CN102131938A - 确定缺氧的方法 - Google Patents

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Abstract

确定生产过程中取样的胎儿头皮血缺氧的方法，所述方法包括确定由所述样品获得的血浆中的总的乳酸脱氢酶(LDH)。方法可以包括另外确定血浆和/或血液中的K、Mg、Ca、AST、ALT、乳酸。LDH、Mg、Ca、AST、ALT、乳酸的数值有一或多个发生增加指示了胎儿缺氧。发明还公开了血浆分离装置在所述方法中的用途。

Description

确定缺氧的方法
相关申请的交叉引用
本发明是2007年10月12日提交的申请PCT/SE2007/050738的部分继续申请，申请PCT/SE2007/050738享有2006年10月13日提交的瑞典申请0602158-8的优先权，以上提及的两份申请均通过引用全文并入本文。
发明领域
本发明涉及确定缺氧的方法。本发明的一个方面涉及在生产过程中确定胎儿头皮血中缺氧，以指示胎儿器官功能障碍的方法。本发明另一方面涉及确定缺血的装置。
发明背景
急性围产期窒息，即生产过程中或接近生产时缺氧(胎儿血氧饱和度不足)，是新生儿中缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy，HIE)形式的神经系统损伤的重要原因。1000个足月新生儿中有2-9例，严重的病例中随后可能发生脑性瘫痪(CP)和死亡。就全球来说，每年有大约4百万新生儿死亡，其中约23％是由急性围产期窒息造成的。由于资源匮乏，不发达国家情况更差，但由这样巨大的数量可以知道，在西方国家这也是严重的问题。瑞典可以看作是西方国家的一个代表，这里的缺氧发生约为7/1000足月新生儿，导致2/1000儿童先天HIE。为了防止新生儿周产期窒息造成的永久性损伤，很重要的一点是尽早检测到胎儿发生缺氧。快速检测使得能够在还未发生永久性损伤的阶段决定是否需要干预。干预基本包括通过器械协助性生产，特别是剖宫产将婴儿尽快取出。
目前检测急性围产期窒息是通过监测胎儿心率进行，如果观察到不良的心率模式，再测量经阴道取样的胎儿头皮血的pH或乳酸。
pH和乳酸表明供氧不足情况下转为无氧代谢而造成的代谢性酸中毒。在缺少氧气的胎儿中，丙酮酸被代谢为乳酸和能量。目前，pH测量值是公认标准。但是快速确定pH需要大约35μl头皮血，并不容易获得。某些研究表明，第一次测量失败非常常见(20％)。测量乳酸更容易，因为只需要5μl血液并且分析可以在床边进行。乳酸分析1分钟内即可完成，因此足够快。
乳酸和pH也是急性窒息的指标。因此乳酸和pH可以提供指示，表明完全健康的胎儿在生产过程中突然发生急性缺氧缺血。发生缺氧缺血性脑病的全部婴儿中很大部分在进入生产期之前就曾发生过缺氧缺血。他们对生产过程中的缺氧缺血更易感，与健康胎儿的反应方式不同，因此目前使用的方法对这一患者群体不够。
WO 2005/034762A1中公开了监测分娩的方法，包括测量液体(比如阴道液)中的乳酸。最近瑞典的一项对产时胎儿血中pH和乳酸随机化研究的初期结果表明，乳酸是和pH一样好的酸中毒指标。乳酸和pH都不是中度/严重HIE的理想预示者：灵敏度对乳酸仅有67％，对pH是50％；而特异性大体相同，乳酸的是76％，pH是73％。乳酸和pH预测新生儿酸中毒的灵敏度和特异性都低于70％。近来的瑞典报道结论是在胎儿监测中即使组合使用胎心宫缩监护(CTG)和STAN(胎心宫缩监护ST区段的分析)，仍有检测不到某些可能导致脑损伤的围产期窒息的风险(SBU Alert-rapport nr2006-04)。
已知在缺氧新生儿中升高的酶有又称为肝酶的LDH(乳酸脱氢酶)、ALT(丙氨酸转氨酶)和AST(天门冬氨酸转氨酶)。LDH在身体的多数细胞中都存在，被认为是非特异性的酶。因此，不常用于临床工作。以前，LDH被用作心肌损伤的标记物，但现在已被特异性更高的测试代替。AST以及特别是ALT是肝损伤特异性更高的。在关于分娩对一组低风险中国妇女的新生儿中血浆肝酶的影响的研究中，确定了LDH(乳酸脱氢酶)、ALT(丙氨酸转氨酶)、AST(天冬氨酸转氨酶)、GGT(γ-谷氨酰转氨酶)，并建立了其与母体和新生儿特点的相互关系(Mongrelli M et al.，J Obstet Gynaecol Res，26(1)：61-63，2000)。
如果胎儿在出生过程中或者接近出生时发生缺氧，其体内的血流将从“不太重要的器官”(肾、肝、脂肪和肠)重新分配向脑、心和肾上腺。这往往会损害非特权级器官的细胞。细胞损伤导致酶泄漏，进入循环系统。如果缺氧严重，细胞会死亡，血液中的酶浓度增加更多。LDH、AST和ALT(在12-36小时)下降速度使得可能检测到由于分娩前开始的先前缺氧导致分娩过程中对缺氧缺血更易感的病例。缺氧还影响胎儿体内的电解质平衡。一个实例是缺氧时钙由血液涌入细胞。已知新生儿动物模型在缺氧时，血清离子钙的浓度升高。钙也能预示人类婴儿中的后果(是否发生脑损伤)。新生哺乳动物在缺氧时发生改变的其他酶和电解质有钾(K+)、镁(Mg2+)、钠(Na+)、葡萄糖、肌酸激酶(CK)和GGT。
全球范围内每年有4百万新生儿死亡，其中的大约23％是由急性围产期窒息造成的。导致脑神经元损伤的缺氧缺血其病理机制分为两个阶段，其中初级阶段在分娩后立刻发生。如果婴儿被成功复苏，该初级阶段之后是持续几小时的无症状期。七分之二的窒息婴儿在该无症状期后会发生次级能量损耗导致婴儿脑中迟发性细胞死亡和包含痉挛的临床图像(又称为HIE)。无症状期提供了一个机会来通过低温处理(将婴儿脑降温至34.5℃)使迟发性细胞死亡降至最低。但是目前没有可靠的手段预测婴儿是否会发生HIE，因此无法利用低温处理的好处。
除了分娩过程中或接近分娩，缺氧在许多其他医学情况中也是严重的问题。例如，结肠直肠癌在两性中都是最常见的肿瘤之一，其发生率逐年增加。目前的治疗方法包括将肿瘤与肠相当一部分一起切除的手术过程。这些病例中很大一部分，之后要将肠的远端和近端接在一起。这被称为吻合术。该过程中，当动脉血管被切开时，对肿瘤所位于的肠部分的动脉血供应被打断。全部手术中7-10％预期会发生由吻合口漏造成的术后并发症。这种情况中，肠内容物会泄漏到腹部，引起炎症、腹膜炎、脓毒症甚至可能死亡。这类并发症的主要原因是摘除血管而造成的进行吻合术的区域供血不足(例如缺氧缺血)。目前的解决方案仅是重新手术。目前还不可能在手术期间就预测到吻合口是否会发生泄漏。
