CN102438634B - 包含银纳米粒和何首乌提取物的组合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

公开了包含有效量银纳米粒和何首乌提取物的药用组合物，局部给予宿主所述药用组合物以增加毛发生长的方法及其用途。

Description

包含银纳米粒和何首乌提取物的组合物及其用途
发明领域
本发明涉及包含有效量银纳米粒和何首乌提取物的药用组合物，以及局部给予宿主所述药用组合物以增加毛发生长的方法，以及所述药用组合物在制备增加宿主毛发生长的药物中的用途。
发明背景
金属纳米粒因为其在许多学科领域如催化和纳米电子有着重要的应用，已吸引了越来越多的对化学领域的关注(参见：(a)El-Sayed，M.A.Acc.Chem.Res.2004，37，326.(b)Ho，C.-M.；Yu，W.-Y.；Che，C.-M.Angew.Chem.Int.Ed.2004，43，3303.(c)Lang，H.；May，R.A.；Iversen，B.L.；Chandler，B.D.J.Am.Chem.Soc.2003，125，14832.(d)Lewis，L.N.Chem.Rev.1993，93，2693)。近来，已付出大量努力致力于开发金属纳米粒的生物医学应用。当生物学标记取得显著进展时(参见：(a)Nicewarner-Pena，S.R.；Freeman，R.G.；Reiss，B.D.；He，L.；Pena，D.J.；Walton，I.D.；Cromer，R.；Keating，C.D.；Natan，M.J.Science 2001，294，137.(b)Elghanian，R.；Storhoff，J.J.；Mucic，R.C.；Letsinger，R.L.；Mirkin，C.A.Science 1997，277，1078)，几乎没有金属纳米粒的治疗学应用在文献中被报导。值得一提的实例是银纳米粒的抗微生物特性，其已用于伤口愈合(Wright，J.B.；Lam，K.；Hansen，D.；Burrell，R.E.Am.J.Inf.Cont.1999，27，344)。
斑秃是头皮和身体其它部位毛发脱落的疾病。据报导与自身免疫相关，其作用机制是毛囊被自身免疫系统攻击，从而阻止毛发生长。另一个观察结果是高水平的自然产生的称为双羟睾丸酮(DHT)的激素存在于遗传学归为男性模式脱发的人头皮中，缩短毛发生长期。最终，毛发变得小至实际上看不见。如果不阻止的话，这样能导致典型的男性秃头发际线。
斑秃经常开始于头皮上一个或多个小的、圆的、光滑的秃块，并能发展为全部头发脱落(全秃)或全部身体毛发脱落(普秃)。流行病学上，斑秃影响大约全世界人口的1.7％，仅美国就包括超过470万人，这种病症/疾病对个人的自我形象和自信心有深远的影响，从而影响生活质量，无论在工作还是学习。
各种年龄和人种的男性和女性均可发生斑秃。其发病最经常开始于儿童期/成人早期，且可为心理学破坏性的。尽管斑秃不危及生命，它最肯定改变生活，其突然发病、反复发作和不可预期的病程对被这种疾病困扰的人的生活有深远的心理学影响。
发明内容
PVP涂层银纳米粒子和何首乌的联用对促进毛发生长有协同作用。包含有效量银纳米粒和何首乌提取物的药用组合物比仅银纳米粒在诱导毛发生长方面更有效。
因此，本发明涉及包含有效量银纳米粒、至少一种稳定剂和何首乌提取物，以及至少一种药学可接受稀释剂的药用组合物。
所述稳定剂可以是例如一种或多种蛋白和/或肽，优选人血清白蛋白或转铁蛋白，更优选人血清白蛋白(HSA)。在一个实施方案中，所述稳定剂是聚乙烯吡咯烷酮。
所述何首乌提取物优选何首乌根部提取物，更优选何首乌根部的乙醇提取物。
在一个实施方案中，所述药用组合物中的银纳米粒直径为1至100nm。
在一个实施方案中，所述药用组合物中银纳米粒的浓度为10μM至10mM，优选10μM至1mM。
在一个实施方案中，所述药用组合物中何首乌提取物的浓度为1g/L至1000g/L，优选1g/L至100g/L。
在优选实施方案中，本申请的所述药用组合物包含选自水、乙醇、二甲基亚砜、乙腈、Hepes缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、柠檬酸缓冲液、血清或任何其它种生理学相关的溶剂或溶液，及其混合物的稀释剂。
本发明也涉及增加毛发生长的方法，该方法包含局部给予需要治疗的宿主本发明药用组合物。宿主优选人。
