CN102443545A - 优良am真菌菌株的筛选方法 - Google Patents
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Abstract
本发明了公开了一种优良AM真菌菌株的筛选方法，它包括以下步骤：选取成片发病或长势不正常植烟土壤中的正常烟株根际土壤，每株根际土壤所取的土样为3-8kg，将所取的各土样进行装盆，移栽烟苗1-2株进行盆栽，70-90天后，从盆中拔出烟株，切下烟根后将其埋回盆中，继续在埋有烟根的盆中移栽1-2株烟苗，70-90天后，再从盆中拔出烟株，切下烟根后将各烟根分别埋入事前准备好的装有相同土样来源的盆中，移栽烟苗，每盆1株，不施肥料，进行目标性的管理选出具有优良目标特性的AM真菌菌株。本发明具有工作量小、选择效率高、方法简单、操作方便、协同性强、效果好等优点，且所得菌株为天然混合菌株。
Description
技术领域
本发明涉及一种优良AM真菌菌株的筛选方法，属于丛枝菌根真菌的筛选领域。
背景技术
丛枝菌根真菌（Arbuscular mycorrhizal fungus）简称AM真菌，在自然界中分布极其广泛，它能与陆地上80%以上的植物形成菌根，能以不同方式或途径影响植物的许多代谢过程，不仅对植物的生长发育、营养状况、抗逆性以及产量与品质等具有重要作用，而且可以在一定程度上改良土壤结构等。
烟草是丛枝菌根真菌共生植物之一，随着社会的发展，人们对吸烟给身体带来的危害越来越关注，对烟叶生产过程中化肥和农药的施用量的控制越来越强烈，大量的研究表明，植物接种AM真菌后能够提高植物的逆性。
我们通过对烤烟接种AM真菌进行研究，结果表明，烤烟接种AM真菌能够促进烟株生长、提高烟叶产量、提高烟叶外观等级、提高烟叶感官质量、同时提高烟株抗逆性；研究进一步证明，不同的菌株其功能各不相同，混合菌株往往优于单株，因此，能够筛选出优良菌株或菌株组合是生产应用上的关键。
目前，关于优良AM真菌菌株的筛选适用于科研及小范围试验，其方法是先将土壤中的各种AM真菌的孢子分离出来，然后进行菌株的扩繁，得到扩繁后的AM真菌菌剂后再进行活体试验，逐一对所选的AM真菌进行盆栽试验，通过不同的管理条件和选择指标来确定该AM真菌的特性；由上述的过程可以看出现有的这种AM真菌的筛选存在严重的工作量大，效率低下等问题，一般一个目标菌株的筛选在多个科研人员协作的条件下需要3年以上的时间、且花费成本很高；同时因所选者的AM真菌是由单一的孢子扩繁而来的，所以所得的AM真菌只存在单一的目标特性，不同AM真菌之间存在是否具有协同性和协同性与效果差等缺点。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：提供一种工作量小、选择效率高、方法简单、操作方便、协同性强、效果好，且菌株为天然混合菌株的优良AM真菌菌株的筛选方法，可以克服现有技术的不足。
本发明的技术方案是：优良AM真菌菌株的筛选方法包括以下步骤：
a、选取成片发病或长势不正常植烟土壤中的正常烟株根际土壤，每株根际土壤所取的土样为3-8kg；
b、将所取的各土样进行装盆，移栽烟苗1-2株进行盆栽，盆栽不施肥料，进行正常水分管理；
c、70-90天后，从盆中拔出烟株，切下烟根后将其埋回盆中，继续在埋有烟根的盆中移栽1-2株烟苗，不施肥料，进行正常水分管理；
d：70-90天后，再从盆中拔出烟株，切下烟根后将各烟根分别埋入事前准备好的装有相同土样来源的盆中，移栽烟苗，每盆1株，不施肥料，进行目标性的管理选出具有优良目标特性的AM真菌菌株；
b步骤中所述的将所取的各土样进行装盆为：每株根际土样分别装盆或将每株根际土样混合后装盆。
c步骤中，切下的烟根被埋入其原生长的盆或其它烟株生长的盆。
所述的目标性的管理由具体如下：
| 选择目标 | 管理条件 | 选择指标 |
| 促生菌株 | 正常水分 | 农艺性状或干物质积累 |
| 抗病菌株 | 接种病原 | 发病较轻或不发病 |
| 抗旱菌株 | 控制水分 | 萎蔫程度小 |
| 提质菌株 | 品质比较 | 选择能够提高品质菌株 |
与现有技术比较，本发明通过两次对丛枝菌根扩繁，使得所得且所选出的目标菌株为天然混合菌株：天然混合菌株自身具有完美的协同性，这样可以使所选的AM真菌可同时具有多重目标特性，如促生和抗病、促生与抗旱或抗旱与抗病等；这种混合菌株相对现有实验室所得的单一菌株相比其效果明显增加，通过试验比对试验发现其可以更好的促进烟株生长、提高烟叶产量、烟叶外观等级、烟叶感官质量和烟株抗逆性。