缺氧是重要问题的其他领域包括血管手术和肝移植手术。例如，决定患者肝脏移植后致残率和死亡率的重要因素是肝移植物的保存损伤(Leemaster 1997)。LDH、AST和ALT泄漏到灌注液标志着肝细胞膜完整性丧失(Kebis 2007)。
先前用于确定缺氧的装置和方法的一个主要缺点是LDH仅能在血浆或血清中进行分析。另外，这一测量需要最少150微升全血。很难由小动物、特定组织或分娩时未出生的婴儿中获取如此体积的血液。另一个问题是LDH也存在于红细胞，溶血(红细胞破裂)会造成假的(超过检测极限的)高值。
因此，需要快速，仅需要少量血分析单独LDH，或者LDH和电解质以及肝酶来检测缺氧缺血的方法。此外，生产时胎儿供血状态的确定需要提高。
发明概述
通过提供装置和方法，几分钟内(或者替代的几秒内)能在10微升全血中分析LDH、以及任选的AST、ALT、Mg和乳酸，本发明满足以上需要中的至少某些。这些分析可以与游离血红蛋白一起测量来保证没有发生溶血使得LDH值假性提高。
本发明的实施方案包括确定缺氧，特别是生产过程中取样的胎儿头皮血中缺氧的方法。这些实施方案中，方法可以包括确定血浆中的LDH(乳酸脱氢酶)。优选除了LDH，还确定所述胎儿头皮血中选自K、Mg、Ca、AST、ALT和乳酸的一种或几种标记物。特别优选的是LDH与K、Mg、Ca、AST、ALT、乳酸之一的组合。同样优选的是LDH、乳酸、Mg和AST和/或ALT的组合。
应当理解文中使用的“LDH”和“乳酸脱氢酶”是指总的乳酸脱氢酶，而非其同工酶。
在发明方法中，有限量(优选大约5-25μL)的头皮血是分娩时在邻近患者的环境中经由阴道从胎儿采样的。样品进行血浆(血清)与血细胞(特别是红细胞)的分离，分析血浆的LDH，以及任选的K、Mg、Ca、AST、ALT、乳酸中的一种或多种，在几分钟内得出结果。这样医疗队伍可以直接得出结论儿童是否遭受急性窒息，即表明是否需要剖宫产。本发明可能免除与缺氧有关的大量痛苦，并且可能挽救大量生命。
在发明人进行的研究中，第一个24小时内分析了儿童血样中的LDH、AST和ALT。发现193个接受测试的儿童中，19个儿童表现出窒息迹象，在5分钟大时Apgar得分＜7。借助ROC曲线(参见图1)，可以观察到临界值1000U/L的LDH灵敏度和特异性达到96％。对于HIE，相同临界值的灵敏度为100％，特异性为96％。换句话说，这意味着发明所述方法的主要标记物准确地确定所有缺氧儿童中的95％(或更多)，同时将所有健康儿童中的95％确定为健康。AST和ALT分别在临界值55U/L和18U/L给出灵敏度86％和特异性90％。尽管这只是初步研究，它表明与现有方法相比有令人惊讶的提高。
从成本角度考虑该结果是惊人的。已知使用目前的方法，大约要10例不必要的剖宫产才会发现一个HIE儿童，即为了发现一个HIE儿童，共需进行11例剖宫产，其中10例是不必要的。本发明的灵敏度和特异性表明结果会是相反的，即10例剖宫产中仅有1例是不必要的。相应的，社会将节省上百万，不仅是使更多儿童能够以自然方式出生。以下表格显示本发明的方法与已知方法相比带来的显著提高。
  方法   LDH   AST/ALT   CTG   pH   乳酸
  HIE灵敏度   100％   90％   46％   72％
  HIE特异性   96％   91％   67％   71％
  Apgar灵敏度   91％   86％   90％   57％   66％
  Apgar特异性   92％   89％   30％   71％   69％
健康人体中，已知红细胞比血清含有的LDH高大约150倍。因此重要的一点是采样和分离的方式要保证不会破坏红细胞，以避免它们含有的LDH进入血浆。同样重要的是考虑可供分析的头皮血的小体积。本发明的方法中，头皮血样品分离为血浆和血细胞是通过使血浆透过有孔基质，该基质本申请中称为“膜”，位于固体支持物上，能够保留下血细胞。以常规方式分析血浆中的LDH。K、Mg、Ca、AST、ALT和/或乳酸可以在血浆或血液中分析；如果在血液中分析，头皮血样品需要分出一部分获得血浆用于测量LDH，一或多份用于其他缺氧标记物的分析。使用其他本领域已知的方法，比如微量离心、微流体圆盘技术和磁泳将发明所述头皮血样品的血浆和血细胞分离开也在本发明的范围内。
分析液体，比如血浆中的LDH的方法是本领域已知的，可以经改进用于测量从胎儿血中获得的血清中的LDH；参见例如Pinto P V C et al.，ClinChem 15：339-349，1969。特别有用的是美国专利4,803,159中公开的方法，该专利并入本申请。可用于以上提到的方法中的商品装置市场上已有(
Figure BPA00001235019800051
DT60II Chemistry System；Ortho-Clinical Diagnostics，Inc.，U.S.A.)。分析血中K、Mg、Ca、ALT、AST和乳酸的方法是临床化学中常规使用的，因此对本领域技术人员很容易。
根据本发明，如果胎儿处于缺氧状态，分娩时通过阴道从胎儿采样的头皮血中LDH、K、Mg、Ca、ALT、AST和乳酸的水平上升，标准(基线)是就没有问题的生产而言，在分娩过程中和/或紧接分娩后胎儿内的相应水平。具体来说，胎儿在分娩过程经受严重窒息(即，使胎儿发生HIE的危险更高的窒息)时，LDH、ALT和AST水平提高两倍，特别是三倍或更多。
根据优选方面，本发明公开了生产过程中在头皮血样品中确定缺氧的方法，所述方法包括提供现场装置，利用至少一种，优选多种标记物在几分钟内确定是否即将发生急性缺氧。
根据更优选的改进，所述装置还与分析K、Mg、Ca、AST、ALT、乳酸中的一或多种的装置保持信息沟通。
根据更优选的方面，本发明公开了可简单直接用于发明所述装置/方法的血浆分离装置。
其他方面中，本发明包括评价哺乳动物组织部位是否缺氧的方法。这些实施方案中，方法可以包括从组织部位采集血样，其中血样包含血浆和血细胞，然后将血浆与血细胞分离开。确定血浆中的LDH的量，根据血浆中的LDH的量评价组织部位是否存在缺氧。评价组织部位是否缺氧的方法可以包括分析来自哺乳动物胃肠道(例如哺乳动物的肠)的血样、分析来自特定器官(例如哺乳动物的主动脉)的样品或者通过例如微导管采集的脑脊液、分析尿或腹腔液，以及对来自要移植到有需求哺乳动物内的器官的样品的分析。根据本发明的实施方案，评价缺氧的方法使得可以预测产前窒息后发生脑损伤的可能性，以及评价医疗或手术程序之前、之中和之后哺乳动物四肢的血液循环情况。
