CN102156190A - 一种测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的方法及试剂装置 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种基于酶联免疫检测的原理来实现抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的免疫检测的方法及其试剂装置，是一种独立的、单人份的、一次性的用于酶联免疫检测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的分析方法、试剂装置以及配套试剂。它可以将抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M酶联免疫检测所需要的多种试剂盛装在一个分析装置上，通过这种方法可以更方便地根据检测项目的使用需要进行相关的免疫学检测，为临床应用提供了更好的依据。

Description

一种测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的方法及试剂装置

技术领域

本发明申请涉及一种测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的方法及试剂装置，属于生物检测技术领域。

背景技术

抗磷脂抗体是一族主要针对磷脂结合蛋白的异质性抗体。抗磷脂抗体综合征(antiphospholipidsyndrome，APS)是一组与抗磷脂抗体有关的疾病，典型表现有血栓、反复流产和血小板减少。以β2糖蛋白I(β2GPI)这种磷脂结合蛋白为靶抗原的抗磷脂抗体，则称为抗β2糖蛋白I抗体(aβ2GPI)。近年研究表明，β2GPI与血栓及妊娠疾病有一定的联系。

aβ2GPI包括IgG、IgM及IgA，IgG与血栓密切相关。aβ2GPI与β2GPI结合，可促进β2GPI与细胞膜表面磷脂稳定结合，从而干扰依赖磷脂的抗凝途径；主要是PC抗凝途径，增加了血栓形成的危险性。aβ2GPI还能促使β2GPI与血管内皮细胞、单核细胞及血小板相关受体(血管内皮细胞上的Toll-likereceptor，单核细胞上的annexin A2、血小板上的apo ER2)结合，诱导血管内皮细胞、单核细胞表达组织因子(TF)，而发挥其促凝作用。aβ2GPI同时也可激活血小板，诱导血栓素产生增加，促进血栓形成。也有学者报道aβ2GPI能抑制β2GPI与vWF结合，而解除β2GPI对vWF诱导血小板聚集的抑制。

aβ2GPI，抗心磷脂抗体(ACA)与带负电荷的磷脂结合时，需要一种辅助因子β2GPI。β2GPI是一种能结合脂蛋白、阴离子磷脂、血小板、肝素、线粒体的载脂蛋白。磷脂与β2GPI结合，使β2GPI表面结构改变而出现被ACA识别的表位，从而发生反应。有研究显示，ACA似乎是直接针对含有β2GPI的阴离子磷脂复合物，或是针对β2GPI与磷脂结合中暴露的抗原决定族的，而与不含β2GPI的磷脂无反应，因此，有人认为检测aβ2GPI可能比ACA更有意义。且有研究表明aβ2GPI定量能准确反映患者体内aβ2GPI水平，是临床上用于诊断和病情观测的实验室方法。aβ2GPI定量较ACA定性有更高的特异性，可以与ACA联合互补作为APS诊断指标，有望在临床推广应用。并且对于那些临床上出现复发性流产、死胎等临床表现但其ACA定性为阴性的患者来说，如能进行aβ2GPI定量的检测，将有助于提高APS的诊断率，增加aβ2GPI的检测同时也能降低因ACA的假阳性所致的APS误诊率。

经典的ACA酶联免疫吸附(ELISA)测定和aβ2GPI ELISA均可检出aβ2GPI，两者检出结果存在相关性。但有时也不一致。部分是由于一些aβ2GPI只针对人源β2GPI，而不与牛源β2GPI起反应，因此以牛血清为稀释液的经典ACA可能无法检出这类抗体。目前多采用ELISA法检测aβ2GPI。aβ2GPI ELISA的敏感性和特异性很大程度上与抗原在微孔板上的表呈方式有关。近年的一些文献表明，采用普通微孔板的aβ2GPIELISA敏感性较差，而使用射线处理过或高抗原结合性的微孔板则可极大提高检测敏感性。其原理可能为aβ2GPI与这些微孔板表面结合后.构象发生改变，暴露出隐藏的抗原表位；或者这些微孔板表面可浓集β2GPI，可以与aβ2GPI稳定结合。

