CN102128866A - 冬虫夏草胶囊有效成份含量的检测方法 - Google Patents
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Abstract
一种冬虫夏草胶囊有效成份含量的检测方法，是利用MWNT/Au修饰电极、以溶出伏安法进行检测；该修饰电极的制备包括如下步骤：①将MWNT在浓盐酸中超声7.5h进行纯化，纯化后的MWNT加浓硝酸在140℃下回流8h，二次水洗至中性，100℃烘干研至成粉末，得功能化的MWNT粉末；②将步骤①中所得功能化的MWNT粉末超声分散于DMF中，形成黑色悬浊液；用微量进样器取悬浊液滴加在金电极表面，红外灯下烘干，得MWNT/Au修饰电极。利用本发明所述的方法检测冬虫夏草胶囊有效成份腺嘌呤核苷的含量，经济、操作简便，检测结果准确灵敏。
Description
技术领域
本发明涉及溶出伏安法进行有效成分含量检测的方法，尤其是利用修饰电极检测腺苷浓度的方法。
背景技术
冬虫夏草是中国传统的名贵中药，为麦角菌科真菌冬虫夏草CordycepssinensisSace.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体。因价格昂贵，目前市场上常有伪品亚香棒虫草出现，其来源为麦角科真菌霍克斯虫草Cordycepshawkesii Gray，寄生在鳞翅目昆虫幼虫的子囊菌，由虫体和头部长出的子座组成。真品冬虫夏草含有核苷、多糖、甾醇、氨基酸等多种活性成分，传统中医认为具有补肺益肾、止血化痰等功效。除此之外还具有免疫调节、抗肿瘤、降血糖、抗氧化等多种药理作用。核苷类化合物核苷类物质(腺苷、尿苷、鸟苷)为冬虫夏草有效成分之一，尤以腺苷具有明显的药理作用。2005年版《中国药典》将其作为指标成分应用于冬虫夏草的质量控制中。近几年，市场上纷纷推出，以冬虫夏草为原材料的保健品，其种类繁多，但究其有效成分的多少，很难判定。关于冬虫夏草的有效成份测定方法虽然有许多。但这些方法涉及仪器昂贵而且操作复杂、测试成本高，为此需要开发新的检测方法。
本发明采用电化学循环伏安技术在金电极表面修饰碳纳米管，根据腺嘌呤核苷在修饰电极上的循环伏安曲线和峰电流测定出样品中腺嘌呤核苷的含量。
发明内容
本发明的目的即在于提供一种简单经济的方法用以便捷地检测冬虫夏草胶囊中有效成份腺苷的含量。
为实现上述目的，本发明提供一种冬虫夏草胶囊有效成份含量的检测方法，其特征在于利用MWNT(多壁碳纳米管)/Au修饰电极进行检测；其中所述的MWNT/Au修饰电极的制备包括如下步骤：
①将MWNT在浓盐酸中超声7.5h进行纯化，纯化后的MWNT加浓硝酸在140℃下回流8h，二次水洗至中性，100℃烘干研至成粉末，得功能化的MWNT粉末；
②将步骤①中所得功能化的MWNT粉末超声分散于DMF中，形成黑色悬浊液；用微量进样器取悬浊液滴加在金电极表面，红外灯下烘干，得MWNT/Au修饰电极；其中MWNT-DMF悬浊液浓度优选1.0mg/ml。
本发明的检测方法中采用包括上述MWNT/Au修饰电极的三电极体系：以MWNT/Au修饰电极为工作电极，铂丝电极为辅助电极，饱和甘汞电极为参比电极；化学测试电池的缓冲溶液组成为磷酸氢二钠和磷酸二氢钠混合溶液，其酸度为pH＝7。
本发明所公开的的检测方法中，还包括修饰电极前对金电极的预处理，方法为：先用0.05μmAl2O3抛光粉抛光成镜面，然后依次在蒸馏水、硝酸-水溶液、无水乙醇和蒸馏水中各自超声三分钟；其中的硝酸-水溶液是硝酸与水按照体积比1∶1混合的溶液。
利用上文所述的检测体系，在25±2℃条件下，以溶出伏安法测定腺苷在MWNT/Au电极上的峰电流与腺苷浓度的线性关系，并采用标准曲线法测定腺苷样品含量，检测中腺嘌呤核苷的扫速为100mv/s。
利用本发明所述的方法检测冬虫夏草胶囊有效成份腺嘌呤核苷的含量，经济、操作简便，检测结果准确灵敏。
附图说明
本发明附图1幅，即不同浓度的纳米碳管修饰电极性能测试试验结果。
图中，A、B、C、D、E的浓度依次为：1、0.5、1.5、2.0和2.5mg/ml。
具体实施方式
下面以具体实施例的方式对本发明的技术方案作进一步的说明，但不以任何形式限制本发明的内容。
如无特殊说明，本部分内容所使用的仪器和试剂包括：ZF-4电位扫描信号发生器，ZF-10B数据采集存贮器，ZF-9恒电位/恒电流仪(上海正方电子电器有限公司)；AS230型数控超声波清洗器(奥特宝恩斯仪器公司)；AL204型电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；PH2C型精密酸度计(上海雷磁仪器厂)；金电极(上海辰华仪器公司)；饱和甘汞电极(上海辰华仪器公司)；铂丝电极。
多壁碳纳米管(MWNT)(中科院成都有机所)；腺苷(国药集团化学试剂有限公司)；冬虫夏草胶囊购自天津天狮生物制品有限公司；PBS缓冲溶液；其他试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。
实施例1
1、MWNT/Au修饰电极的制备：
