CN102154467A - 蛋白酶体β亚单位6作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标的应用 - Google Patents

蛋白酶体β亚单位6作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN102154467A
CN102154467A CN 201110004939 CN201110004939A CN102154467A CN 102154467 A CN102154467 A CN 102154467A CN 201110004939 CN201110004939 CN 201110004939 CN 201110004939 A CN201110004939 A CN 201110004939A CN 102154467 A CN102154467 A CN 102154467A
Authority
CN
China
Prior art keywords
psmb6
resistance
mosquito
deltamethrin
beta subunit
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN 201110004939
Other languages
English (en)
Other versions
CN102154467B (zh
Inventor
沈波
孙海波
张东辉
贺骥
孙林春
于婧
张利
马磊
孙艳
朱昌亮
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing University
Nanjing Medical University
Original Assignee
Nanjing Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing Medical University filed Critical Nanjing Medical University
Priority to CN2011100049391A priority Critical patent/CN102154467B/zh
Publication of CN102154467A publication Critical patent/CN102154467A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102154467B publication Critical patent/CN102154467B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了蛋白酶体β亚单位6（PSMB6）作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标的应用，当待测品系的蛋白酶体β亚单位6基因的表达量达到敏感品系的1.60倍时，可认为待测品系对溴氰菊酯具有抗性。本发明发现了一个蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标，对于蚊溴氰菊酯抗药性的早期发现和治理具有重要价值。