现通过描述优选但非限制性实施方案来更详细地解释本发明，所述实施方案多少通过示意图进行了说明。
附图简述
以上泛泛地描述了本发明，现在参见附图，这些附图不一定按照比例画的，其中：
图1显示了灵敏度和特异性的ROC曲线；
图2显示了代表发明所述方法的一个实施方案的方块图；
图3-5显示了发明所述方法连续使用分离装置的第一实施方案的剖面视图；
图6显示了本发明的毛细管装置的实施方案，该装置意图用于采集和测试头皮血；
图7显示了本发明另一个实施方案的快速测试分析系统；
图8显示了根据发明用于快速测试的一次性卡片装置的实施方案；以及
图9显示了通常会与本发明联合采取的行动的示意图。
发明详述
以下参照附图，对本发明进行更完全的描述，这些附图中显示了本发明的部分，但并非全部实施方案。的确，本发明可以体现为许多不同形式，不应理解为仅局限于本文列举的实施方案；提供这些实施方案只是为了满足适用的法律要求。除非上下文清楚地另有规定，单数形式的“一个”(“a”、“an”、“the”)用于说明书以及所附权利要求中包括复数的所指对象。
本发明提供了装置和方法，可以在几分钟(或替代的几秒内)内，在10微升全血中分析LDH以及任选的AST、ALT、Mg和乳酸。这些分析可以与游离血红蛋白一起测量从而保证没有溶血造成假性升高的LDH值。
本发明一个方面包括确定缺氧的方法。根据某些实施方案，所述方法可以包括采集血样；和确定血液中LDH的总量。血样可以采集自任何哺乳动物或者替代地采集自将要移植到有需要的哺乳动物的任何器官。
另一个实施方案中，确定缺氧的方法包括采集血样，其中所述血样包括血浆和血细胞。优选地，血浆与血细胞分离开从而能够在没有血细胞的情况下对血浆进行分析。可以分析分离的血浆得到血浆中LDH的总量。这样，可以实现LDH的确定。根据LDH的量，或者替代地联合其他预后标记物，可以容易地实现缺氧的确定。
在一个优选实施方案中，缺氧的确定包括分析血样来确定多种预后标记物的量(quantity或amount)。一个这样的实施方案中，所述方法包括确定血样，或者优选血样的血浆中的LDH的量，和确定基本由K、Mg、Ca、AST、ALT和乳酸构成的其他预后标记物中的至少一种的量。
优选地，对用于分析的血样进行操作使得血浆与血细胞分离开。在一个实施方案中，可以利用半透膜或离心实现这种分离。当使用半透膜时，优选血浆透过膜，而血细胞保留在膜上。相应地，血浆实际上与血细胞团分离开。然后可以取血浆并在没有血细胞的情况下进行测试。
根据多种实施方案，用于分析的样品体积可以比现有方法大大减少。在一个实施方案中，确定缺氧所用血液的体积包含从5μL到60μL，或从5μL到25μL，或者优选从大约5到15μL，特别是10μL。某些实施方案中，确定缺氧所用的血液体积包含从大约5μL到150μL，或从10μL到120μL，或从10μL到100μL，或从10μL到80μL。
有益的是本发明的实施方案能够用于多种情形中缺氧的确定。例如，本发明的实施方案包括，但不限于确定来自胎儿头皮、胃肠道(例如结肠吻合术)、特定器官(例如肝和主动脉)、来自腰池引流的脑脊液，以及待移植器官的血是否缺氧。此外，本发明的实施方案使得能够对肝(例如在可能多器官功能衰竭的哺乳动物中)、周围组织(例如与外伤、脓毒症、大出血或大面积手术有关的)进行评价和/或监测，预测产前窒息后的脑损伤，以及监测哺乳动物的外周血液循环。
图3-5显示了本发明的血浆分离装置1在发明方法的连续使用阶段。装置1包括疏水聚合物材料，比如聚四氟乙烯的大体上圆形的壳体。壳体中的血浆收集室2带有顶部开口，关闭该开口的是支撑在由和壳体相同或类似材料制成的网格12上的血浆分离膜11。室底部13向其中心倾斜形成大角度的锥形。从室14的侧壁延伸出一个管状通道15，其上带有阀门16。管道15延伸到负压源，比如真空泵(未显示)。图3中，40μL头皮血样品7被放到膜11的外表面上，阀门16处于关闭位置。打开阀门16，室14即处于负压下(图4)；这样血浆7’被吸入室14，积聚到倾斜底部13上，血细胞7”保留在膜11上。关闭阀门16后，达到图5所示的状态，其中室14的压力被通过膜11吸入的空气的气压所平衡。替代地，平衡室14的压力可以在停止产生负压后，通过管道15来实现，或者其他合适的方式。图5显示了利用吸引注射器从室14移出血浆样品7，注射器的插管10被穿过膜11插入。为了避免血浆样品7被膜上的血细胞污染，可以提供独立的插入口(未显示)，比如例如置于装置1的顶部或侧壁上的独立开口中的橡胶垫片。图2的方块图展示了本发明的方法的原理。
还可以给室提供与其底部沟通的第二管道，管道上有用于将聚集在室底部的液体(血浆)放空的第二阀门装置。替代地，室可以包含用于确定积聚的血浆中的LDH和其他标记物的装置。优选膜面积为5mm2到1000mm2，特别是20mm2到300mm2。
头皮血分析。从健康成年男性取样的头皮血，用临床常规使用的标准仪器成功地重复分析pH或乳酸测量。样品使用和没有使用阴道插管(vaginaltube)(在现实情况中避免被羊水污染)。从将血样加到血浆分离卡到显示结果的时间平均为7分钟。显然通过使用适合本方法的仪器，特别是施加在膜真空一侧的负压受到很好调节和定时(比如利用电子方式)的分离卡，分析时间可以极大地缩短，比如缩短到3到4分钟，甚至更短。因此本发明的方法用于危急状况下，胎儿头皮血的临床确定是完全可行的。
在测量中发现，头皮血中的LDH比手指微血管血中的高得多；头皮血中用和不用羊水插管(amniotic tube)的LDH分别是1044U/L和1127U/L；而手指血中是400U/L。与成年男性的LDH类似，观察到胎儿头皮和脐带血中葡萄糖和血红蛋白浓度存在差异。测量胎儿头皮血中的LDH似乎不是本领域已知的。
图6中显示了本发明的系统，所述系统包括用于现场(即在患者附近的环境中)测试的一次性卡2和分析仪器3，从而在7分钟内，优选2分钟内，更优选几秒内显示测试结果。优选一次性卡2上安置了许多不同检测池20A-20E(结合图7有更详细的解释)，但在某些应用中确实只测试LDH的卡(或者例如，两个小池用于LDH+AST)就足够了。