采用本方法筛选AM真菌菌株是直接以活体为对象的，且通过的活体的成长比对可以直接得出该AM针具的目标特性，相对现有的筛选工序可以避免AM真菌孢子的选取，扩繁、通过比对进行特性确定工序；其工作量大幅度减小，完全可以由一位科研人员带几位农民来完成，且优质混合AM真菌的选取也可在1-2年内完成，其效率明显提高；且该筛选方法极为简单，可直接通过作物的生长表现直接筛选。同时本发明可使得AM真菌的应用可以由实验室延伸到实际的大田种植，能带来显著的社会效益和经济效益。
下表为申请人在菌株筛选过程中不同土样中菌株组合促生效果对比实验，通过对比可以明显看出不同的混合菌株其促生效果也存在差异，通过选取效果好的烟根进行扩繁制作菌剂即可应用。
凤岗7个典型植烟土壤经诱集筛选，优良菌株对烤烟农艺性状的影响
| 菌株编号 | 茎围cm | 株高cm | 最大叶长cm | 最大叶宽cm | 叶数cm |
| 1 | 4.5 | 76 | 38 | 15 | 18 |
| 2 | 3.5 | 47 | 41 | 16 | 14 |
| 3 | 5.5 | 64 | 42 | 15 | 15 |
| 4 | 5.5 | 82 | 47 | 19 | 17 |
| 5 | 5.5 | 98 | 47 | 19 | 17 |
| 6 | 4.5 | 56 | 40 | 14 | 14 |
| 7 | 4.5 | 45 | 40 | 14 | 13 |
| CK | 4.0 | 50 | 42 | 14 | 14 |
湄潭10个典型植烟土壤经诱集筛选，优良菌株对烤烟农艺性状的影响
| 菌株编号 | 茎围cm | 株高cm | 最大叶长cm | 最大叶宽cm | 叶数cm |
| 1 | 5 | 70 | 43 | 17 | 14 |
| 2 | 5 | 100 | 46 | 22 | 19 |
| 3 | 5 | 103 | 48 | 20 | 18 |
| 4 | 5 | 73 | 45 | 18 | 16 |
| 5 | 4.5 | 64 | 42 | 21 | 14 |
| 6 | 5.5 | 80 | 42 | 16 | 14 |
| 7 | 5.5 | 50 | 41 | 14 | 13 |
| 8 | 5 | 72 | 39 | 18 | 14 |
| 9 | 4.5 | 71 | 40 | 18 | 13 |
| 10 | 4.5 | 62 | 42 | 14 | 13 |
| CK | 4.0 | 50 | 42 | 14 | 14 |
兴义6个典型植烟土壤经诱集筛选，优良菌株对烤烟农艺性状的影响
| 菌株编号 | 茎围cm | 株高cm | 最大叶长cm | 最大叶宽cm | 叶数cm |
| 1 | 5 | 72 | 42 | 19 | 14 |
| 2 | 4.5 | 68 | 40 | 19 | 15 |
| 3 | 4.5 | 55 | 37 | 13 | 13 |
| 4 | 5 | 70 | 43 | 21 | 16 |
| 5 | 5 | 106 | 44 | 16 | 18 |
| 6 | 5 | 87 | 44 | 18 | 16 |
| CK | 4.0 | 50 | 42 | 14 | 14 |
兴仁9个典型植烟土壤经诱集筛选，优良菌株对烤烟农艺性状的影响
| 菌株编号 | 茎围cm | 株高cm | 最大叶长cm | 最大叶宽cm | 叶数cm |
| 1 | 5.5 | 98 | 46 | 18 | 16 |
| 2 | 5.5 | 90 | 46 | 21 | 18 |
| 3 | 5 | 62 | 40 | 18 | 15 |
| 4 | 5 | 74 | 41 | 15 | 15 |
| 5 | 5 | 74 | 45 | 15 | 14 |
| 6 | 5.5 | 93 | 44 | 20 | 17 |
| 7 | 5.5 | 93 | 45 | 19 | 16 |
| 8 | 6 | 100 | 44 | 21 | 18 |
| 9 | 4.5 | 45 | 37 | 13 | 10 |
| CK | 4.0 | 50 | 42 | 14 | 14 |
从以上4个对比表格可以明显看出，按本法所筛选的混合AM菌株其对烤烟农艺性状的影响是非常显著的，该筛选方法应用到实际生产上可行的。
因时间原因，申请人无法对所筛选的混合菌株是否还同时具备抗旱、抗病、提质等特性进行规模化试验，但经过盆栽试验发现其筛选的促生菌株对抗旱和抗病性能也有很大程度的提升。
具体实施方式
实施例1：优良AM真菌菌株的筛选包括以下步骤：
a、选取成片发病或长势不正常植烟土壤中的正常烟株根际土壤，每株根际土壤所取的土样为3kg；
b、将所取的各根际土样分别单独进行装盆，移栽烟苗1-2株进行盆栽，盆栽不施肥料，进行正常水分管理；
c、70天后，从盆中拔出烟株，切下烟根后将其埋回盆中，继续在埋有烟根的盆中移栽1-2株烟苗，不施肥料，进行正常水分管理；
