团包括：吡咯烷基、吡咯基、吡唑基、氧杂环丁烷基、吡唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、异噁唑啉基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、呋喃基、四氢呋喃基、噻吩基、噁二唑基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代氮杂基、氮杂基、4-哌啶酮基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基、四氢呋喃基、四唑基、三唑基、吗啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜、硫代吗啉基砜、1，3-二氧戊环以及四氢-1，1-二氧噻吩基以及类似基团。

示例性双环杂环基团包括：吲哚基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并噻吩基、奎宁环基、喹啉基、四氯异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、吲嗪基、苯并呋基(benzofuryl)、苯并呋喃基(benzofuranly)、二氢苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、苯并间二氧杂环戊烯基、二氢苯并间二氧杂环戊烯基、苯并二噁英基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基(诸如呋喃并[2，3-c]吡啶基、呋喃并[3，2-b]吡啶基或者呋喃并[2，3-b]吡啶基)、二氢异吲哚基、二氢喹唑啉基(诸如3，4-氢-4-氧代喹唑啉基)、四氢喹啉基、氮杂双环烃基(诸如6-氮杂双环[3.2.1]辛烷)、氮杂螺烷基(诸如1，4二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷)、咪唑并吡啶基(诸如咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)、三唑并吡啶基(诸如1，2，4-三唑并[4，3-a]吡啶-3-基)，以及六氢咪唑并吡啶基(诸如1，5，6，7，8，8a-六氢咪唑并[1，5-a]吡啶-3-基)以及类似基团。

示例性三环杂环基团包括咔唑基、苯并吲哚基、菲咯啉基、吖啶基、菲啶基、呫吨基以及类似基团。

除非另外说明，杂环基团任选地被选自下列的一个或多个基团取代：烷基(包括取代的烷基)、烯基、氧代、芳基(包括取代的芳基)、杂环(包括取代的杂环)、碳环(任选取代的)、卤代、羟基、烷氧基(任选取代的)、芳氧基(任选取代的)、烷酰基(任选取代的)、芳酰基(任选取代的)、烷基酯(任选取代的)、芳基酯(任选取代的)、氰基、硝基、酰氨基、氨基、取代的氨基、内酰胺、脲、氨基甲酸乙酯、磺酰基以及类似基团，其中任选地，一对或多对取代基与它们所连接的原子一起形成3至7元环。

术语“烷酰基”是指与羰基基团连接的烷基基团(其可以是如上文所述任选地取代的)(即，--C(O)-烷基)。类似地，术语“芳酰基”是指与羰基基团连接的芳基基团(其可以是如上文所述任选取代的)(即--C(O)-芳基)。

术语“(单取代)氨基”是指具有选自由下列组成的组的一个取代基的氨基基团：苯基、取代苯基、烷基(包括取代的烷基)、C₁至C₄酰基、C₂至C₇烯基(包括C₂至C₇取代的烯基)、C₂至C₇炔基、C₇至C₁₆烷基芳基(包括C₇至C₁₆取代的烷基芳基)和杂芳基基团。(单取代)氨基可以另外地具有氨基保护基，如术语“被保护的(单取代)氨基”所包含的。术语“(二取代)氨基”是指具有选自由下列组成的组的两个取代基的氨基基团：苯基、取代苯基、烷基、取代的烷基、C₁至C₇酰基、C₂至C₇烯基、C₂至C₇炔基、C₇至C₁₆烷基芳基、C₇至C₁₆取代的烷基芳基和杂芳基基团。两个取代基可以是相同的或者是不同的。

术语“杂芳基(烷基)”是指在任何位置由上文定义的杂芳基基团取代的上文定义的烷基基团。

“电子等排物”是具有不同分子式但具有相似或者相同外层电子排列并且具有相似性质(例如，药学性质(例如，药代动力学和药效动力学))的不同的原子、分子或者离子。

“部分”是指分子的特定段或功能基团。化学上的部分通常被认为嵌入分子中或附着于分子的化学实体。

“硝基”是指-NO₂基。

“氧杂”是指-O-基。

“氧代”是指＝O基。

“磺酰基”是指下列基团：-S(O₂)-H、-S(O₂)-(烷基)、-S(O₂)-(环烃基)、-S(O₂)-(氨基)、-S(O₂)-(芳基)、-S(O₂)-(杂芳基)和-S(O₂)-(杂环烃基)。“磺氨基(Sulfonamidyl)”或“磺酰氨基(sulfonamido)”是指-S(O)₂-NRR基，其中每个R独立地选自下列组成的组：氢、烷基、环烃基、芳基、杂芳基(通过环碳键合)和杂脂环(通过环碳键合)。-S(O)₂-NRR基的-NRR中的R基团可与其所连接的氮原子一起形成4、5、6或7元环(-S(O₂)-(杂环烃基))。在某些实施方案中，其为C₁-C₁₀磺酰氨基，其中磺酰氨基中的每个R含有总共1个碳、2个碳、3个碳或4个碳。磺酰氨基基团任选地由上文分别为烷基、环烃基、芳基、杂芳基描述的取代基中的一个或多个取代。“砜”是指-S(O₂)-(烷基)、-S(O₂)-(芳基)、-S(O₂)-(杂芳基)或-S(O₂)-(杂环烃基)(当砜基团与杂环烃基中的碳原子连接时)。磺酰氨基基团任选地由上文为烷基、环烃基、芳基和杂芳基描述的取代基中的一个或多个取代。

术语“溶剂”、“有机溶剂”和“惰性溶剂”每个意指在所描述的反应条件下惰性的溶剂。非限制性的实例包括苯、甲苯、乙腈、四氢呋喃(“THF”)、二甲基甲酰胺(“DMF”)、氯仿、氯化亚甲(或二氯甲烷)、乙醚、甲醇、N-甲基吡咯烷酮(“NMP”)、吡啶以及类似物。

术语“保护基团“是指封闭化合物的某些或全部活性部分并且使这些部分不参与某些化学反应直到保护基团被除去的化学部分，例如T.W.Greene，P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保护基团)，第三版.John Wiley & Sons(1999)中列出和描述的那些。当使用不同的保护基团时，每种(不同的)保护基团可通过不同的方法除去是有利的。可在完全不一样的反应条件下被切断的保护基团允许不同地除去这些保护基团。例如，保护基团可通过酸、碱和氢解除去。基团例如三苯甲基、二甲氧基三苯甲基、乙缩醛和叔丁基二甲基甲硅烷基是对酸敏感的，可用来在用可通过氢解除去的Cbz基团和对碱敏感的Fmoc基团保护的氨基基团存在下保护羧基和羟基活性部分。羧酸部分可用对碱敏感的基团例如但不限于甲基或乙基封闭，而羟基活性部分可在用对酸敏感的基团例如叔丁基氨基甲酸酯或用对酸和碱都稳定但可水解除去的氨基甲酸酯封闭的胺存在下用对碱敏感的基团例如乙酰基封闭。

在一个实施方案中，术语“环”是指具有包含3至10个碳原子的环结构的化学部分，其中一个或多个碳原子可任选地由杂原子例如N、O或S取代。环可以是或不是芳香族的并且因此可以是完全不饱和的、完全饱和的和部分不饱和的；并且环可是指稠合系统中的环或非稠合的环。除非另外说明，“环”的这一定义不修改本文提供的环的其他定义。

如本文所用的，除非另外说明，下列术语具有对它们所描述的含义。在本公开内容中，“包含(comprise)”、“包含(comprising)”、“含有(containing)”和“具有(having)”以及类似表述可具有美国专利法中对它们所描述的含义，并且可意指“包括(incuding)”和“包括(include)“以及类似表述；当用于由本公开内容涵盖的方法和组合物时，“主要由...组成”或“主要组成”或类似表述指与本文描述的那些相似的组合物但是其可含有另外的组合物成分或方法步骤。然而，与本文公开的相应的组合物或方法相比，这些另外的组合物成分或方法步骤等不实质上影响所述组合物或方法的基本和新颖的一个或多个特征。当用于由本公开内容涵盖的方法和组合物时，“主要由...组成”或“主要组成”或类似表述具有美国专利法中对它们所描述的含义并且所述术语是可扩展的，允许多于其所列举的那些的存在，条件是其所列举的那些的基本或新颖的特征没有由于多于其所列举的那些的存在而改变，但是现有技术的实施方案除外。

B.

本发明的方面和实施方案提供用于治疗(包括预防性治疗)由编码NS4B的病毒的感染的方法和组合物。这些病毒包括黄病毒科的任何病毒，涵盖例如黄病毒、鼠疫病毒和丙型肝炎病毒。其他的NS4B编码病毒包括黄热病病毒(YFV)、登革热病毒(包括1-4型登革热)、日本脑炎病毒、墨莱溪谷脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、西尼罗病毒、蜱传脑炎病毒、库京病毒、中欧脑炎病毒、俄罗斯春夏型脑炎病毒、波瓦桑病毒、科萨努尔森林病病毒、鄂木斯克出血热病毒以及它们各自的基因型和基因亚型。主题方法和组合物可特别用于治疗或预防性治疗HCV，包括基因型1、2、3、4、5、6和类似基因型中的一种或多种以及HCV基因型的亚型(例如1a、1b、2a、2b、3a以及类似亚型)。

在一个实施方案中，治疗这样的病毒感染的方法包括向受到来自黄病毒科的病毒感染的受治疗者施用有效量的苯并咪唑核心结构的电子等排物或其药学上可接受的盐、异构体、互变异构体或前药。在一个实施方案中，电子等排物是吲唑。

在一个方面，与这一治疗之前受治疗者中存在的病毒载量水平相比，主题方法有效减少受感染的受治疗者中的病毒载量例如至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或甚至更高。不受任何特定理论的限制，病毒载量上的减少可以全部或部分地通过减少NS4B多肽与病毒基因组的结合来实现。在HCV的情况，当施用本发明的化合物时病毒载量上的减少可部分地归因于，NS4B多肽在例如3’UTR上的位点与HCV负链RNA结合的减少。

主题方法还可利用一种或多种其他的电子等排物，包括但不限于与克立咪唑共有结构相似性并且表现出抗病毒活性的H1受体拮抗剂。与克立咪唑共有结构相似性的示例性的H1受体拮抗剂包括但不限于称为醇胺(例如，苯海拉明、卡比沙明和氯马斯汀)，乙二胺(例如，美吡拉敏和曲吡那敏(克立咪唑属于本类))，烷基胺(例如，曲普利啶和氯苯那敏)、哌嗪类(如美克洛嗪和高氯环嗪(homchlorcyclizine))和吩噻嗪(例如，异丙嗪)类别的化合物。

主题治疗方法还可使用本文提供的化合物的前药。示例性前药可由肝酶活化(例如用促进CYP3A的氧化切割反应的基团取代的环-1，3-丙基酯以及类似物)。这些修饰可使得本发明的化合物无活性或少活性直到它到达肝(参见Current Opinion in Investigational Drugs 2006第7卷第2期109-117；J.Med.Chem.2008，51，2328-2345；和Nucleosides，Nucleotides，andNucleic Acids，24(5-7)：375-381，(2005)，其每一个的相应讨论通过引用并入本文)。

在一个实施方案中，示例性的吲唑化合物具有式II-a或式II-b的结构：

在一个实施方案中，对于式II-a或II-b的吲唑化合物，R₁是-H或m＝0，1，2，其中V选自烷基、环烃基、杂环、芳基或杂芳基。

在另一个实施方案中，对于式II-a或II-b的化合物，R₁是其中烷基部分是未取代的或取代的。形成R₁的一部分(m＝1或2)或全部(m＝0)的烷基部分是支链或非支链的。R₁的烷基部分包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、庚基(septyl)、庚基、壬基和癸基。

在还有另一个实施方案中，R₁是其中环烃基部分是取代的或未取代的。形成R₁的一部分(m＝1或2)或全部(m＝0)的环烃基部分包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基和环己基。非限制性示例的R₁包括下列式：

本发明还提供式II-a或II-b的化合物，其中R₁具有式：并且其中杂环部分是未取代的或取代的。形成R₁的一部分(m＝1或2)或全部(m＝0)的杂环部分包括但不限于氮杂环丁基、吡咯烷基、吗啉基、哌啶基或哌嗪基。N-连接的杂环是其中杂环部分通过形成所述杂环环的一部分的氮原子与式II-a或b的化合物连接的杂环部分。非限制性的N-连接的杂环包括但不限于，在某些实施方案中，N-连接的杂环是具有下列式的部分：

其中h是1、2或3并且R₁₂是氢、羟基、烷氧基、烷基、氧代、-(CH₂)_n-OH、-C(O)烷基、-C(O)₂烷基、-C(O)芳基或-SO₂烷基。实例包括但不限于在某些实施方案中，C-连接的杂环是其中杂环部分通过形成所述杂环环的一部分的碳原子与式II-a或b的化合物连接的杂环部分。非限制性的实例包括在某些实施方案中，C-连接的杂环是具有下列式的部分：j是0、1、或2

其中R₁₁是氢、-C(O)烷基、-C(O)芳基、-C(O)NH₂、-C(O)NH烷基、-C(O)N(烷基)₂、-SO₂烷基、-SO₂芳基、-SO₂NH₂、-SO₂NH烷基或-SO₂N(烷基)₂；环A是5、6或7元环并且j是0、1或2。实例包括但不限于

非限制示例性的R₁包括下列式：

在上式中，烷基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、庚基(septyl)、庚基、壬基和癸基。

在还有另外的实施方案中，式II-a或II-b的R₁是其中芳基部分是未取代的或取代的。形成R₁的一部分(m＝1或2)或全部(m＝0)的芳基部分包括但不限于苯基、萘基和芴基。

在某些实施方案中，芳基是下列部分之一：

其中X₁-X₅每一个独立地选自下列组成的组：-H、-烷基、-Br、-Cl、-F、-O-烷基、

非限制示例性的R₁包括下列式：

另外，式II-a或II-b的R₁可以是其中杂芳基部分是未取代的或取代的。在某些实施方案中，杂芳基部分是单环的5元杂芳基。单环的杂芳基包括但不限于吡咯基、咪唑基、噻唑基和吡唑基。

可选择地，当R₁是时，杂芳基可是六元杂芳基部分。六元杂芳基部分包括但不限于2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、嘧啶基、吡嗪基或三嗪基(trianzinyl)。

在某些实施方案中，R₁杂芳基是其中X₁-X₅每一个独立地选自由下列组成的组：-H、-烷基、-I、-Br、-Cl、-F、-O-烷基、 Y选自由下列组成的组：-O、-S、-NH、-N-烷基和-N-酰基；X₆选自由下列组成的组：-H、-CH₃、-I、-Cl、-F、CF₃和-OCH₃；并且X₇和X₈每一个独立地选自由下列组成的组：H和CH₃。

R₁的非限制性实例包括下列式：

R₁的烷基、环烃基、杂环、芳基或杂芳基部分可由选自由下列组成的组的一个或多个取代基取代：烷基、芳基、杂环、碳环、卤代、羟基、被保护的羟基、烷氧基、酰基、芳氧基、烷基酯、芳基酯、烷酰基、芳酰基、羧基、被保护的羧基、氰基、硝基、氨基、取代的氨基、(单取代的)氨基、(双取代的)氨基、保护的氨基、酰氨基、内酰胺、脲、氨基甲酸乙酯和磺酰基。

