CN101991862B - 环糊精-聚乙烯亚胺介导的超分子运载系统及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一类非病毒基因转染的载体，具体是涉及一类环糊精-聚乙烯亚胺材料介导的超分子运载系统，本发明目的是提供一类新型的非病毒基因治疗和药物协同治疗的超分子运载系统，以聚乙烯亚胺-环糊精为骨架，以金刚烷-阿霉素为核心，利用自组装原理将聚乙烯亚胺-环糊与金刚烷-阿霉素进行组合，形成超分子运载系统，其优点在于自组装后的复合物能降低阿霉素的毒副作用同时提高阿霉素的生物利用度并能与聚乙烯亚胺-环糊精携带的基因进行协同作用。
Description
技术领域
本发明涉及一类非病毒基因转染的载体，具体是涉及一类环糊精-聚乙烯亚胺材料介导的超分子运载系统。
背景技术
肿瘤是严重威胁人类健康的常见病、多发病，攻克肿瘤一直是世界瞩目的研究热点。1967年Tan等[1]首次报道了阿霉素具有很强的抗肿瘤活性，可以用于治疗白血病和淋巴癌，随后的研究表明，阿霉素作为化疗药物可以很好地抑制肿瘤，是优秀的化疗药物[2-5]。但是，随即发现阿霉素对人体毒副作用大，在治疗的同时也会给患者带来心脏毒性、脱发等副作用，严重影响患者的生活质量[1]。但是阿霉素除杀死癌细胞之外，对正常细胞也有较大毒副作用，此外还有代谢快、半衰期短等缺点[6]。因此，如何提高抗肿瘤药物的生物利用度，降低抗肿瘤药物对正常细胞的毒性，实现小分子药物与基因药物的协同治疗等是当前亟待解决的热点问题[7-10]。
基因药物治疗是近二十年来兴起的新型治疗方法，其基本策略是将外源基因通过各类载体导入目的细胞并得到有效表达，从而达到治疗疾病的目的。目前普遍应用的病毒载体介导系统，虽然其有很高的基因转染效率，但高的细胞毒性、较低的靶向性、DNA携带能力的限制性、生产包装及高价格等问题限制了病毒载体的应用范围，尤其是1999年，美国基因治疗临床实验因使用腺病毒载体导致“Jesse Gelsinger”死亡事件，使研究者在病毒类载体的临床使用上更为谨慎。相反，非病毒性转基因载体具有免疫反应低，安全性能高，易于人工合成等特点，在基因药物的研究中日益受到重视。随着人类基因组框架图的解析成功，更多的基因药物从实验室研究所阶段进入临床实用阶段。
β-环糊精与低分子量聚乙烯亚胺600偶合后形成聚乙烯亚胺-环糊精复合物(PEI-CyD)[11]。聚乙烯亚胺-环糊精是一种理想的药物载体，也是一种优秀的非病毒型载体，具有出色的载药性能和转染效率。基于聚乙烯亚胺-环糊精的载体材料的基因载体和药物载体具有广泛的研究前景。聚乙烯亚胺-环糊精具有良好的水溶性和生物降解性，可以运载药物进入细胞，释放出游离药物抑制肿瘤细胞生长；聚乙烯亚胺具有质子海绵效应[12]，在较宽的pH区间内具有强大的缓冲能力，聚乙烯亚胺-环糊精与DNA聚合后可以通过胞吞作用进入细胞，并且保护DNA不被溶酶体内的酶类水解，大大提高转染效率。Huang等[13]报道了靶向HER2受体的聚乙烯亚胺-环糊精携带阿霉素药物与干扰素基因协同作用于肿瘤细胞的研究。
基于环糊精的超分子体系被广泛运用于各个领域。金刚烷基与环糊精内腔均为疏水性结构，在水溶液(如磷酸盐缓冲溶液)中，客体金刚烷基会插入主体环糊精的内腔，自组装形成金刚烷/环糊精超分子结构。这种超分子结构在生产、研究、检测等方面有多种实际用途。Holzinger等[14]报道了这一超分子结构用于生物传感器的研究，Pt电极上的碳纳米管外连有金刚烷基，葡萄糖氧化酶与β-环糊精通过共价键连接，在水溶液中金刚烷基和β-环糊精内腔通过疏水作用连接起来形成超分子结构，用于检测葡萄糖分子，结果发现检测灵敏度大大提高。Wang等[15]报道了这一超分子结构用于合成具有复杂结构化合物的研究，将树枝状聚合物PAMAM和聚乙二醇分子上分别连接金刚烷，与聚乙烯亚胺-环糊精自组装形成纳米微球，利用其中的超分子结构通过加入不同配比的反应物可以得到粒径不同的纳米微粒。
基于以上背景技术，研制成一种利用聚乙烯亚胺-环糊精介导的金刚烷-阿霉素为核心的自组装超分子运载系统，在降低阿霉素毒副作用的同时提高阿霉素的生物利用度，并能与聚乙烯亚胺-环糊精携带的基因协同作用用于肿瘤的治疗。
参考文献如下：
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[14]Holzinger，M.，et al.，Adamantane/beta-cyclodextrin affinity biosensors based on single-walled carbon nanotubes.Biosensors&Bioelectronics，2009.24(5)：1128-1134.