图6显示了发明所述方法的两个连续步骤。左上方显示了第一个步骤，其中利用装有例如大约10μL全血的玻璃毛细装置4给新卡2提供测试血7。后续步骤中，玻璃毛细装置4被插入卡2的小室21使血样7与卡2接触，一次性卡2放到仪器3中，从而可以进行血样7的直接分析，这一点将结合图7更详细地解释。卡上带有装置(正如自身已知的，例如用于分配血浆/血清的微流通道)以便来自血样7的血浆7’进入检测池20A-20E中的至少一个，优选血细胞进入至少一个另外的池，更优选全血进入至少一个另外的池。进入检测池之前，血浆/血清/全血进入放置了试剂(优选已变干)的反应室(26A-26E)。相应地，检测前发生反应。仪器3中有放置好的光学装置(正如自身已知的，例如US 4935346(通过引用并入本文)中描述的进行光学测量的装置)。光学测量(例如，正如已知的分光光度法和US 4803159(通过引用并入本文)中描述的)将直接由仪器3的处理器31处理，显示在显示器32和/或提供为例如打印在纸上的数据输出33。此外，分析仪器3优选带有条形码阅读排列34以便能够对每个一次性卡2用独特的条码来阅读和处理条形码22。优选分析仪器3封闭在壳体35中使其便于携带。提供连接部件(未显示)用于仪器3的必要供给，例如电力(如果不是电池驱动的)。在替代实施方案中，通过利用外部处理器可以将所述仪器制造得小一些，例如利用USB接线将仪器与笔记本电脑连接起来，即可使用笔记本电脑的处理器。
图7中显示了示范性的发明所述一次性卡2的实施方案。卡2上排列有5个检测池20A-20E，它们全部是光学检测池。第一个检测池20A用于ALT。第二个检测池20B用于AST。第三个检测池20C用于总LDH。第四和第五检测池20D、20E分别用于乳酸和Mg2+。根据所示实施方案，卡2具有平的圆形主体23，其直径保证它便于使用，例如直径在20-120mm，优选40-100mm范围内。主体23的材料选择范围广泛，例如聚四氟乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯等。如图7所示意的，卡2带有室21能够适合提供血样7的玻璃毛细装置4。在室21的底部与室21相连的界面23，连接方式本身能够保证血样再安全运输到例如血浆分离装置25(包括膜和血浆收集室，请与图3-5显示的膜11比较)中。在血浆分离膜25和界面23之间，可以任选带有样品分配器24(如虚线所示)以便有可能将全血供给某些检测池，例如借助印制上去的试剂26A、B来分别检测ALT和AST。这样可能将较大量的全血样品提供给血浆分离装置25，例如借助印制上去的试剂26C、D来分别检测血浆7’中的总LDH和乳酸。分离后获得的血细胞7”可以在与印制上去的试剂26D混合后导流到光学池20E来检测Mg2+。
以下将描述测试结果，其中示范性的发明所述一次性卡中使用了不同组合的标记物。
乳酸脱氢酶在缺氧时不断增加，存在于身体的所有细胞中。血流中存在LDH表明缺氧已严重到向外周器官供应的血流减少的程度。这是LDH从这些细胞渗漏的开始。不可能通过检测LDH确定哪个器官发生缺氧。如果已经发生溶血(红细胞破裂也会导致LDH升高，即使不是因为缺氧造成的)。溶血可以分成两个类型：(1)体外，表示溶血发生在采血或者保存在试管中时；和(2)体内，表示患者体内的红细胞因为疾病而破裂。这样正在发生的溶血会给出假性的高LDH水平，而不是仅因为缺氧。LDH的半寿期(T1/2)取决于泄漏到血液中的是五种LDH同工酶中的哪种。主要存在于心脏、脑海红细胞的LDH1的T1/2是120h，而主要出现在肝脏和肌肉的LDH5的T1/2为10h。
在我们的新生儿研究中，利用LDH作为标记物可以发现所有HIE患者，和184个健康患者中的178个。这意味着没有缺氧的病例被错过，6名婴儿被不必要地通过剖宫产或借助器械分娩。
高LDH表明体内某处正在发生或者近期发生过缺氧或溶血。
AST是一种体内多种器官中都存在的酶，但它比LDH更有器官特异性。AST主要存在于肝、肌肉和红细胞中。AST和LDH一样对溶血敏感，但程度不同。
新生儿中AST的T1/2为12-15h。
Figure BPA00001235019800112
在我们的研究中，通过利用AST作为标记物可以发现所有HIE患者，和236名健康患者中的210名。这意味着缺氧病例不会被错过，26名婴儿被不必要地通过剖宫产或借助器械分娩。
高水平AST表明肝脏或肌肉内正在发生或者近期发生过缺氧或溶血。
ALT是肝脏特有的酶，受溶血的影响很小。
ALT的T1/2是36h。
Figure BPA00001235019800113
我们的研究中，如果使用ALT作为单独的标记物，脑损伤的婴儿都不会被错过，但240名健康患者中的28名将被不必要地通过剖宫产或借助器械分娩。
ALT水平上升表明肝脏中正在发生或近期发生过缺氧。
体内的镁50％位于骨骼，50％在细胞内。如果发生酸中毒(pH降低)，例如缺氧期间，氢离子会移入细胞内。同时，Mg将被从细胞内运输到血液中，导致血液中的Mg水平增加。对于患有HIE的新生儿，Mg水平比健康新生儿低。Mg更大程度上是酸中毒而不是细胞损伤的标记物。
Mg水平升高表明酸中毒，而后者是缺氧的一个症状。低Mg水平表明导致脑损伤的缺氧事件。
目前，我们没有关于生产过程中Mg的数据。但我们可以依赖在新生小猪的动物研究中观察到的Mg的升高水平。
下表显示了利用LDH+AST作为标记物得到的结果。
我们的发现显示所有健康婴儿都具有低水平的AST和/或LDH。10名有HIE的婴儿的AST和LDH水平都高。三名AST和LDH水平提高的婴儿未遭受HIE。当婴儿是健康的时，AST提高了利用LDH来确定的效果。
高水平的LDH和AST表明缺氧和溶血。
以下表格显示了利用LDH+ALT作为标记物得到的结果。
Figure BPA00001235019800122
以上表格显示如果同时分析LDH和ALT，所有健康婴儿具有低水平的ALT和/或LDH。10名患有HIE的婴儿都有升高的ALT和LDH水平。1名AST和LDH水平升高的婴儿没有HIE。当婴儿是健康的时，ALT使利用LDH确定的效果更好。
我们对ALT也很感兴趣，因为理论上它可以告诉我们是否当婴儿还在子宫内时发生过缺氧，因为ALT能够在血液中保留很长时间(T1/2是36h)。
LDH和ALT水平提高表明缺氧已影响到肝脏(除了其他器官)。