目前已有aβ2GPIELISA检测商品化试剂盒供应，如德国欧蒙医学实验诊断股份公司生产的抗β2糖蛋白1抗体ELISA检测试剂盒。但尚无aβ2GPI国际标准品以及标准化的aβ2GPI ELISA操作规程。与其他生物检测或免疫检测比较，这种通用的ELISA检测方法、技术、工具或产品仍有较多的不足而使其应用受限。

通用的ELISA方法、技术、工具或产品的不足主要表现在以下几个方面：

(1)使用12×8型、8×12型或整板型96孔专用微孔板作为抗原抑或抗体包被用品和反应容器，在使用时只能分成12批次、8批次或整板一次使用；

(2)定量测定所用的试剂可多达11种，每一种检测试剂都要用试剂瓶来盛装，并且每使用一种试剂时都需要更换吸液嘴来分别加注到微孔板的微孔中，不但试剂瓶种类多，加注试剂的操作也极为繁琐，如果不使用全自动酶免分析仪的话，则全部操作都要用手工来进行，而全自动酶免分析仪的价格十分昂贵，投入较大；

(3)每一检测或每次检测无试剂信息的条形码，只能通过查看试剂盒外包装盒的标识才能了解或知悉检测试剂的生产批号及有效期信息，而且所知悉的信息在检测过程中不受控，具有很大的随意性；

(4)检测试剂在检测过程中为开放方式，容易引起各种试剂之间的交叉污染而影响检测结果；

(5)在未采用全自动酶免分析仪进行检测时的检测过程为手工操作，试剂或样品的加量不很精确，操作过程极为繁琐和复杂，容易发生操作差错，检测结果的不准确度和不精密度高；

(6)在检测项目成套试剂的数量配置及使用上均为项目数×96人份，如果需要检测10个项目，则试剂的配置及使用数须为10×96人份，如果只有一份样品需要检测10个不同的项目，也需要配置10×96人份的试剂。

发明内容

为了解决抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M分析检测现有方法中存在的不足之处，本发明申请提供一种新的检测方法和试剂装置及配套试剂。该方法基于酶联免疫检测技术，寻求一种更加简单、准确、有效的一套方法及试剂来进行定量检测以满足临床诊断的需要。

本方法基于酶联免疫检测的原理来实现抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的免疫检测，是一种独立的、单人份的、一次性的用于酶联免疫检测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的分析方法、试剂装置以及配套试剂，它可以将抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M酶联免疫检测所需要的多种试剂盛装在一个分析装置上，通过这种方法可以更方便地根据检测项目的使用需要进行相关的免疫学检测，为临床应用提供了更好的依据。

本发明申请提供一种测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的方法，是通过酶联免疫检测的分析试剂装置和配套试剂组成的试剂盒来实现的，这种分析试剂装置包括设有8个孔位的基体和位于基体一端的手柄，它通过专用特定分析仪器对试剂装置各孔之间的各种特定试剂溶液进行加注和吸弃，使样品与试剂发生反应，然后测量发生反应后溶液色泽的数值，最终通过对测量的数值进行处理而获得检测结果。

所述的测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的方法，是将待测样品中的待测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M与高度纯化的天然β2糖蛋白I抗原进行反应而形成第一免疫络合物，该第一免疫络合物与酶标记的第二抗体进行反应形成第二免疫络合物，将反应形成的第二络合物与显色底物进行显色对比分析，从而获得待测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的含量。

所述的测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的方法，其中，所述的第二抗体为辣根过氧化物酶标记的抗人IgG/A/M抗体。

本发明申请还提供一种测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的试剂装置，设有8个孔位的基体、位于基体一端的手柄，以及用于酶联免疫法检测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的分析试剂装置以及相应数量的配套试剂校准品、质控物和缓冲洗涤液的组份。

所述的测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的试剂装置，其中，所述基体一端的手柄上粘贴有检测试剂条形码的标帖，所述条形码的数值包含每项检测所对应的检测项目代码、检测试剂生产批号、试剂有效期、定性校正值/定量测定标准曲线参数、酶联免疫反应类型、试剂及分析装置的序列号的信息。