[15]Wang，H.，et al.，A supramolecular approach for preparation of size-controlled nanoparticles.Angewandte Chemie-International Edition，2009.48(24)：4344-4348.
发明内容
本发明目的是提供一类新型的非病毒基因治疗和药物协同治疗的超分子运载系统。本发明以聚乙烯亚胺-环糊精为骨架，以金刚烷-阿霉素为核心，利用自组装原理将聚乙烯亚胺-环糊与金刚烷-阿霉素进行组合，形成超分子运载系统。其优点在于自组装后的复合物能降低阿霉素的毒副作用同时提高阿霉素的生物利用度并能与聚乙烯亚胺-环糊精携带的基因进行协同作用。
具体的技术方案如下：
一种环糊精-聚乙烯亚胺介导的超分子运载系统，其特征是聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素复合物，结构式如下：
本发明提供的超分子的制备方法，总的发明构思是：由环糊精与聚乙烯亚胺反应得到环糊精-聚乙烯亚胺，由金刚烷甲酸与阿霉素反应得到金刚烷-阿霉素，再将二者混合，经自组装反应得到超分子运载系统聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素复合物。反应式如下：
反应式中，m1为聚乙烯亚胺中伯氨基单元的数量，m2为仲氨基单元的数量，m1和m2的数值与聚乙烯亚胺的分子量有关，n为聚乙烯亚胺-环糊精单元个数，n大小与聚乙烯亚胺-环糊精的分子量有关。
反应式中结构(1)是β-环糊精(简称β-CyD)，(2)是连接剂N，N’-二羰基咪唑(简称CDI)，(3)是聚乙烯亚胺(简称PEI)，(4)是复合物聚乙烯亚胺-环糊精(简称PEI-CyD)，(5)是阿霉素(简称DOX)，(6)是金刚烷甲酸(简称Ada)，(7)是复合物金刚烷甲酸-阿霉素(简称Ada-Dox)，(8)是复合物聚乙烯亚胺-环糊精的立体结构示意，(9)是目标产物聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素。
本发明提供的超分子材料制备方法，包括如下步骤：
1)聚乙烯亚胺-环糊精的合成：将环糊精溶解于重量体积比10-50倍量的二甲基亚砜中，加入活化羟基的连接剂，用量为环糊精重量比2-5倍量，将连接剂溶解于重量体积比1-5倍量的二甲基亚砜中，在氮气保护下于暗处将连接剂加入环糊精溶液中，加入催化剂三乙胺，搅拌反应2-4小时，将用量为经过活化环糊精重量比3-15倍量的聚乙烯亚胺溶解于重量体积比2-5倍量的二甲基亚砜中，在氮气保护下于暗处，将聚乙烯亚胺溶液滴加在环糊精溶液中，在1-2小时加完，加入催化剂三乙胺，滴加完毕后在室温下继续反应1～2小时，反应完毕后的溶液在透析袋中48小时，然后冰冻干燥，得到白色粉末状物质，即环糊精-聚乙烯亚胺载体材料；
2)金刚烷-阿霉素的合成：将金刚烷甲酸溶解于重量体积比5～20倍量的二甲基亚砜中，加入活化羧基的连接剂，用量为金刚烷甲酸重量比0.5～5倍量，将连接剂溶解于重量体积比5～20倍量的二甲基亚砜中，在氮气保护下于暗处将连接剂加入金刚烷甲酸溶液中，加入催化剂三乙胺，搅拌反应2～5小时，将用量为经过活化金刚烷甲酸重量比2～5倍量的阿霉素溶解于重量体积比3～15倍量的二甲基亚砜中，将阿霉素的二甲基亚砜溶液于暗处氮气保护下缓慢滴加入活化的金刚烷甲酸溶液中，滴加过程于0.5～1.5小时内完成，再加入催化剂三乙胺，滴加完成后反应16～24小时；
3)聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素的合成：加入重量体积比5～20倍量的水于上述完成反应的金刚烷-阿霉素溶液，将重量比5～15倍量的聚乙烯亚胺-环糊精溶解于重量体积比20～50倍量水中，然后于暗处氮气保护下滴加入金刚烷-阿霉素的溶液中，搅拌反应8～15小时，将反应产物装入8000-14000的透析袋用流水透析18～24小时，然后冷冻干燥得到最终产物：聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素。
本发明所述的环糊精为β-环糊精或α-环糊精或γ-环糊精。
本发明所述的连接剂为N，N’-羰基二咪唑、苯并三唑碳酸酯、氯甲酸酯、羰基咪唑、N，N’-二琥珀酰亚胺基硫酸酯、N-羟基琥珀酰亚胺氯甲酸酯中任一种。
