CN102091336A - 脑部肿瘤及神经退行性病变特异性磁共振对比剂及其制备方法 - Google Patents
脑部肿瘤及神经退行性病变特异性磁共振对比剂及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102091336A CN102091336A CN2009102731759A CN200910273175A CN102091336A CN 102091336 A CN102091336 A CN 102091336A CN 2009102731759 A CN2009102731759 A CN 2009102731759A CN 200910273175 A CN200910273175 A CN 200910273175A CN 102091336 A CN102091336 A CN 102091336A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lactoferrin
- iron oxide
- superparamagnetic iron
- oxide nanoparticle
- coupling
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明利用乳铁蛋白与表面表达乳铁蛋白受体的细胞的高亲和力来实现靶向性显影，提供了一种在磁共振成像中能特异性使肿瘤及神经退行性病变(包括AD、PD等)显像的对比剂及其制备方法。本发明磁共振特异性对比剂是采用EDC法将超顺磁性氧化铁纳米粒与乳铁蛋白偶联，粒径为20纳米以下，该偶联物具有粒径小、无毒性、特异性高、选择性好、对比效果强、组织浓度足够活体成像等特性。
Description
技术领域
本发明涉及医疗检测试剂技术，尤其涉及一种用于MRI(磁共振成像)对比增强的脑部肿瘤及神经退行性病变特异性对比剂及其制备方法。
背景技术
核磁共振成像是近年来一种新型的高科技影像学检查方法，是80年代初才应用于临床的医学影像诊断新技术。在临床MRI检测中大约30％以上的诊断需用磁共振成像对比剂(MRI contrast agent)，以提高成像对比度，使原来缺乏对比差异的组织结构显示得更加清晰，从而更好的显示体内组织器官的结构和病变的性质及功能状态，能够大大提高诊断的准确性和早期性。对比剂根据所含磁性物质的种类分为顺磁性和超顺磁性对比剂，顺磁性对比剂一般是钆的螯合物，超顺磁性对比剂一般是超顺磁性氧化铁对比剂。钆类对比剂有效地提高了磁共振成像MRI的诊断水平，但Gd-DTPA有不少缺点如弛豫率较低、非生物相容性、去螯合化后对细胞的毒性作用知之甚少、分布无特异性，入血后迅速进入细胞间隙很快经肾脏排泄等往往不能使MR图像对比明显改善，同时也要求设备能够快速扫描其价格也昂贵。超顺磁性对比剂较传统MR对比剂敏感性高，具有生物相容性，可以被细胞通过正常的生化代谢途径再利用或进人体内铁循环，可顺利地通过光学及电子显微镜观察。但是普通超顺磁性氧化铁对比剂主要被网状内皮系统所识别，被吞噬细胞摄取，沉积在网状内皮细胞丰富的组织和器官中，主要用于肝脏、淋巴结等的MR增强。肿瘤组织因不含正常的吞噬细胞而保持较高信号，所以反映的是肿瘤周围正常组织的信号变化，而不是特征性的肿瘤部位的信号变化。而磁共振特异性对比剂是指利用病变细胞对靶向配体的特异性吞噬作用，吞噬含有靶向配体的对比剂后，使对比剂特异性地聚集在病变部位，使病变部位的T2值降低。正常组织细胞表面缺乏相应的受体，不能摄取特异性对比剂，正常组织部位T2值不升高或升高不明显，从而增加了病变组织与正常组织的对比度，提高了磁共振诊断的敏感性和特异性。目前特异性对比剂的研究，多集中在以单抗为靶向配体的对比剂。但原料单抗的制备普遍存在着制备繁琐、周期长、价格高昂等缺点。同时利用单抗可能在人体中发生免疫反应，产生抗-抗体从而限制重复使用。乳铁蛋白是一种多功能的蛋白质。已经有文献报道乳铁蛋白能通过单向受体介导的转胞作用通过血脑屏障。有证据表明脑微血管内皮细胞上有乳铁蛋白的结合位点，乳铁蛋白修饰的外源性基因在整个大脑均有表达。同时，乳铁蛋白偶联的基因载体在脑部有较高的累积。
发明内容：
本发明的目的在于利用乳铁蛋白和乳铁蛋白受体高亲和力的特性来实现靶向显影，提供一种特异性、选择性、对比效果好、毒副作用低的脑部肿瘤及神经退行性病变特异性磁共振对比剂及其制备方法。
本发明提供的这种脑部肿瘤及神经退行性病变特异性磁共振对比剂，是偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒。该偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒是以乳铁蛋白为特异性配体偶联超顺磁性氧化铁纳米粒得到的偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒。即采用乳铁蛋白为靶向配体，偶联超顺磁性氧化铁纳米粒，得到偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒对比剂。所述的超顺磁性氧化铁纳米粒是可以是超顺磁性三氧化二铁纳米粒、超顺磁性四氧化三铁纳米粒、包裹超顺磁性三氧化二铁的纳米粒、包裹超顺磁性四氧化三铁的纳米粒，其他超顺磁性氧化铁的纳米粒。上述的超顺磁性氧化铁纳米粒对比剂粒径分布为10-20纳米。