所述的测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的试剂装置中，所述孔位包括一个反应孔、一个样品孔、一个稀释孔和五个试剂孔，其中，

1)样品孔盛容待测溶液；

2)稀释孔用于样品的稀释；

3)反应孔为平底并具有很高的光源/光路通透性，当盛装无色/空白试剂溶液时对可见光/紫外光/荧光的吸光度值趋近于零，孔内包被有检测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M所需的高度纯化的天然β2糖蛋白I抗原，该孔用于盛容检测样品和检测试剂，并与这些样品和试剂发生酶联免疫反应，是酶联免疫反应和色泽显示及检测的容器；

4)每一个试剂孔盛装有酶联免疫法检测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M所需的一种试剂，加注试剂后用密封薄膜将微孔的开放口缘进行封闭。

所述的测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的试剂装置，所述试剂孔内所盛装酶联免疫检测所需的试剂包括检测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M之酶联免疫反应所需的免疫反应抑制剂/中和剂/阻断剂/吸附剂、酶结合物溶液、显色底物溶液、显色终止液、反应增强剂/促进剂、样品稀释溶液。

所述的测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的试剂装置，所述样品孔、反应孔、稀释孔和试剂孔剖面形状包括平型、V型或U型，抑或是平型、V型和U型之间的任意组合。

所述的测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的方法，所述的方法包括如下的步骤：

1)开机：打开仪器开关后，仪器会自动地进行一系列检查，从而为仪器的正常运行做准备；

2)检查程序的准备：按要求配置好相应的溶液，包括：缓冲洗涤液、清洗液、消毒液和蒸馏水或去离子水，配制完毕装入相应的液体罐中；

3)冲洗检查：

4)预热：在开机后，仪器会启动加热程序，将温度调至待检温度；

5)与主机连机：仪器通过RS232串口可以和主机相连，从而将仪器正常工作所得结果交由集中式系统处理；

6)抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的检测：所述的检测又包括如下的步骤：

i.从有密封口的一边打开包装袋，取用所需数量的分析装置，排除空气后将袋口封紧；

ii.检查分析装置试剂孔中的底物，应为无色泽改变，否则应弃掉；

iii.分别在每个分析装置的样品孔中加50～100μL未稀释的样品，每更换一个批号的试剂，应取其中一个分析装置及校准品进行仪器校准；

iv.放置分析装置到仪器中相应的分析装置托盘中，按照使用说明书进行校准和检测；

v.按照所需检测的数量在分析装置托盘中放入相对应数量的分析装置，并在检测位置之前放入含有校准品和质控物的分析装置，仪器可自动地识别分析装置条码、质控物条码和校准品条码，选择行可定位于“样品”栏或“检测”栏；

vi.点击开始，运行项目表，扫描各个分析装置条码，对质控物，校准品以及检测样品进行编号；

vii.运行检测表，仪器根据条码信息自动运行，根据条码，仪器会选择相应设置好的标准曲线，程序首先检测校准品，以此来校准仪器内预设的曲线；其次对质控物进行检测，如果其检测结果在标示的范围内，则表示内置曲线合格，可用于样品的检测，最后开始样品的检测程序；

viii.稀释：加注针会从样品孔自动吸取样品，刺破孔位密封薄膜自动吸取稀释液在稀释孔进行样品稀释，动作完成后，被稀释的样品会被加注针移至试剂孔反应一段程序设定的时间，之后移除液体；

ix.洗涤：加注针会从相应的液罐中吸取一定量的洗涤液对试剂孔进行三到五次洗涤后移除液体；

x.加注针刺破试剂孔密封薄膜吸取一定量的辣根过氧化物酶标记的抗人IgG/A/M抗体至试剂孔进行反应，反应一段程序设定的时间后移除液体；

xi.重复步骤ix洗涤；

xii.加注针刺破试剂孔密封薄膜吸取一定量的酶反应底物至试剂孔进行一段程序设定的时间反应；

xiii.加注针刺破试剂孔密封薄膜吸取一定量的终止液加注至试剂孔，在10分钟内于450nm读取OD值，如果选择双波长法测定，参考波长为620nm～690nm；

7)检测结果：当检测程序运行完毕，点击与主机的数据传输，仪器会自动将正常工作所得结果发送到主机交由外接数据处理软件分析，最后生成报告单以便查阅；

8)关机：检测结束后，在仪器关机前，必须启动洗涤循环，这样可以避免来自溶液中的残留盐份在液路中结晶，避免损坏仪器或导致检测结果无效，洗涤完成后，仪器电源自动关闭。