本发明还涉及上文所述的药用组合物在制备增加宿主毛发生长的药物中的用途。
本发明还涉及包含有效量的银纳米粒和何首乌提取物的药用组合物在制备用于增加宿主毛发生长的药物中的用途。
在本发明的用途中，所述药学组合物包含有效量的银纳米粒、何首乌提取物、至少一种稳定剂和至少一种药学上可接受的稀释剂。
在本发明的用途中，所述稳定剂可以是例如一种或多种蛋白和/或肽，优选人血清白蛋白或转铁蛋白，更优选人血清白蛋白(HSA)。在一个实施方案中，所述稳定剂是聚乙烯吡咯烷酮。
在本发明的用途中，何首乌提取物优选何首乌根部的提取物，更优选何首乌根部的乙醇提取物。
在本发明用途的一个实施方案中，所述药用组合物中银纳米粒的直径为1至100nm。
在本发明用途的一个实施方案中，所述药用组合物中银纳米粒的浓度为10μM至10mM，优选10μM至1mM。
在本发明用途的一个实施方案中，所述药用组合物中何首乌提取物的浓度为1g/L至1000g/L，优选1g/L至100g/L。
在本发明用途的优选实施方案中，本申请的药用组合物包含选自水、乙醇、二甲基亚砜、乙腈、Hepes缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、柠檬酸缓冲液、血清或任何其它种类的生理学相关的溶剂或溶液，及其混合物的稀释剂。
所述宿主优选人。
有许多产生不同形状和大小银纳米粒的方法(参见：(a)Raveendran，P.；Fu，J.；Wallen，S.L.J.Am.Chem.Soc.2003，125，13940.(b)Sun，Y.；Xia，Y.Science 2002，298，2176.(c)Esumi，K.；Suzuki，A.；Yamahira，A.；Torigoe，K.Langmuir 2000，16，2604)。
人血清白蛋白(HSA)是循环系统中最丰富的血浆蛋白。先前的报道显示，这种血清蛋白能用于稳定各种金属纳米粒(参见Xie，H.；Tkachenko，A.G.；Glomm，W.R.；Ryan，J.A.；Brennaman，M.K.；Papanikolas，J.M.；Franzen，S.；Feldheim，D.L.Anal.Chem.2003，75，5797)。
包含PVP涂层银纳米粒和何首乌的本发明的药用组合物在促进毛发生长方面有协同作用。
附图简述：
图1是何首乌的照片。
图2是商业上从上海雷允上药业有限公司的首乌片(Shou Wu Pian，Shanghai Lei Yun Shang Pharmaceutical Co.Ltd)获得的PMT片的照片。
图3是带有0.2cm x 0.2cm方格图的1cm x 1cm透明薄膜。
图4是用溶剂对照(仅PVP，图A)、PVP涂层的银纳米粒(纳米Ag-PVP，图B)或混合有5％米诺地尔的PVP涂层银纳米粒(图C)治疗8周后，小鼠鞍前区的照片。纳米Ag-PVP似乎诱导新毛发生长，而添加5％米诺地尔减少这种作用。
图5是用溶剂对照(仅PVP)、仅10％PMT、0.1mM PVP涂层的银纳米粒(纳米Ag-PVP)或0.1mM纳米Ag-PVP和10％PMT的混合物治疗8周后，小鼠的照片。
图6是用仅PVP(溶剂对照)、仅10％PMT、0.1mM纳米Ag-PVP，以及0.1mM纳米Ag-PVP加10％PMT治疗后第3、4、5、6、7和8周时，小鼠敷料皮肤中毛发覆盖面积的百分比。
图7是用含有(1)仅纳米Ag-PVP(2)纳米Ag-PVP加1％(w/v)PMT，(3)纳米Ag-PVP加10％PMT，以及(4)纳米Ag-PVP加50％PMT治疗8周后，测量的裸鼠敷料皮肤中毛发覆盖面积的百分比(n分别等于6、7、8和7，见表3.1)。
图8是用0.1mM纳米Ag-PVP或0.1mM纳米Ag-PVP+10％PMT经皮治疗8周裸鼠皮肤(横截面)Ki67染色。
图9是原位杂交(ISH)检测用纳米Ag-PVP或纳米Ag-PVP+PMT治疗的皮肤横截面(400x)的CD34。
图10显示不同治疗的小鼠敷料皮肤中每个毛囊的CD34+细胞数量(ISH检测)(毛鞘横截面计数，400x，类似图9所示)。
图11显示用各种条件治疗的小鼠体重的测量。
实施本发明的模式
本发明将在以下实施例中被进一步说明。然而，不能认为由此而限制本发明。本领域普通技术人员知道怎样改变示例的制备来得到所需要的结果。
实施例
材料和方法
材料。除非另外指明，所有化学品均购自Sigma-Aldrich Chemical Co.