在式II-a或II-b的化合物的各种实施方案中，R₃是-H、-OH、-O(CH₂)_nX或-(CH₂)_nX，其中n是1、2、3或4，并且X是-NH₂、-NH(烷基)、-N(烷基)₂、-OH、-O-烷基、-O-芳基、-SO₂(烷基)、-SO₂NH₂、-SO₂NH(烷基)、NHSO₂(烷基)、杂芳基、N-连接的杂环或C-连接的杂环。在某些实施方案中，R₃是-H或-OH。在其他的实施方案中，R₃是-O(CH₂)_nX或-(CH₂)_nX，其中X是-NH₂。非限制性的实例包括：-OCH₂CH₂NH₂和-CH₂CH₂NH₂。在还有另外的实施方案中，R₃是-O(CH₂)_nX或-(CH₂)_nX，其中X是-NH(烷基)，其中烷基是取代的或未取代的。烷基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、庚基(septyl)、庚基、壬基和癸基。R₃-O(CH₂)_nNH(烷基)或-(CH_2nNH(烷基)的实例包括但不限于-OCH₂CH₂NHMe、-OCH₂CH₂CH₂NHEt、-CH₂CH₂NH(异丙基)和-CH₂CH₂CH₂NHMe。

本发明还提供式II、II-a和II-b的化合物，其中R₃是-O(CH₂)_nX或-(CH₂)_nX，其中X是-N(烷基)₂，其中烷基是取代的或未取代的。烷基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、庚基(septyl)、庚基、壬基和癸基。R₃-O(CH₂)_nN(烷基)₂或-(CH₂)_nN(烷基)₂的实例包括但不限于-OCH₂CH₂(Me)₂、-OCH₂CH₂CH₂N(Et)₂、-CH₂CH₂N(异丙基)₂和-CH₂CH₂CH₂N(Me)₂。可选择地，R₃是-O(CH₂)_nX或-(CH₂)_nX，其中X是-OH。实例包括但不限于-OCH₂CH₂OH、-OCH₂CH₂ CH₂OH、-CH₂CH₂OH和-CH₂CH₂CH₂OH。

在还有另外的实施方案中，R₃是-O(CH₂)_nX或-(CH₂)_nX，其中X是O-烷基，其中烷基是未取代的或取代的。烷基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、庚基(septyl)、庚基、壬基和癸基。R₃的实例是-O(CH₂)_nO-烷基或-(CH₂)_nO-烷基，包括但不限于-OCH₂CH₂OMe、-OCH₂CH₂CH₂OEt、-CH₂CH₂O(异丙基)和-CH₂CH₂ CH₂OEt。

在某些实施方案中，R₃是-O(CH₂)_nX或-(CH₂)_nX，其中X是-O-芳基，其中芳基是取代的或未取代的。芳基包括但不限于苯基、萘基和芴基。R₃的实例包括但不限于-O(CH₂)_nO-芳基或-(CH₂)_nO-芳基，包括但不限于-OCH₂CH₂O-苯基、-OCH₂CH₂CH₂O-(3-甲氧基-苯基)、-CH₂CH₂O-(4-甲基苯基)和-CH₂CH₂CH₂O-苯基。在其他的实施方案中，R₃是-O(CH₂)_nX或-(CH₂)_nX，其中X是-SO₂(烷基)并且烷基是未取代的或取代的。烷基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、庚基(septyl)、庚基、壬基和癸基。实例包括但不限于-OCH₂CH₂SO₂Me、-OCH₂CH₂CH₂SO₂Et、-CH₂CH₂SO₂(丁基)和-CH₂CH₂CH₂SO₂Me。此外，R₃是-O(CH₂)_nX或-(CH₂)_nX，其中X是-SO₂NH₂或-SO₂NH(烷基)并且烷基是未取代的或取代的。烷基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、庚基(septyl)、庚基、壬基和癸基。实例包括但不限于-OCH₂CH₂SO₂NH₂、-OCH₂CH₂CH₂SO₂NHMe、-CH₂CH₂SO₂NH₂和-CH₂CH₂CH₂SO₂NHMe。

在其他的实施方案中，R₃是-O(CH₂)_nX或-(CH₂)_nX，其中X是NHSO₂(烷基)并且烷基是未取代的或取代的。烷基但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、庚基(septyl)、庚基、壬基和癸基。实例包括但不限于-OCH₂CH₂NHSO₂Me、-OCH₂CH₂CH₂NHSO₂Et、-CH₂CH₂NHSO₂Me和-CH₂CH₂CH₂SO₂NHSO₂Et。

本发明还提供式II-a和II-b的化合物，其中R₃是-O(CH₂)_nX或-(CH₂)_nX，其中X是杂芳基并且杂芳基是未取代的或取代的。在某些实施方案中，杂芳基部分是单环的5元杂芳基。单环的杂芳基包括但不限于吡咯基、咪唑基、噻唑基和吡唑基。另外的非限制性单环的5元杂芳基部分包括下列式：

对于基团D、E和F的化合物，Y选自由下列组成的组：-O、-S、-NH、-N-烷基和-N-酰基；X₃选自由下列组成的组：-H、-CH₃、-Cl、-I、-F、CF₃和-OCH₃；并且X₄和X₅当存在时，独立地选自由下列组成的组：H和CH₃。

可选择地，杂芳基可以是六元杂芳基部分。六元杂芳基部分包括但不限于2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、嘧啶基、吡嗪基或三嗪基。非限制性的R₃-O(CH₂)_n-杂芳基或-(CH₂)_n杂芳基包括-OCH₂CH₂-吡啶基、-OCH₂CH₂CH₂-(4-甲基-吡啶-2-基)、-CH₂CH₂-(噻唑基)和-CH₂CH₂CH₂-吡嗪基。

在还有另外的实施方案中，R₃是-O(CH₂)_nX或-(CH₂)_nX，其中X是N-连接的杂环或C-连接的杂环并且杂环是未取代的或取代的。杂环包括但不限于氮杂环丁基、吡咯烷基、吗啉基、哌啶基或哌嗪基。非限制性的R₃-O(CH₂)_n-杂环(其包括N-连接的或C-连接的杂环两者)或-(CH₂)_n杂环(其包括N-连接的或C-连接的杂环两者)包括-OCH₂CH₂-吗啉基、-OCH₂CH₂CH₂-(4N-甲基-哌嗪基)、-CH₂CH₂-(吡咯烷-2-基)和-CH₂CH₂CH₂-(4N-甲基-哌嗪基)。

形成X的全部或一部分的烷基、芳基、杂芳基和杂环部分可由一个或多个取代基取代，其选自由下列组成的组：烷基、芳基、杂环、碳环、卤代、羟基、被保护的羟基、烷氧基、酰基、芳氧基、烷基酯、芳基酯、烷酰基、芳酰基、羧基、被保护的羧基、氰基、硝基、氨基、取代的氨基、(单取代的)氨基、(双取代的)氨基、被保护的氨基、酰氨基、内酰胺、脲、氨基甲酸乙酯和磺酰基。此外，形成X的全部或一部分的烷基和杂环部分可由氧代取代。

本发明的化合物中可用的其他的R₃部分列于表2b、2e和2h中。

在式II、II-b或上文描述的另一种电子等排物骨架的化合物的各种实施方案中，R₄-R₇的每个独立地选自由下列组成的组：

-H、-I、-Cl、-F、-CH₃、-OCH₃、-OH、-NH₂、-NO₂、在形成R₃-R₇的一部分的部分中，烷基和芳基部分是未取代的或取代的。形成R₃-R₇的一部分的烷基部分包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、庚基(septyl)、庚基、壬基和癸基。形成R₃-R₇的一部分的芳基部分包括但不限于苯基、萘基和芴基。形成R₃-R₇的一部分的烷基和芳基部分可由一个或多个取代基取代，其选自由下列组成的组：烷基、芳基、杂环、碳环、卤代、羟基、被保护的羟基、烷氧基、酰基、芳氧基、烷基酯、芳基酯、烷酰基、芳酰基、羧基、被保护的羧基、氰基、硝基、氨基、取代的氨基、(单取代的)氨基、(双取代的)氨基、被保护的氨基、酰氨基、内酰胺、脲、氨基甲酸乙酯和磺酰基。

在一个实施方案中，R₄-R₇中的至少一个是氢。在其他的实施方案中，当R₃存在时，R₃是氢。在另外的实施方案中，R₄-R₇中的至少两个是氢。可选择地，R₄-R₇中的至少两个是氢并且其余的R₄-R₇基团(以及R₃，如果存在的话)独立地选自由下列组成的组：-Cl、-F、CH₃和-OCH₃。在还有其他的实施方案中，R₅和R₆是取代的并且取代的部分，对于每个取代的位置，独立地选自由下列组成的组：-Cl、-F、-CH₃和-OCH₃，而R₄和R₇(以及R₃，如果存在的话)是氢。

在某些其他实施方案中，R₄和R₅、R₅和R₆、或R₆和R₇由键连接在一起形成环；或任选地，R₄和R₅、R₅和R₆、或R₆和R₇连接在一起形成1，2-(亚甲二氧基)苯环系统，例如在一个实施方案中，环由选自由下列组成的组的结构组成：在一个另外的实施方案中，R₅和R₆由具有选自由下列组成的组的结构的环之一连接：

在本发明的某些实施方案中，式II的化合物不是

在还有另一个实施方案中，本发明提供下文所示的式II-a的化合物。

在某些实施方案中，式II-a的化合物是其中R₁选自由下列组成的组的化合物：-H或m＝0，1，2并且V选自烷基、芳基、 X₁-X₅独立地选自由下列组成的组：-H、-烷基、-I、-Br、-Cl、-F、-O-烷基、 Y选自由下列组成的组：-O、-S、-NH、-N-烷基和-N-酰基；X₆选自由下列组成的组：-H、-CH₃、-I、-Cl、-F、CF₃和-OCH₃；并且X₇和X₈独立地选自由下列组成的组：H和CH₃；R₄-R₇每个独立地选自下列组成的组：-H、-I、-Br、-Cl、-F、-CH₃、-CN、-OH、-OCH₃、-NO₂、-NH₂、-OCH₂CH₂O-烷基、-NHCO(烷基)、-NHCO(芳基)、或者，任选地，R₄和R₅、R₅和R₆、或R₆和R₇由键连接在一起形成5、6或7元环；或任选地，R₄和R₅、R₅和R₆、或R₆和R₇连接在一起形成1，2-(亚甲二氧基)苯环系统。

在其他的实施方案中，式II-a的化合物是其中R₃是-O(CH₂)_nX或-(CH₂)_nX的化合物，其中X选自由下列组成的组：-OCH₃、OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂OH、-OCH₂CH₂OCH₃、

在其他的实施方案中，式II-a的化合物是其中R₁选自由下列组成的组的化合物：

在还有另外的实施方案中，式II-a的化合物是其中R₁是-CH₂V的化合物，其中V选自由下列组成的组：环烃基、杂环、芳基和杂芳基；R₃是-O(CH₂)_nX或-(CH₂)_nX，其中X选自由下列组成的组：-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂OH、-OCH₂CH₂OCH₃、

R₄和R₇都是氢并且R₅和R₆都是除了氢之外的取代基。

在还有另外的实施方案中，式II-a的化合物是其中R₁选自由下列组成的组的化合物： R₃选自：-O(CH₂)₂NMe₂、-O(CH₂)₂NEt₂、-O(CH₂)₃NEt₂、 R₄和R₇都是氢；并且R₅和R₆都不是氢。

本发明还提供式II-a的化合物，其中R₁是-CH₂V，其中V选自环烃基、杂环、芳基或杂芳基；R₃是-O(CH₂)_nX或-(CH₂)_nX，其中X选自由下列组成的组：-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂OH、-OCH₂CH₂OCH₃、

R₄是-NHC(O)芳基、-NHC(O)烷基、-NHSO₂芳基或-NHSO₂烷基；R₇是氢并且R₅和R₆都是除了氢之外的取代基。

式II-a的化合物还是其中R₁选自由下列组成的组的化合物：

R₃选自：-O(CH₂)₂NMe₂、-O(CH₂)₂NEt₂、-O(CH₂)₃NMe₂、-O(CH₂)₃NEt₂、 R₄是-NHC(O)芳基、-NHC(O)烷基、-NHSO₂芳基或-NHSO₂烷基；R₇是氢并且R₅和R₆都不是氢。

表1显示本发明另外的化合物的结构(也称为“抑制剂”(化合物和抑制剂当适用于本文特定的用途时是可互换的))以及制备它们的示例性起始材料。

表1

表2a显示以下文结构为基础的本发明的另外的抑制剂的结构。

具有式II-a的结构的本发明的某些非限制性示例性化合物包括其中R₁是表2a中所描述的任何R₁部分，连同表2b中描述的任何R₃部分和表2c中描述的任何R₄、R₅、R₆和R₇的那些化合物。式II-a的化合物包括R₁、R₃、R₄、R₅、R₆和R₇的任何组合。式II-a的另外的示例性化合物示例性说明于表3、4和5。

表2a.式II-a的R₁部分包括但不限于下列：

表2b.式II-a的化合物的R₃部分包括但不限于下列：

表2c.式II-a的化合物的R₄、R₅、R₆和R₇部分的每一个包括但不限于下列：

具有式II-b的结构的本发明的某些非限制性示例性化合物包括其中R₁是表2d中所描述的任何R₁部分，连同表2e中描述的任何R₃部分和表2f中描述的任何R₄、R₅、R₆和R₇的那些化合物。式II-b的化合物包括R₁、R₃、R₄、R₅、R₆和R₇的任何组合。式II-b的另外的示例性化合物示例性说明于表3、4和5。

表2d.式II-b的R₁部分包括但不限于下列：

表2e 式II-a的化合物的R₃部分包括但不限于下列：

表2f.式II-a的化合物的R₄、R₅、R₆和R₇部分的每一个包括但不限于下列：

本发明的实施方案包括式II-a或II-b的化合物的前药。

在一个实施方案中，本发明提供式III的化合物：

或其药学上可接受的盐、异构体、互变异构体或前药，其中

m、V、R₃和R₅如上文实施方案的任何方面中所定义的。在另一个实施方案中：

m是1或2；

V是未取代的或单取代的苯基、环己基或6元杂环基团，其中所述杂环基团含有1个氮原子；

R₃是-O-L-X；

L是未取代的或单取代的C₁-C₅亚烷基；

X是未取代的或是取代的含有至少1个氮原子的5、6或7元非芳香族杂环、-N(R₂₀)₂或4-取代的苯基；

每个R₂₀独立地是取代的或未取代的C₁-C₃烷基；

R₁₆是取代的或未取代的C₁-C₃烷基。

在另一个实施方案中，m是1。在另一个实施方案中，m是2。

在另一个实施方案中，本发明提供式III的化合物，其中X是5、6或7元非芳香族杂环，其是未取代的或是由1-2个-OH、C₁-C₃烷氧基、-CO₂R₁₇、-CON(R₁₈)₂、取代的或未取代的5或6元芳基或杂芳基基团、C₁-C₃烷基或由-OH、C₁-C₃烷氧基、-CO₂R₁₇、-NR₂₃R₂₄、-CO₂H取代的C₁-C₃烷基取代的；

R₁₇是取代的或未取代的C₁-C₆烷基；

每个R₁₈独立地选自氢或取代的或未取代的C₁-C₃烷基；

R₂₃和R₂₄独立地是氢、取代的或未取代的芳基、杂芳基、C₁-C₃烷基、或R₂₃和R₂₄与它们所连接的氮原子一起形成取代的或未取代的5-7元非芳香族杂环。

在另一个实施方案中，X是1-吡咯烷基，其是未取代的或由1-2个-OH、C₁-C₃烷氧基、取代的或未取代的6元芳基、C₁-C₃烷基或由-OH、C₁-C₃烷氧基或-NR₂₃R₂₄取代的C₁-C₃烷基取代的。在另一个实施方案中，X是取代的或未取代的哌啶基。在另一个实施方案中，X是7元非芳香族杂环基团，其中所述7元非芳香族杂环基团含有1个氮原子。