所述的分析试剂装置是一种测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的独立的、单人份的、一次性使用的专用于特定分析仪器的酶联免疫分析试剂装置。

本发明申请所述的用于抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M酶联免疫的检测方法和配套试剂，其中实现抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M免疫检测的分析试剂装置，是一种独立的、单人份的、一次性使用的专用于特定分析仪器的酶联免疫检测试剂装置。

本发明申请所述测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的方法及装置，继承了其他检测方法所具有的特异性强、灵敏度高，准确性好、成本较低、使用要求不高、操作较为简便、获得检测结果时间短、应用广泛等特点，解决了其他检测方法的诸多不足，具体体现在以下几个方面：

1.这种检测方法，它运用酶联免疫分析原理，利用特定的分析仪器，采用配套专用的检测试剂盒及分析试剂装置，自动实现抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的定性/定量测定，是一种全新的、适用的、实用的、高效的、快速的检测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的方案；

2.它是一种独立的、单人份的检测试剂及分析装置，无需像通用ELISA法那样使用12×8型、8×12型或整板型96孔专用酶联免疫微孔板作为抗原抑或抗体包被用品和反应容器，在使用时只要有一份样品即可进行对应项目的检测而无试剂的浪费。如果样品的数量超过一份，按实际样品数使用该试剂及分析装置即可；

3.无论是定性检测还是定量检测，它将每一检测必须的试剂盛装在一个分析试剂装置的试剂孔位内，而无须将检测试剂分别用不同的试剂瓶来盛装，不但操作极为简便，而且不容易造成操作差错，从而保证检测结果的正确性；

4.它对每一个分析试剂装置都有一个专用条形码，条形码的数值包含检测所对应的检测项目代码、检测试剂生产批号、试剂有效期、定量测定标准曲线参数、具体的酶联免疫反应类型、试剂及分析装置的序列号等信息，不能随意被改变，使用时严格受控，尤其是在使用超过有效期检测试剂时，将被识别并阻止发出检测报告，从而可以确保检测的准确性；

5.它将每一检测试剂进行有效分隔和密封，不会引起各种试剂之间的交叉污染而影响检测结果；

6.它是一种专用于特定分析仪器的分析试剂装置，在检测过程中用全自动的精密加液器来加注检测试剂或样品，操作自动化，加量精确，检测结果的准确度和精密度高；

7.在检测项目成套试剂的数量配置及使用上，一切按实际使用需要来进行配备即可，尤其是在对多项目检测上，配备更为适量，不会出现超配置及使用情况；

附图说明

图1是本发明申请所述测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的试剂装置的一个实施例的剖面结构示意图；

图2是本发明申请所述测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的试剂装置的一个实施例的平面俯视图；

图3是本发明申请所述测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的试剂装置的另一个实施例的剖面结构示意图；

图4是本发明申请所述测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的试剂装置的另一个实施例的平面俯视图；

图5和图6是本发明申请所述测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的试剂装置的其它实施例的剖面结构示意图；

其中，1为样品孔、2、3、4、5、6为试剂孔、7为反应孔、8为稀释孔、9为手柄、10为密封薄膜、11为基体、90为标贴。

具体实施方式

以下结合具体的检测装置与实施步骤对本发明申请所述的检测方法和试剂装置进行进一步的描述，目的是为了公众更好的理解本发明申请所述的技术方案，而不是对所述技术方案的限制。事实上，在本发明精神实质内，对所述方法步骤的改进，以及对相应试剂装置结构的增减、替换和改进都在本发明申请所要求保护的技术方案之内。