本发明还提供上述磁共振肿瘤特异性对比剂的制备方法，该制备方法包括以下步骤：
(1)制备活化后的超顺磁性氧化铁纳米粒悬浮液：取超顺磁性氧化铁纳米粒，分散于pH＝5.0的1mol/L醋酸钠缓冲液中，加入EDC和NHS(终浓度分别为5mM和12.5mM)，振荡15分钟，用磁铁除去未反应的EDC和NHS，再加入pH＝7.4的0.1mol/L PBS缓冲液重新分散超顺磁性氧化铁纳米粒，获得活化后的超顺磁性氧化铁纳米粒悬浮液；
(2)制备乳铁蛋白溶液：取乳铁蛋白溶解于pH＝7.4的0.1mol/L PBS缓冲液中；
(3)将步骤(2)制备的乳铁蛋白溶液加入步骤(1)获得的活化后的超顺磁性氧化铁纳米粒悬浮液中，反应比例为0.1mg∶1mg，室温条件下过夜反应，获得反应后产物；
(4)分离：取出步骤(3)获得反应后产物，用磁铁去除未反应的乳铁蛋白，获得偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒的沉淀；
(5)用pH＝7.4的0.1mol/L PBS缓冲液清洗步骤(4)获得的偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒沉淀三次，用pH＝7.4的0.1mol/L PBS缓冲液重新分散偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒，即得本发明偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒对比剂，其浓度为10mg/mL。
本发明偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒的体外表征：
(1)偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒的确定：利用5.1％聚丙烯酰胺凝胶电泳确定乳铁蛋白成功偶联至超顺磁性氧化铁纳米粒，见图1。
(2)偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒的粒径分布：利用透射电镜测定。偶联乳铁蛋白前后超顺磁性氧化铁纳米粒的粒径分别为8纳米和13纳米，见图2。
(3)偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒的磁饱和曲线：利用磁强振动计测定。偶联乳铁蛋白前后超顺磁性氧化铁纳米粒的磁饱和强度分别为78emu/g和51emu/g，见图3。
(4)偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒的弛豫率曲线：将偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒用水稀释成不同浓度，加入96孔板中，利用Magnetom A Trio Tim 3.0测定不同浓度的偶联超顺磁性氧化铁纳米粒的T2值，得到偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒的弛豫系数(r2)为90.72mM-1S-1。
本发明的有益效果通过一下动物实验表明：
实验动物：Wistar大鼠，湖北预防医学科学院提供，体重在300-400g之间，雄性。
设备：西门子Magnetom A Trio Tim 3.0
肿瘤动物模型的制备：在大鼠前囟右偏3毫米，前偏1毫米的的位置将颅骨钻开，利用立体定位仪将1×106个细胞注入该位置，约10天后瘤直径达到(5mm×5mm)用于动物成像实验。
实验动物成像：大鼠肿瘤模型8只，随机分为2组，一组为实验组，尾静脉注射经PBS稀释的偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒对比剂，按12mg/mL；一组为对照组，尾静脉注射相同剂量的超顺磁性氧化铁纳米粒对比剂，在2分钟内注射完毕，分别在2小时、24小时、48小时扫描，观察肿瘤部位信号的变化。
MR信号值测量方法：尽量取相同层面瘤体最大径上的5个圆形兴趣区，面积为2mm，测其ROI值，然后计算其平均值。
数据处理：采用SASS()版本统计软件，用随机区组设计资料的方差分析方法对数据进行处理，之后用SNK-q检验进行两两间比较。
结果发现，瘤体信号值在注射乳铁蛋白偶联的超顺磁性氧化铁纳米粒后，信号呈明显改变，并随着观察时间的延长，试剂乳铁蛋白偶联的超顺磁性氧化铁纳米粒有向瘤体四周扩散的趋势，最大改变为53.55％，见图4。
