CN101987096B

CN101987096B - 黑素产生抑制剂及美白剂

Info

Publication number: CN101987096B
Application number: CN2010102336038A
Authority: CN
Inventors: 川越大; 山田昌良
Original assignee: Fancl Corp
Current assignee: Fancl Corp
Priority date: 2009-07-30
Filing date: 2010-07-20
Publication date: 2013-07-10
Anticipated expiration: 2030-07-20
Also published as: CN101987096A; KR20110013238A

Abstract

本发明提供黑素产生抑制剂以及美白剂。具体为，其为含有化学式(1)的化合物的黑素产生抑制剂及美白剂。

Description

黑素产生抑制剂及美白剂

技术领域

本发明涉及黑素产生抑制剂及美白剂。

背景技术

由于大气污染、臭氧层的破坏，到达表皮的紫外线量具有逐年增加的趋势，随之而来的因紫外线所造成的肌肤的褐斑、雀斑、肤色变黑等肌肤烦恼也在增大。由于紫外线，皮肤内存在的酪氨酸因酪氨酸酶的作用氧化而产生黑素色素，过度产生时，即会形成褐斑、雀斑、肤色变黑等的肌肤烦恼。作为抑制该黑素色素产生，预防褐斑、雀斑、肤色变黑的方法，以往就提出了配合了熊果苷的皮肤外用剂(专利文献1：日本特开昭60-16906号公报)、配合了L-抗坏血酸及作为其衍生物的L-抗坏血酸的葡萄糖糖苷的皮肤化妆料(专利文献2：日本特开平4-182412号公报)。配合了熊果苷的皮肤外用剂、配合了L-抗坏血酸及作为其衍生物的L-抗坏血酸的葡萄糖糖苷的美白剂的美白效果不充分，或者将体现美白效果的成分以可看出美白效果的浓度配合时会产生安全性方面的问题。

此外，化学式(1)的化合物作为具有抗病毒性的成分而已知，但不知有无抑制黑素产生的效果(专利文献3：日本特开平8-311056号公报)。

化学式(1)

先行技术文献

专利文献

【专利文献1】日本特开昭60-016906号公报

【专利文献2】日本特开平04-182412号公报

【专利文献3】日本特开平08-311056号公报

发明内容

本发明以提供有效的黑素产生抑制剂及美白剂为课题。

(完成本发明的过程)

为探求化妆料等中直接适用于人体的具有黑素产生抑制功能的化合物，将期待具有黑素产生抑制功能的多个化合物通过测定黑素抑制功能的装置进行筛选，选择黑素抑制功能强的化合物。而且为确认直接适用于人体的安全性，进行安全性确认试验，探求黑素抑制功能和安全性均高的化合物。

其结果，从多个化合物中特定了黑素产生抑制功能比公知化合物强、且具备优异安全性的化合物。

(本发明的主要构成)

该特定化合物为以下化学式(1)的化合物，本发明为含有该化合物的黑素产生抑制剂及美白剂。

化学式(1)

本发明通过形成含有如上化学式(1)的化合物的黑素产生抑制剂及美白剂，可起到如下效果，与添加了以往的黑素产生抑制剂的美白剂等相比抑制黑素产生的作用强，在抑制褐斑、雀斑、肤色变黑发生的同时安全性优异。

附图说明

图1为本发明的化学式(1)和阳性对照及比较试样的化合物的抑制黑素产生的IC50值和细胞毒性的IC50值的比较图。

图2为本发明的化学式(1)和阳性对照及比较试样的化合物的安全系数比较图。

图3为培养第5天黑素沉着部的底面图像的比较图。

图4为培养第5天底面三聚氰胺覆盖面积的比较图。

具体实施方式

以下更详细地说明本发明的实施方式。

本发明中使用的以下化学式(1)的化合物为2，2’，3，3’-四氢-5，5’，7，7’-四羟基-2，2’-双(4-羟基苯基)-3，3’-双[4H-1-苯并]-4，4’-二酮(2，2’，3，3’Tetrahydro-5，5’，7，7’-tetrahydroxy-2，2’-bis(4-hydroxyphenyl)-3，3’-bi[4H-1-benzopyran]-4，4’-dione)，组成式为C₃₀H₂₂O₁₀。