清洁玻璃器皿以制备银纳米粒
锥形瓶浸泡在碱水浴中(200克氢氧化钠颗粒溶解在2L双蒸水(ddH2O)中)。然后用ddH2O洗涤，接着用MilliQ水，最后浓硝酸洗涤锥形瓶。锥形瓶内的浓盐酸和浓硝酸的混合物(体积比＝1∶3)煮沸30分钟，以除去锥形瓶内的所有金属。接着用MilliQ水洗涤锥形瓶，然后合成银纳米粒。
人血清白蛋白(HSA)涂层银纳米粒的制备
180mg/L无水柠檬酸三钠盐和16mg/L硝酸银加到1LMilliQ水中，混合约5分钟。然后把50mg硼氢化钠粉末加到混合物种，混合20分钟。然后观察到黄色溶液，把12g HSA加到溶液中。
所有人血清白蛋白(HSA)溶解后，溶液经22μm过滤器顶部过滤。使用前溶液4℃保存。
聚乙烯吡咯烷酮(PVP)涂层银纳米粒的制备
为制备100ml聚乙烯吡咯烷酮(PVP)涂层银纳米粒，把5g PVP-K30(来自Sigma-Aldrich Ltd，USA)溶解于100ML 60％乙醇中，完全溶解后随后加入100mg硝酸银粉末。然后把25mgNaBH4的1ml MilliQ水加到溶液中。使用前，含有0.1mM银纳米粒的终溶液4℃储存。
经检验的化学药品的裸鼠局部给药
四周龄雄性无胸腺Balb/c本底裸鼠购自美国Jackson Laboratory。动物随机分为不同的组，以接受不同的治疗，每日在躯干背部(颈圈或鞍前区)1cmx 1cm区域敷料8周。1cm x 1cm的纱布浸以银纳米粒溶液(或涂有HSA或PVP)，并进一步用另一4cm宽的非拉伸棉绉布绷带覆盖，再以4cm宽伸展型绷带覆盖。敷料最后以胶带固定。经过8周的治疗，小鼠断颈处死，收集敷料区域的皮肤片，以4％甲醛固定，进行分析。
何首乌(PMT)的制备
三种类型的样品从何首乌根部的乙醇提取物制备并分离；它们是：
(A)根部提取物(见图1)
100g干燥的PM根捣碎，浸在1000ml 50％乙醇中(即“根与50％乙醇”的比率为1∶10”)。48小时后，收集溶液并滤出，随后用真空旋转蒸发仪减压浓缩。浓缩的提取物随后冷冻并干燥，4℃保存直至使用。10g量的干燥提取物通常从100g PMT的干燥根获得。将100g干燥提取物粉末70℃下溶解在1000ml(即10％W/V)的ddH2O中，完全溶解后PMT溶液4℃储存，直至实验使用。
(B)商业上可获得的PMT片的溶解
本研究中使用的何首乌(PMT)溶液还可在70℃时，将100g PMT片(商业上从中国上海雷允上药业有限公司的首乌片(Shou Wu Pian，Shanghai LeiYun Shang Pharmaceutical Co.Ltd，China)购得，见图2)溶解在1000ml ddH2O中制备，完全溶解后，PMT溶液4℃保存至使用。
PMT与PVP涂层银纳米粒的混合物
为制备PVP涂层银纳米粒与PMT的混合物，PVP涂层的银纳米粒溶液如上所述制备，除了PVP是溶解在无水乙醇而非60％乙醇中。100g/L溶解的PMT溶液与0.17mM PVP涂层的银纳米粒溶液以体积比4∶6混合。
治疗的皮肤毛发覆盖面积的计算
毛发覆盖面积通过将1cm x 1cm透明薄膜(有0.2cm x 0.2cm方格网，如图3所示)放在皮肤上测量。
治疗后有可见新毛发生长的小鼠毛发覆盖百分比由以下公式计算：
原位杂交(ISH)检测CD34以及免疫染色检测Ki67
原位杂交检测小鼠CD34是在5μm厚的福尔马林固定组织的石蜡固定切片中进行。石蜡固定的载玻片用二甲苯脱蜡，然后用梯度浓度的乙醇再水化。脱蜡后切片在含有0.2N HCl和0.3％ Triton的溶液中室温孵育30分钟，然后用10g/ml蛋白酶-K(Invitrogen)37℃消化15分钟。该PK消化用0.1M甘氨酸室温终止10分钟。2X SSC洗涤切片，用2ng/μl DIG标记的正义和反义cRNA探针46℃下在含有50％去离子化甲酰胺、2X SSC、10％硫酸葡聚糖、5X Denhardt’s溶液、0.25mg/ml酵母tRNA、0.5％SDS的杂交缓冲液中杂交过夜。