本发明所述的聚乙烯亚胺分子量为432Da(直链型)、600Da、1200Da、2000Da、25kDa的聚乙烯亚胺中任一种。
本发明所述的催化剂为三乙胺，用量与小分子量聚乙烯亚胺重量体积比为0.01-0.05倍量。
本发明的技术效果如下：
本发明采用的聚乙烯亚胺-环糊精材料由于可生物降解性，低毒性等特点，作为非病毒性基因载体材料而被广泛地研究。具有很强的改造性，从而增加新的功能。
本发明采用的聚乙烯亚胺PEI，具有3种不同的氨基形式，形成了不同的缓冲体系，氨基的存在基本作用是结合DNA，扩展的功能是在携带DNA进入细胞时不同的氨基组合成不同的缓冲对，能保护DNA免遭细胞质中的溶酶体降解。
本发明中环糊精经活化与聚乙烯亚胺连接，保留了聚乙烯亚胺的功能。
本发明中阿霉素与金刚烷连接后再与环糊精-聚乙烯亚胺自组装成超分子复合物，降低了阿霉素的毒副作用，提高了阿霉素的生物利用度。
本发明中阿霉素与金刚烷连接后再与环糊精-聚乙烯亚胺自组装成超分子复合物，因为保留了聚乙烯亚胺的功能，因此能携带基因进入细胞，与阿霉素产生协同作用。
附图说明
图1是阿霉素、1-金刚烷甲酸、β-环糊精-聚乙烯亚胺、β-环糊精-聚乙烯亚胺/金刚烷阿霉素核磁共振氢谱图；
图2是聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素二维核欧沃豪斯效应谱(NOESY)；
图3是聚乙烯亚胺-环糊精1、阿霉素2、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素3紫外吸收图谱；
图4是阿霉素4、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷5、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素6X射线衍射图谱；
图5是聚乙烯亚胺-环糊精7、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素8粒径分布图；
图6是聚乙烯亚胺-环糊精9、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素10表面电荷分布图；
图7是聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素在不同pH条件下释放阿霉素；
图8是阿霉素、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素在小鼠黑色素瘤细胞上的毒性效应图谱；
图9是阿霉素、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素在绿猴肾上皮细胞上的毒性效应图谱；
图10是乙烯亚胺-环糊精a、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素b、聚乙烯亚胺(25000道尔顿)c携带绿色荧光蛋白质粒在小鼠黑色素瘤细胞内的转染照片；
图11是聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素携带绿色荧光蛋白进入小鼠黑色素瘤细胞的激光共聚焦照片；
图12是阿霉素、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素在小鼠体内代谢活体照片。
图中：1是图3中聚乙烯亚胺-环糊精曲线，2是图3中阿霉素曲线，3是图3中聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素曲线，4是图4中阿霉素曲线，5是图4中聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷曲线，6是图4中聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素曲线，7是图5中聚乙烯亚胺-环糊精曲线，8是图5中聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素曲线，9是图6中聚乙烯亚胺-环糊精曲线，10是图6中聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素曲线。
具体实施方式
以下结合实施例及附图对本发明进行详细的描述，但不限于实施例所公开的内容。
实施例1：以β-环糊精为例。
1)聚乙烯亚胺-环糊精聚合物的制备