下表显示了利用LDH+ALT+AST作为标记物得到的结果。
Figure BPA00001235019800131
如果LDH是与AST和ALT一起分析的，所有的酶水平都低，没有发现HIE婴儿。三种标记物全部升高时，发现了所有HIE婴儿，只有一名没有HIE的婴儿被通过不必要的手段分娩。
高LDH+ALT+AST表明正在发生的缺氧或者在先前的时间里发生的缺氧。ALT的半寿期比AST和LDH长24小时这一事实使得该组合方式可能判断缺氧发生的时间。例如，如果LDH+ALT+AST都高，并且在婴儿出生后的第一个24小时内仍在升高就表明缺氧出现在非常接近生产的时候。
在这些计算所用的资料中，实际上在没有缺氧(HIE、酸中毒或低Apgar打分)的表现的组中，实施了23例剖宫产和22例借助器械分娩。这里只包括了因为怀疑会危害到婴儿而进行的剖宫产。
以上实例中显示了利用LDH组合ALT，只有1名婴儿而不是45名以不必要方式分娩。这样仅剖宫产的费用就能节约880000SEK，未包括胎头吸引术。胎头吸引术增加了母亲和婴儿受伤的危险，产生医疗费用并且给患者带来更大痛苦。
从上文可以看出，就确定婴儿是否遭受缺氧而言，AST对该方法没有多少帮助。但由于其12小时的半寿期，AST仍然能够增加一些信息。与ALT一起，并且在产后重复取样，这两种酶能够提供缺氧什么时候发生的信息。这有很大的法律价值，因为当前的产科医师很难证明是他未察觉一例缺氧还是当妇女抵达医院进行生产时婴儿已经遭受缺氧。
基于科学文献中的信息得到的结论表明，镁将会增加关于缺氧是正在发生还是先前的事件的信息。
高水平LDH+ALT+AST+M表明正在发生的缺氧严重到影响外周器官和产生酸中毒的程度。高水平LDH+ALT+AST，但低Mg表明近期发生过缺氧，造成了器官损伤并且可能影响了脑。Mg对溶血不敏感，结合ALT可以确认LDH水平提高是由于器官损伤而非溶血。
以下将描述本发明的方法和设备的实际使用例子，假设一位名叫Anna的患者到达产房生产。工作人员开始利用放在妇女腹部的一小片仪器(胎心率监护CTG)，通过监测胎儿心率来控制胎儿的状况。间隔一定时间进行CTG控制以便观察可能的变化。生产8小时后，Anna开了8指。新的CTG控制显示胎儿心率升高。助产士呼叫了值班产科医师，后者希望继续从婴儿头皮取样看看是否存在疾病的任何其他征象。
侧躺着的Anna被要求变化为妇科姿势，产科医师将金属管通过阴道，推到婴儿的头皮。她洗去羊水，在婴儿头皮上做个小切口(头皮样品)。当她看到一滴血7时，用毛细管4取大约10μl血(同时从小管取血不容易，因为你需要它干净，而且动作要快。这种情况下，30-40μl是很大的体积了，这是检测pH所需要的头皮样品)。
当医生插入毛细管4时，助产士在产科医师旁边提供一次性卡2。然后带有血液7的卡2被插入放置在旁边的检测仪器3中，通过分光光度计4分析LDH、AST、ALT和镁的水平。在卡2上分离红细胞7”后进行分析，剩下的血浆7’与试剂20A-D在卡上反应。几分钟内(例如大约2分钟内)，结果显示在仪器的显示屏上。显示“正常-正常-正常-正常”即告知产科医师标记物LDH、AST、ALT和镁的水平都没有提高。Anna继续自然分娩，后来生产一名健康婴儿。
同一晚稍后时间，产科医师被呼叫到3号产房，Helena在这里分娩其第一个孩子。CTG同样不理想，取了头皮血样品。这次显示屏显示“高-高-高-高”告诉产科医师所有标记物水平都升高了。这只能意味着婴儿遭受正在发生的缺氧，医师作出紧急剖宫产的决定。给手术室发出警报，Helena在她的产床上被推入手术室。进行快速麻醉时，产科医师洗手并换上手术服。然后医师切开皮肤和子宫，在警报几分钟后生产一名婴儿。
正如上文描述的，某些标记物对溶血敏感。目前的阶段没有重复考察溶血对所述方法的影响，但似乎至少某些情况中不会极大地改变结果。但是如果显示取样过程中经常出现溶血，一般要(it is foresome)在卡中加入溶血标记物是。最可能的情景是我们使用游离血红蛋白(Hb)作为选中的标记物。通过测量血浆中的Hb，可以获得发生了溶血的信息，并且如果发生过溶血，还可能了解溶血有多严重。还可能考虑这一点，根据溶血的程度重新计算酶水平。
某些情况中，单独LDH或者LDH与例如乳酸、ALT、AST或镁联用足够判断婴儿情况如何，如果是这样，分析可以是比色的(试剂颜色改变)。
图8中显示了替代测试安排的实施方案，其中进行的分析使用了干化学物质。如图8所示的测试装置5的优点是不需要任何动力。测试装置5设置有延长的管子形成的主体(body/casing)50。在延长的主体50内有通道51通向位于壳体50的前端的前室52。在通道51的另一端，靠近壳体50的后端有泵装置53。泵装置53的形式是一个有弹性的中空体，在其出口端带有止回阀54。出口(经由止回阀54)通向处理室55。壳体50的前端带有接箍装置56，位于中央的孔57经由滤器58(过滤出血细胞)与前室52沟通。离前端有一段距离，形成通道51的一部分的是另一个室59，放置了干化学的部件8。与泵装置53相邻的也是通道51的一部分安置了另一个室501，形成缓冲区，并且提供关于通道51中的血液7的体积的指示。
图8显示的测试装置意图用于生产过程。如图8中示意的，婴儿头皮6被穿刺取血7(正如本身已知的)。之后，经由阴道引入测试装置5，通过使接箍56处于血滴7周围而置于血样7上。下一步中，启动泵机制53，其中止回阀54被打开使空气从弹性泵装置53的中空内部释放。当泵装置53被放开，将形成真空(归功于泵装置的弹性)，真空通过通道51流通到血滴7，这样血液将被通过滤器58吸入通道51。相应地，血浆7’将进入分析室59。可以多次施加泵机制以保证有足够的血进行测试，当观察到缓冲室501内有血液时可以确定血液足够了。之后，取出测试装置5，通过观察分析室59内化学部件的颜色可以确定婴儿是否遭受缺氧。正如本身已知的，干的化学部件8可以用于根据显示的颜色来指示采取不同措施。例如，以下颜色可以用于指示采取哪种措施。如果显示绿色，不用采取任何措施。如果显示红色，婴儿应当被尽快取出。如果显示黄色，应当在20分钟以内取新的样品。
临床上，测试装置5会给出与以上相同类型的指示。显然稍作改进的测试装置5也可以组合上使用毛细管从婴儿头皮采血，但优选其设计使得当采到血后，装置5内形成密闭系统。这可以通过许多方式实现，例如通过用硅接箍(如图所示)推顶部抵在婴儿头皮上，或者通过取出装置5并在顶部放上密封的盖子(未显示)。