化学式(1)

化学式(1)的化合物是2分子的二氢黄酮在苯并二氢吡喃-4-酮环的3位的位置相互结合的化合物。苯并二氢吡喃-4-酮环的2位和3位是不对称碳，可以是任意的立体异构体，还可以是立体异构体的混合物。

化学式(1)的化合物可使用市售品，例如可从AnalytiCon公司购入。

此外，已知化学式(1)的化合物在作为医药品的中药生药狼毒中含有(专利文献3)。

本发明的黑素产生抑制剂在用于体现美白作用的使用中，可与各种美白剂用的基质、添加剂等混合而作为本发明的美白剂。

本发明的美白剂可用作各种公知形态及用途，例如美白用乳化化妆料、美白用膏霜剂、美白用化妆水、美白用油性化妆料、美白用面膜剂、美白用粉底等。而且本发明的美白剂包括美白用皮肤外用医药、美白用医药部外品、美白用化妆料。此外，本发明的美白剂还可以作为美白用口服剂、注射剂、经口医药。

含有本发明的化学式(1)的化合物的黑素产生抑制剂及美白剂可根据通常使用的制剂化方法制造。

本发明的黑素产生抑制剂及美白剂中，可含有如植物油的油脂类、高级脂肪酸、高级醇、硅酮、阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂、非离子表面活性剂、防腐剂、糖类、金属离子封锁剂；如水溶性高分子的高分子、增稠剂、粉体成分、紫外线吸收剂、紫外线屏蔽剂；如透明质酸的保湿剂、香料、pH调节剂等。还可含有维生素类、皮肤赋活剂、血流促进剂、常驻菌控制剂、活性氧清除剂、抗炎症剂、其他美白剂、杀菌剂等的其他药效成分、生理活性成分。

作为油脂类，例如可例举山茶油、月见草油、澳洲胡桃油、橄榄油、菜籽油、玉米油、芝麻油、荷荷巴油、胚芽油、小麦胚芽油、三甘油、三辛酸甘油酯等的液体油脂，可可脂、椰子油、氢化椰子油、棕榈油、棕榈核油、木蜡、木蜡核油、氢化油、氢化蓖麻油等的固体油脂，蜂蜡、小烛树蜡、棉蜡、糠蜡、羊毛脂、醋酸羊毛脂、液状羊毛脂、蔗蜡等的蜡类，液体石蜡、角鲨烯、角鲨烷、微晶蜡等。

作为高级脂肪酸，例如可例举月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA) 等。

作为高级醇，例如可例举月桂醇、硬脂醇、十六烷醇、十八十六醇等的直链醇，十八烷基甘油醚、羊毛醇、胆固醇、植物甾醇、辛基十二烷醇等的支链醇等。

作为硅酮，例如可例举链状聚硅氧烷的二甲基聚硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷等，环状聚硅氧烷的十甲基聚硅氧烷等。

作为阴离子表面活性剂，例如可例举月桂酸钠等的脂肪酸盐、月桂基硫酸钠等的高级烷基硫酸酯盐、POE月桂基硫酸三乙醇胺等的烷基醚硫酸酯盐、N-酰基肌氨酸、磺基琥珀酸盐、N-酰基氨基酸盐等。

作为阳离子表面活性剂，例如可例举十八烷基三甲基氯化铵等的烷基三甲基铵盐、氯化苯甲烃铵、苄索氯铵等。

作为两性表面活性剂，例如可例举烷基甜菜碱、酰胺甜菜碱等的甜菜碱系表面活性剂等。

作为非离子表面活性剂，例如可例举失水山梨醇单油酸酯等的失水山梨醇脂肪酸酯类、氢化蓖麻油衍生物等。

作为防腐剂，例如可例举对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯等。

作为金属离子封锁剂，例如可例举乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸钠盐等的乙二胺四乙酸盐等。