| Rat(n＝4) | ROI值变化率超顺磁性氧化铁纳米粒对比剂 | ROI值变化率偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒对比剂 |
| 1 | 6.47％ | 49.03％ |
| 2 | 7.95％ | 53.55％ |
| 3 | 53.55％ | 52.56％ |
| 4 | 19.05％ | 36.07％ |
组织普鲁士兰染色：将注射偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒48h后的荷瘤大鼠用4％多聚甲醛进行心脏灌流，取出脑肿瘤组织进行固定、脱水、包埋、切片及普鲁士兰染色。金相显微镜拍照，证实偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒的位于肿瘤组织内，见图4。
结果说明：
注射偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒对比剂的实验组与注射超顺磁性氧化铁纳米粒对比剂的对照组相比，在注射后2小时至48小时之间，实验组肿瘤部位呈低信号，低信号范围逐渐扩大，并维持在较高水平；而对照组肿瘤部位信号无明显改变。偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒能够达到特异性靶向肿瘤的要求。
本发明利用乳铁蛋白和乳铁蛋白受体高亲和力的特性来实现靶向显影，是配体-受体导向系统，其结合具有特异性、选择性等特点。利用超顺磁性氧化铁纳米粒作为载体，与乳铁蛋白偶联后，经静脉注射后被肿瘤细胞特异性识别吞噬，改变了常规对比剂迅速被肾脏清除的特性，提高了诊断的敏感性和特异性。提供了一种特异性、选择性、对比效果好、毒副作用低的磁共振脑部肿瘤及神经退行性病变特异性对比剂。
附图说明
图1是超顺磁性氧化铁纳米粒对细胞的毒性作用实验及结果，由图1可以看出超顺磁性氧化铁纳米粒与细胞相互作用24小时后，对细胞的生长和增值能力无明显影响。
图2是超顺磁性氧化铁纳米粒对细胞活力的影响实验及结果图，由图2可以看出超顺磁性氧化铁纳米粒与胶质瘤细胞相互作用24小时后，对胶质瘤细胞的活力无明显影响。
图3是超顺磁性氧化铁纳米粒(5μg/mL)与偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒(5μg/mL)与胶质瘤细胞共孵育后的磁共振成像(o.5h，37℃)图。
图4是不同浓度的超顺磁性氧化铁纳米粒和偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米与胶质瘤细胞共孵育后铁含量测定(o.5h，37℃)实验及结果图。
由3和4可以看出超顺磁性氧化铁纳米粒和偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米与胶质瘤细胞共孵育，胶质瘤细胞对偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米的摄取大于对超顺磁性氧化铁纳米粒的摄取。
图5是超顺磁性氧化铁纳米粒和偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米与胶质瘤细胞共孵育后的电镜图片(o.5h，37℃)图，图中：a为对照；b为胶质瘤细胞与超顺磁性氧化铁纳米粒共孵育(20μg/mL，0.5h，37℃)；c为胶质瘤细胞与偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒共孵育(20μg/mL，0.5h，37℃)，由图可以看出，胶质瘤细胞摄取的超顺磁性氧化铁纳米粒位于胞浆。
图6是注射超顺磁性氧化铁纳米(12mg/mL)后荷瘤大鼠肾的磁共振图像(24h)，图中a为注射前；b为注射超顺磁性氧化铁纳米后24h；由图可见注射超顺磁性氧化铁纳米24小时后，荷瘤大鼠肾皮质部位呈低信号。
图7是偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)照片，图片中：1是偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒；2.是乳铁蛋白；3是顺磁性氧化铁纳米粒；4.是顺磁性氧化铁纳米粒与乳铁蛋白直接混合，洗三次后的沉淀物.；从上图可以看出乳铁蛋白成功偶联至超顺磁性氧化铁纳米粒，偶联比例约为1mg超顺磁性氧化铁纳米粒与0.1mg乳铁蛋白偶联。
图8是偶联乳铁蛋白前后超顺磁性氧化铁纳米粒的透射电镜(TEM)照片和磁饱和曲线图，图中：(a)电镜：超顺磁性氧化铁纳米；(b)电镜：偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒；(c)磁饱和曲线：超顺磁性氧化铁纳米；(d)磁饱和曲线：偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒。从上图可以看出偶联乳铁蛋白前后超顺磁性氧化铁纳米粒的粒径分别为8纳米和13纳米，利用磁强振动计测定，偶联乳铁蛋白前后超顺磁性氧化铁纳米粒的磁饱和强度分别为78emu/g和51emu/g。