在另一个实施方案中，本发明提供式III的化合物，其中R₅是氢、卤代、取代的或未取代的5、6、7元杂环、或-NR₂₁R₂₂。在另一个实施方案中，R₅是氢。在另一个实施方案中，R₅是卤代。在另一个实施方案中，R₅是取代的或未取代的5元杂环。在另一个实施方案中，R₅是取代的或未取代的6元杂环。在另一个实施方案中，R₅是取代的或未取代的7元非芳香族杂环。在另一个实施方案中，R₅是NR₂₁R₂₂。在一个实施方案中，R₂₁和R₂₂都是取代的或未取代的C₁-C₃烷基。在另一个实施方案中，R₂₁是取代的或未取代的C₁-C₃烷基。在另一个实施方案中，R₂₁是氢。在另一个实施方案中，R₂₂是-COR₁₆或-SO₂R₁₆。在另一个实施方案中，R₂₂是C₃-C₈环烃基。在另一个实施方案中，R₂₂是芳基或杂芳基。

在一个实施方案中，本发明提供下文表6中公开的化合物。在另一个实施方案中，本发明提供下文表7中公开的化合物。

本文作为病毒抑制剂提供的化合物通常能够体外和/或体内抑制病毒复制。例如本发明的化合物当与HCV感染的细胞(例如，HCV感染的肝细胞)接触时，由HCV感染的细胞产生的感染性HCV病毒颗粒数量与由未与抑制剂接触的细胞产生的感染性HCV病毒颗粒的数量相比减少至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或至少约95％或甚至更高。

可获得许多方法测定化合物是否在体外和/或体内减少病毒载量。体外测定通常确定培养基中存在的病毒颗粒的数目，而体内测定通常测量感染的受治疗者的体液中存在的病毒滴度。对于病毒滴度测量来说适合的体液包括但不限于血液、血清、血浆、唾液、精液、脊髓液、尿、汗和脑脊髓液。体外或体内检测病毒载量的通常使用的方法包括定量聚合酶链式反应(PCR)和支链的DNA(bDNA)测试。已经开发了用于测量HCV RNA的病毒载量(滴度)的许多定量测定。许多这些测定是商业上可得的，包括定量逆转录PCR(RT-PCR)(Amplicor HCV Monitor^TM，Roche MolecularSystems，New Jersey)和支链DNA(脱氧核糖核酸)信号放大测定(Quantiplex^TM HCV RNA Assay(bDNA)，Chiron Corp.，Emeryville，California)。参见例如Gretch等人(1995)Ann.Intern.Med.123：321-329。同样感兴趣的是由Chiron Corporation以商品名Procleix出售的核酸测试(NAT)，NAT同时测试HIV-1和HCV的存在。参见例如Vargo等人(2002)Transfusion 42：876-885。

本文提供的化合物还可通过与所述化合物不存在下NS4B多肽与HCV负链RNA的3’UTR结合相比，它们抑制NS4B多肽与HCV负链RNA的3’UTR结合至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、或至少约95％或更高的能力来表征。

在某些实施方案中，本发明的抑制剂以约100μM至50μM、约50μM至25μM、约25μM至10μM、约10μM至5μM、约5μM至1μM、约1μM至500nM、约500nM至400nM、约400nM至300nM、约300nM至250nM、约250nM至200nM、约200nM至150nM、约150nM至100nM、约100nM至50nM、约50nM至30nM、约30nM至25nM、约25nM至20nM、约20nM至15nM、约15nM至10nM、约10nM至5nM、少于约5nM、少于约1nM、少于约0.1nM、或少于约0.01nM的50％抑制浓度(IC₅₀)抑制NS4B多肽与HCV负链RNA的3’UTR结合。

在另外的实施方案中，本发明的抑制剂缺少与HERG K⁺通道的实质交叉反应性。药物诱导的心律失常例如QT延长是新型药物的发现、开发和使用中严重的安全问题。药物诱导的QT间期延长是研究的活跃领域并且已经被综述(Pearlstein等人J.Med.Chem.(2003)，46(11)：2017-2022；Fermini等人，Annual Reports in Medicinal Chemistry(2004)，39：323；http://www.qtdrugs.org)。QT延长常见的原因是心脏HERG K⁺通道被药物抑制。来自非常不同的化学类别和治疗应用的药物已经显示封闭HERG活性。已知为HERG通道抑制剂的许多药物在与治疗所期望的浓度相似的浓度与通道相互作用。避免药物诱导的QT间期延长的发生的一个策略是选择显示对HERG K⁺通道减少的亲和性的候选药物。这一性质可通过使用由hERG基因稳定转染的HEK293或CHO细胞并利用膜片钳技术确定Ikr电流的体外测定来表征。相应地，一些优选的本发明的抑制剂表现出对HERGK⁺通道减少的亲和性或缺少与HERG K⁺通道的实质交叉反应性。在一个方面，本发明的示例性的抑制剂具有高于约100nM的HERG IC₅₀。在另一个方面，本文描述的抑制剂具有高于约500nM、1,000nM、5,000nM、1μM、5μM、10μM、50μM、100μM或甚至更高的HERG IC₅₀。

合成方法

通常，所提供的抑制剂可根据本领域技术人员已知的有机合成技术和/或根据本文提供的合成方案来制备。当需要时，主题化合物的合成可用商业上可获得的化学品和/或用化学文献中描述的化合物来起始。“商业上可获得的化学品”可以从标准的商业来源获得，包括Acros Organics(PittsburghPA)、Aldrich Chemical(Milwaukee WI，包括Sigma Chemical和Fluka)、ApinChemicals Ltd.(Milton Park UK)、Avocado Research(Lancashire U.K.)、BDHInc.(Toronto、Canada)、Bionet(Cornwall、U.K.)、Chemservice Inc.(WestChester PA)、Crescent Chemical Co.(Hauppauge NY)、Eastman OrganicChemicals、Eastman Kodak Company(Rochester NY)、Fisher Scientific Co.(Pittsburgh PA)、Fisons Chemicals(Leicester shire UK)、Frontier Scientific(Logan UT)、ICN Biomedicals，Inc.(Costa Mesa CA)、Key Organics(CornwallU.K.)、Lancaster Synthesis(Windham NH)、Maybridge Chemical Co.Ltd.(Cornwall U.K.)、Parish Chemical Co.(Orem UT)、Pfaltz & Bauer，Inc.(Waterbury CN)、Polyorganix(Houston TX)、Pierce Chemical Co.(RockfordIL)、Riedel de Haen AG(Hanover、Germany)、Spectrum Quality Product，Inc.(New Brunswick、NJ)、TCI America(Portland OR)、Trans World Chemicals，Inc.(Rockville MD)和Wako Chemicals USA，Inc.(Richmond VA)。此外，本领域普通技术人员已知的方法可通过不同的参考书目和数据库来确定。详细描述在本文描述的抑制剂的制备中有用的反应剂的合成或提供对描述制备的文章的参考的适合的参考书目和论文包括例如“Synthetic OrganicChemistry(合成的有机化学)”，John Wiley & Sons，Inc.，New York；S.R.Sandler等人，“Organic Functional Group Preparations(有机官能团的制备)”第二版，Academic Press，New York，1983；H.O.House，“Modern SyntheticReactions(现代合成反应)”，第二版，W.A.Benjamin，Inc.Menlo Park，Calif.1972；T.L.Gilchrist，“Heterocyclic Chemistry(杂环的化学)”，第二版，JohnWiley & Sons，New York，1992；J.March，“Advanced Organic Chemistry：Reactions，Mechanisms and Structure(高级有机化学：反应、机制和结构)”，第四版，Wiley Interscience，New York，1992。详细描述在本文描述的化合物的制备中有用的反应剂的合成或提供对描述制备的文章的参考的适合的另外的参考书目和论文包括例如Fuhrhop，J.和Penzlin G.“Organic Synthesis：Concepts，Methods，Starting Materials(有机合成：概念、方法、起始材料)”，第二版、校订版和扩展版(1994)John Wiley & Sons ISBN：3 527-29074-5；Hoffman，R.V.“Organic Chemistry，An Intermediate Text(有机化学，中间体教科书)”(1996)Oxford University Press，ISBN 0-19-509618-5；Larock，R.C.“Comprehensive Organic Transformations：A Guide to Functional GroupPreparations(综合有机转化：官能基团制备的指南)”第二版(1999)Wiley-VCH，ISBN：0-471-19031-4；March，J.“Advanced Organic Chemistry：Reactions，Mechanisms，and Structure(高级有机化学：概念、机制和结构)”第四版(1992)John Wiley & Sons，ISBN：0-471-60180-2；Otera，J.(编辑)“Modern Carbonyl Chemistry(现代羰基化学)”(2000)Wiley-VCH，ISBN：3-527-29871-1；Patai，S.“Patai′s 1992 Guide to the Chemistry of FunctionalGroups(官能基团的化学的Patai的1992年指南)”(1992)Interscience ISBN：0-471-93022-9；Solomons，T.W.G.“Organic Chemistry(有机化学)”第七版(2000)John Wiley & Sons，ISBN：0-471-19095-0；Stowell，J.C.，“IntermediateOrganic Chemistry(中间体有机化学)”第二版(1993)Wiley-Interscience，ISBN：0-471-57456-2；“Industrial Organic Chemicals：Starting Materials andIntermediates：An Ullmann′s Encyclopedia(工业有机化学：起始材料和中间体：Ullmann百科全书)”(1999)John Wiley & Sons，ISBN：3-527-29645-X，在8卷中；“Organic Reactions(有机反应)”(1942-2000)John Wiley & Sons，在超过55卷中；以及“Chemistry of Functional Groups(官能基团的化学)”John Wiley & Sons，在73卷中。除了指明相反之外，本文描述的反应在大气压下，通常在-10℃至200℃的温度范围中发生。此外，除了如另外说明的以外，反应时间和条件往往是大约的，例如在约大气压下在约-10℃至约110℃的温度范围中在超过约1至24小时的时间段中发生；将反应物留置运行过夜平均约16小时的时间段。

除了指明相反之外，本文描述的反应中使用的溶剂是惰性有机溶剂。除了指明相反之外，对于每一克限定的试剂，一个cc(或mL)的溶剂构成一个体积当量。

本文描述的化学实体和中间体的分离和纯化可通过，如果需要，任何适合的分离或纯化程序例如诸如过滤、提取、结晶、柱层析、薄层层析或厚层层析或这些程序的组合来实现。可通过引用下文的实施例来获得适合的离析和分离程序的特定描述。然而，其他等同的离析或分离程序同样可被使用。

当需要时，本发明的化合物的(R)-和(S)-异构体，如果存在，可通过本领域技术人员已知的方法来分辨，例如，通过形成可通过例如结晶分离的非对映异构的盐；经由形成可通过例如结晶、气相-液相或液相层析分离的非对映异构的衍生物；使用对映体特异性试剂的一种对映体的选择性反应例如酶氧化或还原(之后分离修饰的和未修饰的对映体)；或在手性环境中例如在手性载体诸如具有结合的手性配体的二氧化硅上或在手性溶剂存在下的气相-液相或液相层析。可选择地，特定的对映体可通过使用光学活性的试剂、底物、催化剂或溶剂的不对称合成或通过将一种对映体通过不对称转化转换为另一种对映体来合成。

本文描述的化合物可任选地与药学上可接受的酸接触以形成相应的酸加成盐。

任选地取代的起始化合物和其他试剂中的许多是商业上可获得的，例如从Aldrich Chemical Company(Milwaukee，WI)，或可由本领域技术人员使用常用的合成方法来容易地制备。

本发明的化合物可通过本领域中已知的合成方法与本公开内容的适合组合合成。下文的讨论被用来示例性说明对在制备本发明的化合物的用途来说可用的不同方法中的某些，并且不预期限制可用于制备本发明的化合物的反应的范围或反应顺序。

如方案1中所描述的，本发明的化合物可通过用R₁₁X(X＝Cl、Br、I、OM、OT以及类似物)将1-取代的-苄基-1H-吲唑-3(2H)-酮1.1 O-烷基化来制备。

方案1

方案2示例性说明用于通过使用取代的苄基亲电子试剂2.2(X＝Cl、Br、I、OM、OT以及类似物)将1H-吲唑-3(2H)-酮2.1 N-烷基化合成1-取代的-苄基-1H-吲唑-3(2H)-酮2.3的一般方法。

方案2

方案3示例性说明本发明的化合物的合成。3-吲唑啉酮(indazolinone)3.1可以是通过用溶于EtOH的NaOH处理之后用取代的苄基卤处理以高产率烷基化来产生3.2(日本专利JP49007278)。去质子化之后用被保护的溴代乙醇烷基化产生3.3。乙醇的去保护之后用伯胺和仲胺和/或醇盐活化和置换产生3.4。

方案3

方案4示例性说明本发明的化合物的合成方法。用PBu₃和重氮二哌啶基酰胺处理3-吲唑啉酮4.1产生醚4.2。用NaH去质子化之后烷基化产生通式4.3的化合物。

方案4

方案5示例性说明通过用苄基卤将吲唑5.1烷基化合成1-或2-(取代的-苄基)吲唑5.2和5.3(X＝Cl、Br、I、OM、OT以及类似物)。

方案5

本发明的抑制剂中的一种或多种的合成可使用保护基团和封闭基团。烯丙基封闭基团在酸-和碱-保护基团存在时是有用的，因为前者是稳定的并且随后可通过金属催化剂或pi酸催化剂除去。例如，烯丙基封闭的羧酸可在对酸敏感的叔丁基氨基甲酸酯或对碱敏感的乙酸胺保护基团存在下用钯(0)催化的反应去保护。还有另一种形式的保护基团是化合物或中间体可与其连接的树脂。只要残基与树脂连接，官能团就被封闭并且不能反应。一旦从树脂释放，官能团就可以反应。

典型的封闭/保护基团是本领域中已知的并且包括但不限于下列部分：

药物剂型和施用途径

本发明提供包含与或不与药学上可接受的赋形剂、稀释剂、载体和/或佐剂一起的本文公开的一种或多种抑制剂的药物组合物。在某些实施方案中，药物组合物被配制为基本上不含赋形剂。因此，在一个实施方案中，本发明提供包含或主要由式III的化合物和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂组成的药物组合物。

在另外的实施方案中，抑制剂可与一种或多种药学上可接受的辅助物质一起配制。

在一个实施方案中，抑制剂可与另一种抗病毒剂组合以制备本发明的组合物，并且组合物可包括一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂、载体和/或佐剂。

各种各样的药学上可接受的赋形剂是本领域中已知的。药学上可接受的赋形剂已经被详细描述于各种出版物中，包括例如A.Gennaro(2000)“Remington：The Science and Practice of Pharmacy(雷明顿：药剂学的科学和实践)，”第20版，Lippincott，Williams，& Wilkins；Pharmaceutical DosageForms and Drug Delivery Systems(药物剂型和药物递送系统)(1999)H.C.Ansel等人编辑，第7版，Lippincott，Williams，& Wilkins；和Handbook ofPharmaceutical Excipients(药物赋形剂的手册)(2000)A.H.Kibbe等人编辑，第3版，Amer.Pharmaceutical Assoc。

药学上可接受的赋形剂，诸如媒介物、佐剂、载体或者稀释剂，对于公众是容易获得的。此外，药学上可接受的辅助物质，诸如pH调节剂和缓冲剂、等渗调节剂、稳定剂、湿润剂以及类似物，对于公众是容易获得的。

在本公开内容的实施方案中，用能够产生理想效果(例如，降低病毒量，降低肝纤维化，提高肝功能以及类似效果)的任何方法将抑制剂施用于宿主。因此，抑制剂可以被掺入到用于治疗性施用的多种制剂中。例如，抑制剂可以通过与合适的药学上可接受的载体或者稀释剂组合配制成药物组合物，并且可以被配制成固体、半固体、液体或者气体形式的制剂，诸如片剂、胶囊、粉末、颗粒、软膏、溶液、栓剂、注射剂、吸入剂和气溶胶。