作为高分子，例如可例举阿拉伯胶、西黄蓍胶、半乳聚糖、瓜尔豆胶、卡拉胶、果胶、琼脂、榅桲子、葡聚糖、普鲁兰多糖、羧甲基淀粉、胶原蛋白、酪蛋白、明胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠(CMC)、海藻酸钠、聚羧乙烯(Carboxyvinylpolymer)(CARBOPOL等)等的乙烯类高分子、膨润土等。

作为增稠剂，例如可例举卡拉胶、西黄蓍胶、榅桲子、酪蛋白、糊精、明胶、羧甲基纤维素钠(CMC)、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、聚羧乙烯、瓜尔豆胶、黄原胶等。

作为粉末成分，例如可例举滑石粉、高岭土、云母、二氧化硅、沸石、聚乙烯粉末、聚苯乙烯粉末、纤维素粉末、无机白色颜料、无机红色系颜料、云母钛珠光颜料、氧化钛包覆的滑石粉、着色型云母钛珠光颜料等的珠光颜料、红色201号、红色202号等的有机颜料等。

作为紫外线吸收剂，例如可例举对氨基苯甲酸、水杨酸苯酯、对甲氧基肉桂酸异丙酯、对甲氧基肉桂酸辛酯、2，4-二羟基二苯甲酮等。

作为紫外线屏蔽剂，例如可例举氧化钛、滑石粉、胭脂红、膨润土、高岭土、氧化锌等。

作为保湿剂，例如可例举聚乙二醇、丙二醇、二丙二醇、1，3-丁二醇、甘油、双甘油、聚甘油、木糖醇、麦芽糖醇、麦芽糖、山梨糖醇、葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、硫酸软骨素钠、透明质酸钠、乳酸钠、吡咯烷酮羧酸、环糊精等。

作为药效成分，例如可例举维生素A油、视黄醇等的维生素A类，核黄素等的维生素B₂类、吡哆醇盐酸盐等的B₆类，L-抗坏血酸、L-抗坏血酸磷酸酯、L-抗坏血酸单棕榈酸酯、L-抗坏血酸二棕榈酸酯、L-抗坏血酸-2-葡萄糖苷等的维生素C类，泛酸钙等的泛酸类，维生素D₂、维生素D₃等的维生素D类；α-维生素E、醋酸维生素E、DL-α-维生素E烟酸酯等的维生素E类等的维生素类等。

作为其他药效成分，可例举谷胱甘肽、虎耳草提取物等的美白剂，蜂王浆、山毛榉提取物等的皮肤活化剂，辣椒素、姜酮、斑蝥素、鱼石脂、咖啡因、单宁酸、γ-谷维素等的血流促进剂，甘草酸衍生物、甘草次酸衍生物、甘菊环等的消炎剂，精氨酸、丝氨酸、亮氨酸、色氨酸等的氨基酸类，常驻菌控制剂的麦芽糖蔗糖缩合物、氯化溶菌酶等。

并且，还可例举洋甘菊提取物、荷兰芹提取物、葡萄酒酵母提取物、葡萄柚提取物、金银花提取物、米提取物、葡萄提取物、啤酒花提取物、米糠提取物、枇杷提取物、黄檗提取物、薏米仁提取物、当药提取物、草木樨提取物、桦树提取物、甘草提取物、芍药提取物、肥皂草提取物、丝瓜提取物、辣椒提取物、柠檬提取物、龙胆提取物、紫苏提取物、芦荟提取物、迷迭香提取物、鼠尾草提取物、铺地百里香提取物、茶提取物、海藻提取物、黄瓜提取物、丁香提取物、胡萝卜提取物、欧洲七叶树提取物、金缕梅提取物、桑树提取物等的各种提取物。