切片用2x SSC/50％甲酰胺46℃下洗涤15分钟两次，然后用0.1XSSC/30％甲酰胺46℃洗涤15分钟，接着用0.1XSSC/30％甲酰胺室温洗涤15分钟，并用0.1XSSC室温洗涤15分钟。杂交探针用碱性磷酸酶缀合绵羊抗DIG F(ab)片段(Roche)检测，用NBT/BCIP溶液(Roche)显色。切片随后用带DAPI(Vector Laboratories)的封固剂封固，检测荧光。DIG标记的小鼠CD34探针对应核苷酸379-773[NM_133654(小鼠(mus musculus)CD34抗原(CD34)，mRNA)]。
染色检测Ki67在5μm厚的福尔马林固定的皮肤组织的石蜡固定切片中进行。石蜡固定的载玻片用二甲苯脱蜡，然后用梯度浓度的乙醇再水化。切片随后在10mM柠檬酸钠缓冲液(pH 6.0)中微波加热15分钟。然后载玻片用1∶200兔抗Ki67抗体(LabVision，United States)或相同浓度纯化的兔IgG(Zymed，USA；as an isotype)4℃染色过夜。此后，切片用1∶200 AlexaFluor594山羊抗兔IgG(H+L)抗体(Molecular Probes，USA)室温下孵育1小时。切片最后用带DAPI(Vector Laboratories，United States)的VECTASHIELD封固。荧光显微镜(Nikon E600显微镜)下研究图像。
平行试验包括阳性和阴性对照。阳性对照是小鼠脾切片。阴性对照是用作为一抗的纯化兔IgG染色的皮肤切片。
Ki-67的核染色被认为是阳性的。Ki67阳性细胞百分比由下式计算
经检验的动物的体重测量
小鼠体重用电子秤一周测两次。
结果
1.经皮(局部)应用0.1mM PVP涂层的银纳米粒(纳米Ag)(纳米Ag-PVP)诱导裸鼠毛发生长，而纳米Ag-PVP和5％米诺地尔的混合物减少这种作用。
图4是用溶剂对照(仅PVP，图A)、PVP涂层的银纳米粒(纳米Ag-PVP，图B)或与5％米诺地尔混合的PVP涂层银纳米粒(图C)治疗8周后，小鼠鞍前区的照片。纳米Ag-PVP似乎诱导新毛发生长，而添加5％米诺地尔减少这种作用。
表1.1用溶剂对照、0.1mM纳米Ag-PVP或与5％米诺地尔混合的0.1mM纳米Ag-PVP治疗8周后，敷料区域毛发覆盖的皮肤表面积的百分比。
附：*p＜0.001，与纳米Ag-PVP比较
2.纳米Ag-PVP加10％PMT的混合物在诱导毛发生长方面比仅纳米Ag-PVP更有效，而仅10％PMT无效。
如图5所见，加入PMT协同0.1mM纳米Ag-PVP的毛发生长作用。小鼠用溶剂对照(仅PVP)、仅10％PMT、0.1mM PVP涂层银纳米粒(纳米Ag-PVP)或0.1mM纳米Ag-PVP和10％PMT的混合物治疗8周。用纳米Ag-PVP+PMT治疗的小鼠比用纳米Ag-PVP治疗的小鼠有明显更多的毛发覆盖面积(右侧下部对左侧下部的图)。
表2.1.用仅PVP(溶剂对照)、10％PMT、0.1mM纳米Ag-PVP，或0.1mM纳米Ag-PVP加10％PMT处理8周的裸鼠皮肤敷料区域中的反应率和毛发覆盖面积百分比。每组的反应率分别为0％、0％、75％和91.7％。在有毛发生长的组中，敷料皮肤中毛发覆盖面积的百分比对于用0.1mM纳米Ag-PVP治疗的小鼠为74.5±7.4％，对于用纳米Ag-PVP加10％PMT治疗的小鼠为88.9±8.8％。
如图6所见，用仅PVP(溶剂对照)、仅10％PMT、0.1mM纳米Ag-PVP，以及0.1mM纳米Ag-PVP加10％PMT治疗后3、4、5、6、7和8周时，小鼠敷料皮肤中毛发覆盖面积的百分比。在治疗后7和8周，用纳米Ag-PVP+PMT治疗的小鼠比仅用纳米Ag-PVP治疗的小鼠有明显更高的毛发覆盖面积。8周时的反应率和毛发覆盖面积的实际百分比也列于表2.1。(*p＜0.05；**p＜0.01)。