Description

蛋白酶体β亚单位6作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标的应用
技术领域
本发明涉及蛋白酶体β亚单位6（PSMB6）作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标的应用。
背景技术
蚊可以传播多种疾病，危害人类健康。化学防治一直是蚊媒防制规划中的主要方法。然而连续，大量地使用杀虫剂导致蚊媒抗药性的发生和发展，抗药性已成为控制蚊媒传播疾病的最大障碍。蚊媒抗药性治理的前提在于早期发现抗药性和监测抗药性的发展。所以，抗药性检测一直是蚊媒防制研究的重点课题。寻找有效的抗药性检测靶标对于抗药性治理具有非常重要的意义。
本发明中的蛋白酶体是生物体内的一种巨型蛋白质复合物，主要作用是降解细胞不需要的或受到损伤的蛋白质。PSMB6是蛋白酶体降解蛋白质的一个催化亚基。
发明内容
本发明的目的是提供PSMB6的一种新用途。
本发明的技术方案是：PSMB6作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标的应用。
发明人利用二维电泳和蛋白质质谱分析的方法，发现PSMB6蛋白质在蚊对溴氰菊酯敏感细胞和抗性细胞中的表达有差异，在抗性细胞中高表达，为敏感细胞的1.60倍（p<0.05）。进一步的定量PCR试验验证了这一结果。PSMB6基因在蚊对溴氰菊酯抗性细胞中高表达（p<0.05）。结果表明，PSMB6可能与蚊溴氰菊酯抗性相关。
发明者为了进一步研究PSMB6在蚊对溴氰菊酯抗性中所起的作用，设计并合成了针对PSMB6基因的siRNA。用siRNA干涉PSMB6基因的表达后，检测在溴氰菊酯作用下抗性细胞的存活率。结果显示，干涉PSMB6后，抗性细胞的存活率较对照组显著下降（p<0.05），表明PSMB6可以影响蚊对溴氰菊酯的抗性。
PSMB6基因在蚊抗性细胞中较敏感细胞高表达；其编码的PSMB6在蚊抗性细胞中也较敏感细胞高表达；干涉PSMB6后，抗性细胞对溴氰菊酯的敏感性增加。结果表明，PSMB6与溴氰菊酯抗性相关。
本发明公开了通过检测蚊细胞中蛋白酶体β亚单位6的表达量来判断蚊对溴氰菊酯的抗性。具体是；以定量PCR检测待测品系和敏感品系的蛋白酶体β亚单位6基因表达，当待测品系的蛋白酶体β亚单位6基因的表达量大于或等于敏感品系的1.60倍时，待测品系对溴氰菊酯具有抗性。
发明者选取国内通用的实验室淡色库蚊敏感品系（LC50为0.02ppm）作为参照，以定量PCR检测PSMB6基因的表达。PSMB6基因的表达是敏感品系的1.60倍， 即可认定其对溴氰菊酯具有抗性。
取经世界卫生组织（WHO）推荐的标准方法鉴定的山东淡色库蚊敏感品系（LC50为0.02ppm）和抗性品系（LC50为0.55ppm），定量PCR检测PSMB6基因的表达。结果表明，其抗性品系PSMB6基因的表达是敏感品系的1.60倍（p<0.05）。 因此，PSMB6基因作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标可以理解。
本发明发现了一个蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标，对于蚊溴氰菊酯抗药性的早期发现和治理具有重要价值。
附图说明
图1是PSMB6在敏感和抗性蚊细胞中表达差异的二维电泳图。
图2是利用二维电泳图中PSMB6蛋白质点的灰度值作图，直观地反应PSMB6在敏感抗性细胞中的表达差异。
图3是定量PCR的方法验证PSMB6在敏感和抗性细胞中mRNA水平的表达。
图4是siRNA干涉PSMB6的表达后，CCK-8法检测抗性细胞存活率。
图5是定量PCR的方法验证PSMB6在山东敏感和抗性蚊中mRNA水平的表达。
具体实施方式
除非特别说明，本发明中所使用的术语，一般为本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体的实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。
实施例1 PSMB6蛋白质在蚊溴氰菊酯抗性细胞中较敏感细胞高表达。
蚊敏感细胞购自中国军事科学院，在本实验室经溴氰菊酯逐代筛选，培养出抗性品系。抗性品系的LC50为1256.8mg/ml,是敏感品系的8.9倍（141.2mg/ml）。
发明者提取蚊敏感和抗性细胞的全蛋白液，利用二维电泳技术筛选蚊抗性细胞和敏感细胞中差异表达的蛋白质，运用蛋白质质谱分析的方法对筛选出的蛋白进行鉴定，发现PSMB6蛋白质在抗性细胞中高表达，为敏感细胞的约1.6倍（图1，图2）。
实施例2  PSMB6基因在蚊抗性细胞中较敏感细胞高表达。
发明者设计并合成简并引物：5’ GCCGATTCKCGYACYAGYAC3’（SEQ ID NO.1）和3’CRTCRT GGTACATBGCGTGGA5’ （SEQ ID NO.2）,扩增PSMB6的cDNA片段。根据cDNA片段设计并合成定量引物: 5’GAGTTCCGCCAGTATTGCTACA3’ （SEQ ID NO.3） 和3’CCTGCC CTCCGT TCTTGTTA5’ （SEQ ID NO.4），定量PCR检测PSMB6基因在抗性和敏感细胞中mRNA的表达水平。结果显示，PSMB6基因在抗性细胞中高表达，为敏感细胞的2.5倍（图3）。
实施例3  干涉PSMB6基因后，抗性细胞对溴氰菊酯的敏感性增加。
发明者设计并合成了针对PSMB6的siRNA：5’UGGCCGGAU UUGAUAACAAT3’ （SEQ ID NO.5）(正义链) and 5’UUGUUAUCAAAUCCGGCCATT3’ （SEQ ID NO.6） (反义链); 和一段无关序列的siRNA（阴参）： 5’ GCGACGAUCUGCCUAAGA3’ （SEQ ID NO.7） (正义链) and 5’AUCUUAGGCAGAUCGUCG3’ （SEQ ID NO.8） (反义链)。将siRNA转入抗性细胞干涉PSMB6后，用一系列浓度梯度的溴氰菊酯（100.5,10,101.5, 100,102.5 mg/L）作用于细胞72小时，用CCK-8法检测细胞存活率的变化。
结果如图4：在100.5,10,101.5, 100,102.5 mg/L的溴氰菊酯浓度下，干涉组的细胞存活率依次为52％, 56％, 54％, 35％和33％，对照组的细胞存活率依次为97％, 116％, 93％, 58％和86％。结果显示，干涉PSMB6后，抗性细胞对溴氰菊酯的敏感性增加，即干涉组的细胞存活率较对照组明显下降。
实施例4  PSMB6基因在山东淡色库蚊抗性品系较敏感品系高表达。
取山东淡色库蚊敏感品系（LC50为0.02ppm）和抗性品系（LC50为0.55ppm）各5只，提取总RNA，反转录成cDNA后定量PCR检测PSMB6基因在敏感和抗性品系中的表达。定量PCR引物序列：5’-GCTGGTGGCGGGTATCATT-3’ （SEQ ID NO.9）和5’-ATGGTGACACTCTGCCGAATC-3’ （SEQ ID NO.10）。结果如图5所示， PSMB6基因在抗性品系中较敏感品系高表达（p<0.05），是抗性品系的1.60倍。
                                      SEQUENCE LISTING
 
