CN102191323B - 预测肝癌术后生存的实时定量pcr微阵列芯片试剂盒 - Google Patents
预测肝癌术后生存的实时定量pcr微阵列芯片试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种预测肝癌术后生存的实时定量PCR微阵列芯片试剂盒，其特征在于，包括IL6基因扩增引物及荧光标记探针、HLA_DRA基因扩增引物及荧光标记探针、CSF1基因扩增引物及荧光标记探针、SPP1基因扩增引物及荧光标记探针以及TNF基因扩增引物及荧光标记探针。本发明发现了IL6基因、HLA_DRA基因、CSF1基因、SPP1基因以及TNF基因可以作为标志物来预测肝癌术后生存率，并提供了相应的试剂盒，通过实时定量PCR微阵列芯片技术对原发性肝癌病人术后的组织mRNA水平的检测，具有高通量、高敏感性和高均一性等优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种预测肝癌术后生存的实时定量PCR微阵列芯片试剂盒，属于诊断试剂技术领域。
背景技术
原发性肝癌(以下简称肝癌)是全球最常见的恶性肿瘤之一，在中国肝癌的发病率为肿瘤发病率的第三位，其死亡率为第二位。手术切除仍是其最主要的治疗方法，但术后长期生存尚不能令人满意。术后预后的准确评估，可以使一部分病人得到及时的辅助治疗，从而延长术后生存。
目前研究认为肿瘤发生及进展是一个多因素，多步骤参与并相互作用的复杂过程，涉及癌细胞本身及其与癌周微环境和宿主免疫状态间的相互作用，但其确切机制尚不清楚，近年来癌周微环境在肿瘤发生及进展中的作用成为肿瘤研究的热点。
目前常用的预后预测标记包括肿瘤分期和组织病理学指标。其中组织病理学指标往往不能提供足够的预后信息，而肿瘤分期，如TNM分期，虽是目前最常用的肿瘤预后标记，但对肿瘤术后复发的预测尚显不足。
发明内容
本发明的目的是提供一种预测肝癌术后生存的实时定量PCR微阵列芯片试剂盒，用于对术后肝癌患者生存预后风险进行准确的预测和评估，对高风险患者进行重点监测和有效干预，改善患者预后。
为了达到上述目的，本发明提供了一种预测肝癌术后生存的实时定量PCR微阵列芯片试剂盒，其特征在于，包括IL6基因扩增引物及荧光标记探针、HLA_DRA基因扩增引物及荧光标记探针、CSF1基因扩增引物及荧光标记探针、SPP1基因扩增引物及荧光标记探针以及TNF基因扩增引物及荧光标记探针。
所述的IL6基因扩增引物序列正义链为：GCGGCTACATCTTTGGAATCT、扩增引物序列反义链为：TTCGGTCCAGTTGCCTTCTC、荧光标记探针序列为：CCTGGTGTTGCCTGCTGCCTTC。
所述的HLA_DRA基因扩增引物序列正义链为：CATTTCGAAGCCACGTGACA、扩增引物序列反义链为：CACAAACAGCCCTGTGGAAC、荧光标记探针序列为：TGAGAGAGCCCAACGTCCTCATCTG。
所述的CSF1基因扩增引物序列正义链为：CGAGGAGGTGTCGGAGTACTGT、扩增引物序列反义链为：TTGGCACGAGGTCTCCATCT、荧光标记探针序列为：CCACATGATTGGGAGTGGACACCT。
所述的SPP1基因扩增引物序列正义链为：TCGCAGACCTGACATCCAGT、扩增引物序列反义链为：GGCCTTGTATGCACCATTCA、荧光标记探针序列为：TGCTACAGACGAGGACATCACCTCAC。
所述的TNF基因扩增引物序列正义链为：GCTCCGTGTCTCAAGGAAGTCT、扩增引物序列反义链为：GCCAGAATGCTGCAGGACT、荧光标记探针序列为：CAGAATGCTGCAGGACTTGA。
优选地，所述的预测肝癌术后生存的实时定量PCR微阵列芯片试剂盒中还包括反转录系统、扩增系统和384微孔板组成。
所述的反转录系统由5×反转录体系缓冲液、反转录酶、脱氧核糖核酸混合物以及随机的6核苷酸引物组成。
所述的扩增系统由含Taq酶的信使核糖核酸表达定量检测混合液组成。
本发明的优点为：
1、本发明发现了IL6基因、HLA_DRA基因、CSF1基因、SPP1基因以及TNF基因可以作为标志物来预测肝癌术后生存率，并提供了一个预测模型，经过大样本量独立验证，证明该预测模型可对肝癌患者转移潜能进行准确的预测和评估，从而可对患者术后生存进行准确的预测，将有助于早期识别或预测高危患者，对其进行重点检测和有效干预，为临床个体化干预治疗提供有效的依据。
2、本发明提供了相应的试剂盒及荧光标记探针和引物，通过实时定量PCR微阵列芯片技术对原发性肝癌病人术后的组织mRNA水平的检测，具有高通量、高敏感性和高均一性等特征。相对于芯片技术或者分子杂交( Northern Blot)，该方法简便、快速且经济实用。
附图说明
图1为肝癌转移预测模型对380例行根治性切除术的肝癌患者无瘤生存预测分析结果图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图来具体说明本发明。