●称取5克β-环糊精溶解于50毫升二甲基亚砜中，称取10克N，N’-羰基二咪唑溶解于20毫升二甲基亚砜中，在氮气保护下于暗处将N，N’-羰基二咪唑溶液与环糊精溶液混合，加入三乙胺300微升，搅拌反应2小时，称取15克分子量为600的聚乙烯亚胺(PEI600)，溶解于30毫升二甲基亚砜中，氮气保护下于暗处将该溶液慢慢滴加到活化的环糊精溶液中，在2小时之内滴加完毕，滴加完毕后，再反应3小时。反应完毕后的溶液于8000-14000的透析袋中透析48小时，然后冰冻干燥，得到白色粉末状物质，即环糊精-聚乙烯亚胺聚合物。
2)金刚烷-阿霉素复合物的合成
●称取1克的金刚烷甲酸，溶解于10毫升的二甲基亚砜中，称取2克N，N’-羰基二咪唑溶解于5毫升二甲基亚砜中，于暗处氮气保护下将二溶液混合，加入三乙胺300微升，搅拌反应3小时。称取3克阿霉素溶解于15毫升二甲基亚砜中，于暗处氮气保护下滴加入活化的金刚烷甲酸溶液中，于1小时内加完，加完后反应18小时。得到金刚烷/阿霉素。复合物。
3)聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素的复合组装
●取步骤2中得到的金刚烷-阿霉素溶液10毫升，加入50毫升水，称取3克聚乙烯亚胺-环糊精溶解于60毫升水中，然后于暗处氮气保护下滴加入金刚烷-阿霉素水溶液中，2小时内滴加完毕，滴加完毕后反应10小时，然后将反应产物于8000-14000的透析袋中透析20小时，冷冻干燥得到最终产物：聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素复合物。
图1-图9为实施例1的相应附图，具体阐明如下：
图1是阿霉素、1-金刚烷甲酸、环糊精-聚乙烯亚胺、环糊精-聚乙烯亚胺/金刚烷阿霉素核磁共振氢谱图，图中阿霉素、金刚烷甲酸、环糊精-聚乙烯亚胺各非活性氢原子位移如图中所示，最终产物环糊精-聚乙烯亚胺/阿霉素-金刚烷的核磁共振氢谱表明四者为一个整体，该图充分证明了说明书中的制备方法的可行性。
图2是聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素二维核欧沃豪斯效应图谱(NOESY)，图中横坐标位移1.0-2.0之间的吸收峰为金刚烷的亚甲基氢，纵坐标位移3.0-4.0之间的吸收峰为环糊精的亚甲基氢，二者之间有远程的相关，表明金刚烷分子是嵌入了环糊精的环中，该图进一步证实了制备方法的可行性。
图3是聚乙烯亚胺-环糊精1、阿霉素2、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素3紫外吸收图谱，环糊精-聚乙烯亚胺本身没有紫外吸收，阿霉素的最大吸收波长在480.1纳米，本发明得到的最终产物环糊精-聚乙烯亚胺/金刚烷-阿霉素的最大吸收波长在508.9纳米，最终产物具有紫外吸收是由于阿霉素连接在分子中而产生，但是最大吸收波长出现了红移表明最终产物是不同于阿霉素的新产物。该图也证实了说明书中所述的制备方法的可行性。
图4是阿霉素4、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷5、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素6射线衍射图，阿霉素的X射线衍射图表明该化合物具有一定晶型的化合物，环糊精-聚乙烯亚胺的X射线衍射图表明该化合物为无定型化合物，经过如说明书制备方法的制备得到的最终产物也是一个无定型的化合物，该图证实了说明书所述制备方法的可行性。
图5是聚乙烯亚胺-环糊精7、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素8粒径分布图，该图说明最终产物聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素的微粒是以纳米颗粒存在的，该图证明了说明书中所述超分子系统的可行性。
图6是聚乙烯亚胺-环糊精9、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素10面电荷分布图，该图说明聚乙烯亚胺-环糊精与最终产物聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素的表面电荷相当，该图证明了最终产物结合DNA的可行性，进而能实现说明书所述的进行基因协同治疗的可行性。