在药物剂型中，抑制剂可以以其药学上可接受的盐的形式施用，或者主题活性剂可以被单独使用或与其它药学上活性的化合物适当的联合以及组合使用。下面的方法和赋形剂仅为示例性的并且绝非限制性的。

对于口服制剂，抑制剂可以单独被使用或者与合适的添加剂组合使用以制造片剂、粉末、颗粒或者胶囊，例如与下列一起：常规添加剂，诸如乳糖、甘露醇、玉米淀粉或者马铃薯淀粉；粘合剂，诸如晶体纤维素、纤维素衍生物、阿拉伯胶、玉米淀粉或者明胶；崩解剂，诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉或者羟甲基纤维素钠；润滑剂，诸如滑石或者硬脂酸镁；以及如果必要时，稀释剂、缓冲剂、润湿剂、防腐剂和调味剂。

通过将抑制剂溶解、悬浮或者乳化在水或者非水溶剂，诸如植物油或者其它相似的油、合成脂肪酸甘油酯，高级脂肪酸的酯或者丙二醇中；并且如果必要时，与常规添加剂诸如增溶剂、等离子剂、悬浮剂、乳化剂、稳定剂和防腐剂一起溶解、悬浮或者乳化，将抑制剂的实施方案配制成用于注射的制剂。

抑制剂的实施方案可以经吸入施用的气溶胶制剂使用。抑制剂的实施方案可以被配制到加压的可接受的推进剂，诸如二氯二氟甲烷、丙烷、氮气和类似物中。

此外，抑制剂的实施方案可以通过与多种基质诸如乳化基质或者水溶性基质混合来制成栓剂。抑制剂的实施方案可以通过栓剂经直肠施用。栓剂可以包括媒介物诸如可可脂、碳蜡和聚乙二醇，其在体温下融化，而在室温下固化。

可提供用于口服或者直肠施用的单位剂量形式，诸如糖浆、酏剂以及悬浮剂，其中每个剂量单位，例如，一茶匙、一汤匙、片剂或者栓剂，含有包含一种或者多种抑制剂的预先确定的量的组合物。相似地，用于注射或者静脉施用的单位剂量形式可以包括作为在无菌水、生理盐水或者其它药学上可接受的载体中的溶液的组合物中的抑制剂。

抑制剂的实施方案可根据本发明配制在可注射的组合物中。通常，可注射组合物被制备成液体溶液或者悬浮液；也可以制备在注射之前适合溶解或悬浮于液体媒介物的固体形式。该制剂也可以被乳化，或者活性成分(抑制剂)也可根据本发明被包裹在脂质体媒介物中。

在一个实施方案中，配制抑制剂以便通过持续递送系统递送。术语“持续递送系统”在文中与“控制递送系统”可交换使用，并且包括与导管、注射装置，以及本领域已知的多种类似装置组合的持续的(例如，控制的)递送装置(例如，泵)。

机械的或者机电的输液泵也可适合本公开内容的使用。这种装置的实例包括描述在下列中的那些，例如，美国专利第4,692,147、4,360,019、4,487,603、4,360,019、4,725,852、5,820,589、5,643,207、6,198,966以及类似文献。总的来说，抑制剂的递送可以使用多种可再填充的泵系统中的任一种来完成。泵随时间提供一致的、控制的释放。在一些实施方案中，抑制剂是在药物不可渗透的容器中的液体制剂，并且以连续的方式向个体递送。

在一种实施方案中，药物递药系统是至少部分可植入的装置。可植入装置可以使用本领域熟知的方法和装置在任何合适的植入位置植入。植入位置是受治疗者体内的药物递送装置被导入并且放置的位置。植入位置包括，但不一定限于，真皮下、皮下、肌内或者受治疗者体内的其它合适位置。在一些实施方案中使用皮下植入位置，因为便于植入和移除药物递送装置。

适合在本公开内容中使用的药物释放装置可以是基于多种操作方式中的任何一种。例如，药物释放装置可以基于扩散系统、对流系统，或者侵蚀系统(例如，基于侵蚀的系统)。例如，药物释放装置可以是电化学泵、渗透泵、电渗泵、蒸汽压泵或者渗透爆式基质(osmotic bursting matrix)，例如，其中药物被掺入聚合物中并且该聚合物提供药物剂型的释放同时伴随着药物-浸渗的聚合材料(例如，生物降解的药物-浸渗的聚合材料)的降解。在其它实施方案中，药物释放装置基于电扩散系统、电解泵、泡腾泵、压电泵、水解系统以及类似系统。

基于机械或者机电输液泵的药物释放装置也可以适合与本公开内容一起使用。这些装置的实例包括描述在下列中的那些装置，例如，美国专利第4,692,147、4,360,019、4,487,603、4,360,019、4,725,852号以及类似文献。总的来说，主题治疗方法可以使用多种可再填充的、不可交换的泵系统中的任一种完成。泵和其它对流系统通常是优选的，归因于它们随时间更加一致、控制的释放。在些实施方案中，使用渗透泵，归因于它们更加一致的控制的释放与相对小的大小的组合优势(参见，例如，PCT公开申请第WO 97/27840号和美国专利第5,985,305和5,728,396号)。适合在本公开内容中使用的示例性渗透驱动装置包括，但不一定限于，描述在下列中的那些：美国专利第3,760,984、3,845,770、3,916,899、3,923,426、3,987,790、3,995,631、3,916,899、4,016,880、4,036,228、4,111,202、4,111,203、4,203,440、4,203,442、4,210,139、4,327,725、4,627,850、4,865,845、5,057,318、5,059,423、5,112,614、5,137,727、5,234,692、5,234,693、5,728,396以及类似文献。

在一些实施方案中，药物递送装置是可植入的装置。药物递送装置可以使用本领域熟知的方法和装置在任何合适的植入位置植入。如本文所注，植入位置是受治疗者体内药物递送装置被导入和放置的位置。植入位置包括，但不一定限于真皮下、皮下、肌内或者受治疗者体内其它合适的位置。

在一些实施方案中，活性剂使用可植入药物递送系统递送，例如，可编程以提供药剂施用的系统。示例性可编程的、可植入的系统包括可植入输液泵。示例性可植入输液泵，或者可用于与这些泵连接使用的装置被描述在，例如，美国专利第4,350,155、5,443,450、5,814,019、5,976,109、6,017,328、6,171,276、6,241,704、6,464,687、6,475,180和6,512,954中。可被适用于本发明内容的另外的示例性装置是Synchromed输液泵(Medtronic)。

抑制剂的合适的赋形剂媒介物是例如水、盐水、右旋糖、甘油、乙醇或者类似物，及其混合物。此外，如果必要时，媒介物可以包含少量的辅助物质，诸如润湿剂或者乳化剂或者pH缓冲剂。对于本领域技术人员来说，制备所述剂型的方法是已知的，或者在考虑本公开内容时将是明显的。参见，例如，Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明顿药物科学)，MackPublishing Company，Easton，Pennsylvania，第17版，1985。在任何情况中，施用的组合物或剂型将包括足够在被治疗的受治疗者体中达到期望状态的量的抑制剂。

本发明的组合物包括包含持续释放或者控制释放基质的组合物。此外，本发明的实施方案可以与使用持续释放剂型的其它治疗组合使用。如本文所用，持续释放基质是由可通过酶水解或者酸基水解或者通过溶解降解的物质通常是聚合物制造的基质。嵌入到体内后，基质受酶和体液作用。持续释放基质期望地选自可生物相容的材料，诸如脂质体、聚交酯(聚乳酸)、聚乙醇酸交酯(羟基乙酸的聚合物)、聚交酯共乙交酯(乳酸和羟基乙酸的共聚物)、聚酐类、聚(原酸)酯类、多肽、透明质酸、胶原、硫酸软骨素、羧酸、脂肪酸、磷脂类、多糖类、核酸、聚氨基酸、氨基酸诸如苯丙氨酸、酪氨酸、异亮氨酸，多核苷酸、聚乙烯丙烯、聚乙烯吡咯酮以及硅酮。示例性可生物降解的基质包括聚交酯基质、聚乙醇酸交酯、聚交酯共乙交酯(乳酸和羟基乙酸的共聚物)基质。相似地，本发明的实施方案的持续释放制剂可帮助在较长的时间段内保持抑制病毒的浓度。在另一个实施方案中，本公开内容的药物组合物(以及混合组合物)以控制释放系统递送。例如，可以使用静脉输注、可植入渗透泵、透皮贴片、脂质体，或者其它施用形式施用抑制剂。在一个实施方案中，可以使用泵(Sefton(1987).CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14：201；Buchwald等人(1980).Surgery88：507；Saudek等人(1989).N.Engl.J.Med.321：574)。在另一个实施方案中，使用聚合材料。在还有另一个实施方案中，控制释放系统被放置在治疗靶(即肝)附近，因此仅需要全身剂量的部分。在又实施方案中，控释系统被放置在治疗靶附近，因此仅需要全身的部分。其它控制释放系统在Langer(1990).Science 249：1527-1533的综述中讨论。

在另一个实施方案中，本发明的组合物(以及各自的和一起的混合组合物)包括由文中所述的抑制剂渗透进入吸收性材料诸如缝线、绷带以及纱布，或者涂层到固相材料，诸如外科缝线钉(surgical staple)、拉链和导管表面以递送组合物而形成的那些组合物。这种类型的其它递送系统依照本公开内容对于本领域的技术人员是明显的。

本文公开的化合物可被配制为药物组合物，其包含用于其预期用途的有效的量的抑制剂。例如，本发明的化合物可以约10mg至约500mg之间的单位剂量形式配制用于治疗病毒感染，尤其是黄病毒科的病毒的感染。在某些实施方案中，本发明的化合物可以约25mg至约250mg之间、约25mg至约100mg之间或约50mg至约100mg之间的单位剂量形式配制。尤其地，本发明的化合物可以25mg、50mg、75mg、100mg、125mg、150mg或200mg的单位剂量形式配制。在一个实施方案中，单位剂量形式是片剂；在另一个实施方案中，单位剂量形式是胶囊。片剂可作为立即释放剂型或作为持续释放形式来配制。在还有另一个实施方案中，单位剂量形式是液体。

本发明的化合物和药物组合物的使用

主题化合物及其药物组合物对于治疗黄病毒科的病毒的感染尤其有用。在一个实施方案中，本发明提供治疗受到来自黄病毒科的病毒感染的受治疗者的方法，包括以有效减少所述受治疗者中所述病毒的病毒载量的量向受治疗者施用式III的化合物或包含或主要由式III的化合物组成的药物组合物。

治疗方法通常包括单独或与其他剂组合以一种或多种剂量向受到这些病毒感染的受治疗者施用治疗有效量的抑制剂。对于已经受到黄病毒科的病毒例如丙型肝炎病毒感染的受治疗者，本发明的方法通常在超过几天、几周或几个月的时间段有效地减少病毒载量。

本发明还提供预防性治疗黄病毒科病毒的病毒感染的方法，包括向需要其的受治疗者施用有效量的本文描述的抑制剂。黄病毒科的病毒(包括但不限于HCV)的感染的预防性治疗对于将经历HCV相关的末期肝疾病(ESLD)的肝移植的患者来说尤其重要。已经报道如果移植时存在病毒血症则新的移植物几乎确定受到HCV的感染。可进行使用本发明的化合物的预防性治疗以在肝移植之前减少或消除HCV病毒载量，并且可帮助预防移植后HCV的复发。本发明的化合物的施用还有利于不能耐受完全剂量的标准的护理治疗(聚乙二醇化的干扰素和利巴韦林)的患者。当需要时，对于患有ESLD的移植前患者或患有HCV复发的移植后患者，电子等排物单独治疗或本发明的电子等排物与常规或减少剂量的聚乙二醇化的干扰素和利巴韦林的组合可被用于治疗这些患者。相似地，与硝唑尼特(或另一种thiazolide或这些中的任一种的持续剂型)组合的本发明的化合物可被用于治疗这些患者，如可耐受吲唑加上硝唑尼特(或另一种thiazolide或这些中的任一种的持续剂型)加上减少或常规剂量的标准的药物治疗。经由上文的实施方案中的任一种施用的克立咪唑也可作为抑制(例如维持)或巩固治疗施用，例如在通过含有克立咪唑或另外的药剂的给药方案有效抑制HCV之后。

本发明的抑制剂和包含其的药物组合物可以一种或多种剂量向受治疗者施用。在一个实施方案中，抑制剂可以每剂量约10mg至1000mg的量施用，例如每剂量约10mg至20mg、约20mg至25mg、约25mg至50mg、约50mg至75mg、约75mg至100mg、约100mg至125mg、约125mg至150mg、约150mg至175mg、约175mg至200mg、约200mg至225mg、约225mg至250mg、约250mg至300mg、约300mg至350mg、约350mg至400mg、约400mg至450mg、约450mg至500mg、约500mg至750mg、或约750mg至1000mg。

在一个实施方案中，每剂量抑制剂的量在每体重基础上确定。例如，在一个实施方案中，抑制剂可以约0.5mg/kg至100mg/kg的量施用，例如每剂量约0.5mg/kg至1mg/kg、约1mg/kg至2mg/kg、约2mg/kg至3mg/kg、约3mg/kg至5mg/kg、约5mg/kg至7mg/kg、约7mg/kg至约10mg/kg、约10mg/kg至15mg/kg、约15mg/kg至20mg/kg、约20mg/kg至25mg/kg、约25mg/kg至30mg/kg、约30mg/kg至40mg/kg、约40mg/kg至50mg/kg、约50mg/kg至60mg/kg、约60mg/kg至70mg/kg、约70mg/kg至80mg/kg、约80mg/kg至90mg/kg或约90mg/kg至100mg/kg或高于约100mg/kg。

本领域技术人员将容易地理解剂量水平可以根据施用的具体抑制剂、症状的严重性和受治疗者对副作用的易感性而变化。给定的化合物的优选剂量是本领域技术人员通过多种方法容易确定的。

在一个实施方案中，施用多个剂量的抑制剂。施用抑制剂的频率可以取决于多种因素，例如，症状的严重性以及类似因素中的任一种而变化。例如，在一个实施方案中，每月一次、每月两次、每月三次、每隔一周(qow)、每周一次(qw)、每周两次(biw)、每周三次(tiw)、每周四次、每周五次、每周六次、每隔一天(qod)、每日一次(qd)、每日两次(qid)，或者每日三次(tid)施用抑制剂。如上文所讨论的，在一个实施方案中，持续施用抑制剂。

通过说明的方式，本发明的化合物的有效给药可包括约200mg口服BID、150mg口服BID、75mg口服BID或50mg口服BID的给药。总的每日剂量可被分为多个剂量，其允许每次施用时较低的剂量，具有较少的镇静潜力而维持足够的效力。可选择地，更频繁的给药方案可用于不同情况，例如TID施用或每4、6、8或12小时施用25mg、50mg、75mg、150mg或更高剂量。可选择地，可使用持续释放制剂。

施用抑制剂的持续时间例如抑制剂被施用的时间段可取决于多种因素例如患者响应和类似因素中的任一种而变化。例如，可在约一天至一周、约两周至四周、约一个月至两个月、约两个月至四个月、约四个月至六个月、约六个月至八个月、约八个月至1年、约1年至2年或约2年至4年或更久的时间段施用抑制剂。

本发明的方法的实行通常包括施用有效量的抑制剂或包含这些抑制剂的药物组合物。特定的剂量可取决于所选择的特定化合物、所遵循的给药方案、其是否与其他化合物组合施用、施用的时间安排、其所施用的组织和运输其的物理递送系统而变化。在一个实施方案中，抑制剂的有效量是与未用抑制剂治疗的个体中的病毒载量相比，当以一种或多种剂量施用于需要其的宿主(例如人类)时减少个体中HCV病毒载量至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％或更多的量。