<110>  南京医科大学
 
<120>  蛋白酶体β亚单位6作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标的应用
 
<130> 
 
<160>  10   
 
<170>  PatentIn version 3.3
 
<210>  1
<211>  20
<212>  DNA
<213>  人工序列
 
<400>  1
gccgattckc gyacyagyac                                                 20
 
 
<210>  2
<211>  21
<212>  DNA
<213>  人工序列
 
<400>  2
crtcrtggta catbgcgtgg a                                               21
 
 
<210>  3
<211>  22
<212>  DNA
<213>  人工序列
 
<400>  3
gagttccgcc agtattgcta ca                                              22
 
 
<210>  4
<211>  20
<212>  DNA
<213>  人工序列
 
<400>  4
cctgccctcc gttcttgtta                                                 20
 
 
<210>  5
<211>  20
<212>  DNA
<213>  人工序列
 
<400>  5
uggccggauu ugauaacaat                                                 20
 
 
<210>  6
<211>  21
<212>  DNA
<213>  人工序列
 
<400>  6
uuguuaucaa auccggccat t                                               21
 
 
<210>  7
<211>  18
<212>  DNA
<213>  人工序列
 
<400>  7
gcgacgaucu gccuaaga                                                   18
 
 
<210>  8
<211>  18
<212>  DNA
<213>  人工序列
 
<400>  8
aucuuaggca gaucgucg                                                   18
 
 
<210>  9
<211>  19
<212>  DNA
<213>  人工序列
 
<400>  9
gctggtggcg ggtatcatt                                                  19
 
 
<210>  10
<211>  21
<212>  DNA
<213>  人工序列
 
<400>  10
atggtgacac tctgccgaat c                                               21
 
 

Claims (3)

1.蛋白酶体β亚单位6作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，具体方法是：通过检测蚊细胞中蛋白酶体β亚单位6的表达量来判断蚊对溴氰菊酯的抗性。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于具体是：以定量PCR检测待测品系和敏感品系的蛋白酶体β亚单位6基因表达，当待测品系的蛋白酶体β亚单位6基因的表达量大于或等于敏感品系的1.60倍时，待测品系对溴氰菊酯具有抗性。
CN2011100049391A 2011-01-12 2011-01-12 蛋白酶体β亚单位6作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标的应用 Expired - Fee Related CN102154467B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2011100049391A CN102154467B (zh) 2011-01-12 2011-01-12 蛋白酶体β亚单位6作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2011100049391A CN102154467B (zh) 2011-01-12 2011-01-12 蛋白酶体β亚单位6作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102154467A true CN102154467A (zh) 2011-08-17
CN102154467B CN102154467B (zh) 2012-08-01