图9是不同时间点肿瘤大鼠横断位图象；上部图象为超顺磁性氧化铁纳米粒(12mg/mL)下部图象为偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒(12mg/mL)；注射偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒的实验组与注射超顺磁性氧化铁纳米粒的对照组相比，在注射后2小时至48小时之间，实验组肿瘤部位呈低信号，低信号范围逐渐扩大，并维持在较高水平；而对照组肿瘤部位信号无明显改变。该结果表明偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒能够达到特异性靶向肿瘤的要求。
图10是肿瘤大鼠脑肿瘤普鲁士兰染色照片。将分别注射超顺磁性氧化铁纳米粒和偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒48h后的荷瘤大鼠用4％多聚甲醛进行心脏灌流，取出脑肿瘤组织进行固定、脱水、包埋、切片及普鲁士兰染色，金相显微镜拍照，证实偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒位于肿瘤组织内。
本发明实验资料：
1、超顺磁性氧化铁纳米粒对细胞的毒性作用：实验及结果见图1，由图1可以看出超顺磁性氧化铁纳米粒与细胞相互作用24小时后，对细胞的生长和增值能力无明显影响。
2、超顺磁性氧化铁纳米粒对细胞活力的影响：实验及结果见图2，由图2可以看出超顺磁性氧化铁纳米粒与胶质瘤细胞相互作用24小时后，对胶质瘤细胞的活力无明显影响。
3、超顺磁性氧化铁纳米粒(5μg/mL)与偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒(5μg/mL)与胶质瘤细胞共孵育后的磁共振成像(o.5h，37℃)，实验及结果见图3。
4、不同浓度的超顺磁性氧化铁纳米粒和偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米与胶质瘤细胞共孵育后铁含量测定(o.5h，37℃)
由3和4可以看出超顺磁性氧化铁纳米粒和偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米与胶质瘤细胞共孵育，胶质瘤细胞对偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米的摄取大于对超顺磁性氧化铁纳米粒的摄取。
5、超顺磁性氧化铁纳米粒和偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米与胶质瘤细胞共孵育(o.5h，37℃)后进性电镜观察研究，电镜图片见图5，a)对照；b)胶质瘤细胞与超顺磁性氧化铁纳米粒共孵育(20μg/mL，0.5h，37℃)；c)胶质瘤细胞与偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒共孵育(20μg/mL，0.5h，37℃)；由图可以看出，胶质瘤细胞摄取的超顺磁性氧化铁纳米粒位于胞浆。
6、给荷瘤大鼠注射超顺磁性氧化铁纳米(12mg/mL)后，对荷瘤大鼠肾进行磁共振图像研究，见图6，a是注射前的磁共振图像；b)是注射超顺磁性氧化铁纳米后24小时的磁共振图像，由图可见注射超顺磁性氧化铁纳米24小时后，荷瘤大鼠肾皮质部位呈低信号。
7、偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，见图7，
图中：1.偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒；2.乳铁蛋白；3.超顺磁性氧化铁纳米粒；4.超顺磁性氧化铁纳米粒与乳铁蛋白直接混合，洗三次后的沉淀物.；从图7可以看出乳铁蛋白成功偶联至超顺磁性氧化铁纳米粒，偶联比例约为1mg超顺磁性氧化铁纳米粒与0.1mg乳铁蛋白偶联。
8、偶联乳铁蛋白前后超顺磁性氧化铁纳米粒的透射电镜(TEM)研究照片和磁饱和曲线图研究实验，见图8：(a)电镜：超顺磁性氧化铁纳米；(b)电镜：偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒；(c)磁饱和曲线：超顺磁性氧化铁纳米；(d)磁饱和曲线：偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒。从图8可以看出偶联乳铁蛋白前后超顺磁性氧化铁纳米粒的粒径分别为8纳米和13纳米，利用磁强振动计测定，偶联乳铁蛋白前后超顺磁性氧化铁纳米粒的磁饱和强度分别为78emu/g和51emu/g。