作为美白用口服剂，可将化学式(1)的化合物直接使用，或加入各种营养成分、或使其在饮食品中含有而作为营养补助食品、功能性食品、健康食品、特定保健用食品或通常食品的材料使用。例如可添加淀粉、乳糖、麦芽糖、植物油脂粉末、可可脂末、硬脂酸等适当的助剂。

作为美白用口服剂的化学式(1)的化合物的有效给药量，根据对象者的年龄、体重、症状、给药途径、给药方案、制剂形态、材料活性的强度等适当选择确定，例如，优选每1天1～5000mg，特别优选10～1000mg。也可将其1天分数次给药。

作为美白剂中化学式(1)的化合物的配合量优选为0.00001～80质量％，但并不一定限于此，也可以为0.0001～80质量％。

实施例

[抑制黑素产生试验]

对于化学式(1)的化合物，通过以下的试验测定抑制黑素产生活性。

以化学式(1)的化合物为检体，作为阳性对照以熊果苷为检体，作为比较试样以羟基酪醇、氢醌、曲酸、抗坏血酸2-糖苷为检体，分别使用二甲亚砜配制成10mg/ml。

抑制黑素产生活性通过以下方法求出。

将来自小鼠的B16黑色素瘤F10接种成20％铺满，添加[NLE4，D-PHE7]α-MSH(SIGMA-ALDRICH公司制)、及化学式(1)的化合物、熊果苷、羟基酪醇、氢醌、曲酸、抗坏血酸2-糖苷的各试样，使培养液中检体的浓度为1.56μM～400μM。添加各试样，培养96小时后，去除培养液，将细胞用PBS洗涤。细胞产生的黑素产生量通过比色定量法测定。将仅用[NLE4，D-PHE7]α-MSH处理时的黑素产生量作为100％，计算以各浓度添加各检体时的黑素产生量。

仅用[NLE4，D-PHE7]α-MSH处理时的定量值为A，以各浓度添加检体时的定量值为As，通过下式求出黑素产生量(％)。

黑素产生量(％)＝As/A×100

结果如表1所示。用各检体浓度下的黑素产生量的测定值求出抑制黑素产生的IC50(黑素产生量为50％时，培养液中检体的浓度)。在图1中对抑制黑素产生的IC50作图。另外，有关添加曲酸和抗坏血酸2-糖苷的体系，由于在本实验体系的浓度范围内未能抑制黑素的产生，所以，未能求出抑制黑素产生的IC50。

表1

[细胞存活率试验(MTT试验)]

通过MTT试验求出细胞存活率。将来自小鼠的B16黑色素瘤F10接种成20％铺满，添加[NLE4，D-PHE7]α-MSH(SIGMA-ALDRICH公司制)、及化学式(1)的化合物、熊果苷、羟基酪醇、氢醌、曲酸、抗坏血酸2-糖苷的各试样，使培养液中检体的浓度为1.56μM～400μM。培养96 小时后，根据MTT试验法的通常的实验方法处理细胞，测定细胞存活率。将仅用[NLE4，D-PHE7]α-MSH处理时的细胞存活率作为100％，计算以各浓度添加各检体时的细胞存活率。仅用[NLE4，D-PHE7]α-MSH处理时的定量值为B，以各浓度添加检体时的定量值为Bs，通过下式求出细胞存活率(％)。

细胞存活率(％)＝Bs/B×100

结果如表2所示。用各检体浓度下的细胞存活率的测定值求出细胞毒性的的IC50(细胞存活率为50％时，培养液中检体的浓度)。图1中对细胞毒性的IC50作图。另外，有关添加抗坏血酸2-糖苷的体系，由于在本实验体系的浓度范围内细胞存活率未降低，所以，未能求出细胞毒性的IC50。

表2

[安全系数]