实施例1检测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的间接酶联免疫检测方法和试剂盒及试剂装置

本发明是基于酶联免疫检测技术上的一种更加简单、准确、有效的一套方法，其采用的基本原理为间接酶联免疫法。将由高度纯化的天然β2糖蛋白I抗原吸附于固相上，通过孵育使稀释的人血清中的特异性抗体与抗原结合，洗涤去除未与固相结合的抗体，加入用辣根过氧化物酶标记的抗人免疫球蛋白酶联物，孵育。去除未结合的酶联物，加入酶色原底物。产生的颜色与检测样本中的特异性抗体浓度成正比。这种方法主要是通过用于酶联免疫检测的分析试剂装置和配套试剂来实现抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的免疫检测。通过这种酶联免疫方法，同时运用特定分析仪器的分析试剂装置和试剂，可快速，准确的做出判断用于临床诊断的需要。其分析装置具体结构如下：

如图1-6所示，是本发明申请所述的一种测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M酶联免疫检测分析的试剂装置，包括基体11，在所述基体11上设有1～8个孔位(1、2、3、4、5、6、7、8)，其中孔位1是用于盛装待测样品的样品孔，且其底面为“V”型凹槽底，其余孔位是反应孔7、稀释孔8、试剂孔(2、3、4、5、6)，所述反应孔7是用于接收检测样品和检测试剂并作为酶联免疫反应和比色的容器的反应孔，该反应孔是光源/光路的通透孔，在所述基体一端设有手柄9，在所述手柄上粘贴有检测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M试剂信息条形码的标贴90。本实施例中，所述标号为2、3、4、5、6是试剂孔，使用时，这些标号为2、3、4、5、6试剂孔中已盛装有检测所需的试剂，且其开放口缘可为方形或圆形，其底面为“V”型凹槽底，盛装试剂或空置后用密封薄膜10封口，所述标号为8是稀释孔，用于样品的稀释，上面没有覆盖密封薄膜。

分析试剂装置外的试剂盒中的其他试剂包括：校准品、质控物、缓冲洗涤液、清洗液、消毒液和蒸馏水或去离子水。

实施例2试剂装置或试剂盒的制作-间接法检测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M

以孔位1作为待测样品盛装容器，在使用时加入液体样品，供检测时取用；

以孔位2作为空孔，用密封薄膜封口，供检测备用；

以孔位3作为试剂容器，加入样本稀释试剂后用密封薄膜封口，供检测时取用；

以孔位4作为试剂容器，加入终止试剂后用密封薄膜封口，供检测时用；

以孔位5作为试剂容器，加入辣根过氧化物酶标记的抗人IgG/A/M抗体试剂后用密封薄膜封口，供检测时用；

以孔位6作为试剂容器，加入酶反应底物试剂后用密封薄膜封口，供检测时用；

以孔位7作为包被物孔/反应容器/比色孔，已包被有高度纯化的天然β2糖蛋白I抗原的酶联免疫微孔板的一个微孔，并作为反应容器加注待测的液体样品和检测试剂及洗涤液，最后加入酶反应底物孵育后进行吸光度测定；

以孔位8作为样品稀释容器，供稀释样品时用；

在手柄9粘贴有抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M检测试剂及分析装置信息的条形码90，该条形码包括检测项目代码、检测试剂生产批号、试剂有效期、定性校正系数/定量检测校正系数、酶联免疫反应类型、试剂及分析装置的序列号。

按照上述方法制备若干分析装置，另外制备相应的试剂，包括校准品、质控物、缓冲洗涤液、清洗液、消毒液和蒸馏水或去离子水等。这样即构成了完整的抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M测定试剂盒组分。将检测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的试剂装置及配套使用组份装入试剂盒的外包装盒，即制成检测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M试剂盒。

实施例3通过全自动分析仪实现对样本抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M检测的分析操作流程