图7是聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素在不同pH条件下释放阿霉素，该图表明最终产物在生理条件的pH下能缓慢释放，证实说明书所述的降低毒副作用，提高生物利用度的可行性。
图8是阿霉素、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素在小鼠黑色素瘤细胞上的毒性效应，图9是阿霉素、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素在绿猴肾上皮细胞上的毒性效应，表示了阿霉素、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素在不同细胞上的毒性效应，最终产物聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素的毒性如说明书所述下降。
图10是聚乙烯亚胺-环糊精a、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素b、聚乙烯亚胺(25000道尔顿)c携带绿色荧光蛋白质粒在小鼠黑色素瘤细胞内的转染照片，图中可以证明最终产物聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素能携带报告基因进入细胞并进行相关表达(转染)，转染效率与聚乙烯亚胺-环糊精相当，该图证明了说明书中所述的药物与基因协同治疗的可行性。
图11是聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素携带绿色荧光蛋白进入小鼠黑色素瘤细胞的激光共聚焦照片，e表示复合物中的阿霉素在细胞内被释放(阿霉素显红色)f表示携带的绿色荧光蛋白质粒转染生成的绿色荧光蛋白g是被染成蓝色的细胞核(e，f，g是相同时间和相同位置在不同激发光波长下拍摄的照片，h为e、f、g的叠加照片)，该图证明了最终产物进入细胞后释放药物阿霉素的同时也能保证携带的基因顺利的表达，证实了说明书中所述的药物与基因协同作用的可行性。
图12是阿霉素、聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素在小鼠体内代谢活体照片，该图片是在荷瘤小鼠肿瘤内注射阿霉素和聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素在注射后不同时间段拍摄的活体荧光照片，图中所示阿霉素在8小时内基本代谢完毕(红色消失)，而聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素在注射后24小时内依然在释放阿霉素(一直存在红色荧光)，该图以体内实验的角度证实了说明书中所述的提高阿霉素的生物利用度的可行性。
实施例2：以α-环糊精为例
1)聚乙烯亚胺-环糊精聚合物的制备：
●称取10克α-环糊精溶解于60毫升二甲基亚砜中，称取20克N，N’-羰基二咪唑溶解于30毫升二甲基亚砜中，在氮气保护下于暗处将N，N’-羰基二咪唑溶液与环糊精溶液混合，加入三乙胺300微升，搅拌反应2小时，称取10克分子量为1200的聚乙烯亚胺(PEI1200)，溶解于20毫升二甲基亚砜中，氮气保护下于暗处将该溶液慢慢滴加到活化的环糊精溶液中，在2小时之内滴加完毕，滴加完毕后，再反应3小时。反应完毕后的溶液于8000-14000的透析袋中透析48小时，然后冰冻干燥，得到白色粉末状物质，即环糊精-聚乙烯亚胺聚合物。
2)金刚烷-阿霉素复合物的合成
●称取2克的金刚烷甲酸，溶解于15毫升的二甲基亚砜中，称取3克N，N’-羰基二咪唑溶解于6毫升二甲基亚砜中，于暗处氮气保护下将二溶液混合，加入三乙胺300微升，搅拌反应3小时。称取2克阿霉素溶解于10毫升二甲基亚砜中，于暗处氮气保护下滴加入活化的金刚烷甲酸溶液中，于1小时内加完，加完后反应18小时。得到金刚烷/阿霉素。复合物。
3)聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素的复合组装
●取步骤2中得到的金刚烷-阿霉素溶液20毫升，加入80毫升水，称取5克聚乙烯亚胺-环糊精溶解于80毫升水中，然后于暗处氮气保护下滴加入金刚烷-阿霉素水溶液中，2小时内滴加完毕，滴加完毕后反应10小时，然后将反应产物于8000-14000的透析袋中透析20小时，冷冻干燥得到最终产物：聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素复合物。