Family

ID=44436136

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2011100049391A Expired - Fee Related CN102154467B (zh) 2011-01-12 2011-01-12 蛋白酶体β亚单位6作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102154467B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103969448A (zh) * 2014-05-21 2014-08-06 南京医科大学 Cyp6aa9作为蚊对溴氰菊酯抗性检测靶标的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1354253A (zh) * 2001-12-24 2002-06-19 南京医科大学 淡色库蚊胰蛋白酶基因
CN1385531A (zh) * 2002-03-29 2002-12-18 南京医科大学 淡色库蚊糜蛋白酶基因
CN1715406A (zh) * 2004-06-29 2006-01-04 华中农业大学 猪免疫性状相关基因psmb6的克隆及其应用
CN101705232A (zh) * 2009-11-20 2010-05-12 上海市农业科学院 猪的snp分子标记及其引物

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1354253A (zh) * 2001-12-24 2002-06-19 南京医科大学 淡色库蚊胰蛋白酶基因
CN1385531A (zh) * 2002-03-29 2002-12-18 南京医科大学 淡色库蚊糜蛋白酶基因
CN1715406A (zh) * 2004-06-29 2006-01-04 华中农业大学 猪免疫性状相关基因psmb6的克隆及其应用
CN101705232A (zh) * 2009-11-20 2010-05-12 上海市农业科学院 猪的snp分子标记及其引物

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103969448A (zh) * 2014-05-21 2014-08-06 南京医科大学 Cyp6aa9作为蚊对溴氰菊酯抗性检测靶标的应用
CN103969448B (zh) * 2014-05-21 2016-02-24 南京医科大学 Cyp6aa9作为蚊对溴氰菊酯抗性检测靶标的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN102154467B (zh) 2012-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Issler et al. Sex-specific role for the long non-coding RNA LINC00473 in depression
Ksiezopolska et al. Evolutionary emergence of drug resistance in Candida opportunistic pathogens
Terekhov et al. Microfluidic droplet platform for ultrahigh-throughput single-cell screening of biodiversity
Jiang et al. Molecular profiling of activated olfactory neurons identifies odorant receptors for odors in vivo
Gemayel et al. Variable glutamine-rich repeats modulate transcription factor activity
Rocchi et al. MicroRNAs: an update of applications in forensic science
Yehuda et al. The role of genes in defining a molecular biology of PTSD
Lee et al. Codependency of H2B monoubiquitination and nucleosome reassembly on Chd1
Graze et al. Allelic imbalance in Drosophila hybrid heads: exons, isoforms, and evolution
Wren et al. Not all biofluids are created equal: chewing over salivary diagnostics and the epigenome
Pietrzak et al. Gene expression profiling of brain samples from patients with Lewy body dementia
CA2805915A1 (en) Multiple input biologic classifier circuits for cells
Nguyen et al. Transcription mediated insulation and interference direct gene cluster expression switches
Baranova et al. Shared genetic liability and causal effects between major depressive disorder and insomnia
Zhou et al. Phycosphere microbial succession patterns and assembly mechanisms in a marine dinoflagellate bloom
Matsson et al. Quantifying the impact of transporters on cellular drug permeability
KR20180054829A (ko) 면역 레퍼토리 정상성 평가 방법 및 그 용도
Li et al. Screening and identification of plasma lncRNAs uc. 48+ and NR_105053 as potential novel biomarkers for cured pulmonary tuberculosis
Snijders et al. Circulating serum microRNAs as potential diagnostic biomarkers of posttraumatic stress disorder: a pilot study
Zheng et al. Identification of COVID-19 and dengue host factor interaction networks based on integrative bioinformatics analyses
Zhu et al. Acute depletion of human core nucleoporin reveals direct roles in transcription control but dispensability for 3D genome organization
Singh et al. Transcriptional and translational dynamics of Zika and dengue virus infection
Loll et al. Short-term test for toxicogenomic analysis of ecotoxic modes of action in Lemna minor
Govrins et al. Candida parapsilosis complex in the clinical setting
CN102154467B (zh) 蛋白酶体β亚单位6作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20120801

Termination date: 20130112