全自动分析仪包括一个分析装置托盘，它是与分析装置的形状相配套的，一共有30个位置可供分析装置放置，用于检测分析。此外还包括模块式集成机械电子结构，可实现自动化的加样，稀释，孵育，洗涤以及读数过程。每个位置独立定量分析，且有200余个电子传感器监控仪器运行，保证结果的准确性。仪器运行后，分析装置托盘会自行转动到不同的位置进行加样，稀释，孵育，洗涤以及读数的步骤。

(1)开机

打开仪器开关后，仪器会自动地进行一系列检查，从而为仪器的正常运行做准备。

(2)检查程序的准备

按要求配置好相应的溶液，包括：缓冲洗涤液、清洗液、消毒液和蒸馏水或去离子水，配制完毕装入相应的液体罐中。

(3)冲洗检查

(4)预热

在开机后，仪器会启动加热程序，将温度调至待检温度。

(5)与主机连机

仪器通过RS232串口可以和主机相连，从而将仪器正常工作所得结果交由集中式系统处理。

(6)抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的检测

1)从有密封口的一边打开包装袋，取用所需数量的分析装置，排除空气后将袋口封紧；

2)检查分析装置试剂孔6中的底物，应为无色泽改变，否则应弃掉；

3)分别在每个分析装置的样品孔1中加50～100μL未稀释的样品，每更换一个批号的试剂，应取其中一个分析装置及校准品进行仪器校准；

4)放置分析装置到仪器中相应的分析装置托盘中，按照使用说明书进行校准(若有必要)和检测；

5)按照所需检测的数量在分析装置托盘中放入相对应数量的分析装置，并在检测位置之前放入含有校准品和质控物的分析装置，仪器可自动地识别分析装置条码、质控物条码和校准品条码，选择行可定位于“样品”栏或“检测”栏；

6)点击开始，运行项目表，扫描各个分析装置条码，对质控物，校准品以及检测样品进行编号；

7)运行检测表，仪器根据条码信息自动运行，根据条码，仪器会选择相应设置好的标准曲线，程序首先检测校准品，以此来校准仪器内预设的曲线；其次对质控物进行检测，如果其检测结果在标示的范围内，则表示内置曲线合格，可用于样品的检测；最后开始样品的检测程序；

8)稀释：加注针会从样品孔1自动吸取样品，刺破孔位密封薄膜10，自动吸取稀释液在稀释孔8进行样品稀释，动作完成后，被稀释的样品会被加注针移至试剂孔3反应一段程序设定的时间，之后移除液体；

9)洗涤：加注针会从相应的液罐中吸取一定量的洗涤液对试剂孔3进行三到五次洗涤后移除液体；

10)加注针刺破试剂孔5密封薄膜吸取一定量的辣根过氧化物酶标记的抗人IgG/A/M抗体至试剂孔3进行反应，反应一段程序设定的时间后移除液体；

11)重复步骤9)洗涤；

12)加注针刺破试剂孔6密封薄膜吸取一定量的酶反应底物至试剂孔3进行一段程序设定的时间反应；

13)加注针刺破试剂孔4密封薄膜吸取一定量的终止液加注至试剂孔3，在10分钟内于450nm读取OD值，如果选择双波长法测定，参考波长为620nm～690nm；

(7)检测结果

当检测程序运行完毕，点击与主机的数据传输，仪器会自动将正常工作所得结果发送到主机交由外接数据处理软件分析，最后生成报告单以便查阅；

(8)关机

检测结束后，在仪器关机前，必须启动洗涤循环，这样可以避免来自溶液中的残留盐份在液路中结晶，避免损坏仪器或导致检测结果无效，洗涤完成之后，仪器电源自动关闭。

实施例4患者样品的检测应用、结果分析以及检测的质控

采用实施例3的操作方法与程序，使用方法使用实施例2所述的试剂盒，可用于定量测定人血清中的抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M水平。