实施例
1、一种预测肝癌术后生存的实时定量PCR微阵列芯片试剂盒，由以下试剂组成：
（1） 反转录系统：由5×反转录体系缓冲液、反转录酶、脱氧核糖核酸混合物以及随机的6核苷酸引物组成。所用试剂组分来源于PrimeScriptTM RT reagent kit perfect Real time反转录试剂盒(Takara公司生产，型号：DDR037A) ；
（2） 扩增系统：由含Taq酶的信使核糖核酸(mRNA)表达定量检测混合液(Applied Biosystems公司生产，型号：TaqMan® Gene expression Master mix 4369016)组成；
（3） 384微孔板；
（4） IL6基因、HLA_DRA基因、CSF1基因、SPP1基因以及TNF基因的扩增引物和Taqman荧光标记探针混合液，溶剂为DEPC(焦碳酸二乙酯)处理过的水，引物和探针的具体序列如下：
2、使用上述试剂盒来预测肝癌术后生存率的具体步骤如下：
2.1、380例肝癌患者手术切除肝癌组织总RNA的抽提和纯化：
将380例患者切除的肝癌旁组织与TRIzol试剂按比例75毫克：1mL混合，用匀浆器匀浆；将匀浆液在室温下孵育5分钟，按1：0.2的体积比加入氯仿，盖严，用手摇晃15秒钟，室温下孵育2.5分钟；于12000×g、4℃条件下离心15分钟，离心后混合液分成三层，取上层水相，按照每1mL TRIzol试剂加入0.5mL的比例加入异丙醇，混匀，20℃下静置10分钟，于12000×g、4℃条件下离心10分钟，RNA沉淀形成胶状物沉在管底管壁；倒掉上清液，按照每1mL TRIzol试剂加入1mL的比例加入75%乙醇，振荡混匀；于7500×g、4℃条件下离心5分钟，弃上清液，用移液器吸干试管内残留酒精，室温下自然干燥RNA沉淀10分钟；用DEPC处理过的水重新溶解RNA；用Nanodrop分光光度计检测RNA浓度及A260/A280的比值，当A260/A280的比值为1.9-2.1时，进入下一步；
2.2、采用甲醛变性琼脂糖凝胶电泳对组织标本总RNA样品进行质量检测：
将10×MOPS（3-(N-吗啡啉)丙磺酸RNA变性缓冲液）l0mL、0.1% DEPC水70mL、37%甲醛20mL与RNA琼脂糖1.0g混合制备甲醛变性琼脂糖凝胶；用DEPC处理过的水将10×MOPS缓冲液稀释成1×MOPS缓冲液配制电泳缓冲液；将步骤2.1中得到的RNA样品5.5µL、10×MOPS缓冲液1.0µL、37%甲醛3.5µL以及去离子甲酰胺10.0µL混合，配成电泳样品，65℃孵育5分钟，冰上冷却；将电泳槽内注入电泳缓冲液，置入甲醛变性琼脂糖凝胶；电泳样品内加入2µL 10×RNA加样缓冲液Gel
Loading BufferⅡ(Ambion公司)以及0.1µL EB（溴化乙锭），混合均匀后加入上样孔内，电压100V条件下电泳30分钟，紫外线凝胶分析仪下观测，拍照；当检验证实RNA没有降解时，进入下一步；
2.3、cDNA的合成：
将本发明试剂盒中的2µL 5×反转录体系缓冲液、0.5µL 反转录酶、0.5µL 脱氧核糖核酸混合物 (50µM)和2µL随机的6核苷酸引物(100 µM)，以及步骤2.2中得到的组织样本模板RNA 5.0ul（总量为1µg）充分混合均匀，冰上孵育5分钟。
反转录反应程序如下：37℃，15分钟；85℃，5秒钟。
2.4、实时定量PCR的检测：
将步骤2.3中所得产物用DEPC水稀释20倍，将本发明试剂盒中的0.5µL
扩增引物(18µM)和Taqman荧光标记探针（5µM）混合液与5µL含Taq酶的信使核糖核酸表达定量检测混合液混合，加入4.5µL步骤2.3中所得产物稀释液。
实时定量PCR反应程序如下：第一步：95℃，10分钟。第二步：95℃，15秒；60℃，60秒(40个循环)。实验选取TBP（TATA box binding protein）为内参照基因，其荧光标记探针和引物（购于Applied Biosystems公司 型号：4331182），试验条件同上。
2.5、预测原发性肝癌病人术后预后情况分析：
通过传统的△Ct法（即目的基因的Ct值减去内参照基因的Ct值），计算目标基因在癌旁组织中的表达量。
5个预测基因列表及其贡献度如下所示：
| 基因名称 | 贡献度Yi | P值 |
| IL6 | 0.299212598 | 0.001 |
| HLA_DRA | 0.141732283 | 0.125 |
| CSF1 | 0.244094488 | 0.074 |
| SPP1 | 0.188976378 | 0.035 |
（1）利用libsvm算法对5个预测基因做预测模型，并选用径向基核函数（radical basis function）：
其中，表示径向基核函数，表示某个病人的基因表达值，表示每个基因的表达值，核参数=19。