病毒载量可通过测量血清中病毒的滴度或水平来测量。这些方法包括但不限于定量聚合酶链式反应(PCR)和支链DNA(bDNA)测试。已经开发了用于测量HCV RNA的病毒载量(滴度)的定量测定。许多这种测定是商业上可获得的，包括定量逆转录PCR(RT-PCR)(Amplicor HCVMonitor^TM，Roche Molecular Systems，New Jersey)和支链DNA(脱氧核糖核酸)信号放大测定(Quantiplex^TM HCV RNA Assay(bDNA)，Chiron Corp.，Emeryville，California)。参见例如Gretch等人(1995)Ann.Intern.Med.123：321-329。同样感兴趣的是由Chiron Corporation以商品名Procleix出售的核酸测试(NAT)，NAT同时测试HIV-1和HCV的存在。参见例如Vargo等人(2002)Transfusion 42：876-885。

在一些实施方案中，抑制剂的有效量是与未用抑制剂治疗的个体中的肝功能相比，当以一种或多种剂量施用于需要其的宿主(例如人类)时增加个体中的肝功能至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％或至少约90％或更多的量。

在一些实施方案中，抑制剂的有效量是与未用抑制剂治疗的个体中的肝纤维化的程度相比，当以一种或多种剂量施用于需要其的宿主(例如人类)时减少宿主中的肝纤维化至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％或至少约90％或更多的量。

肝纤维化减少可通过分析肝活组织检查样品来确定。肝活组织检查的分析包括两个主要组分的评价：由“等级”评价的坏死性炎症作为严重性和进行性疾病活动的量度，以及由“阶段”评价的纤维化损伤和薄壁(parenchymal)或者血管重塑作为长期疾病发展的反映。参见，例如，Brunt(2000)Hepatol.31：241-246；和METAVIR(1994)Hepatology 20：15-20。基于肝活组织检查的分析，指定分数。存在许多提供纤维化的程度和严重性的定量评价的标准化评分系统。这些包括METAVIR、Knodell、Scheuer、Ludwig和Ishak评分系统。

METAVIR评分系统基于肝脏活组织检查的各种特征的分析，包括纤维化(肝门纤维化、小叶中心纤维化以及肝硬化)；坏死(碎片状坏死和小叶坏死，嗜酸胜收缩和气胀性退化)；炎症(肝门束炎症，肝门集合淋巴结和肝门炎症的分布)；胆管变化；以及Knodoll指数(门静脉周围坏死、小叶坏死、肝门炎症、纤维化以及综合疾病活动的分数)。METAVIR系统中每个阶段的定义如下：分数：0，无纤维化；分数：1，肝门束的星状扩大但没有隔膜形成；分数：2，肝门束扩大伴随少量的隔膜形成；分数：3，许多隔膜但未出现肝硬化；以及分数：4，肝硬化。

Knodoll评分系统，也称作肝炎活性指数，基于四类组织学特征中的分数将样本分类：I.门静脉周围和/或桥接坏死；II.小叶内退化和局灶性坏死；III.肝门炎症；以及IV.纤维化。在Knodoll疾病分期系统中，分数如下：分数：0，无纤维化；分数：1，轻微的纤维化(纤维性肝门扩张)；分数：2，中等纤维化；分数：3，严重纤维化(桥接纤维化)；以及分数：4，肝硬化。分数越高，肝组织损坏越严重。Knodell(1981)Hepatol.1：431。

在Scheuer评分系统中分数如下：分数：0，无纤维化；分数：1，扩大的纤维性肝门束；分数：2，门静脉周围隔膜或者门-门隔膜，但结构完好；分数：3，纤维化伴随结构扭曲；但无明显的肝硬化；分数：4，很可能的或者确诊的肝硬化。Scheuer(1991)J.Hepatol.13：372。

Ishak评分系统被描述在Ishak(1995)J.Hepatol.22：696-699中。阶段0，无纤维化；阶段1，某些门管区的纤维性扩张，伴随或者缺少短的纤维性隔膜；阶段2，大多数门管区的纤维性扩张，伴随或者缺少短的纤维性隔膜；阶段3，大多数门管区的纤维性扩张伴随偶然的门与门(P-P)桥接；阶段4，门管区的纤维扩张伴随明显的桥连(P-P)以及门-中心(P-C)桥连；阶段5，明显的桥连(P-P和/或P-C)伴随偶然的小结(不完全肝硬化)：阶段6，很可能的或者确诊的肝硬化。

本发明提供的治疗的益处也可以通过使用包括多组分打分系统的Child-Pugh评分系统测定和评价，所述多组分打分系统基于血浆胆红素水平异常、血浆白蛋白水平异常、凝而酶原时间异常、腹水的出现和严重性，以及脑病的出现和严重性。基于这些参数异常的出现和严重性，可以将患者放置于临床疾病的渐增的严重性的三个类别之一：A、B或者C。

主题抑制剂和包含所述剂的药物组合物可与用于治疗病毒感染和其他疾病的一种或多种其他治疗剂组合使用。例如，本文提供的抑制剂和药物制剂可与其他的抗病毒剂组合使用以治疗病毒感染。在一个实施方案中，根据本发明的方法，用于治疗受黄病毒科病毒感染的宿主的抑制剂与一种或者多种其它抗-HCV剂组合使用以治疗HCV感染。在另一种实施方案中，根据本发明的方法，阻止NS4B与HCV RNA的3’-UTR结合的抑制剂(本文也称为“HCV NS4B拮抗剂”)可以与一种或者多种其它抗-HCV剂组合使用以治疗HCV感染。

此外，抑制剂和包含所述剂的药物组合物可与另一种剂(例如抗病毒剂)组合使用以预防性治疗来自病毒的黄病毒科的病毒(包括但不限于HCV)的感染。所述方法的实施方案包括向需要其的个体施用抑制NS4B多肽与HCV负链RNA的3’-UTR结合的一种或多种抑制剂。

日前的治疗HCV感染的药物实践通常使用干扰素-α的单一治疗或与利巴韦林的组合疗法(诸如Rebetol或Copegus)和干扰素-α(诸如干扰素α2b)或者聚乙二醇化的干扰素(诸如Pegasys，Roche出售，或者PEG-Intron，Schering Plough出售)。根据本公开内容的方法，抑制化合物可以与这些标准的治疗组合使用以治疗HCV感染。

许多HCV蛋白酶抑制剂处于HCV感染的治疗的开发中，并且根据本公开内容的方法，阻止NS4B与HCV RNA的3’-UTR结合的抑制剂和HCV蛋白酶抑制剂的共施用在HCV的治疗中是有效的。在一个实施方案中，在这种组合疗法中也使用干扰素α和/或核苷类似物，诸如利巴韦林。合适的HCV蛋白酶抑制剂包括但不限于telaprevir(VX-950，Vertex)、BILN 2061和BI12202(Boehringer Ingelheim)、boceprevir(SCH 503034，ScheringPlough)、ITMN191(Roche/InterMune/Array BioPharma)、MK-7009(Merck)、TMC435350(Tibotec/Medivir)、ACH-1095和ACH-806(Achillion/Gilead)以及NS3/NS4A蛋白酶的其它抑制剂，包括但不限于Presidio开发中的化合物。

许多HCV RNA聚合酶(NS5B)抑制剂处于用于HCV感染的治疗的开发中，并且根据本公开内容的方法，阻止NS4B与HCV RNA的3’-UTR结合的抑制剂与HCV RNA聚合酶抑制剂的共施用在HCV的治疗中是有效的。在一个实施方案中，在这种组合疗法中也使用干扰素α和/或核苷类似物，诸如利巴韦林和/或HCV蛋白酶抑制剂。合适的HCV RNA聚合酶抑制剂包括但不限于，valopicitabine(NM283，Idenix/Novartis)、HCV-796(Wyeth/ViroPharma)、R1626(Roche)、R7128(Roche/Pharmasset)、GS-9190(Gilead)、MK-0608(Merck)、PSI-6130(Pharmasset)和PFE-868，554(PFE)。

许多toll样受体(TLR)激动剂处于用于HCV感染的治疗的开发中，并且根据本发明的方法，阻止NS4B与HCV RNA的3’-UTR结合的NS4B拮抗剂与TLR激动剂的共施用在HCV的治疗中是有效的。在一个实施方案中，在这一组合疗法中也使用干扰素α和/或核苷类似物诸如利巴韦林和/或HCV蛋白酶抑制剂和/或HCV RNA聚合酶抑制剂。合适的TLR激动剂包括但不限于TLR7激动剂(即ANA245和ANA975(Anadys/Novartis))和TLR 9激动剂(即Actilon(Coley)和IMO-2125(Idera))

许多thiazolide衍生物处于用于HCV感染的治疗的开发中，并且根据本公开内容的方法，阻止NS4B与HCV RNA的3’-UTR结合的NS4B拮抗剂与thiazolide，包括但不限于硝唑尼特(阿替洛尔或者硝唑尼特或者其它thiazolide的其它持续释放剂型，Romark Laboratories)的共施用在HCV的治疗中是有效的。在一种实施方案中，在这种组合疗法中也使用干扰素α和/或核苷类似物诸如利巴韦林和/或HCV蛋白酶抑制剂和/或HCV RNA聚合酶抑制剂和/或TLR激动剂。

在本公开内容的方法的另一个实施方案中，阻止NS4B与HCV RNA的3’-UTR结合的抑制剂与亲环蛋白抑制剂(即NIM-811(Novartis)和DEBIO-025(Debiopharm))和/或α-葡萄糖苷酶抑制剂(即Celgosivir(Migenix))和/或来自本文讨论的HCV治疗剂的一种或者多种其它类别的一种或多种药剂的共施用被用于治疗HCV感染。而且，在NS4B内有几个靶，并且根据本公开内容的方法，与这些其它靶相互作用的化合物可以与阻止NS4B与HCV RNA的3’-UTR结合的NS4B拮抗剂，以及任选地，本文提到的抑制剂的其它类别中的一种或者多种组合使用以治疗HCV感染。这些其他NS4B靶包括：N-末端两亲性螺旋(参见PCT公布WO2002/089731，通过引用并入本文)、NS4B GTP酶(参见PCT公布WO2005/032329，通过引用并入本文)、第二两亲性螺旋，NS4B中第一两亲性螺旋的PIP2结合活性(参见US临时专利申请序列第60/057,188号，通过引用并入本文)。

可与本公开内容的抑制剂组合使用的阻止NS4B与HCV RNA的3’-UTR结合的其他剂包括(i)靶向NS5A的剂，包括但不限于A-831(ArrowTherapeutics)、AZD2836(Astra Zeneca)和XTL/Presidio或BMS开发中的剂(参见PCT公布WO 2006/133326和WO 2008/021928，通过引用并入本文)；(ii)靶向TBC1D20和/或NS5A与TBC1D20的相互作用的剂(参见PCT公布WO 2007/018692和美国专利申请序列第11/844,993号，通过引用并入本文)；(iii)靶向NS4B的GTP酶活性的剂(参见PCT公布WO2005/032329和美国专利申请公开2006/0199174，通过引用并入本文)；(iv)抑制由HCV两亲性螺旋介导的膜结合的剂，诸如在NS5A、NS4B和NS5B中发现的那些(参见PCT公布2002/089731，同上文)；(v)靶向HCV蛋白中PIP2或BAAPP结构域的剂，诸如在NS4B和NS5A中找到的那些剂(参见美国临时专利申请60/057,188，同上)；(vi)靶向HCV进入、装配或释放的剂，包括共同受体的抗体；(vii)靶向HCV NS3解旋酶的剂；(viii)siRNA、shRNA、反义RNA或者靶向HCV中的序列的其它基于RNA的分子；(ix)靶向小分子RNA122或者调节HCV复制的其它小分子RNA的剂；(x)靶向PD-1、PD-L1或PD-L2的相互作用或者途径的剂(参见美国专利申请公布20080118511、20070065427、20070122378，通过引用并入本文)；(xi)靶向HCV两亲性螺旋功能的剂，诸如AH2抑制剂，(xii)异戊烯化抑制剂(例如美国专利5,503,973、5,876,920、6,159,939、6,627,610、7,342,016、5,874,442、7,101,897和6,232,338，其每一个通过引用并入本文)。

在本公开内容的另一个实施方案中，阻止NS4B与HCV RNA的3’-UTR结合的抑制剂与能够治疗HIV感染的一种或者多种药物组合使用以治疗被HIV和HCV共同感染的患者。在本公开内容的另一个实施方案中，阻止NS4B与HCV RNA的3’-UTR结合的抑制剂与能够治疗HBV感染的一种或者多种药物组合使用以治疗被HBV和HCV共同感染的患者。在一个实施方案中，阻止NS4B与HCV RNA的3’-UTR结合的抑制剂与PD-L1抑制剂组合使用以治疗病毒感染。

如上文提到的，本实施方案包括将文中(或者通过使用本发明的筛选的实施方案)鉴定的抑制剂与至少一种其他治疗剂组合施用以治疗病毒感染。合适的其他治疗剂包括但不限于利巴韦林；核苷类似物(例如，左旋韦林、韦拉米啶以及类似物质)；NS3抑制剂；NS5抑制剂；干扰素以及副作用处理剂。

在一个实施方案中，所述至少一种其他的合适的治疗剂包括利巴韦林。利巴韦林，1-β-D-呋喃核糖基-1H-1，2，4-三唑-3-羧酰胺，可从ICNPharmaceuticals，Inc.，Costa Mesa，Calif获得，描述于Merck索引中，化合物第8199号，第十一版。其制备和配制描述于美国专利第4,211,771号中。本公开内容还预期利巴韦林衍生物的使用(参见，例如，美国专利第6,277,830号)。

在一个实施方案中，所述至少一种其他的合适的治疗剂包括左旋韦林左旋韦林是利巴韦林的L-对映体，并且显示增强Th1免疫反应超过Th2免疫反应的性质。左旋韦林由ICN Pharmaceuticals制造。

在一个实施方案中，所述至少一种其他的合适的治疗药物包括韦拉米啶。韦拉米啶是利巴韦林的3-甲脒衍生物，并且作为利巴韦林的前药。其通过腺苷脱氨酶被有效地转化成利巴韦林。

适合在组合疗法中使用的核苷类似物包括但不限于，利巴韦林、左旋韦林、韦拉米啶、艾托立宾、在美国专利第5,559,101号中公开并且由美国专利第5,559,101号的式I包含的L-呋喃核糖基核苷(例如，1-β-L-呋喃核糖基尿嘧啶、1-β-L-呋喃核糖基-5-氟代尿嘧啶、1-β-L-呋喃核糖基胞嘧啶、9-β-L-呋喃核糖基腺嘌呤、9-β-L-呋喃核糖基次黄嘌呤、9-β-L-呋喃核糖基鸟嘌呤、9-β-L-呋喃核糖基-6-硫鸟嘌呤、2-氨基-α-L-呋喃核糖[1’，2’:4，5]噁唑啉、O²，O²-脱水-1-α-L-呋喃核糖基尿嘧啶、1-α-L-呋喃核糖基尿嘧啶、1-(2，3，5-三-O-苯甲酰基-α-呋喃核糖基)-4-硫尿嘧啶、1-α-L-呋喃核糖基胞嘧啶、1-α-L-呋喃核糖基-4-硫尿嘧啶、1-α-L-呋喃核糖基-5-氟代尿嘧啶、2-氨基-β-L-阿拉伯呋喃并[1’，2’:4，5]噁唑啉、O²，O²-脱水-β-L-阿拉伯呋喃糖尿嘧啶、2’-脱氧-β-L-尿苷、3’5’-双-O-苯甲酰基-2’脱氧-4-硫代β-L-尿苷、2’-脱氧-β-L-胞苷、2’-脱氧-β-L-4-硫代尿苷、2’-脱氧-β-L-胸苷、2’-脱氧-β-L-5-氟代尿苷、2’，3’-二脱氧-β-L-尿苷、2’-脱氧-β-L-5-氟代尿苷和2’-脱氧-β-L-肌苷)；美国专利第6,423,695号中公开的并且由美国专利第6,423,695号的式I包含的化合物；美国专利公开第2002/0058635号中公开的并且由美国专利公开第2002/0058635号的式1包含的化合物；WO 01/90121 A2(Idenix)中公开的核苷类似物；WO 02/069903A2(Biocryst PharmaceuticalsInc.)中公开的核苷类似物；WO 02/057287 A2或WO 02/057425 A2(都是Merck/Isis)中公开的核苷类似物；以及类似物。