β2球蛋白与体内脂蛋白、血小板以及磷脂相关，并且可阻断内源性凝血途径、抑制凝血因子V的活性和ADP依赖的血小板凝集。抗磷脂抗体常见于系统性红斑狼疮及其他相关疾病的患者，是向抗磷脂综合症的继发性发展的典型标志。无任何其他自身免疫性疾病的患者，若查出抗磷脂抗体，则为原发性抗磷脂综合症。很多研究显示，这些抗体和上升的血栓发生率、血小板减少症和习惯性流产(如由胎盘梗死引起)相关。因此我们可根据检测的结果来进行临床诊断，初步判断患者患病的情况，最终确诊应结合临床表现或其他诊断方法/指标进行综合考虑。

以下为检测结果的分析：

(1)参考值(参考范围)

正常参考值：0～15AU/mL；检测一定数量(具有统计学意义)的阴性样本，结果的平均值加3倍标准偏差(即

)为正常参考值的上限。建议各实验室根据实际情况，建立自己的正常参考值范围。

为了方便临床应用，我们推荐：

样本值＜12AU/mL                         阴性

12AU/mL≤样本值≤18AU/mL                可疑

样本值＞18AU/mL                         阳性

(2)检测结果的解释

结果解释：样本值＞18AU/mL时，表明抗体浓度明显升高，应结合临床表现或其他诊断方法/指标确诊是否患有系统性红斑狼疮及其他相关疾病，鉴别诊断原发性抗磷脂综合症；样本值＜12AU/mL时，表明机体抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M水平无明显上升；12AU/mL≤样本值≤18AU/mL时，应重新检测，若仍为可疑，2-3周后重新采集样本检测。

以下是将实施例3的检测过程重复检测阳性和阴性质控血清，检查结果的再现性，获得如下的结果：

按照本发明，可通过相同的分析过程同时全自动进行多种样品的抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的检测，这就使检测更简化、成本降低、检测时间缩短、不易发生交叉污染、检测操作容易进行；且检测的特异性强、灵敏度高、准确性好。

Claims (9)

1.一种测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的方法，其特征在于：所述方法是通过酶联免疫检测的分析试剂装置和配套试剂组成的试剂盒来实现的，这种分析试剂装置包括设有8个孔位的基体和位于基体一端的手柄，它通过专用特定分析仪器对试剂装置各孔之间的各种特定试剂溶液进行加注和吸弃，使样品与试剂发生反应，然后测量发生反应后溶液色泽的数值，最终通过对测量的数值进行处理而获得检测结果。

2.根据权利要求1所述的测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的方法，其特征在于：所述的方法是将待测样品中的待测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M与高度纯化的天然β2糖蛋白I抗原进行反应而形成第一免疫络合物，该第一免疫络合物与酶标记的第二抗体进行反应形成第二免疫络合物，将反应形成的第二络合物与显色底物进行显色对比分析，从而获得待测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的含量。

3.根据权利要求2所述的测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的方法，其特征在于：所述的第二抗体为辣根过氧化物酶标记的抗人IgG/A/M抗体。

4.一种用于测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的试剂装置，其特征在于：所述的试剂装置设有8个孔位的基体、位于基体一端的手柄，以及用于酶联免疫法检测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的分析试剂装置以及相应数量的配套试剂校准品、质控物和缓冲洗涤液的组份。

5.根据权利要求4所述的用于测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的试剂装置，其特征在于：所述基体一端的手柄上粘贴有检测试剂条形码的标帖，所述条形码的数值包含每项检测所对应的检测项目代码、检测试剂生产批号、试剂有效期、定性校正值/定量测定标准曲线参数、酶联免疫反应类型、试剂及分析装置的序列号的信息。

6.根据权利要求4所述的用于测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的试剂装置，其特征在于：所述孔位包括一个反应孔、一个样品孔、一个稀释孔和五个试剂孔，其中，

1)样品孔盛容待测溶液；

2)稀释孔用于样品的稀释；

3)反应孔为平底并具有很高的光源/光路通透性，当盛装无色/空白试剂溶液时对可见光/紫外光/荧光的吸光度值趋近于零，孔内包被有检测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M所需的高度纯化的天然β2糖蛋白I抗原，该孔用于盛容检测样品和检测试剂，并与这些样品和试剂发生酶联免疫反应，是酶联免疫反应和色泽显示及检测的容器；