将细胞毒性的IC50除以抑制黑素产生的IC50的值作为安全系数。安全系数越大，越能在低细胞毒性下抑制黑素产生。化学式(1)化合物与熊果苷相比安全系数极高，作为美白剂很优异。安全系数如表3所示，所绘图如图2所示。另外，有关曲酸和抗坏血酸2-糖苷，因未能求出抑制黑素产生、细胞毒性的IC50，所以也未能求出安全系数。

表3

	化学式(1) 化合物	熊果苷	羟基酪醇	氢醌
					安全系数	39.4	11.8	1.3	0.8

由以上结果可知，本发明中的化学式(1)的化合物在1.5625～25μM的浓度范围内时黑素产生量为53～23％，与其他5种化合物相比为明显少的量，因而可以说能发挥抑制黑素产生的效果。此外，在50～100μM的浓度下，与熊果苷、羟基酪醇、曲酸、抗坏血酸2-糖苷相比，抑制黑素产生的效果显著。而且，化学式(1)的化合物在抑制黑素产生的IC50(μM)为1.8μM，与其他5种化合物相比明显小，所以，即使在比其他5种化合物低的浓度下，也显示抑制黑素产生的作用。进而有关细胞毒性的IC50，本发明中的化学式(1)的化合物与羟基酪醇、氢醌相比为相同或显示高值，毒性低。

综合上述数据，根据求出了抑制黑素产生的IC50值的每1单位细胞毒性的IC50的表3及图2的数据，显示本发明的化学式(1)的化合物的安全系数为39.4，与熊果苷的11.8相比为约4倍的安全性，与羟基酪醇、氢醌的显示1左右的值的化合物相比，可以说安全性更加优异。

由以上结果可知，本发明的化学式(1)的化合物在黑素产生抑制剂及美白剂中含有时，与其他具有抑制黑素产生作用的化合物相比具有更强的抑制黑素产生作用，同时成为发挥美白效果的化妆料，且更安全。

[使用三维皮肤模型的抑制黑素产生试验]

对于化学式(1)的化合物，通过以下试验，观察三维皮肤模型中的抑制黑素产生效果。

(样品溶液的配制)

将化学式(1)的化合物用二甲亚砜(049-07213和光纯药工业株式会社)配制成10质量％的浓度，而后，将该溶液以0.5质量％的浓度添加在 D-PBS-中，作为化学式(1)的化合物的样品溶液。样品溶液中化学式(1)的化合物浓度为0.05质量％。此外，将不含化学式(1)的化合物，将二甲亚砜以0.5质量％的浓度添加在D-PBS-中的溶液作为对照。

(三维皮肤模型的培养和样品溶液的添加)

三维皮肤模型使用MEL-300A(Lot#10892，MatTek Corp.)。MEL-300A是由包含正常人体表皮黑素细胞的正常人体表皮角化细胞构成的人体皮肤三维模型。三维皮肤模型按照试剂盒的说明开始培养(角化)。培养基使用EPI-100-LLMM维持培养基(Lot#302410PND，MatTek Corp.)。培养通过在6孔盘内的中央将Stelile Washers(MatTek Corp.)每2个重叠，将EPI-100-LLMM维持培养基各添加5ml，在其上设置皮肤模型杯(Cup)来进行。

将所配制的样品溶液在MEL-300A三维皮肤模型的杯(Cup)表面分别给与50μl，作为化妆料的适用模型。培养基在2天后、4天后更换新的培养基，培养5天(n＝3)。样品溶液在2天后、4天后将旧的样品溶液吸引除去，用D-PBS-洗涤后，更换新的样品溶液，作为化妆料的连用模型。

(三维皮肤模型底面的观察)

培养开始5天后，观察三维皮肤模型底面的色素沉着了的黑素细胞。将培养中的三维皮肤模型杯(Cup)使用倒立显微镜、用CCD照相机拍摄来进行观察。观察时的倍率为100倍。给与对照的三维皮肤模型的底面图像如图3a所示，给与化学式(1)的化合物的样品溶液的三维皮肤模型的底面图像如图3b所示。给与化学式(1)的化合物的样品溶液时，黑素细胞的颜色浅，沉着的黑素较对照少。