我们还预见，当前使用的乳酸测试可以与本发明的方法组合分析。
图9中显示了关于何时分别优选使用本发明的方法和装置的流程图。如流程图所示，CTG应当优选作为主要指标。如果CTG正常，通常没有必要采取任何措施。但如果CTG不正常，或者直接将来自婴儿头皮的血样按照本发明进行分析，或者可能往下进行ST分析胎心。
本发明不被以上的描述所限制，但可以在所附权利要求的范围内有所变化。例如，对本领域技术人员显而易见的是“头皮血”的定义也包括从身体其他部位采集的血样，某些情况中可能也达到本发明的优点。用于本发明的样品包括全血、血浆和血清。
另一方面，本发明的实施方案可以有益地用于其他医疗情景。一个实施方案中，在医疗程序前从感兴趣的部位采集血样，并分析预后标记物。优选地，在确定血浆中预后标记物各自的量(例如血浆中的LDH总量)之前，将血浆和血细胞相互分开。医疗程序完成后，从感兴趣的部位再次取血，与原始样品相同的方式进行分析。可以确定每个样品中的预后标记物并进行比较，从而评价是否存在缺氧。
各种实施方案中分析了多种预后标记物。这些实施方案包括确定两个血样的血浆中的LDH总量和基本由K、Mg、Ca、AST、ALT和乳酸构成的其他预后标记物中的至少一种。相应地，可以比较第一和第二样品中每种预后标记物各自的量来鉴定进行吻合术的合适位置。在一个实施方案中，医疗程序包括胃肠道的吻合术。
例如，结肠直肠癌在两性中都是最常见的肿瘤之一。目前的治疗包括手术将肿瘤与肠的相当一部分一起切除。这些病例中的多数在之后将肠的远端和近端再接到一起。这被称为吻合术。
这样，某些实施方案包括确定从哺乳动物胃肠道(例如肠)采集的血样缺氧的方法。这样，某些实施方案包括由小体积血液快速(例如如上文讨论的在几分钟或几秒钟之内)确定缺氧缺血的现场(POC)方法。因此，这些实施方案使得能够决定选中的肠部分是否适合进行吻合术。
LDH、AST、镁和乳酸是在缺氧缺血中，由于细胞损伤和无氧代谢而在血液中升高的标记物。在切开血管前，可以用手术刀(之类的)和无菌毛细管从肠采血。毛细管可以插入以上描述的分析卡进行分析。优选结果可以作为独特的患者参考值(例如基线)。当肿瘤(以及周围的肠)已被切除，可以进行新的测试看看标记物是否升高。如果升高了，进行吻合术的区域可以重新移到更靠近仍有供血的位置，从而使缺氧缺血导致的吻合不全和吻合口漏最小化。
除了从胃肠道取血，本发明的实施方案可以有益地包括在手术过程中，从感兴趣的特定器官中采集血液或者哺乳动物的脑脊液。
例如，在胸腹主动脉进行手术的主要原因是动脉瘤和解剖。所需的大面积手术与严重的致残和致死率联系在一起。某些最常见的并发症是神经系统损伤。这些并发症中多数是由于缺血所造成的氧气和能量供应不足。举例来说，取决于手术所在的主动脉位置，作为术后并发症，这类手术在1-10％患者中导致永久性瘫痪。
但是本发明的实施方案包括这样的方法，所述方法可以是POC方法，用于手术过程中在来自特异器官的血液或者来自腰池引流的脑脊液(CSF)中检测缺氧缺血。这样，如上文详细描述的从感兴趣的特定器官中获得样品并分析LDH。在优选实施方案中，检测缺氧的方法包括检测样品中的LDH和选自基本由K、Mg、Ca、AST、ALT和乳酸构成的其他预后标记物中的至少一种。优选地，被确定的其他预后标记物之一包括乳酸。举例来说，感兴趣的特定器官可以包括哺乳动物的主动脉。
另一方面，本发明的实施方案可以改善患者在移植手术后的致残率和死亡率。影响移植后患者的致残率和死亡率的关键因素之一与移植物的保存损伤有关，比如肝移植中的肝移植物。例如，LDH、AST和ALT泄漏到灌注液中表明肝细胞丧失了膜完整性。
在一个这样的实施方案中，确定待移植给有需要的哺乳动物的器官中是否存在缺氧的方法可以包括在移植手术前，如上所述采集血样和分析样品中的预后标记物。一个实施方案中，对样品进行分析来确定LDH总量和样品中选自基本由K、Mg、Ca、AST、ALT和乳酸构成的其他预后标记物中的至少一种。在一个优选实施方案中，用于移植的器官包括肝脏。
本发明的某些实施方案可以在诊所中满足它们对鉴定可能发生严重状况-多器官功能障碍的患者的需要。目前，一些国家已建立由来自重症加强护理病房(ICU)的医师和护士组成的队伍，目的在于提供可以到不是重症加强护理的病房对是否存在多器官功能障碍风险的患者进行评价的流动队伍。如果鉴定为有风险，患者将接受治疗并转移到ICU。在澳大利亚，引入这些流动队伍已将心脏骤停、由心脏骤停造成的死亡、术后并发症的发生率以及在ICU住的天数减少了50％。
这些流动队伍实施肺、肾和循环系统的临床检验来评价多器官功能障碍的风险。但是，没有快速可靠的方法对肝或代谢进行评价。肝经常被严重疾病影响，并且肝酶和代谢性酸中毒预示着死亡。
相应地，符合本发明的实施方案的装置非常适合这类队伍使用。所述装置一般较小和较快，足够这类队伍在给病房提供咨询时携带(例如放在包里)。因为LDH、AST和ALT存在于肝细胞，乳酸在代谢性酸中毒时会升高，这些队伍现在可以通过利用本发明的装置，在其他被检验参数之外加上对肝的评价。因此，符合本发明实施方案的装置和方法有可能鉴定到更多存在严重疾病风险的患者，从而更好地实行人道主义和节省经济成本。
另一方面，符合某些实施方案的装置和方法非常适合重症加强护理病房(ICU)的工作人员使用。ICU在医疗系统中负责病情最严重的患者。Independently，如果患者因为外伤、心脏诊断、脓毒症、大出血或大面积手术被送进ICU，在血循环和氧饱和不足的情况下，总会有很大的缺氧危险。即使仔细地监测典型参数，并用液体和药物对异常情况进行治疗，但还是没有床边方法能够给ICU工作人员提供关于某种治疗对外周组织的效果的信息。
已知重度中风患者中血浆LDH、AST、ALT和乳酸水平极大提高指示着坏的结果(例如死亡)(Hardaway 1981)。许多ICU中临床常规测量AST、ALT(以前还有LDH)作为肝损伤的标记物，乳酸作为无氧代谢和肠缺血的标记物(Juel 2007)。但是，目前还没有装置可以在床边操作或者在几分钟内提供结果。
本发明的实施方案包括床边确定缺氧的装置和方法，其中最多几分钟内即可提供结果。这些实施方案包括获得用于分析和确定LDH的样品。在优选实施方案中，方法包括确定血浆中选自基本由AST、ALT和乳酸构成的其他预后标记物中的至少一种的量。