Claims (6)
1.一种聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素复合物，其特征是结构式如下：
2.根据权利要求1所述的聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素复合物的制备方法，其特征在于，由环糊精与聚乙烯亚胺反应得到环糊精-聚乙烯亚胺，由金刚烷甲酸与阿霉素反应得到金刚烷-阿霉素，再将二者混合，经自组装反应得到超分子运载系统聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素复合物，反应式如下：
反应式中，结构(1)是环糊精，(2)是连接剂N，N’-二羰基咪唑，(3)是聚乙烯亚胺，(4)是复合物聚乙烯亚胺-环糊精，(5)是阿霉素，(6)是金刚烷甲酸，(7)是复合物金刚烷甲酸-阿霉素，(8)是复合物聚乙烯亚胺-环糊精的立体结构示意，(9)是目标产物聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素；m1为聚乙烯亚胺中伯氨基单元的数量，m2为仲氨基单元的数量，m1和m2的数值与聚乙烯亚胺的分子量有关，n为聚乙烯亚胺-环糊精单元个数，n大小与聚乙烯亚胺-环糊精的分子量有关。
3.根据权利要求2所述的聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素复合物的制备方法，其特征在于，所述的反应步骤如下：
1)聚乙烯亚胺-环糊精的合成：将环糊精溶解于重量体积比10-50倍量的二甲基亚砜中，加入活化羟基的连接剂，用量为环糊精重量比2-5倍量，将连接剂溶解于重量体积比1-5倍量的二甲基亚砜中，在氮气保护下于暗处将连接剂加入环糊精溶液中，加入催化剂三乙胺，搅拌反应2-4小时，将用量为经过活化环糊精重量比3-15倍量的聚乙烯亚胺溶解于重量体积比2-5倍量的二甲基亚砜中，在氮气保护下于暗处，将聚乙烯亚胺溶液滴加在环糊精溶液中，在1-2小时加完，加入催化剂三乙胺，滴加完毕后在室温下继续反应1～2小时，反应完毕后的溶液在透析袋中48小时，然后冰冻干燥，得到白色粉末状物质，即环糊精-聚乙烯亚胺载体材料；
2)金刚烷-阿霉素的合成：将金刚烷甲酸溶解于重量体积比5～20倍量的二甲基亚砜中，加入活化羧基的连接剂，用量为金刚烷甲酸重量比0.5～5倍量，将连接剂溶解于重量体积比5～20倍量的二甲基亚砜中，在氮气保护下于暗处将连接剂加入金刚烷甲酸溶液中，加入催化剂三乙胺，搅拌反应2～5小时，将用量为经过活化金刚烷甲酸重量比2～5倍量的阿霉素溶解于重量体积比3～15倍量的二甲基亚砜中，将阿霉素的二甲基亚砜溶液于暗处氮气保护下缓慢滴加入活化的金刚烷甲酸溶液中，滴加过程于0.5～1.5小时内完成，再加入催化剂三乙胺，滴加完成后反应16～24小时；
3)聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素的合成：加入重量体积比5～20倍量的水于上述完成反应的金刚烷-阿霉素溶液，将重量比5～15倍量的聚乙烯亚胺-环糊精溶解于重量体积比20～50倍量水中，然后于暗处氮气保护下滴加入金刚烷-阿霉素的溶液中，搅拌反应8～15小时，将反应产物装入8000-14000分子量的透析袋用流水透析18～24小时，然后冷冻干燥得到最终产物：聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素。
4.根据权利要求2或3所述的聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素复合物的制备方法，其特征在于，所述的环糊精为β-环糊精。
5.根据权利要求2或3所述的聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素复合物的制备方法，其特征在于，所述的环糊精为α-环糊精或γ-环糊精。
6.根据权利要求2或3所述的聚乙烯亚胺-环糊精/金刚烷-阿霉素复合物的制备方法，其特征在于，所述的聚乙烯亚胺分子量为600Da、1200Da、2000Da、25kDa的聚乙烯亚胺中任一种。
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