9.注射偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒的实验组与注射超顺磁性氧化铁纳米粒的对照组相比，在注射后2小时至48小时之间，实验组肿瘤部位呈低信号，低信号范围逐渐扩大，并维持在较高水平；而对照组肿瘤部位信号无明显改变。该结果表明偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒能够达到特异性靶向肿瘤的要求。不同时间点肿瘤大鼠横断位图象见图9：上：超顺磁性氧化铁纳米粒(12mg/mL)；下：偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒(12mg/mL)。
10.将分别注射超顺磁性氧化铁纳米粒和偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒48h后的荷瘤大鼠用4％多聚甲醛进行心脏灌流，取出脑肿瘤组织进行固定、脱水、包埋、切片及普鲁士兰染色。金相显微镜拍照，证实偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒位于肿瘤组织内。肿瘤大鼠脑肿瘤普鲁士兰染色照片见图10。
具体实施方式
实施例1
一种磁共振脑部病变特异性对比剂，它是乳铁蛋白与超顺磁性氧化铁纳米粒偶联物，即Lactoferrin-SPIO，粒径约为13纳米。
实施例2
一种制备实施例1所述的磁共振脑部病变特异性对比剂的方法，它包括以下步骤：
(1)制备活化后的超顺磁性氧化铁纳米粒悬浮液：取超顺磁性氧化铁纳米粒，分散于pH＝5.0的1mol/L醋酸钠缓冲液中，加入EDC和NHS(终浓度分别为5mM和12.5mM)，振荡15分钟，用磁铁除去未反应的EDC和NHS，再加入pH＝7.4的0.1mol/L PBS缓冲液重新分散超顺磁性氧化铁纳米粒，获得活化后的超顺磁性氧化铁纳米粒悬浮液。
(2)制备乳铁蛋白溶液：取乳铁蛋白溶解于pH＝7.4的0.1mol/L PBS缓冲液中。
(3)将②加入①中，反应比例为0.1mg∶1mg，室温条件下过夜反应，获得反应后产物。
(4)分离：取出③，用磁铁除去未反应的乳铁蛋白，获得偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒的沉淀。
(5)pH＝7.4的0.1mol/L PBS缓冲液清洗④三次，用pH＝7.4的0.1mol/L PBS缓冲液重新分散偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒，即得偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒对比剂，其浓度为10mg/mL。
Claims (6)
1.一种脑部肿瘤及神经退行性病变特异性磁共振对比剂，其特征在于，它是偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒。
2.根据权利要求1所述的脑部肿瘤及神经退行性病变特异性磁共振对比剂，其特征在于，所述的偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒是以乳铁蛋白为特异性配体偶联超顺磁性氧化铁纳米粒得到的偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒。
3.根据权利要求1或2所述的脑部肿瘤及神经退行性病变特异性磁共振对比剂，其特征在于，超顺磁性氧化铁纳米粒是超顺磁性三氧化二铁纳米粒、超顺磁性四氧化三铁纳米粒、包裹超顺磁性三氧化二铁的纳米粒或包裹超顺磁性四氧化三铁的纳米粒。
4.根据权利要求1或2所述的脑部肿瘤及神经退行性病变特异性磁共振对比剂，其特征在于所述的超顺磁性氧化铁纳米粒对比剂粒径分布为10-20纳米。
5.根据权利要求3所述的脑部肿瘤及神经退行性病变特异性磁共振对比剂，其特征在于所述的超顺磁性氧化铁纳米粒对比剂粒径分布为10-20纳米。
6.一种如权利要求1所述的脑部肿瘤及神经退行性病变特异性磁共振对比剂的制备方法，其特征在于该制备方法包括以下步骤：
(1)制备活化后的超顺磁性氧化铁纳米粒悬浮液：取超顺磁性氧化铁纳米粒，分散于pH＝5.0的1mol/L醋酸钠缓冲液中，加入EDC和NHS(终浓度分别为5mM和12.5mM)，振荡15分钟，用磁铁除去未反应的EDC和NHS，再加入pH＝7.4的0.1mol/L PBS缓冲液重新分散超顺磁性氧化铁纳米粒，获得活化后的超顺磁性氧化铁纳米粒悬浮液；
(2)制备乳铁蛋白溶液：取乳铁蛋白溶解于pH＝7.4的0.1mol/L PBS缓冲液中；
(3)将步骤(2)制备的乳铁蛋白溶液加入步骤(1)获得的活化后的超顺磁性氧化铁纳米粒悬浮液中，反应比例为0.1mg∶1mg，室温条件下过夜反应，获得反应后产物；
(4)分离：取出步骤(3)获得反应后产物，用磁铁去除未反应的乳铁蛋白，获得偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒的沉淀；