(图像处理后的三维皮肤模型底面的观察和黑素覆盖面积的测定)

为了定量比较黑素沉着部，将三维皮肤模型底面的黑素覆盖面积通过图像分析进行数值化。将三维皮肤模型底面的图像通过计算机软件(Adobephotoshop)转换为灰度模式，将图像内的背景阶度用256个阶度，统一各图像的背景值。其后，将作为由黑素引起染色的部分的阶度的180个阶度作为临界值进行二值化，将黑色部分作为三维皮肤模型底面的黑素覆盖面积使用图像分析计算机软件(Image J)的Analyze PartiCle功能进行数值化。

给与对照的黑素沉着部的二值化图像处理的底面图像如图3c所示，给与化学式(1)的化合物的样品溶液的黑素沉着部的二值化图像处理底面图像如图3d所示。

三维皮肤模型底面的黑素覆盖面积的比较是将对照给与区的底面黑素覆盖面积的合计作为100％，用百分率进行，使用Student-T-test进行统计处理。结果如图4所示(给与样品溶液(化学式(1)的化合物0.05％)时和给与对照(化学式(1)的化合物0％)时的底面黑素覆盖面积的比较(Mean＝±S.D.n＝3))。

给与化学式(1)的化合物的样品溶液的三维皮肤模型底面黑素覆盖面积的合计为给与对照时的48％，显著减少。

根据使用该三维皮肤模型的抑制黑素产生试验，也可确认出化学式(1)的化合物不仅仅使黑素产生量降低，还具有减少黑素沉着部面积的效果，也就是说，即使通过目测也能确认出黑素覆盖面积、即产生褐斑、雀斑及肤色变黑的面积的减少或变成更浅的颜色，由此也可证明将化学式(1)的化合物配合在化妆料中时可发挥美白效果。

以下表示本发明的处方例。分别根据常法制造。

处方例1 美白用洗液

成分配合量(质量％)

1.甘油 10

2.1，3-丁二醇 5

3.葡萄糖 2

4.乙醇 5

5.聚羧乙烯 0.02

6.甘草酸二钾 0.1

7.透明质酸钠 0.001

8.化学式(1)的化合物 0.1

9.柠檬酸 0.05

10.柠檬酸钠 0.1

11.氢氧化钾 0.01

12.纯净水剩余

处方例2美白用膏霜剂

成分配合量(质量％)

1.硬脂醇 6

2.硬脂酸 2

3.角鲨烷 10

4.辛基十二烷醇 5

5.橄榄油 5

6.1，3-丁二醇 8

7.聚乙二醇1500 4

8.POE(25)十六烷醇醚 3

9.单硬脂酸甘油酯 2

10.化学式(1)的化合物 0.1

11.纯净水剩余

处方例3美白用面膜

成分配合量(质量％)

1.聚乙烯醇 15

2.羧甲基纤维素 5

3.1，3-丁二醇 5

4.乙醇 12

5.化学式(1)的化合物 0.05

6.POE油醇醚 0.5

7.柠檬酸 0.02

8.柠檬酸钠 0.04

9.纯净水剩余

处方例4美白用片剂

成分配合量(质量％)

1.化学式(1)的化合物 63

2.乳糖 24

3.玉米淀粉 12

4.瓜尔豆胶 1

处方例5美白用饮料

成分配合量(质量％)

1.化学式(1)的化合物 10

2.果糖葡萄糖液糖 15

3.柠檬酸 10

4.维生素C 5

5.香料 1

6.色素 1

7.纯净水剩余

Claims

1.以下化学式(1)的化合物作为有效成分在制备黑素产生抑制剂中的应用化学式(1) 。

2.含有以下化学式(1)的化合物在制备美白剂中的应用化学式(1) 。