d：70天后，再从盆中拔出烟株，切下烟根后将各烟根分别埋入事前准备好的装有相同土样来源的盆中，移栽烟苗，每盆1株，不施肥料，进行目标性的管理选出具有优良目标特性的AM真菌菌株；
所述的目标性的管理由具体如下：
| 选择目标 | 管理条件 | 选择指标 |
| 促生菌株 | 正常水分 | 农艺性状或干物质积累 |
| 抗病菌株 | 接种病原 | 发病较轻或不发病 |
| 抗旱菌株 | 控制水分 | 萎蔫程度小 |
| 提质菌株 | 品质比较 | 选择能够提高品质菌株 |
实施例2：优良AM真菌菌株的筛选包括以下步骤：
a、选取成片发病或长势不正常植烟土壤中的正常烟株根际土壤，每株根际土壤所取的土样为5kg；
b、将所取的各根际土样混合后分别进行装盆，移栽烟苗1-2株进行盆栽，盆栽不施肥料，进行正常水分管理；
c、80天后，从盆中拔出烟株，切下烟根后将其埋回原种植的盆中，继续在埋有烟根的盆中移栽1-2株烟苗，不施肥料，进行正常水分管理；
d：80天后，再从盆中拔出烟株，切下烟根后将各烟根分别埋入事前准备好的装有相同土样来源的盆中，移栽烟苗，每盆1株，不施肥料，进行目标性的管理选出具有优良目标特性的AM真菌菌株；
所述的目标性的管理由具体如下：
| 选择目标 | 管理条件 | 选择指标 |
| 促生菌株 | 正常水分 | 农艺性状或干物质积累 |
| 抗病菌株 | 接种病原 | 发病较轻或不发病 |
| 抗旱菌株 | 控制水分 | 萎蔫程度小 |
| 提质菌株 | 品质比较 | 选择能够提高品质菌株 |
实施例3：优良AM真菌菌株的筛选包括以下步骤：
a、选取成片发病或长势不正常植烟土壤中的正常烟株根际土壤，每株根际土壤所取的土样为8kg；
b、将所取的各根际土样混合后分别进行装盆，移栽烟苗1-2株进行盆栽，盆栽不施肥料，进行正常水分管理；
c、90天后，从盆中拔出烟株，切下烟根后将其埋回其它种植烟株的盆中，继续在埋有烟根的盆中移栽1-2株烟苗，不施肥料，进行正常水分管理；
d：90天后，再从盆中拔出烟株，切下烟根后将各烟根分别埋入事前准备好的装有相同土样来源的盆中，移栽烟苗，每盆1株，不施肥料，进行目标性的管理选出具有优良目标特性的AM真菌菌株；
所述的目标性的管理由具体如下：
| 选择目标 | 管理条件 | 选择指标 |
| 促生菌株 | 正常水分 | 农艺性状或干物质积累 |
| 抗病菌株 | 接种病原 | 发病较轻或不发病 |
| 抗旱菌株 | 控制水分 | 萎蔫程度小 |
| 提质菌株 | 品质比较 | 选择能够提高品质菌株 |
Claims (4)
1.一种优良AM真菌菌株的筛选方法，其特征在于：它包括以下步骤：
a、选取成片发病或长势不正常植烟土壤中的正常烟株根际土壤，每株根际土壤所取的土样为3-8kg；
b、将所取的各土样进行装盆，移栽烟苗1-2株进行盆栽，盆栽不施肥料，进行正常水分管理；
c、70-90天后，从盆中拔出烟株，切下烟根后将其埋回盆中，继续在埋有烟根的盆中移栽1-2株烟苗，不施肥料，进行正常水分管理；
d：70-90天后，再从盆中拔出烟株，切下烟根后将各烟根分别埋入事前准备好的装有相同土样来源的盆中，移栽烟苗，每盆1株，不施肥料，进行目标性的管理选出具有优良目标特性的AM真菌菌株。
2.根据权利要求1所述的优良AM真菌菌株的筛选方法，其特征在于：所述的优良目标特性由目标、管理条件和选择指标构成；目标为选取促生菌株、抗病菌株、抗旱菌株和提质菌株；依次对应的选择指标为：农艺性状或干物质积累、发病较轻或不发病、萎蔫程度小和选择能够提高品质菌株；依次对应的管理条件为正常水分、接种病原、控制水分和品质比较。
3.根据权利要求1所述的优良AM真菌菌株的筛选方法，其特征在于：b步骤中所述的将所取的各土样进行装盆为：每株根际土样分别装盆或将每株根际土样混合后装盆。
4.根据权利要求1所述的优良AM真菌菌株的筛选方法，其特征在于：c步骤中，切下的烟根被埋入其原生长的盆或其它烟株生长的盆。
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|---|---|---|---|---|
| CN104962482A (zh) * | 2015-06-25 | 2015-10-07 | 无锡本元生物科技有限公司 | 一种am菌根真菌mw21及其生防菌剂及应用 |
| CN110063160A (zh) * | 2018-01-20 | 2019-07-30 | 杭州绿风生态环境建设集团有限公司 | 一种利于园林植物生长的丛枝菌根真菌筛选方法 |
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