在一个实施方案中，所述至少一种其他的合适的治疗剂可以包括HCVNS3抑制剂。合适的HCV非结构蛋白-3(NS3)抑制剂包括但不限于在美国专利第6,642,204、6,534,523、6,420,380、6,410,531、6,329,417、6,329,379和6,323,180号(Boehringer-Ingelheim)中公开的三肽；美国专利第6,143,715号(Boehringer-Ingelheim)中公开的化合物；美国专利第6,608,027号(Boehringer-Ingelheim)中公开的大环化合物；美国专利第6,617,309、6,608,067和6,265,380号(Vertex Pharmaceuticals)中公开的NS3抑制剂；美国专利第6,624,290号(Schering)中公开的氮杂肽化合物；美国专利第5,990,276号(Schering)中公开的化合物；Pause等人(2003)J.Biol.Chem.278：20374-20380中公开的化合物；NS3抑制剂BILN 2061(Boehringer-Ingelheim；Lamarre等人(2002)Hepatology 36：301A以及Lamarre等人(2003年10月26日)Nature doi：10.1038/nature02099)；NS3抑制剂VX-950(Vertex Pharmaceuticals；Kwong等人(2003年10月24-28日)美国肝病研究会(AASLD)第54届年会)；NS3抑制剂SCH6(Abib等人(2003年10月24-28日)摘要137.美国肝病研究会(AASLD)第54届年会的纲要和摘要，2003年10月24-28日，Boston，MA)；WO99/07733、WO 99/07734、WO 00/09558、WO 00/09543、WO 00/59929或WO 02/060926中公开的NS3蛋白酶抑制剂中的任一种(例如WO02/060926中第224-226页的表中公开的化合物2、3、5、6、8、10、11、18、19、29、30、31、32、33、37、38、55、59、71、91、103、104、105、112、113、114、115、116、120、122、123、124、125、126和127)；美国专利公开第2003019067、20030187018和20030186895号中任一个中所公开的NS3蛋白酶抑制剂；以及类似物。

在一个实施方案中，在本发明的组合疗法中使用的NS3抑制剂是特异性NS3抑制剂类别中的成员，例如抑制NS3丝氨酸蛋白酶活性并且未显示出对其它丝氨酸蛋白酶诸如人类白细胞弹性蛋白酶、猪胰弹性蛋白酶或者牛胰凝乳蛋白酶或者半胱氨酸蛋白酶诸如人肝脏组织蛋白酶B的显著抑制活性的NS3抑制剂。在一个实施方案中，所述至少一种其他的合适的治疗药物包括NS5B抑制剂。合适的HCV非结构蛋白-5(NS5；RNA-依赖性RNA聚合酶)抑制剂包括但不限于美国专利第6,479,508号(Boehringer-Ingelheim)中公开的化合物；Boehringer Ingelheim在2002年7月18日提交的国际专利申请第PCT/CA02/01127、PCT/CA02/01128和PCT/CA02/01129号中任一个中公开的化合物；美国专利第6,440,985号(ViroPharma)中公开的化合物；WO 01/47883中公开的化合物，例如，JTK-003(Japan Tobacco)；Zhong等人(2003)Antimicrob.Agents Chemother.47：2674-2681中公开的二核苷酸类似物；Dhanak等人(2002)J.Biol chem.277(41)：38322-7中公开的苯并噻二嗪化合物；WO 02/100846 A1或WO02/100851 A2(两者都是Shire)中公开的NS5B抑制剂；WO 01/85172 A1或WO 02/098424 A1(两者都是Glaxo SmithKline)中公开的NS5B抑制剂；WO 00/06529或WO 02/06246 A1(两者都是Merck)中公开的NS5B抑制剂；WO 03/000254(Japan Tobacco)中公开的NS5B抑制剂；EP 1 256,628A2(Agouron)中公开的NS5B抑制剂；JTK-002(JapanTobacco)；JTK-109(Japan Tobacco)；以及类似物。

在一个实施方案中，在本发明的组合疗法中使用的NS5抑制剂是特异性NS5抑制剂类别中的成员，例如抑制NS5 RNA-依赖性RNA聚合酶并且缺乏对其他RNA依赖性RNA聚合酶和DNA依赖性RNA聚合酶的显著抑制效果的NS5抑制剂。

在一个实施方案中，所述至少一种其他的治疗剂是干扰素，例如，干扰素α(IFN-α)。任何已知的IFN-α可以在本发明的治疗方法中使用。文中使用的术语“干扰素-α”是指抑制病毒复制和细胞增殖并且调节免疫反应的相关多肽的家族。术语“IFN-α”包括天然存在的IFN-α；合成的IFN-α；衍生的IFN-α(例如，聚乙二醇化的IFN-α、糖基化的IFN-α以及类似物)；以及天然存在的或者合成的IFN-α的类似物、具有抗病毒性质的基本上任何IFN-α，如为天然存在的IFN-α所描述的。

合适的α干扰素包括但不限于天然存在的IFN-α(包括但不限于天然存在的IFN-α2a、IFN-α2b)、重组干扰素α-2b，诸如可从Schering Corporation，Kenilworth，N.J.获得的Intron-A干扰素、重组干扰素α-2a诸如从Hoffmann-La Roche，Nutley，N.J.获得的Roferon干扰素、重组干扰素α-2C，诸如从Boehringer Ingelheim Pharmaceutical，Inc.，Ridgefield，Conn获得的Berofor α2干扰素；干扰素α-n1，天然α干扰素的纯的混合物，如从Sumitomo，Japan获得的Sumiferon或者从Glaxo-Wellcome Ltd.，London，Great Britain获得的Wellferon干扰素α-n1(INS)；以及干扰素α-n3，由Interferon Sciences制造并且可从Purdue Frederick Co.，Norwalk，Conn.在商标名Alferon下获得的天然α干扰素的混合物。

术语“IFN-α”也包括复合IFN-α。复合IFN-α(也称作“CIFN”和“IFN-con”以及“复合干扰素”)包括但不限于指定为IFN-con₁、IFN-con₂和IFN-con₃的氨基酸序列，其公开于美国专利第4,695,623和4,897,471号中；以及由确定天然存在的干扰素α的共有序列所定义的复合干扰素(例如，InfergenInterMune，Inc.，Brisbane，Calif.)。IFN-con₁是Infergenalfacon-1产品中的复合干扰素剂。Infergen复合干扰素产品在文中被称为其商标名(Infergen)或者其通用名(干扰素alfacon-1)。编码的IFN-con的DNA序列可以如在前面所述的专利或者其它标准方法中所描述的合成。在一个实施方案中，所述至少一个其他治疗剂是CIFN。

在一个实施方案中，包含IFN-α和异源多肽的融合多肽也可以在本发明的组合疗法中使用。合适的IFN-α融合多肽包括但不限于，Albuferon-α^TM(人类白蛋白和IFN-α的融合产物；Human Genome Sciences；参见，例如，Osborn等人(2002)J.Pharmacol.Exp.Therap.303：540-548)。同样适合在本公开内容中使用的是IFN-α的基因改组形式。参见，例如Masci等人(2003)Curr.Oncol.Rep.5：108-113。其它合适的干扰素包括Multiferon(Viragen)、Medusa干扰素(Flamel Technology)、Locteron(Octopus)和ω干扰素(Intarcia/Boehringer Ingelheim)。

术语“IFN-α”还涵盖被衍生(例如，相对于天然存在的肽的化学修饰)以改变某些特性例如血清半衰期的IFN-α衍生物。因此，术语“IFN-α”包括糖基化的IFN-α；用聚乙二醇衍生的IFN-α(“聚乙二醇化的IFN-α”)以及类似物。聚乙二醇化的IFN-α以及制备其的方法在例如美国专利第5,382,657、5,981,709和5,951,974中讨论。聚乙二醇化的IFN-α涵盖PEG和上文描述的IFN-α分子中的任一种的轭合物，包括但不限于与干扰素α-2a(Roferon，Hoffman La-Roche，Nutley，N.J.)、干扰素α-2b(Intron，Schering-Plough，Madison，N.J.)、干扰素α-2c(Berofor Alpha，BoehringerIngelheim，Ingelheim，Germany)轭合的PEG；以及如通过测定天然存在的干扰素α的共有序列而定义的复合干扰素(InfergenInterMune，Inc.，Brisbane，Calif.)。

在一个实施方案中，可以用一种或多种聚乙二醇部分修饰IFN-α多肽，即聚乙二醇化。聚乙二醇化的IFN-α多肽的PEG分子与IFN-α多肽的一个或多个氨基酸侧链轭合。在一个实施方案中，聚乙二醇化的IFN-α仅在一个氨基酸上含有PEG部分。在另一个实施方案中，聚乙二醇化的IFN-α在两个或多个氨基酸上含有PEG部分，例如，IFN-α含有连接在二、三、四、五、六、七、八、九或十个不同的氨基酸残基上的PEG部分。IFN-α可通过氨基基团、巯基基团、羟基基团或羧基基团直接与PEG偶联(即，没有连接基团)。

为了确定诸如吲唑的抑制剂与其他抗HCV剂的最佳组合，可以在多种抗HCV剂的不同组合存在下进行HCV复制测定和/或动物研究。在另外的剂存在下增加的复制抑制(高于用单一治疗所观察到的复制抑制)是组合疗法的潜在益处的证据。

在一个实施方案中，副作用处理剂可被用于本发明的治疗方法，并且这些包括在在疼痛处理中有效的药剂；改善胃肠不适的药剂；镇痛药、消炎药、抗精神病药、抗神经毒素药、抗焦虑剂和造血剂。此外，本发明的实施方案预期在使用主题疗法的治疗过程中患有疼痛或任何其他副作用的患者的治标护理的任何化合物的用途。示例性的治标剂包括扑热息痛、布洛芬、其他NSAID、H2阻断剂和抗酸药。

本文提供的抑制剂和药物组合物可用于治疗受到黄病毒科的病毒感染的多种患者或宿主。主题治疗方法可尤其有利于“治疗失败患者”。这些患者包括但不限于未能对之前用于HCV的疗法响应的患者(称为“不反应者”)或最初对之前的疗法响应但是治疗响应未能保持的患者(称为“复发者”)。之前的疗法通常可包括使用除了本公开内容的抑制剂之外的任何抗病毒剂的治疗。

可从主题治疗受益的其他患者是在临床上被诊断为感染HCV的个体。这些个体包括首次用于实验的个体(individual)(例如之前没有对HCV进行治疗的个体)。感染HCV的个体可通过检测他们血液中的HCVRNA和/或在他们的血清中具有抗HCV抗体来确定。

在某些实施方案中，适用于本发明的治疗的宿主具有每毫升血清至少约10⁵、至少约5×10⁵或至少约10⁶HCV基因组拷贝的HCV滴度。患者可受到任何HCV基因型(基因型1，包括1a和1b、2、3、4、6以及类似基因型和亚型(例如2a、2b、3a以及类似亚型)感染，尤其是难以治疗的基因型例如HCV基因型1和特定的HCV亚型和准种感染。

还适于治疗的是由于慢性HCV感染而显示重度纤维化或早期肝硬化(非代偿失调的，Child’s-Pugh分级为A或更低)或更晚期的肝硬化(代偿失调的，Child’s-Pugh分级为B或C)以及尽管先前接受了抗病毒治疗还具有病毒血症或对已知的抗病毒剂治疗具有禁忌症的HCV阳性宿主(如上文所述)。

在一种实施方案中，根据METAVIR评分系统具有3期或4期肝纤维化的HCV阳性宿主适于使用本公开内容的方法治疗。在另一个实施方案中，适于使用本公开内容的实施方案治疗的宿主是患有具有临床表现的代偿失调性肝硬化的患者，包括患有末期肝硬化的患者，包括那些等待肝移植的患者。在还有另一个实施方案中，适于使用本公开内容的实施方案治疗的宿主包括具有较轻度纤维化的患者，包括患有早期纤维化(在METAVIR、Ludwig和Scheuer评分系统中1和2期或在Ishak评分系统中1、2或3期)的那些患者。

在本公开内容的一个实施方案中，为了帮助最佳地选择最可能从治疗获益的患者并监测治疗的效力-尤其是在面对可能的药物耐受性突变病毒时-使用本发明所提供的合适的诊断测试可能具有很大的益处。例如，评估给定患者中所发现的具体病毒对预期治疗的敏感性可能有助于确定候选患者与相应的合适治疗之间的最佳匹配。在本文鉴定的本发明的化合物的情况下，其可通过从给定患者的HCV分离物中分离NS4B序列，并确定药物抑制患者的NS4B同种型的RNA结合的效力。这是尤为重要的，因为当前还没有研究给定患者病毒的药物敏感性的有效方法，这是由于来源于患者的接种物不能够容易地培养。使用这种诊断测定来指导治疗的价值已经在HIV中得到了广泛地验证。

使用根据本发明的实施方案的本发明的化合物的组合治疗包括，例如但不限于(1)使用吲唑加上硝唑尼特的治疗，(2)使用吲唑以及之后使用硝唑尼特的治疗。(3)使用吲唑加上硝唑尼特以及NS3蛋白酶抑制剂的治疗，(4)使用吲唑加上硝唑尼特加上NS3蛋白酶抑制剂加上NS5B聚合酶抑制剂的治疗，(5)使用吲唑加上NS3蛋白酶抑制剂加上NS5B聚合酶抑制剂的治疗，(6)使用吲唑加上硝唑尼特加上NS3蛋白酶抑制剂加上NS4B第二两亲性螺旋抑制剂的治疗，(7)使用吲唑加上硝唑尼特加上NS4B第二两亲性螺旋抑制剂的治疗，(8)使用吲唑加上NS3蛋白酶抑制剂加上NS4B第二两亲性螺旋抑制剂的治疗，(9)使用吲唑加上利巴韦林的治疗，(10)使用吲唑之后使用硝唑尼特加上利巴韦林的治疗，(11)吲唑加上盐酸克立咪唑；以及(12)上文(1)-(11)列出的一种或多种剂的任何其他组合。在某些实施方案中，所述一种或多种另外的治疗剂在使用吲唑、吲唑类似物或本发明的电子等排物的治疗之前、同时或之后施用。

根据本发明的组合治疗的硝唑尼特施用可以是，为了说明而并非限制性的，500mg口服BID。其他的剂量、其他的thiazolide、或硝唑尼特或另一种thiazolide的其他制剂例如持续释放制剂可被用于本发明的组合治疗。抑制剂及其药物组合物可使用适合于药物递送的任何可获得的方法和途径施用于受治疗者，包括体内和离体方法，以及全身和局部的施用途径。施用的途径包括施用的鼻内、肌内、气管内、皮下、真皮内、局部应用、静脉内、直肠、经鼻、口服和其他肠内和胃肠外途径。如果需要，施用的途径可以是组合的，或取决于剂和/或期望的效果调整。活性剂可以单次剂量或多次剂量施用。

抑制剂的实施方案可使用适合于常规药物的递送的可获得的常规的方法和途径施用于宿主，包括全身或局部途径。通常，本公开内容预期的施用的途径包括但不限于肠内、胃肠外或吸入途径。

除了吸入施用之外的施用的胃肠外途径包括但不限于局部、经皮肤的、皮下的、肌内的、眼眶内的、囊内的、脊柱内的、胸骨内的和静脉内的途径，即除了通过消化道之外的施用的任何途径。可进行胃肠外的施用以实现抑制剂的全身或局部递送。当期望全身递送时，施用通常包括药物制品的侵入性或全身地吸收的局部或粘膜施用。