（2）预测计算公式如下：
P=∑Yi+C
其中，表示径向基核函数，Yi为基因的贡献度，C为惩罚因子（为LIBSVM中对错误分类的惩罚常数）。根据libsvm的预测结果和基因的贡献度加权投票后的总分P值，如果P值大于等于0.879为高风险，小于0.879为低风险。
运用该预测模型对380例行根治性切除术的肝癌患者进行转移复发预测分析并分组，发现高风险组无瘤生存预后比低风险组显著差（P=4.5e-11，如图1所示，为肝癌转移预测模型对380例行根治性切除术的肝癌患者无瘤生存预测分析结果图），可对患者转移复发进行准确预测。该模型总的预测准确性：72.38 %，特异性：70.13%，敏感性：74.17 %。
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: 复旦大学附属中山医院
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Claims (4)
1.一种预测肝癌术后生存的实时定量PCR微阵列芯片试剂盒，其特征在于，包括IL6基因扩增引物及荧光标记探针、HLA_DRA基因扩增引物及荧光标记探针、CSF1基因扩增引物及荧光标记探针、SPP1基因扩增引物及荧光标记探针以及TNF基因扩增引物及荧光标记探针，所述的IL6基因扩增引物序列正义链为：GCGGCTACATCTTTGGAATCT、扩增引物序列反义链为：TTCGGTCCAGTTGCCTTCTC、荧光标记探针序列为：CCTGGTGTTGCCTGCTGCCTTC；所述的HLA_DRA基因扩增引物序列正义链为：CATTTCGAAGCCACGTGACA、扩增引物序列反义链为：CACAAACAGCCCTGTGGAAC、荧光标记探针序列为：TGAGAGAGCCCAACGTCCTCATCTG；所述的CSF1基因扩增引物序列正义链为：CGAGGAGGTGTCGGAGTACTGT、扩增引物序列反义链为：TTGGCACGAGGTCTCCATCT、荧光标记探针序列为：CCACATGATTGGGAGTGGACACCT；所述的SPP1基因扩增引物序列正义链为：TCGCAGACCTGACATCCAGT、扩增引物序列反义链为：GGCCTTGTATGCACCATTCA、荧光标记探针序列为：TGCTACAGACGAGGACATCACCTCAC；所述的TNF基因扩增引物序列正义链为：GCTCCGTGTCTCAAGGAAGTCT、扩增引物序列反义链为：GCCAGAATGCTGCAGGACT、荧光标记探针序列为：CAGAATGCTGCAGGACTTGA。
2.如权利要求1所述的预测肝癌术后生存的实时定量PCR微阵列芯片试剂盒，其特征在于，还包括反转录系统、扩增系统和384微孔板。
3.如权利要求2所述的预测肝癌术后生存的实时定量PCR微阵列芯片试剂盒，其特征在于，所述的反转录系统由5×反转录体系缓冲液、反转录酶、脱氧核糖核酸混合物以及随机的6核苷酸引物组成。
4.如权利要求2所述的预测肝癌术后生存的实时定量PCR微阵列芯片试剂盒，其特征在于，所述的扩增系统由含Taq酶的信使核糖核酸表达定量检测混合液组成。
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| 几种肝癌诊断预测相关标记物研究进展;宋海等;《现代肿瘤医学》;20090930;第17卷(第9期);第1797-1798页 * |
| 史炯等.肝细胞肝癌术后预后分子预测模型的研究进展.《国际病理科学与临床杂志》.2010,第30卷(第5期), |
| 基因芯片在早期预测肝癌肝移植转移复发中的应用;郭志刚等;《现代肿瘤医学》;20101130;第18卷(第11期);第2198-2200页 * |
| 宋海等.几种肝癌诊断预测相关标记物研究进展.《现代肿瘤医学》.2009,第17卷(第9期), |
| 肝癌转移、复发预测的蛋白质分子标志物;舒宏等;《世界华人消化杂志》;20100508;第18卷(第13期);第1350-1355页 * |
| 肝细胞肝癌术后预后分子预测模型的研究进展;史炯等;《国际病理科学与临床杂志》;20101031;第30卷(第5期);第402-406页 * |
| 舒宏等.肝癌转移、复发预测的蛋白质分子标志物.《世界华人消化杂志》.2010,第18卷(第13期), |
| 范从进.血清肿瘤标记物联合检测在预测肝癌复发患者中的诊断价值.《海南医学院学报》.2010,第16卷(第10期), |
| 血清肿瘤标记物联合检测在预测肝癌复发患者中的诊断价值;范从进;《海南医学院学报》;20101031;第16卷(第10期);第1301-1303页 * |
| 郭志刚等.基因芯片在早期预测肝癌肝移植转移复发中的应用.《现代肿瘤医学》.2010,第18卷(第11期), |
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