正如以上讨论的，急性围产期窒息即生产过程中或者接近生产时的缺氧(胎儿血氧饱和不足)仍是新生婴儿中表现为缺氧-缺血性脑病(HIE)的神经损伤的重要原因。缺氧缺血导致脑神经元损伤的病理机制分为两个阶段，开始是出生后立即发生的初级阶段。如果婴儿被成功复苏，该初级阶段之后是持续几小时的无症状期。七分之二的窒息婴儿在该无症状期后会发生次级能量损耗导致婴儿脑中迟发性细胞死亡和包含痉挛的临床图像(又称为HIE)。无症状期提供了一个机会来通过低温处理(将婴儿脑降温至34.5℃)使迟发性细胞死亡降到最低。但是需要一种方法来预测哪个婴儿会发生HIE，因此可以利用低温处理的好处，哪个婴儿不会发生。
因为出生后尽可能快地开始低温治疗非常重要(神经保护效果最好在窒息后5.5小时才下降)，能够快速检测预后标记物的就地系统非常有临床价值。从新生婴儿收集到的数据显示，通过确定LDH和ALT的量，预测HIE的灵敏度为100％，特异性＞96％。
本发明的某些实施方案给遭受围产期窒息的新生儿进行低温治疗的临床和研究医师提供了诊断工具。此外，本发明的实施方案包括确定缺氧的方法，其中个体能够预测产前窒息后的脑损伤。所述方法包括如以上详细描述的获得分析LDH的样品。在优选实施方案中，可以确定多种预后标记物的相对量。优选地，对血样进行处理使得血浆与血细胞分离，确定多种预后标记物的水平是基于仅对血浆进行的分析。另一个优选实施方案中，方法包括确定血浆中LDH和选自基本由AST、ALT和乳酸构成的其他预后标记物中的至少一种的量。最优选地，ALT的量是被确定的预后标记物之
根据本发明实施方案的一个方法中，所述方法包括给有需要的哺乳动物提供低温处理，其中确定血浆中的LDH(单独或者与其他预后标记物)表明哺乳动物脑中细胞死亡被延迟。
再一方面，本发明的实施方案可以用于评价哺乳动物的肢体在医药或手术治疗之前、过程中和之后的状况。例如，外伤、骨折和血管阻塞会影响到达外周肢体和肌肉的循环(例如，腔室综合征)。缺血肌肉中的氧气和观察到的乳酸和LDH水平之间有明显的关联(Yamamoto 1988)，与对照值相比，外周主动脉阻塞患者的股动脉血中的乳酸升高(Rexroth 1988)。符合本发明实施方案的装置使得可以利用酶和乳酸水平来诊断特定肢体的缺血，并可以对多数治疗的效果进行评价。
此外，本发明的实施方案包含通过分析来自目标肢体的样品并确定血浆中LDH总量，从而确定缺氧缺血的方法。确定LDH的同时，可以对其他预后标记物进行定量。这使得能够在医药或手术治疗之前、过程中和之后对哺乳动物肢体的血液循环进行评价。
本领域技术人员可以意识到，除了以上的描述，可以在不需要过多技术的情况下进行大量改进，例如用玻璃或其他一些合适的材料代替塑料等。
本发明相关领域的技术人员会想到文中阐述的发明的许多改进和其他实施方案，这些改进和实施方案可以受益于以上描述和相关附图的教导。因此，应当理解本发明并不限于文中公开的特定实施方案，这些改进和其他实施方案包括在所附权利要求的范围内。尽管文中采用了某些特定名词，它们的使用只是宽泛和描述性的，而非为了限制。
权利要求书(按照条约第19条的修改)
1.评价哺乳动物组织部位缺氧的方法，所述方法包括：
a.由组织部位采集血样，所述血样包含血浆和血细胞；
b.将血浆与血细胞分开；
c.确定血浆中的LDH的量；和
d.由血浆中的LDH的量评价该组织部位是否存在缺氧。
2.权利要求1的方法，另外包括确定血浆中选自基本由K、Mg、Ca、AST、ALT和乳酸构成的其他预后标记物中至少一种的量。
3.权利要求1的方法，其中血样的体积包含从5μL到150μL。
4.权利要求1的方法，其中血样的体积包含从5μL到25μL。
5.权利要求1的方法，其中血样的体积包含从大约5到15μL。
6.权利要求1的方法，其中通过利用半透膜，使血浆通过膜，血细胞保留在膜上，而将血浆与血细胞分开。
7.权利要求1的方法，其中血样采集自哺乳动物的肠。
8.权利要求7的方法，其中血样在医疗程序前采集，且另外包括：
a.在医疗程序后采集第二血样，所述血样包含血浆和血细胞；
b.将第二血样的血浆与血细胞分开；和
c.确定第二血样的血浆中的LDH总量。
9.权利要求8的方法，另外包括确定两种血样的血浆中选自基本由K、Mg、Ca、AST、ALT和乳酸构成的其他预后标记物中至少一种的量。
10.权利要求9的方法，另外包括比较血样中预后标记物的量。
11.权利要求8的方法，其中所述医疗程序包括胃肠道的吻合术。
12.权利要求1的方法，其中所述血样在手术过程中采集自一或多种特异器官、脑脊液、尿或腹腔液。
13.权利要求12的方法，其中所述器官包含哺乳动物的主动脉。
14.权利要求12的方法，还包括确定血浆中选自基本由K、Mg、Ca、AST、ALT和乳酸构成的其他预后标记物中的至少一种的量。
15.权利要求14的方法，其中所述至少一种预后标记物包括乳酸。
16.权利要求1的方法，其中血样从器官采集，该器官将要移植给需要所述器官的哺乳动物。
17.权利要求17的方法，其中血样是在移植手术前采集的。
18.权利要求17的方法，其中所述器官包括肝。
19.权利要求17的方法，还包括确定血浆中选自基本由K、Mg、Ca、AST、ALT和乳酸构成的其他预后标记物中的至少一种的量。
20.权利要求2的方法，还包括确定血浆中选自基本由K、Mg、Ca、AST、ALT和乳酸构成的其他预后标记物中的至少一种的量。
21.权利要求20的方法，其中确定预后标记物使个体能够对哺乳动物的肝脏健康状况进行评价。
22.权利要求1的方法，其中确定缺氧使得能够预测产前窒息后的脑损伤。
23.权利要求22的方法，还包括确定血浆中选自基本由AST、ALT和乳酸构成的其他预后标记物中的至少一种的量。
24.权利要求22的方法，还包括确定血浆中ALT的量。
25.权利要求22的方法，还包括给有需要的哺乳动物提供低温治疗，其中确定血浆中的LDH表明哺乳动物脑中延迟的细胞死亡。
26.权利要求1的方法，其中确定血浆中的LDH总量使得能够对医药或手术治疗之前、过程中和之后，哺乳动物肢体的血液循环进行评价。

Claims (54)

1.评价哺乳动物组织部位缺氧的方法，所述方法包括：
a.由组织部位采集血样，所述血样包含血浆和血细胞；
b.将血浆与血细胞分开；
c.确定血浆中的LDH的量；和
d.由血浆中的LDH的量评价该组织部位是否存在缺氧。