3.对于促进毛发生长，当与纳米Ag-PVP溶液混合时，10％(w/v)PMT有PMT的最理想协同作用。
表3.1在独立实验中，用含(1)仅纳米Ag-PVP(2)纳米Ag-PVP加1％(w/v)PMT，(3)纳米Ag-PVP加10％PMT，以及(4)纳米Ag-PVP加50％PMT的溶液治疗8周后，测量裸鼠敷料皮肤中的反应率和毛发覆盖面积百分比。促进毛发生长的最理想效果见加10％或50％PMT的纳米Ag-PVP(请查阅图7)。
如图7所见，用含有(1)仅纳米Ag-PVP(2)纳米Ag-PVP加1％(w/v)PMT，(3)纳米Ag-PVP加10％PMT，和(4)纳米Ag-PVP加50％PMT的溶液治疗8周后，测量裸鼠敷料区域中毛发覆盖面积百分比(n分别为6、7、8和7，见表3.1)。促进毛发生长的最佳效果见加10％或50％PMT的纳米Ag-PVP。加入0％与10％之间的***p＜0.001，加入0％与50％之间也是如此。加入0％与1％之间，或加入10％与50％之间没有统计学差异。
4.纳米Ag-PVP和纳米Ag-PVP+10％PMT都诱导毛根细胞的Ki67和CD34表达(与仅用溶剂治疗的小鼠比较)，而在用纳米Ag-PVP+10％PMT治疗的小鼠中见到更高的CD34+细胞数量。
图8显示用0.1mM纳米Ag-PVP或0.1mM纳米Ag-PVP+10％PMT经皮治疗8周的裸鼠皮肤(切片)Ki67染色。两种治疗组中的小鼠毛根Ki67(+)细胞增加(左栏)。同位型对照为中栏，显示细胞核的DAPI为右栏。结果为3个独立实验的代表。
图9显示原位杂交(ISH)检测用纳米Ag-PVP或纳米Ag-PVP+PMT治疗的皮肤横截面(400x)的CD34。与溶剂对照治疗(仅PVP)相比，用纳米Ag-PVP和纳米Ag-PVP+PMT治疗诱导更多CD34mRNA表达于毛鞘，更多CD34+细胞在用纳米Ag-PVP+PMT治疗的组中发现。检测CD34的正义对照见左栏。显示细胞核的DAPI复染见更低的一行。结果为3个独立实验的代表
图10显示不同治疗的小鼠敷料皮肤中每个毛囊CD34+细胞的数量(ISH检测)(毛鞘横截面计数，400x，类似见图9)。用加10％PMT的纳米Ag-PVP治疗比用纳米Ag-PVP治疗诱导明显更多的CD34+细胞(p＜0.05)。结果为代表性的三种独立实验。
5.局部施用8周对体重增加没有造成显著改变。
图11显示测量用各种条件治疗的小鼠的体重。治疗下的小鼠体重每周监控，治疗过程中不同组小鼠中体重没有明显改变，这表明没有一种治疗对小鼠总体状况有明显或显而易见的系统作用。注：nAg＝纳米Ag；这里使用的PMT为10％(w/v)。

Claims (11)

1.药用组合物在制备增加宿主毛发生长的药物中的用途，其中所述药用组合物包含有效量银纳米粒、至少一种稳定剂、何首乌根部的乙醇提取物，以及至少一种药学可接受稀释剂。
2.权利要求1所述的用途，其中一种或多种蛋白和/或肽和/或聚乙烯吡咯烷酮作为稳定剂使用。
3.权利要求2所述的用途，其中所述蛋白选自人血清白蛋白和转铁蛋白。
4.权利要求1至3中任一项所述的用途，其中所述银纳米粒直径为1至100nm，所述组合物中银纳米粒的浓度为10μM至10mM。
5.权利要求4中所述的用途，其中所述组合物中银纳米粒的浓度为10μM至1mM。
6.权利要求1至3中任一项所述的用途，其中所述组合物中何首乌提取物的浓度为1g/L至1000g/L。
7.权利要求6所述的用途，其中所述组合物中何首乌提取物的浓度为1g/L至100g/L。
8.权利要求1至3中任一项所述的用途，其中所述稀释剂选自水、乙醇、二甲基亚砜、乙腈、Hepes缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、柠檬酸缓冲液、血清或任何其它种类生理学相关的溶剂或溶液，及其混合物。
9.权利要求1至3中任一项的用途，其中所述宿主是人。