(5)用pH＝7.4的0.1mol/L PBS缓冲液清洗步骤(4)获得的偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒沉淀三次，用pH＝7.4的0.1mol/L PBS缓冲液重新分散偶联乳铁蛋白的超顺磁性氧化铁纳米粒，即得本发明脑部肿瘤及神经退行性病变特异性磁共振对比剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009102731759A CN102091336A (zh) | 2009-12-10 | 2009-12-10 | 脑部肿瘤及神经退行性病变特异性磁共振对比剂及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009102731759A CN102091336A (zh) | 2009-12-10 | 2009-12-10 | 脑部肿瘤及神经退行性病变特异性磁共振对比剂及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102091336A true CN102091336A (zh) | 2011-06-15 |
Family
ID=44124715
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2009102731759A Pending CN102091336A (zh) | 2009-12-10 | 2009-12-10 | 脑部肿瘤及神经退行性病变特异性磁共振对比剂及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102091336A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104525092A (zh) * | 2014-12-17 | 2015-04-22 | 华中科技大学 | 一种超顺磁性纳米颗粒的制备方法及其产品 |
| CN111643684A (zh) * | 2020-04-13 | 2020-09-11 | 中国科学院地质与地球物理研究所 | 一种具有肿瘤靶向性的钆基磁共振成像造影剂及制备方法 |
-
2009
- 2009-12-10 CN CN2009102731759A patent/CN102091336A/zh active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104525092A (zh) * | 2014-12-17 | 2015-04-22 | 华中科技大学 | 一种超顺磁性纳米颗粒的制备方法及其产品 |
| CN111643684A (zh) * | 2020-04-13 | 2020-09-11 | 中国科学院地质与地球物理研究所 | 一种具有肿瘤靶向性的钆基磁共振成像造影剂及制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Caspani et al. | Magnetic nanomaterials as contrast agents for MRI | |
| Efremova et al. | Magnetite-Gold nanohybrids as ideal all-in-one platforms for theranostics | |
| Arbab et al. | Cellular magnetic resonance imaging: current status and future prospects | |
| Rümenapp et al. | Magnetic nanoparticles in magnetic resonance imaging and diagnostics | |
| Shapiro et al. | In vivo detection of single cells by MRI | |
| Daldrup-Link et al. | Migration of iron oxide–labeled human hematopoietic progenitor cells in a mouse model: in vivo monitoring with 1.5-T MR imaging equipment | |
| Huang et al. | Improving the magnetic resonance imaging contrast and detection methods with engineered magnetic nanoparticles | |
| Bai et al. | Triple-modal imaging of magnetically-targeted nanocapsules in solid tumours in vivo | |