抑制剂还可通过肠内施用递送至受治疗者。施用的肠内途径包括但不限于口服和直肠(例如使用栓剂)递送。

通过皮肤或粘膜的抑制剂的施用的方法包括但不限于适合的药物制品的局部应用、经皮的传递、注射和表皮施用。对于经皮的传递，吸收促进剂或离子电渗疗法是适合的方法。离子电渗传递可使用通过未破损的皮肤经由电脉冲不断地递送其产品几天或更长的时间段的商业上可获得的“贴片”来完成。在某些实施方案中，吲唑通过口服的、静脉内的、经皮的、舌下的、肌内的或直肠的途径施用。

在分别但相关的实施方案中，本发明还提供鉴定调节RNA与RNA结合蛋白的结合的剂(抑制剂)的体外无细胞的方法。还可在基于细胞的测定中测试抑制NS4B多肽与HCV负链RNA的3’UTR结合的测试剂的抑制HCV复制的能力。例如，可将感兴趣的测试剂与包含HCV基因组的全部或部分的哺乳动物细胞接触；并且确定测试剂对HCV复制的影响。适合的细胞包括允许HCV复制的哺乳动物肝细胞，例如允许HCV的永生化的人类肝细胞细胞系。例如，适合的哺乳动物细胞是Huh7肝细胞或Huh7肝细胞的亚克隆，例如Huh-7.5。适合的细胞系描述于例如Blight等人(2002)J.Virol.76：13001；和Zhang等人(2004)J.Virol.78：1448中。在一个实施方案中，细胞中的HCV基因组包括报告子，例如编码萤光素酶、荧光蛋白或提供可检测的信号的其他蛋白的核苷酸序列；并且确定测试剂对HCV复制的影响，如果有的话，通过检测来自报告子的信号来完成。

在一个实施方案中，测试剂是有机部分。在这一实施方案中，如在通过引用并入本文的WO 94/24314中通常描述的，测试剂是从可被化学修饰的一系列底物合成的。本文“化学修饰的”包括传统的化学反应以及酶促反应。这些底物通常包括但不限于烷基基团(包括烷类、烯类、炔类和杂烷基)，芳基基团(包括芳烃类和杂芳基)、醇类、醚类、胺类、醛类、酮类、酸类、酯类、酰胺类、环化合物、杂环化合物(包括嘌呤、嘧啶、苯并二氮卓类、β-内酰胺、四环素类、头孢菌素类和糖类)、类固醇(包括雌激素类、雄激素类、可的松、蜕皮激素以及类似物质)、生物碱类(包括麦角、长春胺、箭毒、吡咯双烷类和丝裂霉素)、有机金属化合物、杂原子负载化合物、氨基酸和核苷。可对所述部分进行化学(包括酶促)反应以形成新的底物或候选剂，之后可使用本方法测试。

实施例

列出下列实施例以便为本领域普通技术人员提供完整的公开内容和如何制备和使用本公开内容的说明，并且不意欲限制发明人所认为的公开内容的范围，也不意欲表示下列实验是所进行的所有或仅有的实验。已经努力确保所用数值(例如，量、温度等等)的准确性，但是应考虑某些实验误差和偏差。除非另有说明，否则份数是重量份数，分子量是重量平均分子量，温度是摄氏度并且压力为大气压或接近大气压。可以使用标准的缩写，例如，bp，碱基对；kb，千碱基；pl，皮升；s或sec，秒；min，分钟；h或hr，小时；aa，氨基酸；kb，千碱基；bp，碱基对；nt，核苷酸；i.m.，肌内；i.p.，腹膜内；s.c.，皮下的；等等。

实施例1：化学合成

合成方法1

将1-苄基-1H-吲唑-3(2H)-酮1a(44mg；0.2mmol)溶解在DMF(1mL)中。加入NaH(12mg，0.3mmol，60％溶于矿物油)，所得的混合物于室温搅拌10分钟。加入1-(3-氯丙基)吡咯烷之后，反应混合物在60℃加热2h并且通过LC-MS监测。粗制反应混合物通过制备型HPLC纯化以获得所期望的产物1b(48.1mg，0.143mmol，72％)。将1b通过使用HCl-醚-甲醇的处理转化为盐酸盐。

列于下文的化合物可按照合成方法1制备。

合成方法2

将1H-吲唑-3(2H)-酮2a(268.3mg；2.0mmol)溶解于DMF(5mL)中。加入NaH(120mg，3.0mmol，60％溶于矿物油)并且将所得的混合物于室温搅拌10分钟。之后加入1-(溴甲基)-4-氯苯并且将反应混合物于室温搅拌另外2h。反应通过LC-MS监测。将粗制的反应混合物通过制备型HPLC纯化以获得作为主产物的所期望的产物2b(290.1mg，1.12mmol，56％)，伴随副产物2c和2d。

列于下文的化合物可按照合成方法2制备。

合成方法3

吲唑化合物可根据文献中公开的方法合成，例如Lukin等人J.Org.Chem.2006，71，8166-8172和Souers等人J.Med.Chem.2005，48，1318-1321。将溶于DMF(8mL)的5-(三氟甲基)-1H-吲唑3a(0.46g，2.5mmol)、K₂CO₃(1.04g，7.5mmol)的混合物于室温搅拌30分钟。向混合物加入对氯苄基溴化物(0.77g，3.75mmol)。所得的混合物于60℃加热6h。冷却后，将混合物倒入水中(30mL)。将沉淀物过滤并且用水清洗并且干燥。将粗产物通过层析(己烷/二氯甲烷，1∶1至1∶3)纯化以产生1-(4-氯苄基)-5-(三氟甲基)-1H-吲唑3b(120mg，15％)和2-(4-氯苄基)-5-(三氟甲基)-2H-吲唑3c(60mg，7.7％)。

1-(4-氯苄基)-5-(三氟甲基)-1H-吲唑：¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ8.15(s，1H)，8.08(d，1H)，7.56(dd，1H)，7.41(d，1H)，7.28(d，2H)，7.12(d，2H)，5.60(s，2H)。(C₁₅H₁₀ClF₃N₂ ⁺H)⁺的MS计算值：310.9。MS测量值：(M+H)⁺＝310.7。2-(4-氯苄基)-5-(三氟甲基)-2H-吲唑：¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ8.04(s 1H)，7.99(s，1H)，7.45(dd，1H)，7.35(d，2H)，7.22(d，2H)，5.60(s，2H)。(C₁₅H₁₀ClF₃N₂ ⁺H)⁺的MS计算值：310.9。MS测量值：(M+H)⁺＝310.7。

列于下文的化合物可按照合成方法3制备。

实施例2：

下文所示表3使用本文描述的萤光素酶和阿尔玛蓝(Alamar Blue)测定说明某些吲唑电子等排物对HCV RNA复制(AV)和细胞存活率(Viab)的作用。在两个浓度测量化合物活性以确定作用是否是剂量依赖性的。数值表示化合物处理之后保留的正常活性的百分比(病毒复制或细胞存活率)；还将这些值汇总(binned)以提供相对活性的粗略测量。

在化合物的两个浓度5μM和10μM，对每种化合物确定相对于无药物的对照，处理的细胞中残留的萤光素酶活性(指示HCV复制)的量并记录在表中。此外，将这些百分比如下转化为评分系统：“+”＞80％残留活性；“++”＝55-80％残留活性；“+++”＝20-54％残留活性；“++++”＜20％残留活性。因此，在复制测定中评分为+++的化合物具有比评分为+的化合物更高的抗病毒活性(AV)。

表3.本文描述的RNA复制抑制测定中本发明的化合物的体外活性

¹萤光素酶报告子活性被规定为与相同的细胞类型的未处理的对照群中的萤光素酶活性相比，处理的细胞群中萤光素酶报告子活性的百分比。

表4.本文描述的细胞存活率测定中本发明的化合物的体外活性

²细胞存活率被规定为与相同的细胞类型的未处理的群相比，处理的细胞群中存活细胞的百分比。

表5.表3和4中所列的化合物的结构

实施例3：测定

适合的1b HCV RNA复制测定使用Huh7细胞系，其包含带有稳定的萤光素酶(LUC)报告子的HCV 1b RNA复制子。这一构建体包含使得细胞系更强壮的修饰并且提供用于抗病毒筛选的稳定的LUC表达。LUC报告子被用作HCV复制的间接量度。使用LUC端点，LUC报告子的活性与HCV RNA水平成正比并且正对照抗病毒化合物表现相当。

适合于在证明本发明的方法中可用的化合物的抗病毒活性的用途的HCV测定包括本实施例中描述的用于HCV复制子报告子细胞系的萤光素酶测定和用于HCV复制子报告子细胞系的MTT测定。本实施例中描述的这些测定的实施方案是由Shanghai ChemPartner Co.，Ltd.，总公司位于201203中国上海市蔡伦路720弄3号楼的一家中国公司开发的。

A.用于HCV基因型1b复制子报告子细胞系的萤光素酶测定

临使用前配制新鲜的生长培养基。程序中使用的容器是10cm直径培养皿。使用HCV复制子报告子细胞系。配制完全培养基：如下文“培养基”中描述的加入FBS和适当的添加剂。在37℃恒温水浴中预热培养基。从37℃/CO₂培养箱移出培养皿。检查培养皿上标记的细胞名称和完全培养基以及传代编号。小心抽吸培养基并且加入1ml PBS以漂洗细胞。移去并且弃掉溶液，加入1ml的0.25％胰蛋白酶/0.02％EDTA。使用加入的胰蛋白酶/EDTA漂洗细胞以确保所有的细胞被漂洗。用真空泵移去胰蛋白酶/EDTA并且于37℃孵育3-5分钟。在倒置显微镜下检查细胞形态以确认单细胞悬浮液是清楚可见的。将3ml的完全培养基加至培养皿并且通过轻柔抽吸悬浮细胞。使用血红蛋白计计数细胞数目。通过加入适当体积的完全培养基将细胞密度调节至100k/ml。向96孔白板中的每一孔加入100μl的细胞悬浮液；由此细胞密度为10k每孔。用细胞名称、传代数、接种密度、日期和操作者的名字标记板。将96孔测定板放于37℃/5％CO₂培养箱中24小时。

制备或以25mM溶于100％DMSO提供化合物。这是化合物储存液。稀释程序应在细胞培养超净台中进行。将储存液分配于96孔板的第二排中。通过将10μl的化合物转移至含有40μl的DMSO的下一个孔中来制备9步骤(总共10个浓度)，5倍系列的稀释液。使用12道移液管从每一孔抽吸2μl的上文化合物溶液并且加至198μl完全培养基以获得具有1％DMSO的10倍浓度化合物溶液，充分混合。

从37℃/5％CO₂培养箱移出96孔测定板，在倒置显微镜下检查细胞形态。在细胞培养超净台中，将10μl的10×浓度的化合物溶液加入96孔测定板上的每个孔中。一式两份进行所有的化合物的剂量响应。化合物的起始最终浓度是25μM并且DMSO终浓度0.1％。用化合物代码和浓度标记板。将96孔测定板放在CO₂培养箱中48小时。将30μl的Stead-Glo萤光素酶系统(Promega)试剂加至每个孔中并且通过在板振荡器上轻柔振荡5分钟来混合以允许完全的细胞溶解。用Envision(Perkin Elmer)以2秒的积分时间测量发光。记录并且分析数据。

细胞培养基是DMEM完全培养基：补充以下的DMEM(LifeTechnologies #41965-039)：10％FCS、2mM谷氨酰胺(Glutamin)(LifeTechnologies #25030-024)、青霉素(100IU/ml)/链霉素(100μg/ml)(LifeTechnologies #15140-114)和1×非必需氨基酸(Life Technologies#11140-035)。G418(“遗传霉素”，Life Technologies)：浓度按原始物质的重量/体积给出。典型批次的比活是由制造者说明的大约700μg/mg。这一值不是必然反映使用者系统中的生物学活性。因此，每个新的批次的G418应被单独测试，例如在使用不同选择条件(0.2-1mg/ml)的电穿孔实验中。

B.用于HCV复制子报告子细胞系的MTT测定

MTT测定(和MTS测定)是用于测量酶将MTT或MTS+PMS还原为产生紫色的甲臜(formazan)的活性的实验室测试和标准的比色测定(测量颜色变化的测定)。其同样被用来确定可能的药剂和其他有毒物质的细胞毒性，因为这些剂将导致细胞毒性以及因此的代谢异常和因此测定中减少的性能。黄色MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯四唑溴化盐，一种四唑)在活的细胞中被还原为紫色甲臜。http://en.wikipedia.org/wiki/MTT_assay-cite_note-pmid6606682-0#cite_note-pmid6606682-0。加入增溶溶液(通常二甲亚砜、酸化的乙醇溶液或去垢剂十二烷基硫酸钠溶于稀盐酸的溶液)以将不溶解的紫色甲臜产物溶解为有色溶液。这一有色溶液的吸光度可通过在特定波长(通常从500至600nm)经由分光光度计测量来定量。吸收最大值取决于所使用的溶剂。

如这一实施例中部分A中所描述的制备培养基、培养板和添加剂。在37℃恒温水浴中预热培养基。从37℃/CO₂培养箱移出培养皿。检查培养皿上标记的细胞名称和完全培养基以及传代编号。小心抽吸培养基并且加入1ml PBS以漂洗细胞。移去并且弃掉溶液并且加入1ml的0.25％胰蛋白酶/0.02％EDTA。使用加入的胰蛋白酶/EDTA漂洗细胞以确保所有的细胞被漂洗。用真空泵移去胰蛋白酶/EDTA并且于37℃孵育3-5分钟。在倒置显微镜下检查细胞形态以确认单细胞悬浮液是清楚可见的。将3ml的完全培养基加至培养皿并且通过轻柔抽吸悬浮细胞。使用血红蛋白计计数细胞数目。通过加入适当体积的完全培养基将细胞密度调节至100k/ml。向96孔白板中的每一孔加入100μl的细胞悬浮液；由此细胞密度为10k每孔。用细胞名称、传代数、接种密度、日期和操作者的名字标记板。将96孔测定板放于37℃/5％CO₂培养箱中24小时。

制备或以25mM溶于100％DMSO提供化合物。这是化合物储存液。稀释程序应在细胞培养超净台中进行。将储存液分配于96孔板的第二排中。通过将10μl的化合物转移至含有90μl的DMSO的下一个孔中来制备9步骤(总共10个浓度)，5倍系列的稀释液。对所有化合物重复。使用12道移液管从每一孔抽吸2μl的上文化合物溶液并且加至198μl完全培养基以获得具有1％DMSO的10倍浓度化合物溶液，充分混合。从37℃/5％CO₂培养箱移出96孔测定板，在倒置显微镜下检查细胞形态。在细胞培养超净台中，将10μl的10×浓度的化合物溶液加入96孔测定板上的每个孔中。一式两份进行所有的化合物的剂量响应。化合物的起始最终浓度是25μM并且DMSO终浓度0.1％。

用化合物代码和浓度标记板。将96孔测定板放在CO₂培养箱中48小时。将10μl的5mg/ml MTT加至每个孔中并且在37℃/CO₂培养箱中孵育4小时。将100μl的测试溶液(10％SDS+5％异丁醇+10mmol/L HCl)直接加至每个孔并且在37℃/5％CO₂培养箱中孵育过夜。于580/680nm在SpectraMax Plus 384(MDC)测量吸光度。记录并且分析结果。