2.权利要求1的方法，另外包括确定血浆中选自基本由K、Mg、Ca、AST、ALT和乳酸构成的其他预后标记物中至少一种的量。
3.权利要求1的方法，其中血样的体积包含从5μL到150μL。
4.权利要求1的方法，其中血样的体积包含从5μL到25μL。
5.权利要求1的方法，其中血样的体积包含从大约5到15μL。
6.权利要求1的方法，其中通过利用半透膜，使血浆通过膜，血细胞保留在膜上，而将血浆与血细胞分开。
7.权利要求1的方法，其中血样采集自哺乳动物的肠。
8.权利要求7的方法，其中血样在医疗程序前采集，且另外包括：
a.在医疗程序后采集第二血样，所述血样包含血浆和血细胞；
b.将第二血样的血浆与血细胞分开；和
c.确定第二血样的血浆中的LDH总量。
9.权利要求8的方法，另外包括确定两种血样的血浆中选自基本由K、Mg、Ca、AST、ALT和乳酸构成的其他预后标记物中至少一种的量。
10.权利要求9的方法，另外包括比较血样中预后标记物的量。
11.权利要求8的方法，其中所述医疗程序包括胃肠道的吻合术。
12.权利要求1的方法，其中所述血样在手术过程中采集自一或多种特异器官、脑脊液、尿或腹腔液。
13.权利要求12的方法，其中所述器官包含哺乳动物的主动脉。
14.权利要求12的方法，还包括确定血浆中选自基本由K、Mg、Ca、AST、ALT和乳酸构成的其他预后标记物中的至少一种的量。
15.权利要求14的方法，其中所述至少一种预后标记物包括乳酸。
16.权利要求1的方法，其中血样从器官采集，该器官将要移植给需要所述器官的哺乳动物。
17.权利要求17的方法，其中血样是在移植手术前采集的。
18.权利要求17的方法，其中所述器官包括肝。
19.权利要求17的方法，还包括确定血浆中选自基本由K、Mg、Ca、AST、ALT和乳酸构成的其他预后标记物中的至少一种的量。
20.权利要求2的方法，还包括确定血浆中选自基本由K、Mg、Ca、AST、ALT和乳酸构成的其他预后标记物中的至少一种的量。
21.权利要求20的方法，其中确定预后标记物使个体能够对哺乳动物的肝脏健康状况进行评价。
22.权利要求1的方法，其中确定缺氧使得能够预测产前窒息后的脑损伤。
23.权利要求22的方法，还包括确定血浆中选自基本由AST、ALT和乳酸构成的其他预后标记物中的至少一种的量。
24.权利要求22的方法，还包括确定血浆中ALT的量。
25.权利要求22的方法，还包括给有需要的哺乳动物提供低温治疗，其中确定血浆中的LDH表明哺乳动物脑中延迟的细胞死亡。
26.权利要求1的方法，其中确定血浆中的LDH总量使得能够对医药或手术治疗之前、过程中和之后，哺乳动物肢体的血液循环进行评价。
27.确定胎儿头皮血急性缺氧的方法，所述方法包括在生产过程中采集血样、处理血样以寻找至少一种确定缺氧的指标，该方法特征在于包括确定由样品获得的血浆中的总乳酸脱氢酶(LDH)。
28.权利要求27的方法，其中所述样品是5μL到60μL。
29.权利要求27的方法，其中所述样品是5μL到25μL。
30.权利要求27的方法，其中所述样品是大约5到15μL。
31.权利要求27的方法，其包括利用半透膜和/或滤器将血浆与血细胞分开。
32.权利要求31的方法，其中所述膜的面积为5mm2到1000mm2，优选低于100mm2。
33.权利要求31的方法，其包括将样品加到膜的一面，给膜的另一面施加负压，并将血浆收集到朝向所述另一面的小室内。
34.权利要求33的方法，其包括将血浆从小室转移到确定LDH的设备和/或装置的步骤。
35.权利要求33的方法，其包括确定放置在小室内的血浆中的LDH的步骤。
36.权利要求31的方法，其中所述的膜被放置在有孔基质上或者与有孔基质结合，血浆被毛细管力吸引进入所述基质。
37.权利要求36的方法，其中在一定时间后从基质上取下所述膜来确定基质中的LDH。
38.权利要求27的方法，其包括将样品中的血浆与血细胞分离以及将上清血浆转移到设备中确定LDH的步骤。
39.权利要求27的方法，还包括比较如上确定的LDH和从胎儿头皮血获得的血浆中确定的LDH，后者血浆是从分娩过程中非缺氧状态的胎儿采集的。
40.权利要求39的方法，其中LDH水平有统计意义上的显著升高表明缺氧。
41.权利要求39的方法，其中LDH水平在统计意义上升高3倍或更多倍表明有缺氧缺血性脑病的风险。
42.权利要求27的方法，还包括确定所述头皮血和/或所述血浆中K、Mg、Ca、AST、ALT和乳酸中的一或多种。
43.权利要求42的方法，其中K、Mg、Ca、AST、ALT和乳酸水平有统计意义上的显著升高，结合LDH水平有统计意义上的显著升高，表明缺氧。
44.权利要求27的方法，其特征在于样品被采集到一次性装置上，所述装置包括用于分离血浆的部件和用于进行LDH检测的小室。
45.仪器在权利要求27的方法中分离血浆和血细胞的用途，所述仪器包含壳体、壳体中的小室、壳体中被半透膜覆盖的第一开口、壳体中经由管道将小室与负压部件或毛细管力部件相通的第二开口，以及在负压的情况下，用于控制所述相通的阀门部件。
46.权利要求45的用途，其中阀门部件安排在管道上，其中优选小室还包含与其底部相通的第二管道，并带有用于控制清空积累在小室底部的血浆的第二阀门部件。
47.权利要求45的用途，其中小室中有确定积聚在该壳体内的血浆中的LDH的部件或者与这种部件相通。
48.执行权利要求27所述方法的测试系统，所述测试系统包含一次性装置有血样收集部分、血浆分离装置和能够间接或直接确定血浆中总的乳酸脱氢酶(LDH)的室。
49.权利要求48的测试系统，其特征在于所述一次性装置有平滑的壳体，其中所述接收部分形成小室、并形成毛细采样器的界面。
50.权利要求49的测试系统，其特征在于卡上排列有许多检测室，其中优选这些小室中的每一个与含有试剂的上游小室相通。
51.权利要求48的测试系统，其特征在于所述界面和所述血浆分离装置之间带有样品分配器。
52.权利要求49的测试系统，其特征在于所述小室是光学检测池的形式，形成的壳体适合放入配有至少一个用于分光光度法的装置的仪器中。
53.权利要求48的测试系统，其特征在于所述壳体被编排了独特的代码，优选所述仪器带有阅读器。
54.权利要求48的测试系统，其特征在于所述一次性装置包括放置了目测用的干化学部件的小室。
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