| Xiao et al. | High molecular weight chitosan derivative polymeric micelles encapsulating superparamagnetic iron oxide for tumor-targeted magnetic resonance imaging | |
| Ni et al. | Integrating anatomic and functional dual-mode magnetic resonance imaging: design and applicability of a bifunctional contrast agent | |
| Chen et al. | A new nano-sized iron oxide particle with high sensitivity for cellular magnetic resonance imaging | |
| CN103143041B (zh) | 基于叶酸修饰的四氧化三铁纳米颗粒的靶向mri造影剂的制备方法 | |
| Chen et al. | Dynamic contrast-enhanced folate-receptor-targeted MR imaging using a Gd-loaded PEG-dendrimer–folate conjugate in a mouse xenograft tumor model | |
| CN102366632A (zh) | 顺磁性金属配合物功能化的荧光金纳米簇磁共振和荧光成像造影剂 | |
| CN104436220B (zh) | 一种壳聚糖磁性纳米微球的制备方法及其用途 | |
| Song et al. | Rat model of metastatic breast cancer monitored by MRI at 3 tesla and bioluminescence imaging with histological correlation | |
| Li et al. | Bombesin-functionalized superparamagnetic iron oxide nanoparticles for dual-modality MR/NIRFI in mouse models of breast cancer | |
| CN104274842B (zh) | 一种聚乙烯亚胺介导的多功能四氧化三锰纳米颗粒核磁共振造影剂的制备方法 | |
| Tseng et al. | A noninvasive method to determine the fate of Fe3O4 nanoparticles following intravenous injection using scanning SQUID biosusceptometry | |
| Lee et al. | Silica nanoparticle-based dual imaging colloidal hybrids: cancer cell imaging and biodistribution | |
| Song et al. | A multifunctional nanoprobe based on europium (iii) complex–Fe 3 O 4 nanoparticles for bimodal time-gated luminescence/magnetic resonance imaging of cancer cells in vitro and in vivo | |
| Mehravi et al. | Cellular uptake and imaging studies of glycosylated silica nanoprobe (GSN) in human colon adenocarcinoma (HT 29 cell line) | |
| Jiang et al. | Noninvasively characterizing the different αvβ3 expression patterns in lung cancers with RGD-USPIO using a clinical 3.0 T MR scanner | |
| Qi et al. | Transferrin-targeted magnetic/fluorescence micelles as a specific bi-functional nanoprobe for imaging liver tumor | |
| CN113797361A (zh) | 一种主动靶向型pet/mr双模态影像纳米探针及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20110615 |