4)每一个试剂孔盛装有酶联免疫法检测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M所需的一种试剂，加注试剂后用薄膜将微孔的开放口缘进行封闭。

7.根据权利要求6所述的用于测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的试剂装置，其特征在于：所述试剂孔内所盛装酶联免疫检测所需的试剂包括检测抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M之酶联免疫反应所需的免疫反应抑制剂/中和剂/阻断剂/吸附剂、酶结合物溶液、显色底物溶液、显色终止液、反应增强剂/促进剂、样品稀释溶液。

8.根据权利要求6所述的用于测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的试剂装置，其特征在于：所述样品孔、反应孔、稀释孔和试剂孔剖面形状包括平型、V型或U型，抑或是平型、V型和U型之间的任意组合。

9.根据权利要求1所述的测定抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的方法，其特征在于：所述的方法包括如下的步骤：

1)开机：打开仪器开关后，仪器会自动地进行一系列检查，从而为仪器的正常运行做准备；

2)检查程序的准备：按要求配置好相应的溶液，包括：缓冲洗涤液、清洗液、消毒液和蒸馏水或去离子水，配制完毕装入相应的液体罐中；

3)冲洗检查：

4)预热：在开机后，仪器会启动加热程序，将温度调至待检温度；

5)与主机连机：仪器通过RS232串口可以和主机相连，从而将仪器正常工作所得结果交由集中式系统处理；

6)抗β2糖蛋白I抗体IgG/A/M的检测：所述的检测又包括如下的步骤：

i.从有密封口的一边打开包装袋，取用所需数量的分析装置，排除空气后将袋口封紧；

ii.检查分析装置试剂孔中的底物，应为无色泽改变，否则应弃掉；

iii.分别在每个分析装置的样品孔中加50～100μL未稀释的样品，每更换一个批号的试剂，应取其中一个分析装置及校准品进行仪器校准；

iv.放置分析装置到仪器中相应的分析装置托盘中，按照使用说明书进行校准和检测；

v.按照所需检测的数量在分析装置托盘中放入相对应数量的分析装置，并在检测位置之前放入含有校准品和质控物的分析装置，仪器可自动地识别分析装置条码、质控物条码和校准品条码，选择行可定位于“样品”栏或“检测”栏；

vi.点击开始，运行项目表，扫描各个分析装置条码，对质控物，校准品以及检测样品进行编号；

vii.运行检测表，仪器根据条码信息自动运行，根据条码，仪器会选择相应设置好的标准曲线，程序首先检测校准品，以此来校准仪器内预设的曲线；其次对质控物进行检测，如果其检测结果在标示的范围内，则表示内置曲线合格，可用于样品的检测，最后开始样品的检测程序；

viii.稀释：加注针会从样品孔自动吸取样品，刺破孔位密封薄膜自动吸取稀释液在稀释孔进行样品稀释，动作完成后，被稀释的样品会被加注针移至试剂孔反应一段程序设定的时间，之后移除液体；

ix.洗涤：加注针会从相应的液罐中吸取一定量的洗涤液对试剂孔进行三到五次洗涤后移除液体；

x.加注针刺破试剂孔密封薄膜吸取一定量的辣根过氧化物酶标记的抗人IgG/A/M抗体至试剂孔进行反应，反应一段程序设定的时间后移除液体；

xi.重复步骤ix洗涤；

xii.加注针刺破试剂孔密封薄膜吸取一定量的酶反应底物至试剂孔进行一段程序设定的时间反应；

xiii.加注针刺破试剂孔密封薄膜吸取一定量的终止液加注至试剂孔，在10分钟内于450nm读取OD值，如果选择双波长法测定，参考波长为620nm～690nm；

7)检测结果：当检测程序运行完毕，点击与主机的数据传输，仪器会自动将正常工作所得结果发送到主机交由外接数据处理软件分析，最后生成报告单以便查阅；

8)关机：检测结束后，在仪器关机前，必须启动洗涤循环，这样可以避免来自溶液中的残留盐份在液路中结晶，避免损坏仪器或导致检测结果无效，洗涤完成后，仪器电源自动关闭。

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