C.HCV基因型2a感染克隆测定

部分A和B中的测定被用来产生本文支持的基因型1b抑制活性和相关细胞毒性(存活率)信息。这一测定已经被用来产生本文支持的基因型2a抑制活性信息。

阶段1：RNA转录

1)以XbaI将FL-J6/JFH-5’C19Rluc2AUbi质粒于37℃线性化2小时并且在1％琼脂糖凝胶上运行以检查消化的完全性。2)通过使用绿豆核酸酶的处理在30℃消化5’悬垂30分钟。3)对于Bart79I-luc质粒(与Elazar等人J.Virol.2003，77(10)：6055-61(其通过引用并入本文)中描述的Bart79I质粒相似，不同的是用编码萤火虫萤光素酶的基因代替新霉素磷酸转移酶基因)的线性化，使用ScaI限制性核酸内切酶，然后在凝胶上检测线性化的模板DNA以确定裂解是完全的，随后进行蛋白酶k消化。4)通过用蛋白酶K消化30分钟、苯酚-氯仿抽提、乙醇沉淀来纯化模板，然后以1μg/μl重悬。5)对于转录反应，通过使用用于FL-J6/JFH-5’C19Rluc2AUbi的T7Megascript试剂盒(Ambion，Austin，TX)或用于Bart79I-luc的RiboMax^TM试剂盒(Promega，Madison，WI)来使用1μg纯化的模板。将反应物在37℃孵育4小时。6)加入DNA酶15分钟。7)用等体积的苯酚/氯仿并且之后用等体积的氯仿抽提。回收水相并且将其转移至新的试管中。8)通过加入1体积的异丙醇并充分混合来沉淀RNA。9)在-20℃下冷却混合物至少15分钟。在4℃下以最大的速度离心15分钟以将RNA成团。10)小心移去上清液并在不含RNA酶和DNA酶的水中以1μg/μl重悬RNA。11)在凝胶上运行并检测RNA浓度。12)制备等份试样并储存在-80℃。

阶段2：电穿孔Huh7.5细胞

1)用PBS清洗细胞一次，用胰蛋白酶消化。2)在50ml试管中，以每10cm平板中总体积5ml的完全培养基(所有合在一起)重悬细胞。3)在4℃下以1000×RPM将细胞成团5分钟。抽吸上清液并且在10ml冰冻的不含RNA酶的过滤的1×PBS(BioWhitaker)中重悬-轻轻来回抽吸～5次以除去细胞团块。4)如之前一样再次以1000×RPM将细胞成团，并且再次在10ml冰冻的PBS(BioWhitaker)中重悬。5)移出10μl等份试样以确定细胞浓度。6)再次将细胞成团并在不含RNA酶的冰冷PBS中以1.5×10⁷个细胞/m1终浓度重悬。需要：0.4ml中6×10⁶个细胞中每次电穿孔(ep)和5μg的FL-J6/JFH-5’C19Rluc2AUbi RNA或Bart79I-luc RNA。7)将5μg RNA等份试样放置于eppendorf管中(每次电穿孔一个管)。8)移出0.4ml的细胞悬液并添加至RNA中。通过抽吸混合两次。9)立即转移0.4ml至2mm间隙的电击杯中。10)对细胞施加脉冲：820v、5次脉冲、99μs，220ms间隔、单极。11)使细胞静置15分钟。12)使用巴斯德(Pasteur)吸管将杯体中的细胞转移到培养基中。由所有的管中制备总的储备液。13)将10,000个细胞/孔铺在96孔板中。14)稍微旋转平板以便平均细胞铺板。15)孵育24小时，然后处理。

阶段3：处理板

1)在电穿孔后约24小时，制备含有所需浓度的药物的培养基。2)吸出培养基并添加100μl的新鲜培养基和药物。在开始留下未处理的孔，并在结束时再次留下未处埋的孔。3)每天一次重复，持续2天以上。

阶段4：收获(电穿孔后第5天)

1)阿尔玛蓝测定-a)包括用于背景扣除(以及还用于容易地观察颜色改变)的培养基。b)吸出培养基。c)制备培养基加10％阿尔玛蓝的储备液。每孔的总体积为100μl。d)在37℃下孵育2-2.5小时(或直到有颜色改变)。c)在flex station上读板。

2)海肾萤光素酶(Renilla Luciferase)测定-a)吸出含有阿尔玛蓝的培养基。b)用1×PBS洗涤。C)完全吸出(吸出，然后倾斜并再次吸出剩余缓冲液)。d)确定需要哪种裂解缓冲液：萤火虫或海肾。e)添加30μl的1×裂解缓冲液(将1体积的5×裂解缓冲液添加到4体积的无菌水中)。f)将板振荡15分钟。g)在-80℃下冷冻。此时，技术人员可以停至或继续下一步。

阶段5：通过发光计读取。a)将板解冻。b)将板放置在冰上直到准备好读数。c)制备技术人员所需的底物试剂；对于海肾：将海肾缓冲液解冻，制备1体积100×海肾萤光素酶(Renilla luc)底物加100体积萤光素酶测定缓冲液+2ml用于启动发光计(例如，对于4ml海肾萤光素酶底物，加入40μl测定缓冲液)。对于萤火虫：解冻10ml萤火虫缓冲液并将其添加到萤光素酶试剂中。d)根据制造商的指示使用标准发光计读板。

D.HERG通道测定：

属于不同类别的药物已经显示与QT延长和某些情况中的严重的室性心律失常有关。这些不良事件最常见的机制是一种或多种心脏钾通道尤其是hERG的抑制。这一钾流对于心肌细胞复极化来说是重要的并且是延长QT间隔的药物的共用靶。这一研究中的测试品因此被表征以确定它们抑制hERG通道的能力。使用表达hERG mRNA的稳定转染的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系测量离子通道活性。CHO细胞系中表达的这一克隆的通道的药理学与在天然组织中观察到的非常相似。

细胞：稳定表达hERG通道的AVIVA的CHO细胞系被用于本研究。将细胞在含有10％FBS、1％青霉素/链霉素和500μg/ml G418的DMEM/F12中培养。测试前，使用Accumax(Innovative Cell Technologies)收获细胞。

溶液：对于电生理学的记录，使用下列溶液。外部溶液：2mM CaCl₂、2mM MgCl₂、4mM KCl、150mM NaCl、10mM葡萄糖、10mM HEPES、310-320mOsm、pH 7.4(用1M NaOH调节)。内部溶液：140mM KCl、10mM MgCl₂、6mM EGTA、5mM HEPESNa、mM ATP-Mg、300-320mOsm、pH 7.25(用1M KOH调节)。

电生理学：使用PX 7000A(Axon Instruments)用VIVA的SealChip^TM技术进行全细胞的记录。将细胞电压钳制在-80mV的控制电位。之后通过至-50mV 300毫秒的去极化步骤激活hERG流。这一-50mV的第一步骤被用作测量尾电流的峰值振幅的基线。之后，施加至+20mV的电压阶跃5秒以激活通道。最后回到-50mV的步骤5秒除去激活并且记录灭活的尾电流。

化合物处理和稀释：从10或30mM DMSO储存液制备所有化合物。通过超声20分钟之后强力涡旋混合溶液。测试之前，使用外部溶液在玻璃小瓶稀释化合物至测试浓度。使用前不超过20分钟内制备稀释液。所有最终稀释液中存在等量的DMSO(0.1％)。

电生理学程序：获得全细胞模式之后，将细胞监测90秒以评估稳定性并且之后用外部溶液清洗66秒。之后在整个程序中每12秒将上文描述的电压步骤施加于细胞。仅具有高于阈值的记录参数(参见质量控制部分)的稳定细胞允许进入药物加入程序。含有0.1％DMSO(媒介物)的外部溶液被施加于细胞以建立基线。允许所述电流稳定3至5分钟后，施加测试品。在4次不同的加入中将测试品溶液加至细胞。将细胞保留在测试溶液中直到所述测试品的作用达到稳定状态，最多12分钟。之后，加入1μM的西沙必利(正对照)。最后，进行使用外部溶液的清洗直到恢复电流达到稳定状态。

数据分析：使用DataXpress(Axon Instruments)、Clampfit(AxonInstruments)和Origin(Originlab Corporation)软件进行数据分析。

质量控制：报告中包括的数据来源于满足下列所有标准的实验：a)记录参数：膜电阻(Rm)：＞200MΩ；接入电阻(Ra)：＜15MΩ；尾电流振幅：＞150pA；b)药理学参数：1μM西沙必利：＞95％抑制。

按照这些程序，发现本发明提供的几种化合物缺少与hERG通道实质的交叉反应性。

实施例4

这一实施例展示在实施例1中描述的测定中测试本发明的示例性化合物的结果。化合物被分在两个表中：表6展示“1b活性类似物”而表7展示“克立咪唑样类似物”。这些分类中的每一种讨论于下文中。

表6展示在1b复制子测定中证明显著的抗HCV活性的化合物的结果。因此，表6提供本发明提供的1b活性类似物的一些非限制性实例。这些化合物中的许多也在2a感染克隆测定中显示活性；在1b复制子测定中活性的化合物通常在2a感染克隆测定中也是活性的。在1b复制子测定中，以从25μM至0.001μM浓度的3倍系列稀释测试待测试化合物。结果被报告为抗1b复制子的复制的50％抑制的微摩尔活性(EC₅₀)。＞25μM的高值意味着需要＞25μM的测试化合物来抑制1b复制子的复制的50％。1μM的低值意味着需要1μM的测试化合物来抑制1b复制子的复制的50％。因此，较低的EC₅₀值对应较高的效力。为了说明，参见来自表6的化合物EBP899，其对这一测定显示2.2μM的EC₅₀值，表示这一化合物是抗1b复制子复制的相对强力的抑制剂。此外，表6仅列出具有证明＞10μM的细胞存活率和在1b复制子测定中＜10μM的活性的测试结果的化合物。以从25μM至0.001μM浓度的3倍系列稀释测试化合物的细胞毒性。结果被报告为微摩尔活性。＞25μM的高值表示在25μM没有观察到毒性。

此外，对代表性化合物测试抗hERG钾通道的活性。在这一测定中，结果被报告为抗hERG通道复极化活性的抑制的微摩尔活性。＜1μM的低值意味着需要＜1μM的化合物来抑制hERG通道活性的50％。＞10μM的高值意味着需要＞10μM的化合物来抑制hERG通道活性的50％。为了示例性说明，参见表6中的化合物EBP288，其对这一测定显示1μM的值，表示至少1μM的血浆浓度将可能是在人类中导致可能的QT延长所需要的。具有与EBP288的结构类似的结构的化合物(在R₃中含有N-连接的杂环的化合物，其中邻近氮的取代基是小的)在这一测定中应具有相似的活性。还是为了示例性说明，表6中的化合物EBP640，其对于这一测定显示5.3μM的值，表示将需要5μM的高得多的血浆浓度以导致QT延长。具有与上文所提及的化合物相似的结构的化合物(在R₃中含有C-连接的杂环的化合物，其中杂原子是酰化的N)在这一测定中应具有相似的活性。通常，在hERG测定中显示无活性或仅有低活性的化合物是优选的。

表6，1b活性类似物

表7展示在2a感染克隆测定中于5μM证明抗HCV的显著活性的化合物的结果。表7提供本发明提供的克立咪唑样类似物的一些实例。在2a感染克隆测定中，在5μM和10μM两个浓度测试待测试化合物。仅来自于5μM的测试的结果示于表7中。结果被报告为％无测试化合物存在时对照样品的复制活性。40％的低值表示5μM的测试化合物时40％的复制活性保留，表示高效力的化合物。90％的高值表示5μM的测试化合物时90％的复制活性保留，表示低效力的化合物。此外，表7仅列出具有证明于5μM的＞85％和于10μM的＞80％的细胞存活率水平以及在2a感染克隆测试中＜90％的活性的测试结果的化合物。在5μM和10μM的浓度测试化合物的细胞毒性。结果被报告为％细胞存活。在5μM＞85％和在10μM＞80％的高值表示5μM时高于85％的细胞是有活力的而在10μM时高于80％的细胞是有活力的。

表7，克立咪唑样类似物

下文列出的是在1b复制测定中无活性的化合物。这些包括其中R₁是Me，并且R₃是包含1个氮原子、与羧酸或羧基酯取代基直接连接的N-连接的5或6元非芳香族杂环的化合物。

在一个实施方案中，不是上文描述的那些化合物之一的化合物可被用来治疗HCV。在另一个实施方案中，上文的化合物中的一个或多个可被用于本公开内容的其他实施方案中以治疗HCV。

应当注意的是比率、浓度、量和其他数值数据在本文中可以表示为范围形式。应理解的是这种范围形式是为了方便和简洁而使用的，因此应以灵活地方式理解为不止包括作为范围界限而明确列出的数值，还包括该范围内所涵盖的所有单个数值或子范围，就如同各数值和子范围被明确地列出一样。为了示例性说明，“约0.1％至约5％”的浓度范围应被解释为不止包括明确列出的约0.1wt％至约5wt％的浓度，还包括在所指示范围内的单个浓度(例如，1％、2％、3％和4％)和子范围(例如，0.5％、1.1％、2.2％、3.3％和4.4％)。术语“约”可以包括被修饰的数值的±1％、±2％、±3％、±4％、±5％、±6％、±7％、±8％、±9％或±10％或更多。此外，短语“约‘x’至‘y’”包括“约‘x’至约‘y’”。

应强调的是本公开内容的上述实施方案仅为实现的可能实例，并且仅为清楚地理解本公开内容的原理而列出。可以对本公开内容的上述实施方案进行一些变化和改良而基本上不背离本公开内容的精神和原理。所有的这些修改和变化都预期包括在本公开内容的范围内。

Claims

1.一种化合物，所述化合物具有式II-a中所示的结构或其药学上可接受的盐或立体异构体

其中R₁是其中V选自由烷基、环烃基、杂环、芳基和杂芳基组成的组；

R₃是-OH、-O(CH₂)_nX或-(CH₂)_nX，其中n是1、2、3或4，并且-(CH₂)_nX中的X选自由以下组成的组：-NH₂、-NH(烷基)、-N(烷基)₂、-OH、-O-烷基、-O-芳基、-SO₂(烷基)、-SO₂NH₂、-SO₂NH(烷基)、NHSO₂(烷基)、

并且-O(CH₂)_nX中的X选自由以下组成的组：-OH、-O-烷基、-O-芳基、-SO₂(烷基)、-SO₂NH₂、-SO₂NH(烷基)、NHSO₂(烷基)、

R₄-R₇中的每一个独立地选自下列组成的组：-H、-Br、-Cl、-F、-I、-CH₃、-CN、-OH、-OCH₃、-NO₂、-NH₂、-NHCO(烷基)、

或任选地，R₄和R₅、R₅和R₆、或R₆和R₇由键连接在一起形成5、6或7元环；或任选地，R₄和R₅、R₅和R₆、或R₆和R₇连接在一起形成1,2-(亚甲二氧基)苯环系统；条件是式II-a的化合物不是

其中所述化合物选自以下化合物组成的组：

2.如权利要求1所述的化合物，所述化合物具有以下结构：

3.如权利要求1所述的化合物，所述化合物具有以下结构：

4.如权利要求1所述的化合物，所述化合物具有以下结构：

5.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体或互变异构体。

6.如权利要求5所述的药物组合物，所述药物组合物还包括选自由下列组成的组的一种或多种其他抗HCV治疗剂：HCV NS3蛋白酶抑制剂、HCV NS5B RNA依赖性RNA聚合酶抑制剂、thiazolide、核苷类似物、干扰素-α、聚乙二醇化的干扰素、利巴韦林、左旋韦林、韦拉米啶、TLR7激动剂、TLR9激动剂、亲环蛋白抑制剂、α-葡萄糖苷酶抑制剂、NS5A抑制剂和NS3解螺旋酶抑制剂。

7.如权利要求6所述的药物组合物，所述thiazolide是持续释放的thiazolide。

8.如权利要求6所述的药物组合物，其中所述一种或多种其他抗HCV治疗剂是利巴韦林或干扰素-α。