①MWNT的纯化与功能化：将MWNT在浓盐酸中超声7.5h进行纯化，纯化后的MWNT加浓硝酸在140℃下回流8h，二次水洗至中性，100℃烘干研至成粉末，备用。
②电极的制备：称取1.2中所得功能化的MWNT粉末2.0mg超声分散于DMF中，MWNT用量以1.0mg/ml，形成黑色悬浊液备用。金电极先用0.05μmAl2O3抛光粉抛光成镜面，然后依次分别在蒸馏水、硝酸与水按照体积比1∶1所形成的溶液中、无水乙醇及蒸馏水中各自超声三分钟。用微量进样器取悬浊液滴加在金电极表面，红外灯下烘干，既得MWNT/Au修饰电极。
2、检测方法
首先将待测定样品粉碎、溶解、过滤和定溶，溶剂为60％甲醇。测定前根据含量范围估计数值先将定溶的样品中腺嘌呤核苷浓度控制在1.0×10-4mol·L-1～1.0×10-8mol·L-1范围内进行定量分析。然后在25±2℃下，采用三电极体系：以MWNT/Au修饰电极为工作电极，铂丝电极为辅助电极，饱和甘汞电极为参比电极。化学测试电池所选择的缓冲溶液组成为磷酸氢二钠和磷酸二氢钠混合溶液，其酸度为pH＝7，测定腺嘌呤核苷的扫速为100mv/s，以溶出伏安法测定腺苷在MWNT/Au电极上的峰电流与腺苷浓度的线性关系，并用标准曲线法测定了腺苷样品含量。
实施例2
线性范围、重现性和稳定性
测试中，在优化的实验条件下，依次检测对下列不同浓度的腺嘌呤核苷的极化电流：1.0×10-4mol·L-1、1.0×10-2mol·L-1、1.0×10-3mol·L-1、1.0×10-4mol·L-1、1.0×10-5mol·L-1、1.0×10-6mol·L-1、1.0×10-7mol·L-1、1.0×10-8mol·L-1、1.0×10-9mol·L-1。腺嘌呤核苷的最高氧化峰电流与其浓度在1.0×10-1mol·L-1～1.0×10-8mol·L-1的范围内有良好的线性关系，线性方程：
A(mA)＝0.0431-0.0046C(mol·L-1)，相关系数R2＝0.9947。
将该修饰电极室温下保存2周，其氧化峰电流基本不变。对于1.0×10-4mol·L-1的腺嘌呤核苷溶液，连续平行测定5次的相对标准偏差(RSD)为2.8％。检出限为1.0×10-6mol·L-1。
实施例3
不同浓度的纳米碳管修饰电极性能测试
实验发现，在金电极上修饰0.5～2.5mg/ml范围内不同浓度的碳纳米管，会出现不同形状的还原峰，当碳纳米管的浓度为1mg/ml时，其峰电流最大而且峰型最佳、重现性最好。实验过程中，我们分别取0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml、2.5mg/ml浓度的MWNT-DMF悬浊液进行修饰，经检测，只有在浓度为1mg/ml时，有良好的还原峰，其结果如附图1所示。
实施例4
按上述实验条件取5个不同批次样品进行平行测，所得实验数据结果处理如下表。实验结果表明，所测的5批样品的平均回收率为101.52％，RSD为1.50。经与分光光度法对比分析结果得知，两种方法没有显著性差异，并且所测产品标志含量与所测结果基本相符，是质量合格产品。
Claims (5)
1.一种冬虫夏草胶囊有效成份含量的检测方法，其特征在于利用MWNT/Au修饰电极进行检测；
其中所述的MWNT/Au修饰电极的制备包括如下步骤：
①将MWNT在浓盐酸中超声7.5h进行纯化，纯化后的MWNT加浓硝酸在140℃下回流8h，二次水洗至中性，100℃烘干研至成粉末，得功能化的MWNT粉末；
②将步骤①中所得功能化的MWNT粉末超声分散于DMF中，形成黑色悬浊液；用微量进样器取悬浊液滴加在金电极表面，红外灯下烘干，得MWNT/Au修饰电极。
2.权利要求1所述的冬虫夏草胶囊有效成份含量的检测方法，其特征在于所述的检测是采用三电极体系：以MWNT/Au修饰电极为工作电极，铂丝电极为辅助电极，饱和甘汞电极为参比电极；化学测试电池的缓冲溶液组成为磷酸氢二钠和磷酸二氢钠混合溶液，其酸度为pH＝7。
3.权利要求1所述的冬虫夏草胶囊有效成份含量的检测方法，其特征在于所述的步骤②中MWNT-DMF悬浊液浓度为1.0mg/ml。
4.权利要求3所述的冬虫夏草胶囊有效成份含量的检测方法，其特征在于所述的步骤②中包括对金电极的预处理，方法为：先用0.05μmAl2O3抛光粉抛光成镜面，然后依次在蒸馏水、硝酸-水溶液、无水乙醇和蒸馏水中各自超声三分钟；其中的硝酸-水溶液是硝酸与水按照体积比1∶1混合的溶液。
5.权利要求2所述的冬虫夏草胶囊有效成份含量的检测方法，其特征在于所述测定方法中设定腺嘌呤核苷的扫速为100mv/s。
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| CN106769912A (zh) * | 2016-09-20 | 2017-05-31 | 广东东阳光药业有限公司 | 一种鲜冬虫夏草鲜度的测定方法 |
| CN107505370A (zh) * | 2017-07-26 | 2017-12-22 | 大连大学 | 一种用于腺嘌呤核苷测定的新型电极及其测定方法 |
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