10.包含有效量的银纳米粒和何首乌根部的乙醇提取物的药用组合物在制备用于增加宿主毛发生长的药物中的用途。
11.权利要求10所述的用途，其中所述宿主是人。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9572880B2 (en) 2010-08-27 2017-02-21 Sienna Biopharmaceuticals, Inc. Ultrasound delivery of nanoparticles
CN103124549B (zh) 2010-08-27 2017-07-14 塞安纳生物制药公司 用于靶向热调节的组合物和方法
US20120164242A1 (en) * 2010-12-27 2012-06-28 Wen-Jen Yu Novel methods for modulating melanin production
MX2015004524A (es) 2012-10-11 2015-09-25 Nanocomposix Inc Metodos y composiciones de nanoplacas de plata.
TWI636794B (zh) * 2017-11-06 2018-10-01 吳治增 一種奈米複合材料及其應用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007046636A1 (en) * 2005-10-18 2007-04-26 Kmsi Co., Ltd Herbal composition for preventing and improving baldness
KR20080035848A (ko) * 2006-10-20 2008-04-24 주식회사 비트로젠 피부개선 미용비누 조성물
CN101287477A (zh) * 2005-08-04 2008-10-15 林成龙 一种包含银纳米粒的组合物及其用途

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5306434A (en) * 1992-10-20 1994-04-26 Alberto-Culver Company Hair care composition containing dispersed silicone oil
CA2634953C (en) * 2004-12-24 2015-09-15 Dolphst Pty Ltd. Formulations and treatments for well-being
KR100554947B1 (ko) 2005-10-18 2006-03-03 주식회사 케이엠에스아이 생약 추출물을 함유하는 탈모 방지 및 모발 생장 촉진효과를 갖는 화장료 조성물
KR20070081211A (ko) * 2006-02-10 2007-08-16 주식회사 자연이나라 양모 및 탈모 방지제 조성물

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101287477A (zh) * 2005-08-04 2008-10-15 林成龙 一种包含银纳米粒的组合物及其用途
WO2007046636A1 (en) * 2005-10-18 2007-04-26 Kmsi Co., Ltd Herbal composition for preventing and improving baldness
KR20080035848A (ko) * 2006-10-20 2008-04-24 주식회사 비트로젠 피부개선 미용비누 조성물

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